Name: 살아있는 인간의 눈의 압력 상승에 섬유주 응답 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: 배우세요 살아있는 인간 눈에서 섬유주가 급성 안압 상승에 어떻게 반응하는지 광학 간섭 단층 촬영법으로 정량화하는 방법을. 이 기법은 녹내장 연구와 수액 역학 이해에 중요한 통찰을 제공합니다.

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미국 국립보건원(National Institute of Health) 계약 R01-EY13178 및 P30-EY08098(메릴랜드주 베데스다), 눈과 귀 재단(Eye and Ear Foundation, 펜실베이니아주 피츠버그) 및 실명 방지를 위한 연구(Research to Prevent Blindness, 뉴욕)의 무제한 보조금에 의해 부분적으로 지원됩니다.

윤리 문 : 대상 모집이 시작되기 전에 승인은 의학의 피츠버그 학교의 대학의 임상 시험 심사위원회로부터 얻은 것입니다. 제공되는 모든 피험자는 연구에 참여하기 전에 동의를 정보를 작성합니다. 1. 데이터 수집 <ol><li> 압력 상승 <ol><li> 눈에 0.5 % proparacaine 한 방울을 주입하여베이스 라인 측정 (안압과 10월 측정을) 가져 가라. 효능에 대한 3 분을 기다립니다. </li><li> 부드럽게 ophthalmodynamometer, 코호트 1 30 g을 5 시간 공막에 압​​력을 적용하고 다음과 같이 코호트 (2) 10 g을 다음 원하는 (안압 및 10월) 측정을 수행 <ol><li> 안압 측정 <ol><li> 기준 안압을 측정합니다. 1.1 절에 설명 된대로 압력을 상승. </li><li> 코호트 1에서 0.5 % proparacaine 한 방울을 심어 효능 3 분을 허용하고, 공막에 압​​력 30g을 적용합니다. 압력이 적용되는 동안, 안압 안압계 다음 manufa의를 사용하여 측정cturer의 지시. </li><li> 코호트 2 년, 0.5 % proparacaine 한 방울을 심어 효능 3 분을 허용하고, ophthalmodynamometer를 사용하여 공막 압력 5g을 적용합니다. 안압계 다음과 같은 제조업체의 지침을 사용하여 압력 상승시 안압을 측정합니다. <ol><li> 5g 측정 후 5 분을 기다립니다. </li><li> ophthalmodynamometer에 의해 공막 압력 10​​g을 적용하고, 제조업체의 지침에 따라 안압계를 이용하여 압력 상승시 안압을 측정한다. 연구 레코드의 안압과 상태 (즉, 기준 또는 10 g)을 기록한다. </li></ol></li></ol></li><li> 10월 스캐닝 <ol><li> OCT를 스캐너에 따라 좌석. 새로운 주제에 대한 환자의 인구 통계 학적 데이터를 입력, 또는 이전에 스캔 한 주제에 대한 OCT를 데이터베이스에서 인구 통계 학적 데이터를 기억합니다. </li><li> 전 안부 512 X 128 스캔 프로토콜을 선택합니다. 영상 창에서 감시 센터입니다. 스캐너 사이의 거리를 감소눈은 각막 단면 이미지 검색 창에 나타날 때까지 </li><li> 구두 명령을 사용하면 코 방향으로 환자의 시선을 유도하여 검색 창 중앙에 시간 윤부 위치 </li><li> 기준 검사 획득 및 품질에 대한 검사를 검토합니다. 허용되는 경우, 저장하고 허용하지 않을 경우,이 단계를 반복합니다. <ol><li> 아무 깜박없고, 각도 화상의 에지의 떨어져 표류 또는 상단 내리고 않고도 음량 통하여 가시화되면 스캔을 수락. </li></ol></li><li> , 0.5 % proparacaine 한 방울을 심어 효능 3 분을 허용하고, 1.3.5을 통해 단계 1.3.2를 반복합니다. </li><li> 코호트 1 들어 ophthalmodynamometer 의해 공막 압 30g을 적용하고 압력이인가되는 동안 주사를 획득. 