Name: 앞으로 유전학 식별하는 대 식세포를 사용하여 화면 톡소 포자충 유전자 중요 저항이하는 IFN-γ 의존 세포 자치 내성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 21 s
Description: 배우세요 대식세포를 이용한 정방향 유전학 접근으로 Toxoplasma gondii의 면역 회피 유전자를 식별하는 방법을. 이 연구는 세포 자율성 면역 메커니즘을 규명하고 새로운 치료 전략 개발에 기여합니다.

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T. gondii 미토콘드리아를 검출하는 항체에 대해 Peter Bradley 박사에게 특별한 감사를 드립니다. 이 작업은 미국 국립보건원(National Institute of Health)의 보조금 AI072028과 D.G.M의 AI107431, 그리고 열대의학 연구를 위한 뉴욕 의과대학(New York Medical College)의 지원을 받았습니다.

저자는 경쟁하는 재정적 이해관계가 없습니다.

설명 된 프로토콜은 뮤린 골수 유래 대 식세포를 분리 T. 순방향 유전학의 활성화를 사용하여 비 편파 접근법을 제공 자신의 능력에 결함이와 포자충 돌연변이 감염된 대 식세포의 활성화를 생존. 돌연변이 다음 식세포 활성화의 표현형은 일반적으로 두 가지 범주 중 하나에 해당 : 1) 기생충은 그대로 나타나지만 PV 당 1 기생을 넘어 복제하는 데 실패; 2) 기생충이 저하 될 넓고, 비정질 PV가 될 수 있습니다. 돌연변이 활성의 부재하에 나이브 식세포에서 야생형 표현형 기생충 등을 가지고 있다는 사실은 프로토콜과 특이 식세포 활성화를 저항하는 능력을 손상되어 돌연변이를 식별 할 수 증명한다. 일차 골수 유래 대 식세포의 사용은 화면 RAW 264.7 대식 세포주 대 권장 때문에 VACU 당 기생충 및 기생충 수의 모폴로지OLE보다 쉽게​​ 골수 유래 대 식세포에서 시각화 하였다. 앞으로 유전학과 결합 된 설명 화면이 기생충 유전자...

