Name: 돌이킬 수 및 가역 일방적 Ureteric 폐색의 쥐 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: 학습하세요 쥐에서 일방성 요관 폐쇄를 이용한 신장 손상 및 회복 메커니즘을 연구하는 방법을. 조직학적 분석과 가역적 폐쇄 기법을 통해 조직 재형성 과정을 탐구합니다.

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본 연구는 Kidney Research UK(ST4/2011), Cunningham Trust(CT11/14), Mrs AE Hogg Charitable Trust for Kidney Research 및 Renal Endowment Fund of the Royal Infirmary of Edinburgh의 보조금으로 지원되었습니다.

일반 지침 : 동물 실험은 동물에 의해 부과 된 지침과 규정에 따라 (과학적 절차) 법 1986이 프로토콜 많은에서 수행 할 수있는 동반 비디오 프로토콜 표준 UUO 및 R-UUO 모두이며, 수행되었다 마우스 균주. 첨부 된 비디오에서 두 절차는 남성 C57BL / 6 마​​우스 세 팔주에서 수행됩니다. 대표적인 결과 섹션에 제시된 데이터는 남성 FVB / N 마우스로부터 얻었다. 주 :이 프로토콜 및 표준 방법을 수행 UUO R-UUO 왼쪽 요관을 이용하여 비디오 정보를 수반하지만 동일한 기술을 쉽게 오른쪽 요관에 적용될 수있다. 1. 동물 준비 및 개복술 <ol><li> 살균 (멸균) 장비 및 소모품 모든 절차를 수행합니다. </li><li> 마취 복강 케타민 염산염 (70 ㎎ / kg) 및 medetomidine 염산염 (1 ㎎ / kg)을 주사마우스. 참고 : 결과 마취 평면의 지속 시간은 4 시간이며, 더 추가 마취가 필요하지 않습니다. </li><li> 반사 예를 들어, 발가락 핀치의 손실에 의한 마취의 깊이를 확인합니다. </li><li> 절개 주변 지역 모든 머리를 제거하고 희석 클로르헥시딘 솔루션의 응용 프로그램을 통해 수술을 위해 복부 피부를 준비합니다. </li><li> 앙와위에서 가열 수술 패드에 마우스를 놓고 낮은 압정 접착 테이프를 사용하여 패드에 사지를 고정합니다. </li><li> 절차 동안 가열 패드 수술의 결과로서 열 화상 흔적 마우스를 모니터링. 가능하면 비 전기 열원을 사용한다. </li><li> 부 프레 노르 핀 염산염 (내지 0.06 ㎎ / kg)의 피하 주사에 의해 진통을 관리하고 각막 건조를 방지하기 위해 눈 윤활제를 적용합니다. </li><li> 정중선 개복 및 복강에 접근하기 위해 조직 분리 가위를 사용하여 무 혈관의 백선 알바의 절개를. </li><li> 마우스를 올려 놓와 콜리 브리를 삽입절개에 트랙터. </li></ol> 2. 일방적 Ureteric의 방해 <ol><li> 멸균 면봉을 사용하여 복강의 오른쪽으로 장을 변위에 의해 왼쪽 요관을 노출하고 젖은 커튼로 커버. </li><li> 각도 집게 격리하고 왼쪽 요관을 들어 올려 사용. </li><li> ureteric 방해를 만들려면 아무 곳이나 방광 및 신장 골반 사이의 6 / O 검은 꼰 실크 봉합사로 두 번 왼쪽 요관을 결찰. 장기 실험을 위해, 모든 복부 수술에 대한 흡수성 봉합사를 사용합니다. 대안 적으로, 결찰 클립 요관에 적용될 수있다. </li><li> 방광 요관으로부터 격리하기 위해 두 요관 봉합 사이를 나눈다. </li><li> 조심스럽게 복강에 장을 교체합니다. </li><li> 4 절에 나와있는 단계를 수행 - 수술 후 회복 및 관리는 절개를 닫고 마취를 반전 할 수 있습니다. </li></ol> Reversibl 3. 준비전자 일방적 Ureteric의 방해 <ol><li> 수술 마우스를 준비하고 단계 위의 1.1-2.2에서 설명하는대로 왼쪽 요관을 격리 할 것. </li><li> 반전 될 수있는 ureteric 방해를 만들려면, 방광에 가까운 6 / O 검은 꼰 실크 봉합사로 두 번 왼쪽 요관을 결찰. 이는 요관 주위 장소에 부드러운 벽 플라스틱 튜브를 고정하는 데 사용되는만큼 상부 봉합사의 한쪽 끝을 남겨주세요. </li><li> 그것은 그것이 요관에인가 될 수 있도록 오픈 스플레이 될 수 있도록 부드러운 벽의 플라스틱 튜브의 길이 5mm의 길이 방향 슬릿을 확인. 1mm와 2mm의 외경 내경 상관 벽으로 부드러운 실리콘 플라스틱 튜브가 사용될 수있다. </li><li> 요관 주위에 부드럽게 부드러운 벽 플라스틱 튜브를 놓습니다. 이 요관 주위를 닫으면 긴 봉합 튜브의 슬릿의 중심에서 나온다 있는지 확인합니다. </li><li> 요관을 둘러싸는 부드러운 벽으로 둘러싸인 튜브 주위에 6 / O 검은 꼰 실크 봉합사의 길이를 놓고 넥타이한 번. 이제 길이 방향으로는 이전에 묶여 봉합 위에 놓여 있도록 튜브를 통해, 튜브의 슬릿의 중심에서 신흥, 봉합의 긴 끝을 배치합니다. </li><li> 튜브 및 요관 주위 장소에 긴 봉합 끝을 고정 두 번 튜브 주위에있는 봉합사를 묶어. 주 : 요관 및 연질 플라스틱 배관 벽에 유착 형성을 방지하기 위해 접착 환원 액 배관 주변에 적용될 수있다. </li><li> 조심스럽게 복강에 장을 교체합니다. </li></ol> 4. 