압력을 제거하고 품질 검사를 검토합니다. 허용되는 경우, 저장하고 허용하지 않을 경우,이 단계를 반복합니다. </li><li> 코호트 2의 경우, ophthalmodynamom에 의해 공막 압력 5g을 적용압력이인가되는 동안 라 미터 및 스캔을 획득. 압력을 제거하고 품질 검사를 검토합니다. 허용되는 경우, 저장하고 허용하지 않을 경우,이 단계를 반복합니다. </li><li> 눈 5g 압력 섭동 복구 할 수 있도록 5 분을 기다립니다. </li><li> 코호트 2 들어 ophthalmodynamometer 의해 공막 압 10g을 적용하고 압력이인가되는 동안 주사를 획득. 압력을 제거하고 품질 검사를 검토합니다. 허용되는 경우, 저장하고 허용하지 않을 경우,이 단계를 반복합니다. </li><li> 연구 레코드의 스캔 시간, 상태 (즉, 기준 또는 10 g) 및 위치를 기록합니다. </li></ol></li></ol></li></ol></li></ol> 2. 데이터 처리 <ol><li> OCT에 USB 대용량 저장 장치를 플러그. OCT에 레코드 메뉴에서 &quot;내보내기&quot;를 선택합니다. USB 드라이브 보낸 파일의 파일 위치를 지정한다. &quot;.ZIP&quot;옵션의 선택을 취소합니다. SC에 대한 환자의 이름을 입력ANS는 수출 및 검사를 내보낼 수 있음을 선택합니다. 수출을 시작합니다. </li><li> 내보내기가 완료되면 USB 드라이브를 마운트 해제하고 OCT에서 제거합니다. 화상 처리 스테이션으로 보낸 이미지를 포함하는 고용량 USB 드라이브 플러그. </li><li> 이 경우에 ImageJ에 화상 처리 프로그램을 실행. </li><li> RAW 이미지 데이터를 가져 오기; 선택 &quot;파일 -&gt; 가져 오기 -&gt; 원시&quot;파일 메뉴에서. &quot;_cube_raw.img&quot;로 끝나는 USB 드라이브에서 처리 할 수있는 파일을 선택합니다. </li><li> 원 화상 데이터가 변경되지 않고 저장되도록 새 이름을 사용하여 임포트 된 파일을 저장 (http://www.ori.dhhs.gov/education/products/RIandImages). </li><li> 8 비트, 폭 : 512, 높이 : 1,024, 오프셋 : 이미지의 유형은 다음과 같이 가져 오기 매개 변수를 입력 0; 이미지 수 : 128. </li><li> 플러그인 메뉴에서 &quot;&gt; StackReg - -&gt; 연구의 egistration 플러그인&quot;을 선택합니다. 그리고 &quot;강체를 선택&quot;옵션을 선택합니다. 정렬 된 스택을 저장 후 &quot;&gt; TIFF - -&gt; 다른 이름으로 저장 파일&quot;을 선택합니다. </li><li> 선택 &quot;프로세스 -&gt; 필터 -&gt; 3D 평균&quot;프로세스 메뉴에서. 필터 옵션에 따라 매개 변수 X = 1, Y = 1, 및 Z = 1을 입력합니다. 두 번이 단계를 반복합니다. </li><li> 평균 스택을 저장 &quot;&gt; TIFF - -&gt; 다른 이름으로 저장 파일&quot;을 선택합니다. 활성 스택의 프레임 1로 이동 마우스 휠 스핀. </li><li> &quot;프로세스 -&gt; 로컬 대비 (CLAHE) 강화&quot;를 선택하여 처리 메뉴에서합니다. (31), 히스토그램 빈 : 256, 최대 경사 : 5, 마스크 : 매개 변수 블록 크기를 사용 없음을하​​고 &quot;빠른&quot;옵션을 선택합니다. 다음 프레임으로 사전에 오른쪽 화살표 키를 사용합니다. </li><li> 지역 대비 (CLAHE)을 강화&gt; 활성 스택의 프레임 2로 이동하고 프로세스 -를 반복합니다. 