톡소 포자충 (T. 포자충)는 의무적 인 세포, 원 충성 병원체이다. 이 톡소 플라즈마 증의 원인균, 면역 개인의 건강 위험이 있습니다. 또한 포자충과 원 포자충 속을 포함하여 인간을 감염 다른 apicomplexan 병원균의 모델 시스템입니다. 톡소 플라즈마 증은 가장 일반적으로 기생충의 bradyzoite 또는 oocyst 단계에 오염 된 음식이나 물을 섭취을 통해 획득된다. 섭취시,이 단계는 숙주 세포 내에서 복제하고 체계적으로 유포 기생충의 tachyzoite 단계로 변환합니다. T 세포, IFN-γ와, 낮은 정도, 산화 질소 1-4, 감염의 조절에 중요하지만 tachyzoites의 비율로, 병을 제거 할 수없는 조직 포낭 내에서 보호된다 bradyzoite 스테이지로 변환 수명이 긴 만성 감염의 결과. 사실, 어떤 치료제는 만성 낭종의에 효과가없는질병의 다케. 심한 톡소 플라즈마 증은 기본 및 급성 감염의 신속 복제 tachyzoite 단계 특성으로 다시 변환 기생충의 bradyzoite 단계로 인해 지속적인 감염의 재 활성화에 가장 많다. 선천성 면역 반응의면에서 이른 생존 기생충 충분한 기생충 번호에 도달 할뿐만 아니라 만성 감염의 확립을 가능하게하기 위해, 말초 부위에 도달 할 수 있도록하는 것이 중요하다. T. 포자충 가능성 복제 및 감염의 조기 보급 할 수있는 능력에 기여하는 숙주 방어 메커니즘을 방해하는 전략을 진화했다. 첫째, T. 포자충 다른 세포 내 병원체에 비해 5-9 숙주 세포 내 이입 및 exocytic 프로세스와 크게 편석 기생충 침윤 동안 고유 PV를 형성한다. 또한, 모든 성공적인 세포 내 병원균의 T. 같은 포자충은 f를 허용 환경을 조성하기 위해 숙주 세포를 수정또는 성장. 이것은 세포 활성화 10-15 조절에 중요 포함한 숙주 세포 전사 인자를 변경하여 재 프로그래밍 숙주 세포의 유전자 발현을 포함한다. ROP16 16-19 GRA15 20 GRA16 21, 22는 모두 GRA24 T. 감염된 숙주 세포를 전사 캐스케이드 반응을 조절하고 세포 시그널링에 중요한 것으로 밝혀졌다 포자충. 별개의 표현형과 기생충 변종 사이의 유전 십자가를 사용하여 최근의 연구는 면역 관련 GTP 아제 (IRGs) 16,19,23-26의 회피를 포함하여 기생충 유전자형에 의존하는 특성을 기초 기생충 유전자를 식별하는 매우 생산되고있다. 매우 독성이 강한 유형 I 유전자형이 쥐 IRGs을 회피 메커니즘을 진화하는 동안 마우스에 면역 관련 GTP 아제 (IRGs)는 유형 II의 제어 및 기생충의 III 유전자형을 위해 중요하다. 그러나, 기생충 항균 미디어를 회피하는 메커니즘을 진화 한 것이 분명하다이러한 메커니즘의 일부 IRGs과 그 외에 TORS는 기생충 유전자형 (27, 28)에 걸쳐 보존 할 수있다. 또한, 약간은 T.에 대한 세포 자율 면역의 중요한 매개체에 대해 알려진 인간의 톡소 플라즈마 증 동안 포자충. tachyzoite 또한 호스트 면역 반응에 의해 유발 될 수있는 변환을 bradyzoite하는 동안 셀 자율 면역 매개 물질에 대한 저항성에 중요한 기생충 유전자는 생존을 위해 중요 할 수있다. 예를 들어, 높은 수준의 질소 산화물이 감염된 대 식세포 기생충 복제를 억제 할뿐만 아니라 생산 낭종 30-32 변환을 초래하는 bradyzoite tachyzoite을 자극 할 수있다. ToxoDB는 T.위한 기능 게놈 데이터베이스입니다 포자충 그 지역 사회 주석을 포함한 출판되지 않은 게놈 규모의 데이터 시퀀스 기생충 게놈에 대한 정보와 액세스를 제공하는 측면에서 필드의 중요한 자원으로 기능, 유전자 특급<html> ression 및 단백체 데이터 (33). 많은 충성 병원체와 마찬가지로, 게놈의 대부분이 잠재적 인 기능에 대한 통찰력을 제공하기 위해 유전자 상 동성을 기반으로 사용할 수없는 정보와 가상의 유전자로 구성되어 있습니다. 따라서, 앞으로 유전자는 면역 회피, 낭종 변환 및 기생충 병인뿐만 아니라 별개의 발달 단계 사이의 변환을위한 중요한 다른 기능에 중요한 새로운 기생충 유전자를 식별 할 수있는 강력한 도구입니다. 순방향 유전학의 추가적인 장점은 면역 회피 및 포낭 형성 포함한 병인 특정 작업에 중요한 유전자로 기생충 심문 비교적 비 편향된 방식으로 사용될 수 있다는 점이다. 돌연변이 프로파일 링을위한 차세대 시퀀싱 최근 개선은 화학에서 삽입 모두 돌연변이 유발 34 ~ 37를 사용하여 앞으로 유전학 연구의 책임 기생충 유전자를 식별하기위한 선택의 방법을 만들었습니다. ntent은 &quot;&gt; 그것은 특히 또한 저항 낭종 단계에 활성화 될 수 것들.