수술 후 복구 및 관리 <ol><li> 5 / O 검은 꼰 실크 봉합사를 사용하여 블랭킷 스티치와 복막을 닫고 금속 피부 클립을 사용하여 피부에 근접. </li><li> 수술 후 감염의 위험을 최소화하기 위해, 복부 피부에 요오드 / 알코올 용액으로서 방부제 등을 적용한다. </li><li> 피하 atipamezole 염산염 (2 ㎎ / kg)와 부분적으로 반대 마취. </lI&gt; <li> 1 ml의 피하 주사에 의해 유체를 관리 식염수를 따뜻하게. </li><li> 이 의식을 회복 할 때까지 마우스를 모니터링합니다. </li><li> 마우스가 24 시간 동안 29 ° C로 유지 가열 상자에 복구 할 수 있습니다. 적신 음식은 유체 및 영양 섭취를 장려하기 위해 제공 될 수있다. </li><li> 장애물이 원하는 수준의, 일반적으로 7 일 유도하기 위해 복구하기 위해 마우스를 둡니다. </li><li> 장기적 회복 실험에 지속적인 진통제를 제공한다. 마우스를 7 일 이상을 위해 회수 될 경우, 피부 클립을 수술 후 7 일 제거. </li><li> 폐색 원하는 레벨이 유도되면, 하나 후술하는 바와 같이, 역방향 UUO, 경부 탈구에 의해 마우스를 안락사 조직 병리학 분석 신장을 모은다. </li></ol> 5 가역 일방적 Ureteric의 방해 <ol><li> 단계에 설명 된대로 R-UUO가 수술을 위해, R-UUO을위한 준비를 마쳤습니다 마우스를 준비 수행하려면 10.1-1.7. </li><li> 존재하는 경우, 피부 클립을 제거하고 분할 또는 복강에 접근하기 복막에 봉합사를 제거한다. 주 :이 요관 장기 실험 피부 클립 방해 되었다면 응용 다음 7 일 제거 된 것이다. </li><li> 마우스를 준비 단계 1.8-2.2에서 설명한 바와 같이 왼쪽 요관을 격리. </li><li> 각도 집게를 사용하여 형성 할 수있는 모든 육아 종성 조직에서 부드러운 벽 플라스틱 튜브를 무료. </li><li> 메스 차단 된 요관 주위의 플라스틱 튜브를 들고 봉합을 잘라 튜브를 제거합니다. </li><li> 왼쪽 신장에 수신증의 존재를 평가하여 성공적인 UUO을 확인, 신장은 창백 나타납니다. </li><li> 봉합 사이의 요관을 나눈다. </li><li> 멸균 거즈의 작은 조각에 부착 신장 수뇨관의 나머지 길이를 놓는다. 이것은 수뇨관에서 소모 시키게 뇨 침전물과 사균을 수집하는 데 사용할차 봉합 한 번 신우가 제거됩니다. </li><li> 위의 요관을 분할하지만, 근처, 봉합사와는 신장이 거즈에 배출 할 수 있습니다. 방광에 가장 가까운 그대로, 낮은 봉합을 남겨주세요. 이은 소변이 방광과 복강으로 누출 없다는 것을 확인하는 것입니다. </li><li> 요관과 신우가 배출되고 나면, 요관의 남은 길이의 끝에 긴 6 / O 검은 꼰 실크 봉합사를 적용합니다. 이것은 나중에 수행 방광 문합에 요관을 돕기 위해 사용됩니다. </li><li> 방광 요관의 나머지 길이를 문합 아래 단계에 따라 : <ol><li> 그것의 원래 위치로 전방을 거짓말과 신장을 통해 거짓말을하도록 요관 돌립니다. </li><li> 그것이 방광의 방향으로 나온다되도록 요관의 단부로부터 하나의 8 / O 폴리 아미드 모노 필라멘트 봉합사를 점착 2mm를 놓는다. 봉합사는 근육 코트에 남아 있고 요관 루멘를 입력하지 않도록주의하십시오. 시침 봉합 줘야L은 방광 요관을 고정하기 위해 사용될 수. </li><li> 방광을 통해 채널을 생성하기 위해서는 방광의 정면 (복부) 벽쪽으로 종료하도록 방광을 통해 대각선으로 21G 바늘을 전달합니다. </li><li> 21G 바늘의 경사에 눈 바늘을 휴식. 방광을 통해 눈의 바늘을 안내하는 21G 바늘을 사용합니다. 눈 바늘은 방광을 통해 요관을 위해 사용됩니다. </li><li> 9 / O 시침 봉합사를 통과, 방광에서 밖으로 엔트리 포인트에 인접한 방광 벽을 통해 첫 절개를 통해, 단계 5.11.2에서 요관에 적용. 방광 요관이 통과되면 이는 방광 요관 앵커에 연결된다. </li><li> 눈 바늘을 통해 단계 5.10에서 요관의 끝 부분에 적용되는 긴 6 / O 검은 꼰 실크 봉합사를 놓습니다. </li><li> 조심스럽게 요관도 방광을 당겨을 보장하는 동안 방광 밖으로 눈 바늘을 철회. </li><li> 요관은 일에서 나온다되면전자 블래 눈동자 바늘을 제거하고 다시 방광 수축을 방지 요관의 끝에 긴 봉합 클램프를 적용. </li><li> 방광의 장소에서 요관을 고정하려면 단계 5.11.5에 적용되는 9 / O 폴리 아미드 모노 필라멘트 압정 봉합을, 넥타이. </li><li> 단단히 방광 내 요관을 고정하기 위해 진입 점을 중심으로 두 위치에서 단계 5.11.2 및 5.11.5에 설명 된대로 추가 한 9 / O 폴리 아미드 모노 필라멘트 타이 봉합을 적용합니다. </li><li> 열이 위의 뒷면을 사용하여 응급 요관의 더 많은 노출을 뒤로 살짝 방광 벽에 ​​밀어 넣습니다. </li><li> 요관의 끝에있는 긴 봉합 위의 요관을 나눈다. 요관 방광의 몸으로 철회해야한다. 이 요관의 오픈 루멘을 확인, 방광의 구멍에서 흐르는 소변을 관찰하는 것이 일반적이다. </li><li> 9 / O 폴리 아미드 모노 필라멘트 봉합사 방광에 상처 출구를 닫습니다. </li></ol></li><li> 조심스럽게에 장을 교체복강. </li><li> 단계 4.1-4.8에서 설명하는대로 수술 후 치료를 제공합니다. </li><li> 신장이 칠일 일반적으로 압축이 해제 될 때까지 마우스를 복구 할 수 있습니다. </li><li> 실험 종료 시점에서, 경부 탈구에 의해 마우스를 안락사 및 조직 병리학 적 분석을 위해 신장을 모은다. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 또는 공개 할 이해 관계 충돌이 없습니다.