모든 프레임 대비 강화했다 때까지 반복합니다. </li><li> 선택 &quot;파일 -&gt; 다른 이름으로 저장 -&gt; TIFF&quot;; 조영 증강 스택을 저장합니다. 그런 다음 선택 &quot;이미지 -&gt; 조정 -&gt; 크기&quot;이미지 메뉴에서. &quot;화면 비율을 제한합니다&quot;옵션의 선택을 취소 한 다음 너비를 입력 : 2,048과 높이를 : 1,024 값을. </li><li> 선택 &quot;이미지 -&gt; 변환 -&gt; 수직 뒤집기&quot;이미지 메뉴에서. 분석 메뉴에서 - 그런 다음 &quot;&gt; 설정 규모 분석&quot;을 선택합니다. 일을하고 확인을 클릭합니다 : 2,048, 알려진 거리 : 4,000, 및 픽셀 종횡비를 픽셀 단위로 거리를 입력합니다. 1 화면 비율 스택 : 교정 1을 저장합니다 &quot;&gt; TIFF - -&gt; 다른 이름으로 저장 파일&quot;을 선택합니다. </li><li> 육안 검사 내의 기준점 역할을 독특한 용기 교차를 식별 검사를 검사 천천히 마우스 휠 스핀. 분석 스프레드 시트의 이미지 번호와 참조 프레임 번호를 기록한다. </li><li> 첫 번째 측정 프레임으로 이동 왼쪽 화살표 키를 15 번 누릅니다. &quot;자유형 SelectionsR를 선택(21); 도구 모음에서 도구입니다. </li><li> SC의 중심에 마우스를 놓고 위쪽 화살표를 누릅니다. SC가 화면을 채울 때까지이 단계를 반복합니다. </li><li> 마우스로 경계를 돌고 수동 세그먼트 사우스 캐롤라이나. 현재 이미지 프레임에 대한 제어 (CTRL) 키를 누른 D를 잡습니다. Ctrl 키를 누른 상태에서 M을 누릅니다 분석 스프레드 시트 SC 단면적 및 측정 프레임 수의 측정을 스크립트 작성. 요약 영역의 선택을 취소합니다. 3 번 키 오른쪽 화살표를 누릅니다. SC는 10 프레임으로 측정 될 때까지이 단계를 반복합니다. </li><li> 첫 번째 측정 프레임으로 돌아가려면 왼쪽 화살표 키를 30 번 누릅니다. </li><li> 도구 모음에서 직선 세그먼트 도구를 선택합니다. </li><li> SC의 앞쪽에 가장 후방에 가장 위치에서 직선을 그립니다. 만 현재의 프레임에 대한 제어 키를 누른 D를 잡습니다. 분석 스프레드 시트 컨트롤 키를 누른 엠 스크립트 작성 SC 길이와 프레임 번호를 잡습니다. 요약 영역의 선택을 취소합니다. 오른쪽 화살표 키를 누르십시오3 번. SC 길이 SC 단면적과 동일한 10 프레임으로 측정 될 때까지이 단계를 반복합니다. </li><li> 길이 측정에 의해 면적 측정을 나누어 외부 벽의 거리 (SC-IOWD)에 평균 SC 내측 벽을 계산하기 위해 분석 스프레드 시트로 식 SC-IOWD = SC-CSA / 축 방향 길이를 삽입한다. </li><li> 첫 번째 측정 프레임으로 돌아가려면 왼쪽 화살표 키를 30 번 누릅니다. </li><li> 도구 모음에서 직선 세그먼트 도구를 선택합니다. </li><li> 직선을 그립니다 앞쪽에 가장 섬유주와 전방의 경계에 SC의. 선이 경계에 수직 있는지 확인하십시오. Ctrl 키를 누른 다음를 누릅니다 D를, 엠 잡아 </li><li> (SC)의 후방 가장 위치와 TM의 경계와 전방에서 선을 그립니다. 경계에 수직 그 라인을 확인합니다. 제어하고 D를 눌러, 엠 잡아 </li><li> SC의 중심과 TM의 경계와 전방에서 선을 그립니다. 린 있는지 확인경계에 수직 전자. 만 현재의 프레임에 대한 제어 키를 누른 D를 잡습니다. </li><li> 스프레드 시트 분석 세 TM 두께 측정 및 프레임 번호 속기. 이 보도 3 번 키 오른쪽 화살표를 수행합니다. TM 두께 SC 단면적과 동일한 10 프레임으로 측정 될 때까지이 단계를 반복합니다. </li></ol>