이 목표를 향해, 시험관 쥐의 기생충에 대한 세포 자율 면역 메커니즘의 효율성을 향상시키기 위해 이용 될 수있다 T. 포자충의 취약점을 파악하는 것이 중요하다 대 식세포 감염 및 활성화 모델을 구체적으로 순진한 대 식세포에 감염된 대 식세포의 활성화가 아닌 다음 T.의 포자충 체력을 손상 기생충 돌연변이를 확인하기 위해 개발되었다.이 대 식세포 화면에 순서대로 T. 포자충에서 삽입 돌연변이 체의 라이브러리를 심문하기 위해 사용되었다 궁극적으로 산화 질소 (27, 28)에 대한 내성을 위해 중요 T. 포자충 유전자를 확인한다. 감염된 대 식세포 산화 질소 특히 현저한 감도의 활성화에 장애가 저항 T. 포자충 돌연변이 패널의 분리를 식별하기 위해 화면의 유용성을 입증 저항에 대한 중요한 기생충 유전자뮤린 IRGs 28에 기재된 저항기구 이외 셀 자율 면역 매개체이다. 삽입 성 돌연변이 유발 이론 랜덤 기생충 각 클론의 돌연변이 및 돌연변이의 위치의 식별을 용이하게 제한된 수를 생성하는 관점에서 화학적 돌연변이 유발에 비해 많은 장점을 갖는다. 그러나, T.에서 플라스미드 삽입의 게놈 사이트를 식별합니다 포자충 삽입 성 변이체는, 실제로는, 많은 경우에 37 의외로 어려웠다. 유전자 내로 플라스미드의 삽입은 일반적으로 단일 염기 변화를 초래 화학적 돌연변이 대조적으로 유전자의 기능을 방해하기 쉽다. 그것은 다수의 단일 염기 다형성을 생성하지만, 화학적 돌연변이 유발 N 에틸 -N- 니트로 소 우레아 (ENU) 또는 ethylmethane 설포 네이트 (EMS) 중 하나와 (삽입 성 돌연변이 유발에 비해 기생충 게놈의 큰 부분을 분석 할 수있는 증가 된 능력을 제공 할 수있다 돌연변이 (34) 당 10 -100)로 추정38. 또한, 전체 게놈 프로파일 최근 발전은 가능한 돌연변이 기생충 34,38의 표현형에 책임 식별 가능성의 후보 유전자를 동정하는 차세대 시퀀싱을 사용하도록했다. 상관없이 돌연변이 유발 접근법 식세포 활성화에 저항 기생충 유전자의 역할을 확인 궁극적 분자 코흐의 공리를 충족 유전자 결실 및 보완이 필요하다. 기생충 및 대식구 모두의 유전자 조작에 의한 유전자의 기능을 절개하는 능력은 T. 앞으로 유전학 통해 식별 된 유전자의 많은만큼 중요 포자충,뿐만 아니라 다른 병원체는 아직 공지 기능없이 다른 단백질 서열 상 동성이 거의 가설 유전자로 특징 지어진다. 현재 용지는 돌연변이 유전자의 파괴는 공지 또는 내성에 중요한 것인지 식별​​ 할 수있는 일반적인 방법을 설명셀 자율 면역 알 수없는 중재자. 숙주 미생물 인자 초기 분석은 야생형 및 유도 성 산화 질소 합성 효소 (iNOS의) GP-91 phox (NADPH 옥시 다제)에서 특정 유전자의 결실로 그 대 야생형 마우스에서 대 식세포의 돌연변이 기생충의 생존을 평가함으로써 수행되고 특정 면역 관련 GTP 아제 (IRGs). 확인 된 기생충 유전자가 산화 질소, 활성 산소 중간체 또는 면역 관련 GTP 아제 (28)을 각각 또는 알 수없는 면역 메커니즘이 관련된 경우에 대한 저항성에 중요한 경우를 결정합니다. 현재의 프로토콜에 기재된 IFN-γ와 LPS 모두 감염된 대 식세포의 활성화는, 주로 일산화 질소 (28)의 저항에 중요한 기생충 유전자의 분리 결과. 마크로파지 활성화의 부재 하에서 산화 질소 유도되는 약물의 사용은 (산화 질소 공여체) 식별 유전자의 대부분이 재 중요한 것이 확인산화 질소보다는 대 식세포 활성화 (28)와 관련된 추가 매개과 콘서트에서 산화 질소에 sistance. 하나, 둘, 시험관에 감염된 골수 유래 대 식세포의 활성화를 다음과 피트니스 결함과 기생충 돌연변이를 분리하기위한 앞으로 유전학 화면을 설명하는 단계. 하나 기생충 복제를 감소 시키지만, 완전 야생형 T.의 복제를 저해하지 않는 대 식세포 활성화를 위해 사용 된 실험적 IFN- γ와 LPS의 투여 량을 결정하기 위해 용량 적정 분석을 설명 스텝 기생충 돌연변이 라이브러리의 제작에 사용되는 모 균주 포자충. 두 번째 단계는 96 웰 플레이트에서 대 식세포의 돌연변이 클론의 앞으로 유전 화면을 설명합니다. 세 번째 단계는 각 돌연변이에 결함이 기생충의 생존에 영향을 미치는지, 복제를 평가하고 96 웰 플레이트의 화면에서 식별 된 각 돌연변이의 표현형을 확인하는 방법을 설명,대 식세포의 활성화에 응답 또는 낭종 생산. 네 단계는 돌연변이 기생충은 특히 민감되는 면역 매개체를 식별하기 위해 특정 항균 통로에 결실 된 마우스 골수 유래 대 식세포를 사용하는 방법을 설명한다. 5 단계는 감염된 쥐의 뇌에 낭종 생산에 의해 평가 등의 기생충 돌연변이는 또한 생체 기전에 대한 손상 여부를 확인하는 방법을 설명합니다.