신장 폐쇄는 자연 신장 또는 이식된 신장에 영향을 미치고 신장 손상 및 흉터를 유발할 수 있습니다. R-UUO 모델은 환자가 종종 전립선 비대증, 후방 요도 판막 등에 이차적인 신장 폐쇄를 나타내기 때문에 현재 치료 옵션이 없고 결국 말기 신장 질환으로 이어질 수 있는 심각한 잔여 신장 손상이 있는 환자와 함께 감압이 필요한 경우가 많기 때문에 인간 질병과 관련이 있습니다. 8,9 여기에 자세히 설명된 모델은 비가역적 UUO와 R-UUO를 모두 연구할 수 있게 해줍니다. 비가역적 UUO를 사용하면 다양한 백혈구 및 매개체1-3,10 의 역할을 포함하여 염증 및 조직 손상을 연구할 수 있으며, R-UUO 모델에 대한 연구를 통해 연구자는 신장 손상 및 관련 조직 리모델링의 해결을 탐색할 수 있습니다. 6,7,11-15
다른 연구자들은 요관 폐쇄를 유도하고 역전시키기 위해 다양한 방법을 사용했습니다. R-UUO 모델의 첫 번...

여기에 설명된 실험 모델의 전반적인 목표는 비가역적(UUO) 또는 가역적(R-UUO)일 수 있는 편측 요관 폐색(UUO)에 의한 폐쇄성 신병증을 유도하는 것입니다. UUO의 간단한 비가역적 모델이 제시되며, 이는 좌측 요관이 봉합사를 통한 결찰 또는 결찰 클립의 적용에 의해 영구적으로 막히는 것입니다. 그 결과 요관이 현저하게 확장되고 신장 혈류가 감소하고 사구체 여과가 이루어집니다. 신장 조직학은 세뇨관 확장과 점점 더 심각한 간질성 신장 염증 및 섬유증을 보여줍니다. 비가역적 UUO는 유용한 모델이며 신장 염증과 섬유증 모두에서 많은 연구자들이 채택했습니다. 1-4 UUO의 비가역적 모델은 약간의 외과적 전문 지식이 필요하지만, 비교적 간단하며 간질성 신장 손상의 발병 기전과 그에 따른 섬유증에 대한 통찰력을 찾는 데 자주 사용됩니다. 또한 Tapmeier et al.이 원래 설명한 방법의 수정을 사용하여 덜 자주 사용되는 R-UUO 모델이 제시됩니다. 5 R-UUO 모델은 염증 및 면역 과정, 세포 및 조직 재생뿐만 아니라 해로운 자극 제거 후 후속 조직 리모델링에 대한 연구에 대한 많은 미래 잠재력을 가지고 있습니다. 
더 도전적인 R-UUO 모델은 흥미로운 결과를 얻었지만 여기에 설명된 것과 상당히 다른 수술 기술을 사용하는 일부 그룹과 함께 제한된 수의 연구자에 의해 사용되었습니다6,7. 제시된 R-UUO 모델에서, 요관은 원하는 수준의 부상 및 섬유증을 유도하기에 충분한 기간 동안 완전한 요관 폐쇄를 유도하도록 결찰됩니다: 여기에 설명된 방법에서 7일의 UUO가 선택되었습니다. 요관 폐쇄는 역전되고 신장은 마우스를 도태시키고 분석을 위해 신장을 제거하기 전에 연구자가 결정한 기간 동안 신장을 감압하도록 허용합니다: 염증 및 섬유증의 해결을 연구하는 경우 더 긴 기간이 선택되지만 여기에 설명된 방법으로 7일의 감압이 선택되었습니다. 여기에 설명된 방법은 상당한 수술 전문 지식이 필요하지만 다른 R-UUO 모델에 비해 몇 가지 이점을 제공합니다. 막힌 요관에 부드러운 벽으로 된 플라스틱 튜브를 적용하면 과도한 요관 팽창을 방지하고 이는 요관의 후속 조작 및 문합을 용이하게 합니다. 또한, 설명된 R-UUO 모델에서는 요관이 분리되어 잔류 요침전물 및 파편을 제거할 수 있습니다. 이것은 남아있는 요관 내강이 막히지 않고 방광을 문합하기 전에 특허를 받았음을 확인합니다. 
비가역적 UUO 모델과 가역적 UUO 모델을 모두 통합한 실험은 연구자들에게 손상과 후속 해결 및 재생의 분자 및 세포 메커니즘에 대한 강력한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 따라서 여기에 설명된 R-UUO 모델은 염증 후 조직 리모델링 및 이를 조절할 수 있는 방법에 관심이 있는 연구자와 매우 관련이 있습니다.

<table><tbody><tr><td>무딘 해부 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072-10</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위; 직선</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>톱니 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>각도 집게 x 2</td><td>Fine Science Tools</td><td>00649-11</td><td></td></tr><tr><td>직선 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Colibri 3cm 와이어 견인</td>기 <td>Fine Science Tools</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>잠금 장치가 있는 Castroviejo 바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>상처 클립 애플리케이터</td><td>Fine Science Tools</td><td>12031-07</td><td></td></tr><tr><td>7mm 상처 클립</td><td>Fine Science Tools</td><td>12032-07</td><td></td></tr><tr><td>잠금 장치가 있는 Castroviejo 마이크로 바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>OPMI 피코 현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td>S100</td><td></td></tr><tr><td>Heat 전자 패드</td><td>Cozee Comfort</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>6/O 실크 꼰 봉합</td>사 <td>Harvard Apparatus</td><td>72-3287</td><td></td></tr><tr><td>9/O Dafilon (폴리아미드) 봉합</td>사 <td>B-Braun</td><td>G1111434</td><td></td></tr><tr><td>5/O 꼰 실크 봉합</td>사 <td>Harvard Apparatus</td><td>51-7680</td><td></td></tr><tr><td>일반 베벨 바늘, 1 인치, 21G</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305175</td><td></td></tr><tr><td>1ml 주사기 슬립 팁</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>300184</td><td></td></tr><tr><td>Wypall 종이 면봉</td><td>Kimberley-Clark</td><td>L40</td><td>살균 (오토 클레이브)</td></tr><tr><td>면봉</td><td>Johnson and Johnson</td><td>n / a</td><td>살균 (오토 클레이브)</td></tr><tr><td>일반 커튼</td><td>Guardian</td><td>CB03</td><td>멸균 (오토클레이브)</td></tr> <tr><td>연질 벽 실리콘 고무 튜브</td><td></td><td></td><td>실리콘 튜브 - 내경 1.0 mm; 외경 2.0 mm; 벽 두께 0.6 mm</td></tr> <tr><td>(Lacri-Lube) 백색 연질 파라핀 57.3 %, 미네랄 오일 42.5 % 및 라놀린 알코올 0.2 %</td><td>Allergan Ltd</td><td>21956GB10X</td><td></td></tr> <tr><td>(Videne) 포비돈 - 요오드 10 %</td> <td>Ecolab Ltd</td><td>PL 04509/0041</td><td></td></tr> <tr><td>(Vetalar V) 케타민 염산염</td><td>화이자 동물 건강</td><td>VM 42058/4165</td><td>100mg/ml 용액</td></tr><tr><td>(도미토) 메데토미딘 염산염</td><td>오리온 파마</td><td>VM 06043/4003</td><td>1mg/ml</td></tr><tr><td>(베터지식) 부페르노르핀 염산염</td><td>알스토 동물 건강</td><td>VM 00063/4002</td><td>0.3mg/ml</td></tr><tr><td>(안티세단) 아티파메졸 하이드로코라이드</td><td>오리온 파마</td><td>VM 06043/4004</td><td>5mg/ml</td></tr><tr><td>(숙련자) 4% 이코덱스트린</td><td>박스터</td><td></td><td>접착 환원 용액</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Baxter</td><td>FKE1323</td><td></td></tr></tbody></table>