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</ol>

박사 슈만은 자이스 사에 매사 추세 츠 공과 대학과 매사추세츠 눈과 귀 의무실에 의해 허가 지적 재산권에 대한 로열티를받은

본 기술은 SC 붕괴를 정량화하는 연부 조직의 기계적 응답의 비 침습적 관찰을 활용합니다. 인간의 시체의 눈을 사용하여 미래의 작업은 절개 후 조직의 처짐을 실제 조직 강성을 보정 할 필요가있다. 그러나, 이러한 연구는 이전 유출 모델의 동일한 제한을 겪을 것이다; 특히, 조직 장력에 살고있는 근육의 기여는 존재하지 않습니다. 살아있는 포유류의 눈 모델에 추가 교정은 이미징 및 TM의 강성의 직접 측정의 보정을 허용 할 수있다. 기술에 대한 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 그것은 또 다른 10월 플랫폼에서 입증되어야한다. 문학은 같은 구조, 다른 10월 장치에서 아직 인간의 눈에서 증명해야하는 해당 장치에 급성 안압 상승과 관련된 변화에 그러나 감도를 가시화 될 수 있음을 시사한다. 추가 광학 장치가 없기 때문에 본 장치는 편리 성에서 사용전 안부 검사에 필요합니다. 이 작품의 가장 큰 문제는 스캔 내에서 SC의 식별이다. 그것은 명확히 단일 슬라이스 내의 SC를 식별하는 것...

녹내장은 돌이킬 수없는 실명 1의 세계에서 두 번째 주요 원인이다. 상승 된 안압 (IOP)을 녹내장 2-7의 존재 및 진행에 대한 주요 원인 위험 인자이다. &#160; 안압은 방수 (8)의 형성과 유출의 균형에 의해 조절된다. 큰 유출 저항의 위치가 조직과 juxtacanicular Schlemm 운하 (SC)의 내벽, SC 및 섬유주 (TM) 9-11 사이의 인터페이스이다. TM 강성은 안압 상승의 얼굴에 SC 붕괴의 방지에 기여할 수 있지만, 오버 비 등. (12)는 최근에 안압 상승으로 이어지는, 모공의 형성을 방해, 증가 SC 내피 보강의 결과, 녹내장의 유전자 발현이 변경되는 것을 증명 녹내장 (13). TM의 형태와 강성 T을 강조, 유출 시설 14, 15와 상관 관계그는 그것의 생체 역학적 특성을 측정 할 필요가있다. TM의 원자 힘 현미경 측정은 녹내장 (4.0 kPa의) (16)없이 기증자로부터 눈에 비해 녹내장 환자 (81 kPa의) 기증 눈에 높은 강성을 보여 주지만, 이러한 측정은 해부 생체 조직에서 만들어졌다. 후방 TM은 외부 lamellated과 cribiform TM (17)에 삽입 길이 근육 세포의 전방 힘줄을 통해 모양체 근육에 고정된다. 모양체 근육 (CM) 활동이 높은 TM 강성 (17)을 흉내 낸, TM의 팽팽함을 증가시킬 수있다. 평활근의 섭동에 의한 SC 붕괴에 저항의 변화를 관찰 할 수있는 능력을 동물 모델 (18)에 도시되었다. 우리는 비 침습적 영상에 능력을 원위부 인간의 눈을 살고 스펙트럼 영역 빛 간섭 단층 촬영 (OCT를) 사용하여 SC 등의 기본 방수 유출 시스템을 증명하고있다 &lt;SUP&gt; 19-21. 이 기술을 사용하여, 우리는 급성 IOP 상승 22 TM 및 SC의 형태 학적 반응을 정량화하는 능력을 보여 주었다. 본원에 기재된 방법의 전반적인 목적은 현장에서 살아있는 조직에서 급성 IOP 상승에 살고 유출 관의 형태 학적 반응을 정량화 하였다. 이 기술은 해부 조직 이루어진 출판 측정치와 비교하여, TM 강성에 TM과 CM 내의 두 수축성 섬유 활성의 기여를 포함 생리적 조건 하에서 TM을 조사하는 이점을 갖는다. 기계 TM 응답의 관찰에이 기술을 적용 뒤에 이론적 근거는 우리가 지금 유출 저항과 안압 조절 (13)에 직접 연결되는 알고 TM의 기계적인 행동에 대한 그렇지 않으면 사용할 수없는 통찰력으로 우리를 제공하는 것입니다. 전체 강성, 작은 코호에 수축성 조직의 기여를 식별하려면주제 RT는없이 tropicamide의 투여에 의한 부드러운 근육 활동의 억제와 함께 조사 하였다.