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단백질 접합 키트</td><td>Life Technologies</td><td>A20181</td><td></td></tr><tr><td>http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/A10235 염소 혈청</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN19135680</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog 아이디=29104& productId=2133236& dis 유형=0& 하이라이트ProductsItemsFlag =Y& fromSearch=1& crossRefData =ICN19135680=2& 검색 유형 =프로덕션& hasPromo=0</td></tr><tr><td>Vectashield 마운팅 미디어</td><td>Vector Labs</td><td>H1200</td><td>https://www.vectorlabs.com/catalog.aspx?prodID=428</td></tr><tr><td>FITC-conjugated dolichos</td><td>Vector Labs</td><td>FL-1031</td><td>https://www.vectorlabs.com/catalog.aspx?prodID=188</td></tr><tr><td>LAMP1</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>http://dshb.biology.uiowa.edu/LAMP-1</td><td></td></tr><tr><td>LysoTracker</td><td>Life에 대한 항체 기술</td><td>L-7526</td><td>https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/L7526?ICID=search-product</td></tr><tr><td>C57BL6 마우스</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td>http://jaxmice.jax.org/strain/000664.html</td></tr><tr><td>gp91 phox 녹아웃 마우스</td><td>Jackson Labaoratories</td><td>2365</td><td>http://jaxmice.jax.org/strain/002365.html</td></tr><tr><td>iNOS 녹아웃 마우스</td><td>Jackson Laboratories</td><td>2609</td><td>http://jaxmice.jax.org/strain/002609.html</td></tr><tr><td>나트륨 니트로프루스사이드</td><td>ACROS Organics</td><td>AC21164-0250&nbsp;</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog 아이디=29104& productId=2627727& dis 유형=0& 하이라이트ProductsItemsFlag =Y& fromSearch=1& 검색 유형 = PROD& hasPromo=1</td></tr><tr><td>DETA NONOate</td><td>ACROS Organics</td><td>AC32865-0250</td><td>https://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalog 아이디=29104& productId=2252389& dis 유형=0& 하이라이트ProductsItemsFlag =Y& fromSearch=1& 검색 유형 = PROD& hasPromo=1</td></tr><tr><td>단클론 마우스 anti-Toxoplasma gondii Ab</td><td>Fitzgerald Industries International</td><td>10T19A</td><td>http://1degreebio.org/reagents/product/1069274/?qid=652947</td></tr></tbody></table>