돌이킬 수 및 가역 일방적 ureteric 폐색의 쥐 모델

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

신장 폐색은 토착 신장 또는 이식된 신장에 영향을 미쳐 신장 손상 및 흉터를 유발할 수 있습니다. 여기에 제시된 것은 편측 요관 폐쇄(UUO)에 의해 유발되는 폐쇄성 신병증 모델이며, 이는 비가역적(UUO) 또는 가역적(R-UUO)일 수 있습니다. 비가역적 UUO 모델에서는 점점 더 심각한 신장 염증과 간질성 섬유성 흉터를 유발하기 위해 요관이 다양한 기간 동안 막힐 수 있습니다. 가역적 R-UUO 모델에서는 요관이 막혀 신증, 세뇨관 확장 및 염증을 유발합니다. 적절한 시간이 지난 후, 이전에 막혔던 요관을 문합하여 방광으로 막힌 요관을 외과적으로 되돌려 신장을 완전히 감압하고 방광으로 가는 소변 흐름을 회복할 수 있도록 합니다. 비가역적 UUO 모델은 질병의 발병 기전, 잠재적인 항염증 또는 항섬유화 요법의 검사를 포함하여 신장 염증 및 흉터의 다양한 측면을 조사하는 데 사용되었습니다. R-UUO의 보다 도전적인 모델은 일부 연구자들에 의해 사용되었으며, 해로운 자극을 제거한 후 손상되고 흉터가 있는 신장에서 염증 및 면역 과정 및 조직 리모델링을 연구할 수 있기 때문에 상당한 연구 잠재력을 제공합니다. 결과적으로, R-UUO 모델은 연구자에게 조직 복구의 주요 측면과 함께 신장 염증의 해결을 탐구할 수 있는 기회를 제공합니다. 이러한 실험 모델은 환자가 종종 감압이 필요한 신장 폐쇄를 가지고 나타나고 일반적으로 현재 치료 옵션이 없고 결국 말기 신부전으로 이어질 수 있는 심각한 잔여 신장 손상을 남기기 때문에 인간 질병과 관련이 있습니다.

신장의 모양이 변경 현저 ureteric 폐쇄를 다음과는 창백한와 시간 촉진에 시제 (그림 1)가된다. 장애물과 신우 요관의 근위부의 증가 팽창이있다. 신장은 신장 피질과 수질의 현저한 얇아 결과 연장 방해 폐쇄성 신증 증가의 지속 시간으로 점점 위축된다. ureteric 폐색의 반전에 따라, 신장의 색 혈류 증가 및 조직 부종 해소 할 어두워진다. 그들은 연장 팽만의 기간 (그림 1)의 결과로 약간 &#39;헐렁한&#39;남아​​있을 수 있지만 신장 요관과 신우의 팽창이 가라 앉는다. 조직 손실의 정도 방해의 지속 기간에 의존 하겠지만 조직의 위축이 불가피 소자로 드 막혀 신장 대측 신장보다 전형적으로 작다. 정상이 아닌 조작 네이티브 신장의 조직 학적 많은 세관은 분명 (그림 2) 루멘 식별을 갖는 tubulointerstitium의 소형 세관에 둘러싸여 사구체을 보여준다. ureteric 폐색에게 신우 및 요관 ...

비가역적 편측성 요관 폐색(unlateral ureteric obstruction, UUO)의 쥐 모델(murine model)은 절단된 요관을 방광으로 문합하여 요관 폐색이 완화되는 가역적 UUO 모델과 함께 제시됩니다. 이러한 모델은 신장 염증 및 흉터뿐만 아니라 조직 리모델링에 대한 연구를 가능하게 합니다.