<table><tbody><tr><td>스펙트럼 도메인 OCT</td><td>Zeiss</td><td>Cirrus</td><td></td></tr><tr><td>이미징 워크스테이션</td><td>Apple</td><td>iMac</td><td></td></tr><tr><td>검안경</td><td>Baillairt Matalene 검안경, 수술 기구 CO., Inc. 뉴욕, 뉴욕</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이미지 처리 프로그램</td><td>rsb.info.nih.gov/ij</td><td>ImageJ, FIJI</td><td></td></tr></tbody></table>

살아있는 인간의 눈의 압력 상승에 섬유주 응답

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

섬유주 (TM)의 기계적 특성을 유출 저항과 안압 조절에 연결되어 있습니다. 이 기술 뒤에 근거는 급성 안압 상승에 TM의 기계적 응답의 직접 관찰이다. 스캔하기 전에, 안압은베이스 라인에서와 안압 상승하는 동안 측정한다. 윤부는베이스 라인에서 안압 상승 중 스펙트럼 영역 빛 간섭 단층 촬영으로 스캔 (ophthalmodynamometer (ODM)는 30g의 힘에 적용). 검사는 ImageJ에를 사용하여 방수 유출 경로의 시각화를 향상시키기 위해 처리됩니다. 혈관 랜드 마크는베이스 라인과 안압 상승 스캔 볼륨에 해당하는 위치를 식별하는 데 사용됩니다. Schlemm 운하 (SC)의 단면적 (SC-CSA)하고 장축을 따라 전치부에서 SC 길이 SC의 1mm 세그먼트 내의 열 위치에서 수동으로 측정된다. 외벽의 거리 (단경)는 내측으로 나눈 SC의 면적으로서 산출 의미 그장경. 효과 안압 상승에 인접한 조직의 기여를 검사하려면, 측정없이 tropicamide의 점안과 평활근 이완을 반복한다. SC에 TM 마이그레이션 TM 강성으로 저항하지만, 모양체 내에서 인접 평활근에 첨부 파일의 지원에 의해 강화된다. 이 기술은 인간의 눈 내 생리 학적 조건하에 동일계 내 압력 상승에 살아있는 인간 TM 응답을 측정하는 제이다.

이러한 데이터 수집 및 영상 분석 기술들을 사용하여, 예컨대 SC 단면적 같은 유출 관 형태 학적 파라미터에 IOP에 크고 작은 변화의 영향 (도 1)가 얻어진다. 우리는 단면적의 큰 감소로 대표되는 IOP 증가 높은 수준, SC의 관찰 붕괴를 생성 할 것을 알 수있다. 눈은 SC-CSA 변화의 부재 (도 1)에 의해 입증되는 바와 같이, IOP의 작은 증가를 수용 할 수있을 것으로 보인다. 이 결과는이 기술이 급성 IOP 도전로 유출 관의 형태 학적 반응을 정량화 할 수있는 것을 보여준다. 기술이나 기법의 다른 가족은 유출 요로 생체 역학에 대한 두 시각 및 정량적 정보를 제공하지 않습니다. 연구를 통해, TM의 두께에는 큰 변화가 관찰되지 않았다. 23 mmHg의 IOP 증가에 응답하여, 외벽 거리 내측 SC가 5.03 μm의 감소 하였다. Without 평활근 활성의 억제와 함께, IOP의 6 mmHg의 증가는...

Schlemm의 운하 공간으로 섬유주 (TM) 마이그레이션 ophthalmodynamometer에 의해 급성 압력 상승에 의해 유도 및 스펙트럼 영역 빛 간섭 단층 촬영으로 관찰 할 수있다. 이 방법의 목적은 현장에서 조직 생활에 심각한 압력 상승에 살고 유출 관의 형태 계측 학적 반응을 정량화하는 것입니다.