앞으로 유전학 식별하는 대 식세포를 사용하여 화면<em&gt; 톡소 포자충</em&gt; 유전자 중요 저항이하는 ifn-γ 의존 세포 자치 내성

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

톡소플라즈마증의 원인균인 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii)는 절대 세포 내 원생동물 병원체입니다. 이 기생충은 거의 모든 온혈 척추 동물 세포 유형에 침입하여 복제합니다. 기생충이 숙주 세포에 침입하는 동안, 기생충은 기생충이 복제하는 식세포작용(phagocytosis)과 무관하게 숙주 세포막에서 유래하는 기생 액포(PV)를 생성합니다. IFN 의존성 선천성 면역 및 세포 매개 면역이 감염의 궁극적인 통제에 중요하지만, 호중구, 단핵구, 수지상 세포를 포함한 선천성 면역 세포도 감염 초기에 기생충의 전신 전파를 위한 매개체 역할을 할 수 있습니다. 한 가지 접근법은 전방 유전자 검사에서 숙주 선천성 면역 반응(이 경우 대식세포)을 활용하여 활성화 후 감염된 대식세포에서 적합성 결함이 있지만 순진한 대식세포에서 정상적인 침입 및 복제를 보이는 기생충 돌연변이를 식별하는 방법입니다. 따라서, 이 검사는 대식세포 활성화의 영향에 저항하는 능력에 특정한 결함이 있는 기생충 돌연변이를 분리한다. 이 논문은 감염된 대식세포의 활성화에 따른 돌연변이 기생충의 두 가지 광범위한 표현형을 설명합니다: 기생충 정지 대 기생충 분해, 종종 비정질 액포에서. 그런 다음 기생충 돌연변이를 분석하여 세포 자율 면역의 유도 매개체에 대한 내성에 특히 중요한 책임 있는 기생충 유전자를 식별합니다. 이 논문은 이론적으로 특정 항균 매개체에 대한 내성에 중요한 기생충 유전자를 표적으로 하도록 수정할 수 있는 전방 유전학 스크리닝에 대한 일반적인 접근 방식을 제시합니다. 또한 기생충 돌연변이가 감염되기 쉬운 특정 대식세포 항균 매개체를 평가하는 접근 방식을 설명합니다. 감염된 대식세포의 활성화는 또한 타키조이트에서 만성 감염을 유지하는 서디조이트 단계로 기생충 분화를 촉진할 수 있습니다. 따라서 확인된 기생충 유전자가 만성 감염 확립에 미치는 중요성을 평가하기 위한 방법론이 제시됩니다.

톡소 포자충은 순진 대 식세포에서 자유롭게 복제하고 6 ~ 12 시간이 기생충의 변형에 따라 사이에 두 배의 시간이 있습니다. (1)가 활성화 된 골수 유래 대 식세포 대 순진한 대표 기생충을 보여줍니다. 그림 2 HFF에서 기생충의 일반적인 형태를 보여줍니다 2, 4, 8, 16, 32 기생충 / PV에서 숙주 세포. 현재 프로토콜에서 기생충은 순진 대 식세포 침입 감염된 대 식세포에 강력한 활성화 자극, LPS 및 IFN-γ의 전달에 앞서 초기 parasitophorous 공포 (PV)를 설립 할 수있다. 이 모델에서, 야생형 기생충의 복제가 느려지지만 기생충 복제는 여전히 식세포 기생충 복제 억제에 점진적 숙달되어이 기간 동안 약 24 시간 동안 진행된다. 화면 유력한 식세포에 필요한 시간 사이 변성 경쟁 모델로서 기능하도록 설계야생형 기생충 또는 기생충 돌연변이가 PV 내에 계속 복제 할 수있는 동안의 시간 대 ctivati​​on. 화면의 첫...

Forward genetics는 세포 내 병원체에서 세포 자율 면역에 대한 저항에 중요한 유전자를 식별하는 강력한 접근 방식입니다. 현재 접근 방식은 선천성 면역 세포, 특히 대식세포를 사용하여 면역 회피에 중요한 새로운 Toxoplasma gondii 유전자를 식별합니다.

앞으로 유전학 식별하는 대 식세포를 사용하여 화면<em&gt; 톡소 포자충</em&gt; 유전자 중요 저항이하는 IFN-γ 의존 세포 자치 내성

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

우리는 체세포 핵 전송 (SCNT)를 통해 epigenetic 프로그래밍이 사전 정의된 T 세포 수용체 (TCR) specificities와 마우스 모델을 생성하는 도구로 사용할 수 여기를 보여줍니다. 이러한 transnuclear 생쥐는 내생 모터의 제어하에 자신의 내생 로커스에서 해당 TCR을 표현.

반대 미리 정의된 T 세포 수용체 Specificities와 Transnuclear 쥐 Toxoplasma gondii SCNT 비아 획득

앞으로 유전학이 어떻게 분자 수준을 해명하기위한 강력한...

분리하기위한 유전자 스크린 Toxoplasma gondii 호스트 세포 재현의 돌연변이

감염 THP1 셀과 기생충 - 구조 및 변화...