돌이킬 수 및 가역 일방적 Ureteric 폐색의 쥐 모델

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

본 영상에서는 일측성 요관 폐쇄로 유도된 폐쇄성 신경병증 마우스 모델을 소개합니다. 이 모델은 비가역적일 수도 있고 가역적일 수도 있으며, 그 결과로 나타나는 구조적 손상과 가역적 조치 후의 회복을 보여주는 조직학적 데이터가 제시됩니다. 이 도식도는 본 모델의 주요 단계를 설명합니다. 여기에서는 왼쪽 신장, 요관 및 방광을 확인할 수 있습니다.표준 일측성 요관 폐쇄는 요관 결찰을 통해 유도됩니다. 시간이 지남에 따라 요관은 확장되고 신장은 수신증 상태가 됩니다. 가역적 일측성 요관 폐쇄를 수행하려면, 방광 근처에서 요관을 결착하고 폐쇄 지점의 요관 주변에 회색으로 표시된 연성 벽 플라스틱 튜브를 적용합니다.과도한 요관 확장을 제한하기 위해 신장이 시간이 지남에 따라 수신증 상태가 되도록 하며, 이후 연구에 적절한 시점에 폐쇄를 해제합니다. 본 실험의 7일 차에 연성 벽 튜브를 제거하고 결찰 부위 바로 윗부분에서 요관을 절단합니다. 소변 흐름을 허용하기 위해 폐쇄가 해제된 요관을 방광에 문합하며, 신장은 일반적으로 수일에 걸쳐 압력이 완화됩니다.UUO라고 불리는 일측성 요관 폐쇄 모델은 폐쇄성 신병증 이후의 조직 손상 및 섬유화 발달을 연구하는 데 사용될 수 있습니다. RUUO로 약칭되는 가역적 요관 폐쇄 모델은 손상 이후에 나타날 수 있는 조직 리모델링에 대한 통찰을 얻는 데 사용될 수 있습니다. 다음은 UUO와 RUUO 절차를 모두 포함하는 전형적인 실험의 예시입니다.마우스는 0일에 UUL을 수행하며, 7일 후에 다음 단계로 진행합니다. 마우스를 희생시켜 손상 수준을 평가하거나, 요관의 폐쇄를 해제하여 RUUR을 수행합니다. 이후 조직을 채취하기 전까지 7일 동안 신장이 감압되도록 합니다.조직을 통해 구조적 손상, 대식세포 침윤, 근섬유아세포 축적 및 섬유화를 평가할 수 있습니다. 다음은 전형적인 수술 설정입니다. 모든 절차는 멸균된 수술 구역 내에 배치된 멸균 오토클레이브 도구 및 소모품을 사용하여 수행됩니다.여러 마리의 동물을 수술하는 경우, 각 절차 사이에 비드 멸균기를 사용하여 기구를 멸균하거나 각 절차마다 새로운 기구 세트를 사용해야 합니다. 수술자는 멸균 가운, 마스크, 모자 및 장갑을 착용합니다. 이 8주령 수컷 C 57 black six 마우스는 케타민, 염산염 및 meine를 복강 내 주사하여 마취되었습니다.발가락 꼬집기 자극에 대한 반응 소실을 통해 마취 깊이를 확인하였습니다. 수술 부위는 털을 제거한 후 희석된 클로르헥시딘 용액을 사용하여 소독하였습니다. 각막 건조를 방지하기 위해 안구 윤활제를 도포하였습니다.진통제인 buprenorphine hydrochloride를 피하 주사로 투여하였습니다. 마우스의 입 부분을 멸균 드레이프가 깔린 가열 수술 패드 위에 놓고, 조직 분리 가위를 사용하여 사지를 고정한 뒤 정중선 개복술을 시행하고 혈관이 없는 선형 팔꿈치를 따라 절개합니다. 다음 장에서는 불가역적 UUOA를 수행하는 방법을 자세히 설명하며, 절개 부위에 calibra 리트랙터를 삽입하고 마우스를 멸균 드레이프로 덮습니다.장관을 밀어내고 멸균 거즈로 습윤 드레싱하여 왼쪽 요관을 노출시킵니다. 각도 핀셋(angled forceps)을 사용하여 요관을 노출시키고 분리하여 폐쇄를 유도합니다. 6-0 검은색 땋은 실크 봉합사(black braided silk suture)를 사용하여 요관을 두 번 결찰합니다.요관은 방광과 신우 사이의 어느 지점에서든 폐쇄될 수 있습니다. 