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

본 절차의 전반적인 목표는 생체 내 인간 안구의 생리학적 조건에서 섬유주를 검사함으로써, 급격한 IOP 상승에 따른 살아있는 유출로의 형태계측학적 반응을 정량화하는 것입니다. 이를 위해 우선 기저 상태에서 안압을 측정하고, 광간섭단층촬영을 통해 방수 유출 경로의 위치인 각막연부의 영상을 촬영합니다. 두 번째 단계는 안과용 역학계를 사용하여 외측 공막에 5g 및 10g의 압력을 가해 IOP를 높이는 동안 안압 측정과 각막연부 스캔을 반복하는 것입니다.다음으로 tropic amide 한 방울을 사용하여 평활근을 이완시킵니다. 이후 약물 투여 없이 압력 측정과 각막연 스캔을 반복합니다. 안압(IOP) 상승 중에 획득한 이미지 데이터를 내보내고 처리하며, 유출 경로의 구조적 형태를 측정합니다. 평활근 이완 여부에 따른 안압 상승 시의 형태학적 변화를 비교함으로써 섬유주 그물망의 기계적 특성에 대한 통찰을 얻을 수 있습니다.이 기술이 원자 힘 현미경(atomic force microscopy)과 같은 다른 기술에 비해 갖는 주요 장점은 살아있는 눈에서 섬유주(trabecular meshwork)를 측정하고 안압(IOP) 섭동에 대한 기계적 반응을 조사할 수 있다는 점입니다. 이러한 반응에는 이를 지지하는 주변 평활근의 영향이 포함됩니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 사람들은 고정이 없고 표적이 없으며, 고정이나 안구 위치 조정이 주로 구두 명령으로 이루어지기 때문에 초기에는 어려움을 겪을 수 있습니다.또한, 복부 다이너모미터를 적용하면 안구 위치에 약간의 변화가 발생합니다. 따라서 영상 획득 전에 스캔 위치를 다시 조정해야 합니다. 압력 상승부터 시작하십시오.먼저 Goldman applanation tonometry를 사용하여 기저 압력을 측정하며, 0.5% propane 한 방울을 안구에 점안하고 3분간 기다립니다. 테스트 그룹을 두 개의 코호트로 나눕니다. 코호트 1은 30 g의 압력을 받고 코호트 2는 5 g의 압력을 받습니다.안과용 다이나모미터를 사용하여 측두부 공막에 부드럽게 압력을 가합니다. 그 후 5분 동안 대기한 뒤, 두 번째 코호트에 10g의 압력을 가하고 상승 압력 측정값에 해당하는 추가 측정을 수행합니다. 이제 피험자의 안구 좌석에 대해 광간섭 단층촬영 스캔을 실시하고, 피험자를 스캐너에 앉힌 후 인구통계학적 데이터를 입력합니다.다음으로, 환자의 시선을 비강 방향으로 유도하는 구두 명령을 통해 스캔 중심을 측두 각막연(temporal limbus)에 맞춥니다. 측두 각막연이 중심에 위치하면 기선 스캔(baseline scan)을 수행합니다. 이제 눈에 0.5%propane 한 방울을 점안합니다.3분간 대기한 후, 알모 다이내모미터(almo dynamometer)를 사용하여 압력을 가하면서 다시 스캔합니다. 첫 번째 코호트에는 30 g의 압력을 가하고, 두 번째 코호트에는 5 g의 압력을 가합니다. 두 번째 코호트의 경우, 최초 압력 적용 후 5분간 대기한 다음 10 g의 압력을 가하며 눈의 세 번째 스캔을 수행합니다. 이전과 마찬가지로, 양호한 스캔 결과만 인정됩니다.데이터를 내보낸 후 Image J로 가져와서 이미지를 TIFF 이미지 스택으로 변환하고, 다음 설정으로 enhanced local contrast 프로세스를 사용하십시오. Parameter block size는 31, Instagram bins는 256, maximum slope at five masks는 none으로 설정하고, fast 옵션을 활성화합니다. 이미지 스택의 각 프레임에 대해 이 작업을 수행하고 변경 사항을 저장하십시오.그다음 가로세로 비율의 크기를 2048 By 10 24로 조정하고, 이미지를 수직으로 반전시킵니다. 스케일 거리를 2048로 설정하십시오. 기지 거리를 4, 000으로 설정하고 픽셀 가로세로 비율을 1로 설정하십시오.그 다음, 스캔 영상을 분석하여 혈관 교차 지점을 확인합니다. 마우스 휠을 천천히 돌려 스캔 영상을 시각적으로 검토하면서 특징적인 혈관 교차 지점을 식별하십시오. 