퇴행성 신경 질환의 초파리 모델에서 등반 결함의 정량 분석

이 절차의 전반적인 목표는 운동에 관여하는 유전자에 대한 돌연변이 야생형 파리와 파리의 등반 능력을 정량화하는 것입니다. 이것은 먼저 파리를 유리 눈금이 매겨진 실린더로 옮김으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 폼 패딩에서 실린더를 가볍게 두드려 파리를 실린더 바닥으로 옮기는 것입니다.

다음으로 목표선을 넘는 파리는 2분 동안 비디오 카메라를 사용하여 녹화됩니다. 마지막 단계는 비디오를 분석하고 10초마다 목표선 위의 파리 수를 플로팅하는 것입니다. 궁극적으로 등반 분석은 초파리의 돌연변이 계통의 등반 능력의 결함을 식별하는 데 사용됩니다.

이 기술 또는 와일드 방법과 같은 기존 기술의 주요 장점은 등반 능력의 사소한 차이를 감지할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 진행성 보행 장애에 대한 유전성 경련성 하반신 마비에 대한 특정 유전자의 역할과 같은 신경 퇴행성 질환 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 함의는 치료의 발전으로 향하는 경향이 있습니다.

신경계 질환에 대한 IP는 약물 반응 및 돌연변이 후보 신경 퇴행성 유전자를 테스트하기 위한 간단한 정량적 분석을 제공하기 때문에 이산화탄소를 사용하여 파리 20마리를 마취시키는 것으로 시작하고 모든 파리를 음식이 들어 있는 25mm x 95mm 수집 바이알에 넣습니다. 그런 다음 파리가 들어 있는 바이알을 판지 트레이에 수평으로 보관하여 바이알 바닥에 쌓일 수 있는 액체에 파리가 갇히지 않도록 합니다. 다음 날 아침 12시간 동안 밝고 어두운 주기로 최소 21시간 동안 파리를 인큐베이터에 넣고, 바이알의 파리를 250ml 유리 눈금 실린더로 옮겨 등반 분석을 설정하고, 파리가 탈출하지 못하도록 상단을 왁스 필름으로 밀봉합니다.

섭씨 22도, 습도 40%의 주변 조명에서 실험을 수행합니다. 수면 주기와 혼동되지 않도록 항상 같은 시간에 실험을 수행하십시오. 또한 벤치 탑에 실린더의 위치를 표시하여 매일 일정하게 유지하십시오.

실린더 바닥과 음식 바이알에 있는 죽은 파리의 수를 세고 이 숫자를 폐사율로 기록하십시오. 다음으로 삼각대에 비디오 카메라를 설치합니다. 250ml 눈금이 매겨진 실린더의 190ml 라인에 카메라의 초점을 매우 가볍게 맞춥니다.

파리를 내부 바닥 표면으로 이동시킬 수 있을 만큼 충분한 힘으로 닫힌 셀 폼 패드에 실린더를 5-10회 두드립니다. 그런 다음 다른 손을 사용하여 카메라에서 녹화를 누릅니다. 그런 다음 카메라가 녹화하는 동안 뚜렷한 비리듬 패턴으로 실린더를 6번 두드립니다.

파리를 마지막으로 탭한 시간부터 2분 동안 각 시도를 수행합니다. 마지막으로 파리를 95% 에탄올에 처분하십시오. 시험이 완료되면 그룹 간의 운동에서 작은 차이를 감지하기 위해 매번 20마리의 신선한 파리를 사용하여 이 등반 분석을 10회 반복합니다.

실린더를 식기 세척기로 세척하고 밤새 건조시켜 실험이 완료되면 재사용할 수 있습니다.플라이 성능을 분석하기 위해 각 플라이 시험 기록의 비디오를 시청하는 것으로 시작합니다. 10초마다 목표 라인을 통과하는 파리의 총 수입니다. 플라이가 다시 내려오거나 떨어지면 그 플라이를 마이너스 1로 기록하고 목표선을 넘은 다음 플라이를 다시 올라가거나 떨어진 플라이와 같은 숫자로 계산합니다.

예를 들어, 15번째 플라이가 타겟 라인 아래로 떨어지면 라인을 넘는 다음 플라이는 16번째 플라이가 아닌 15번째 플라이로 간주됩니다. 그런 다음 총 파리 수에서 폐사율을 빼서 시험 플롯에 남아 있는 파리의 수를 구합니다. 심각한 돌연변이를 가지고 작업할 때 각 시점에서 목표선 위에 있는 파리의 비율은 다른 등반 분석을 사용하여 다른 정도의 등반 결함을 볼 수 있습니다.

여기에서 18초 후에 빈 음식병 위로 올라간 8일된 파리의 수는 두 그룹 간의 등반 행동에 큰 차이가 없음을 보여주었습니다. 반면에, 이 프로토콜의 등반 분석을 사용함으로써, TM 3개의 돌연변이 파리에 대한 Bastin 17 dash seven은 대조군에 비해 성능이 부족함을 보여줍니다. 많은 기관차 장애는 진행성이기 때문에 시간이 지남에 따라 파리의 진화를 관찰하는 것이 중요합니다.

생후 2일이 지나면 목표선 위로 올라가는 파리의 수에 상당한 차이가 있습니다. 대조군과 비교. 이 등반 성능은 돌연변이 파리가 2 일에서 며칠로 나이를 먹음에 따라 계속 감소합니다.

이 실험과 분석을 완전히 마스터하면 3시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 신경 장애에 대한 돌라 돌연변이 모델에서 기관차 결함을 정량화하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.