그런 다음 봉합사 사이에서 요관을 절단합니다. 다음 장에서는 가역적인 요관 폐쇄를 수행하는 방법을 자세히 설명하겠습니다.이는 RUUL의 첫 번째 단계입니다. 각도가 있는 포셉을 사용하여 요관을 노출하고 분리하여 폐쇄를 유도합니다. 6.0 black braided silk 봉합사를 사용하여 요관을 두 번 결찰합니다.방광과의 문합을 위해 적절한 길이의 요관을 보존할 수 있도록, 요관의 폐쇄는 방광에 가까운 부위에서 이루어져야 합니다. 복구 과정에서 봉합사를 다듬되, 나중에 사용하기 위해 하나는 길게 남겨두고, 약 5 mm 길이의 연질 플라스틱 튜브를 절단합니다. 그다지 요관 주변에 적용할 수 있도록 펼쳐질 수 있게 세로 방향으로 절개선을 만듭니다.연질 벽 플라스틱 튜브의 내경은 1 mm, 외경은 2 mm여야 합니다. 그 다음 연질 벽 플라스틱 튜브를 요관 주위에 조심스럽게 배치하여, 튜브를 닫았을 때 긴 봉합사가 슬릿의 중앙에서 나오도록 합니다. 이어서 6-0 검은색 편사 실크 봉합사를 튜브 주위로 통과시켜 묶어줍니다.그 후 튜브 중심에서 나오는 긴 봉합사를 다음 매듭에 포함시킵니다. 이는 요관과 튜브를 제자리에 단단히 고정하기 위해 수행됩니다. 요관 주변의 튜브는 UUO 및 RUUO 절차 모두의 마지막 단계에서 요관이 과도하게 확장되는 것을 방지합니다.장기를 원래 위치로 되돌린 후 복막을 봉합하고 금속 클립으로 피부를 폐쇄합니다. 수술 부위에 요오드를 도포합니다. aamaz를 피하 주사하여 마취를 부분적으로 역전시킵니다.염산염과 수액을 1 mL의 가온된 식염수와 함께 피하 주사로 투여합니다. 마우스가 의식을 회복할 때까지 모니터링한 후, 29 °C로 유지되는 가온 상자에서 24시간 동안 회복하게 합니다. 요관 폐쇄 후 며칠이 지나면 신장에 수신증이 발생합니다.마우스는 손상 단계 중 다양한 시점에서 혹은 폐쇄 해제 후에 희생시킬 수 있습니다. 다음 장에서는 RUUO 절차의 두 번째 단계인 폐쇄 해제 수행 방법을 자세히 설명합니다. 마우스는 앞서 설명한 대로 마취 및 준비 과정을 거칩니다.금속제 피부 클립을 제거하고 개복술을 수행합니다. 복막 봉합사를 제거한 후, 쥐 치과용 포셉(rat tooth forceps)을 사용하여 복막을 조심스럽게 엽니다. 그런 다음 마우스를 준비하고, 이전에 설명한 대로 굴곡 포셉(angled forceps)을 사용하여 왼쪽 요관을 노출시킵니다.요관과 연성 벽 플라스틱 튜브를 주변 조직으로부터 분리합니다. 연성 벽 튜브를 고정하고 있는 봉합사를 메스로 절단하여 제거합니다. 그런 다음 연성 벽 플라스틱 튜브를 조심스럽게 제거하면 확장된 요관이 확인됩니다.요관은 폐쇄 지점에서 취약하며, 본 영상에서 나타난 바와 같이 폐쇄 부위 상단이 파열될 가능성이 높습니다. 하지만 UUO 1단계 동안 방광 근처에 미리 배치한 봉합사는 그대로 유지되므로, 방광에서 복강으로 소변이 새어나가지 않도록 보장합니다. 이전에 폐쇄되었던 요관에서 배출되는 요침전물을 수집하기 위해 요관 아래에 멸균 거즈 한 조각을 배치합니다.요관 내강에 잔류물이 없음을 확인하기 위해, 폐쇄되지 않은 요관의 나머지 길이를 통해 맑은 소변이 나올 때까지 배출시켜야 합니다. 요관과 신우의 배출이 완료되면, 요관 끝에 6-0 검정색 땋은 실크 봉합사를 연결합니다. 이는 이후에 진행될 요관-방광 문합술을 돕기 위해 사용됩니다.그 다음 요관을 원래 위치보다 앞쪽으로 돌려 신장 위에 놓이게 합니다. 요관 끝에 단일 나노 폴리아미드 모노필라멘트 TAing 봉합사를 배치합니다. 이때 봉합사가 근육층에 머물러 요관 내강으로 들어가지 않도록 주의합니다.