스캔 내의 참조점으로 활용하기 위해, 분석 스프레드시트에 이미지 번호와 참조 프레임 번호를 기록합니다.스캔 볼륨의 프레임을 스크롤하는 것은 두 가지 목적이 있습니다. 첫째, 수성 혈관에서 특징적인 랜드마크를 찾는 것입니다. 이는 서로 다른 시간에 촬영된 스캔 볼륨을 정렬하는 데 사용됩니다.둘째로, 볼륨을 스크롤하면서 수성관의 형태를 머릿속으로 통합하고, 그 형태를 이용하여 수성관과 슐렘관을 구분합니다. 프리핸드 선택 도구를 사용하여 슐렘관에 집중하십시오. 먼저, 슐렘관의 단면적을 측정합니다. 마우스로 경계를 원형으로 그려 관을 수동으로 분할합니다.현재 이미지 프레임에서 CTRL D를 눌러 분할선의 위치를 기록합니다. 그런 다음 CTRL M을 눌러 슐렘관(Schlemm canal)의 면적을 자동으로 측정합니다. 확대해서 보면 슐렘관의 뚜렷한 경계가 없음을 알 수 있습니다.그러한 이유로, 분할 경계를 결정하기 위한 가이드라인으로서 반치폭(full width half max) 방식이 사전에 사용됩니다. 이제 슐렘관(Schlemm canal)의 단면적과 측정 프레임 번호를 분석 스프레드시트로 복사하십시오. 다음으로, 외곽선이 그려진 영역의 선택을 해제하고 오른쪽 화살표를 누르십시오.키를 세 번 눌러 이미지 프레임을 세 칸 앞으로 이동합니다. 이 과정을 반복하여 10개 프레임에서 Schlemm관의 단면적 측정을 완료합니다. 이제 왼쪽 화살표 키를 눌러 첫 번째 측정 프레임으로 돌아가 Schlemm관의 길이를 측정하기 시작합니다.툴바에서 직선 세그먼트 도구를 선택하십시오. 현재 프레임의 슐렘관(Schlemm canal)에서 가장 앞쪽 지점부터 가장 뒤쪽 지점까지 직선을 그으십시오. Control D 키를 눌러 세그먼트 라인의 위치를 기록하십시오.그런 다음 Control M을 눌러 Schlemm관의 길이를 측정합니다. 그다음 Schlemm관의 길이와 프레임 번호를 분석 스프레드시트에 복사하고, 길이 선택을 해제한 후 부피를 측정한 매 세 번째 이미지마다 관 길이를 측정합니다. 마지막으로, 세 개의 샘플에서 섬유주 그물망의 두께를 측정합니다.첫 번째 측정 프레임으로 돌아가서, 운하의 가장 앞쪽 지점에서 섬유주 그물망과 전방의 경계까지 직선을 긋습니다. 이때 선이 경계와 수직이 되도록 합니다. 이제 Control 키를 누른 상태에서 D를 누르고, 이어서 M을 눌러 선의 측정값을 얻습니다.이 측정값들을 어떤 프레임에서 추출했는지와 함께 항상 데이터베이스에 복사하십시오. 둘째, 운하의 중심에서 섬유주 망과 전방의 경계까지 선을 그으십시오. 이 선은 경계와 수직이어야 합니다.그런 다음 control 키를 누른 상태에서 D를 눌러 현재 프레임에만 적용합니다. 셋째, 관의 가장 후방 위치에서 전방과 접하는 망상 조직의 경계까지 선을 긋습니다. 이때 이 선이 경계와 수직이 되도록 합니다.그런 다음 Control 키를 누른 상태에서 D를 누르고 이어서 M을 누릅니다. 이전에 분석한 나머지 9개 프레임 각각에 대해 세 번의 두께 측정을 동일하게 반복합니다. 이후 설명된 프로토콜에 따라 데이터 분석을 진행하여, 안압의 소폭 및 대폭 변화가 유출 경로의 Schlemm canal 단면적과 같은 형태학적 파라미터에 미치는 영향을 얻었습니다. 높은 수준의 압력 증가는 관의 뚜렷한 허탈을 유발하는 반면, 안압의 소폭 증가는 수용되었습니다. 이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 10분에서 15분 이내에 완료할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Sharma, T. P., et al., Translaminar Autonomous System Model for the Modulation of Intraocular and Intracranial Pressure in Human Donor Posterior Segments(인간 기증자 후방 분절에서 안구 및 두개내 압력 조절을 위한 경층류 자율 시스템 모델). J. Vis. 특급 (2020). 이 비디오는 층류 횡단 자율 시스템에서 안구 및 두개내 압력을 시뮬레이션하여 망막 신경절 세포 신호에 대한 층상압의 영향을 연구하기 위해 인간의 눈을 준비하는 절차를 보여줍니다.