세포에 붙어 Antileishmanial 검사에 대한 기생충 구조 및 변화 분석<em&gt; Leishmania donovani</emTHP1 인간 급성 백혈병 Monocytic 셀 라인에서&gt; Amastigotes

이 프로토콜에서는 Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle System을 사용하여 쥐 대식세포 세포주를 siRNA로 효율적으로 transfection하고, 지질다당류로 대식세포를 자극하고, 염증성 사이토카인 생성에 미치는 영향을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

마우스 대 식세포의 타고난 면역 반응을 조사하기 위해 RNA 간섭을 사용하여

스트레스 저항은 장수의 특징 중 하나이며 유 전적으로 규율하는 것으로 알려져있다. 여기, 우리는 장수 연구에 마우스 모델을 개발하기 위해있는 배아 줄기 세포에 스트레스 저항을 부여 돌연변이 선별 편견 높은 처리량 방법을 개발했다.

앞으로 유전 접근은 마우스의 스트레스 저항성 유전자를 밝히기 위해서 - ES 세포에서 높은 처리량 화면

Toxoplasma gondii 에서 약물 내성 유전자를 확인하는 데 유전지도를 기반으로하는 QTL 매핑을 사용하는 방법과 게놈 타겟을 효율적으로 편집하는 CRISPR / Cas9 시스템으로 어떻게 검증 할 수 있는지에 대한 세부 정보가 제공됩니다. 약물 내성 유전자.

약물 저항 유전자를 확인하기위한 QTL 매핑 및 CRISPR / Cas9 편집<em&gt; Toxoplasma gondii</em

침입하는 대 식세포가 순환하는 전구체로부터 성인 조직으로 지속적으로 모집되는 동안, 상주하는 대 식세포는 발달 중에 그들의 조직을 뿌리고, 전구체로부터의 더 이상의 입력없이 유지된다. 상주 대 식세포의 전구 세포는 최근 확인되었다. 여기, 우리는 상주 macrophage progenitors의 유전 적 운명 매핑 방법을 제시한다.

Flow Cytometry에 의한 마우스 태아의 적혈구 전구 세포 (Erythromyeloid Progenitors)와 그 자손의 동정

생산 유발에 대 한 우리의 프로토콜 여기 제시 erythroid 창시자 (Iep) 성인 섬유 아 세포 전사 인자 제어를 사용 하 여 마우스에서에서 직접 혈통 프로그래밍 (DLR).

리니지 Reprogramming 성인 마우스 구와 Erythroid 창시자에의 직접

대식세포, 특히 1차 대식세포는 비자기 기원의 분자를 검출하는 것을 전문으로 하기 때문에 트랜스펙트에 도전하고 있습니다. 우리는 플라스미드와 같은 DNA 템플릿에서 생성된 mRNA를 가진 1 차적인 대식세포의 고도로 능률적인 형질혈을 허용하는 프로토콜을 기술합니다.

체외 전사 mRNA를 가진 1 차적인 대식세포의 고효율 형질감염

생체 내에서 대식세포 모집에 대한 케모카인의 효과를 시험하기 위해, 시투 혼성화에서 전체 마운트를 사용하여 케모카인의 자궁외 발현을 검출하고, 면역염색을 사용하여 대식세포에 라벨을 붙이도록 하였습니다. 라이브 이미징은 대식세포 이동의 실시간 관찰에 사용되었다.

생체내 대식세포 모집 테스트를 위한 자궁외 체모카인 발현 모델

이 프로토콜은 형광 기자 및 세포 분류를 사용하여 대식세포 및 T 세포주에서 노크-인 실험을 단순화합니다. 2개의 플라스미드는 면역 세포에 있는 Rosa26 메뚜기에서 영구적으로 통합되는 EBFP2를 표현하는 EBFP2를 표현하는 상동성 재조합 기증자 플라스미드와 CRISPR/Cas9- 및 DsRed2 표현 플라스미드와 균등하게 재조합 기증자 플라스미드인 이러한 단순화된 노크-인 실험에 사용됩니다.

CRISPR/Cas9 및 대식세포 및 T 세포주에서 세포 분류에 의한 유전자 노크인

배우세요 대식세포를 이용한 정방향 유전학 접근으로 Toxoplasma gondii의 면역 회피 유전자를 식별하는 방법을. 이 연구는 세포 자율성 면역 메커니즘을 규명하고 새로운 치료 전략 개발에 기여합니다.

앞으로 유전학 식별하는 대 식세포를 사용하여 화면

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