봉합사는 추후 문합을 위해 방광 내에 요관을 고정하는 데 사용됩니다. 21 gauge 바늘을 방광에 대각선으로 통과시켜 방광을 관통하는 통로를 만듭니다. 그다음 21 gauge 바늘을 이용하여 안구 바늘(eye needle)을 방광에 통과시킵니다. 이전에 요관에 배치한 Nino 봉합사를 방광의 첫 번째 절개창으로 통과시킨 뒤, 요관이 방광을 관통할 수 있도록 진입점 근처의 방광벽 밖으로 빼냅니다.요관 끝에 배치한 6-0 봉합사를 바늘귀에 통과시킵니다. 그 후, 요관이 함께 끌려 나오도록 확인하면서 바늘귀를 방광을 통해 천천히 빼냅니다. 요관이 방광 내에 위치하면, 요관을 안정적으로 고정하기 위해 요관과 방광벽에 배치한 나노 봉합사를 묶어 요관을 고정합니다.두 번째 otax 봉합사를 배치합니다. 이 봉합사를 다시 요관을 통과시키되 근육층 내에 머물도록 하며, 방광 절개창을 거쳐 방광벽 밖으로 뺍니다. 그 다음 앞서와 동일한 방식으로 매듭을 짓습니다.세 번째 nano tax 봉합사를 방광 후면에 배치합니다. 다음으로, 열린 가위의 뒷부분을 사용하여 방광벽을 약간 뒤로 밀어 요관의 길이를 노출시킵니다. 그 후, 폐 봉합사 윗부분에서 요관을 절단합니다.그 후 도색된 요관이 방광 내부로 비스듬하게 후퇴하게 됩니다. 요관이 방광 안으로 완전히 후퇴했는지 확인하기 위해 4개의 팁을 사용합니다. 마지막으로, 방광의 출구 상처를 9-0 폴리아미드 단사 봉합사로 폐쇄하며, 폐쇄 전 요관이 방광 내에 단단히 고정되었는지 확인하십시오.앞서 설명한 대로 복막과 피부를 봉합하고, 이전과 동일하게 수술 후 관리를 실시합니다. 본 연구에서는 폐쇄되었던 신장의 압력을 낮추기 위해 모든 UUO 마우스가 7일 동안 회복하도록 하였으나, 더 빠르거나 늦은 시점을 연구할 수도 있습니다. 다음은 폐쇄된 신장과 폐쇄 해제된 신장의 외형 및 그로 인한 손상을 보여주는 데이터입니다.이 그림은 정상 신장과 비교하여 native U-U-L-U-U-O 신장, 신우 및 요관의 외형을 보여줍니다. 7일 동안 폐쇄된 UUO 신장은 수신증 양상을 보이며 색이 창백합니다. 폐쇄 해제 후 7일이 지나면, RUO 신장은 감압되었으며 신우와 요관은 정상 신장과 유사한 크기와 색상으로 회복되었습니다.IUO 요관은 비구조화 기술 및 방광으로의 문합으로 인해 UUO 및 정상 신장의 요관보다 짧다는 점에 유의하십시오. 이 그림은 정상, UUO 및 RUUO 신장의 H &amp; E 염색된 신장 절편의 대표 이미지를 보여줍니다. 정상 신장의 건강한 간질은 조밀하고 건강한 세뇨관의 횡단면으로 구성됩니다.검은색 화살표로 표시된 다수의 세뇨관들이 7일 차에 극심한 확장을 보입니다. 대조군 튜브의 QUL 이후, UUL의 가역적 해소 7일 후에 확장 정도가 현저히 감소합니다. 여기서 제시된 폐쇄성 신병증 마우스 모델은 일측성 요관 폐쇄에 의해 유도되며, 이는 비가역적일 수도 있고 가역적일 수도 있습니다.여기서 상세히 설명하는 가역적 모델은 요관 폐쇄를 제거하고 요관과 방광을 문합하여 소변 흐름을 완전히 복원할 수 있게 합니다. 그 결과로 나타나는 신장 감압을 통해 손상 후 실험의 조직 리모델링 연구가 가능해집니다. 비가역적 및 가역적 폐쇄성 신증 모델을 모두 통합함으로써, 연구자들은 질병 과정과 치료적 개입이 손상의 발생 및 이후의 조직 리모델링을 어떻게 조절하는지에 대한 강력한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 편측 요관 폐쇄 마우스 모델을 생성하는 절차를 보여줍니다. 이 절차에는 소변 흐름을 막기 위해 마우스의 요관 중 하나를 절단하는 것이 포함됩니다.