 Translaminar Autonomous System을 사용한 Translaminar Pressure 모델 개발

출처: Lani-Louzada, R., et al., 설치류의 외과적 유도 녹내장에 대한 변지 혈관신경총의 전원형 소작. J. Vis. Exp. (2022)이 비디오는 쥐 모델에서 상승된 안압(IOP)의 유도 및 모니터링을 보여줍니다. 이 과정에는 변부 혈관을 소작하는 것이 포함되며, 그 결과 혈관 폐색과 안압 상승이 발생합니다. 그런 다음 쥐가 회복되도록 하고 IOP는 비교를 위해 실험 눈과 대조 눈 모두에서 정기적으로 모니터링됩니다.

 쥐 모델에서 상승된 안압 유도

우리는 녹내장을 모델링하기 위해 쥐의 눈에 자기 미세구를 주입하여 안압(IOP) 상승을 유도하는 방법을 제시합니다. 이것은 강한 압력 상승과 광범위한 신경 세포 사멸로 이어집니다. 이 프로토콜은 수행하기 쉽고, 반복 주입이 필요하지 않으며, 안정적이고 오래 지속되는 안압 상승을 생성합니다.

실험 녹내장은 안구하는 미소 자석을 투여 한

여기서는 관찰 녹내장, 망막 신경절 세포의 손실을 초래 쥐 눈 안압을 유도 프로토콜을 제시한다. 자기 마이크로 비드는 전방에 주입과 방수의 유출을 차단하는 자석을 이용하여 홍채 각막 각도에 매료된다.

자기 마이크로 비드 폐색 모델 마우스의 녹내장 안구 고혈압 종속 유도합니다

여기, 우리 다운스트림 RNA 분석에 대 한 배수 채널 (TM)를 격리 하기 위한 재현성 레이저 캡처 기정 (LCM)에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. TM에 유전자 발현에 변화를 분석 하는 능력은 TM 관련 눈 질병의 근본적인 분자 메커니즘을 이해에 도움이 됩니다.

레이저 캡처 서 유전자 표정 분석에 대 한 마우스 눈에서 높은 순수 배수 채널의

만성 안구 고혈압 쥐와 쥐, 일치 녹 내장 망막 신경 절 세포의 기능 및 구조 저하로 이어지는 circumlimbal 봉합을 적용 하 여 유도 된다.

쥐와 쥐에 Circumlimbal 봉합에 의해 유도 된 녹 내장의 모델

우리는 트랜스 라미나르 자율 시스템의 사용을 설명하고 자세히 설명합니다. 이 시스템은 인간 후방 세그먼트를 사용하여 세그먼트 내부의 압력(내부)과 시신경(원두개)을 둘러싸서 녹내장 신경병증의 특징을 모방한 횡하수압 그라데이션을 생성합니다.

인간 기증자 후방 세그먼트의 내구 및 두개 내 압력 의 변조를위한 트랜스 라미나르 자율 시스템 모델

이 프로토콜의 목표는 아급성 안구 고혈압을 유발하는 변연 혈관 신경총의 360° 열 소작을 기반으로 하는 녹내장 신경 퇴행의 새로운 모델을 특성화하는 것입니다.

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

이 프로토콜은 트라베큘로톰 터널링 트라베큘로플라스티(3T)를 설명하는데, 이는 트라베큘라 절개, 슐렘관(SC) 확장, 인장 봉합 이식을 포함하는 최소 침습 녹내장 수술로, 생리적 수류 배출을 복원하는 데 포함됩니다.

트라베큘로톰 터널링 트라베큘로플라스티(3T): 원발성 개방각 녹내장에 대한 단계별 수술 프로토콜

두개골 내의 압력을 기록하는 소설 기법이 설명되어 있습니다. 최소한 침략적 방법은 정확하게 심각한 뇌 손상을 유발하지 않고 anaesthetized 쥐에게 intracranial 압력 (ICP)를 측정하기위한 광섬유 압력 감지 시스템을 사용합니다. 기술은 실험적 모델의 넓은 범위에서 사용할 수 있습니다.

광섬유 압력 변환기를 사용하여 쥐에서 경막외 Intracranial 압력 측정

배우세요 살아있는 인간 눈에서 섬유주가 급성 안압 상승에 어떻게 반응하는지 광학 간섭 단층 촬영법으로 정량화하는 방법을. 이 기법은 녹내장 연구와 수액 역학 이해에 중요한 통찰을 제공합니다.

살아있는 인간의 눈의 압력 상승에 섬유주 응답

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