편측성 요관 폐색 쥐 모델: 마우스 모델에서 신장의 소변 흐름을 막는 수술 절차

우리는 양적 역전사 중합효소 연쇄 반응에 의해 일방적인 요원 방해(UUO)를 가진 마우스의 신장에서 마이크로RNA 발현을 평가하는 방법을 설명한다. 이 프로토콜은 UUO를 가진 마우스에 있는 신장 microRNA 발현 단면도및 그밖 병리학 조건의 맥락에서 공부하기 에 적합합니다.

일방적 인 요원 방해와 마우스 신장에서 microRNA 표현의 정량적 실시간 PCR 평가

여기에서는 표면 사구체가있는 뮌헨 Wistar Fromter 쥐에서 2 광자 현미경을 사용하여 사구체 역학 및 기능에 대한 장기간의 요관 폐쇄의 영향을 정량화하는 프로토콜을 제시합니다.

2광자 현미경을 사용하여 만성 일방적 요관 폐쇄가 사구체 과정에 미치는 영향을 정량화

본 프로토콜은 편측 요관 폐색의 단계적이고 재현 가능한 모델을 설명합니다.

가역적 일방적 요관 폐색의 미성숙한 쥐 모델(An Immature Murine Model of Reversible Unilateral Ureteral Obstruction)

이 프로토콜은 폐쇄성 신병증에서 조직 섬유증의 진행을 연구하기 위해 마우스에서 편측 요관 폐쇄(UUO)를 유도하는 방법을 설명합니다. 여기에는 수술 절차, 수술 후 관리 및 섬유증 평가 방법이 포함됩니다.

신장 간질성 섬유증(Kidney Interstitial Fibrosis) 조사를 위한 일측성 요관 폐쇄 모델(Unilateral Ureteral Obstruction Model for Investigating Kidney Interstitial Fibrosis)

이 논문은 연구자가 장기간의 요관 폐쇄 후 장기적인 구조적 및 기능적 결과를 분석할 수 있는 표준화된 모델을 사용하여 마우스에서 가역적 편측 요관 폐쇄를 수행할 수 있도록 하는 자세한 지침을 제공합니다.

장기간의 일측성 요관 폐색의 역전 후 장기적인 구조적 및 기능적 결과를 평가하기 위한 마우스 모델

Cholestasis은 일반적으로 외과의와 소화기 전문 내과 모두에 의해 발생 임상 조건입니다. 가역 cholestatic 랫 모델의 생성 쥐의 작은 크기와 독특한 hepatopancreatobiliary 해부학보기에 도전하실 수 있습니다. 이 동영상이 문서는 가역 cholestatic 모델의 생성을 보여줍니다.

가역 Cholestatic 쥐 모델의 생성

무한 호라이즌 임팩터를 사용하여 자궁 경부 일방적 척수 부상을 생산하기위한 안정적이고 반복 가능한 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 사용자 정의 설계된 프레임을 활용하고 척추를 고정 클램프. 표준화된 절차와 충분하고 지속적인 부상의 biomechanical 부상 매개 변수 결과.

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돌이킬 수 및 가역 일방적 Ureteric 폐색의 쥐 모델

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