Name: Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: 배우세요 사후 돼지 눈에서 완전한 유리체 핵과 피질을 분리하는 해부 기법을 통해 안과학 연구를 수행하는 방법을. 이 방법은 유리체 유머의 해부학적 구조를 보존하여 물리적 및 생화학적 특성 연구에 활용할 수 있습니다.

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저자는 Whittier Foundation, Harrington Foundation, National Institutes of Health and Research to Prevent Blindness의 자금 출처를 인정합니다.

모든 탈핵 눈은 도살장에서 얻은하고 모든 실험은 기관 바이오 안전성 법에 따라 수행되었다. <ol><li> 표면에 세포핵이 제거 된 눈을 고정합니다. 눈 주위에 여분의 조직을 통해 조직의 핀을 배치하고 스티로폼 보드로를 확보하여이 작업을 수행합니다. </li><li> 해부 및 눈에서 perilimbal 결막을 분리합니다. <ol><li> 윤부에서 결막을 절개하고 퉁명스럽게 공막 떨어져 그것을 해부 미세 집게 (0.3 집게) 및 microscissors (웨스트 코트 위)를 사용합니다. 무딘 절개가 더 해부 할 수 있도록 진행으로 윤부 따라 결막을 잘라. </li><li> 가능한 한 많은 공막을 노출 끝까지 눈 (360도)의 주위에 결막을 제거합니다. 참고 :이 절차의 나머지 부분 동안 수술 핀이나 집게로 눈에 집착 용이하게하기 위해 결막의 작은 금액을 떠나 도움이됩니다. </li></ol></li><li> 하나 따라 전체 두께 공막 편 만들기눈 (메스 블레이드 69)의 측면. <ol><li> 부드럽게 어둡게 착색 된 맥락막까지 메스 (메스 블레이드 11)과 공막으로 절단하여 윤부에 윤부 및 3mm 후방에 ~ 5mm 공막 절개 평행을 볼 수 있습니다. 맥락막 자체를 절개하지 않도록주의하십시오. </li><li> 이 부드럽게 안쪽으로 맥​​락막을 눌러이 조직 사이의 잠재적 인 공간을 확대 할 수있을 때까지 조심스럽게, (무딘 절개를 사용하여) 가위 또는 메스 중, 공막과 맥락막 사이의 평면을 따라 해부. </li><li> T 자형 절개를 작성, 날카로운 microscissors와 최초의 공막 절개에 수직 다른 공막 절개를합니다. </li><li> 그리고 퉁명스럽게 기본 맥락막에서 공막 조직을 제거하고 부드럽게 위에서 언급 한 바와 같이 공막에서 멀리 맥락막을 밀어 원주 방식으로 해부하는 것을 계속한다. </li><li> 필요에 따라 공막 편을 크게한다. <ol><li> 부드럽게 떨어져 공막에서 맥락막을 해부 무딘과정 전반에 걸쳐. </li><li> 윤부 수직 만들어진 절개 시신경 도달 절개 윤부 평행이 눈 둘레 (45)의 적어도 1/3까지 이루어 플랩을 크게한다. </li><li> 무딘 해부하는 동안 눈을 조작하기위한 지렛대의 소스로 공막 편을 사용합니다. 플랩에 반대 견인은 무딘 절개보다 쉽게​​ 만든다. </li></ol></li><li> 다른 공막 편에 이전 단계를 반복합니다. </li></ol></li><li> 맥락막의 큰 영역을 노출하는 공막 플랩을 버려야. </li><li> 눈의 둘레 (360도)의 주위에 3 단계에서 만든 절개를 계속합니다. </li><li> 나머지 맥락막 - 망막 조직을 제거합니다. <ol><li> 노출 된 지역 내에서 조심스럽게 남아있는 맥락막 - 망막 조직을 브러시면 팁을 사용합니다. 또한, 부드럽게 집게로 조직을 잡고 기본 유리체 오프를 껍질. </li><li> 필요하다면 맥락막 성으로 절개를시신경에서 arting. 그런 다음, 망막 및 유리체 피질을 노출 부드럽게 맥락막을 벗겨. </li></ol></li><li> 멀리 공막에서 맥락막을 해부 무딘 계속하고 전체 그대로 유리체를 얻기 위해 맥락막을 벗겨. </li><li> 원하는 위치에서 전체 유리체의 위치를​​ 각막에 부착 된 공막 림을 사용합니다. 이 시점에서, 유리체는 전방 및 공막 렌즈에 부착된다. </li><li> 모든 공막을 제거, 렌즈 주위 공막의 내부로부터 해부 무딘 유리체. </li><li> 필요가있을 경우 멀리 유리체에서 렌즈를 특종 무딘 도구를 사용합니다. 다양한 vitreodynamic 실험 샘플을 사용합니다. <ol><li> 공기에 노출 알려진 표면적 유리 비커에 샘플을 놓습니다. 샘플의 가장자리에 산소에 민감한 프로브를 놓습니다. 샘플로 알려진 거리 (R)에 프로브를 이동하는 마이크로 매니퓰레이터를 사용합니다. </li><li> 이론적 확산 방정식을 얻기 위해 확산의 픽의 법칙을 사용합니다. 다 함께TA는 단계 10.1에 수집 등 실험적 확산 계수 / 반응 조건을 구하는 </li></ol></li></ol>

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</ol>

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조심스럽게 유리체 박리 동안 수행해야 두 가지 중요한 단계가 있습니다. 전체 두께 공막 편을 만드는 단계 3, 전체 박리에 결정적이다. 케어는 전체 두께 공막 편을 만들 때 맥락막으로 절단하지 않도록주의해야한다. 다른 중요한 단계는 맥락막에서 공막을 멀리 해부한다. 이 단계는주의 깊게 유리체가 밖으로 유출 할 수있는 맥락막에 여러 개의 구멍을 만드는 방지하기 위해 수행해야합니다. 프로토콜을 수정하고 그대로 전체 유리체 유머를 해부하는 방법이있다. 유리체 조직이 원하는 위치에 위치 된 후에 단계 8. 맥락막은 단부에서 제거 될 때까지 6 단계가 지연 될 수있다. 이 절차의 제한은 해부 동안 그대로 유리체 절제술의 성공 및 정확도를 제시하기 만 시각적 큐가 존재한다는 것이다. 유리체 코어와 피질은 육안으로 투명하고 구별하기 어려운 모두이기 때문에,이도전이 될 수 있습니다. 유리체 망막 상에의 접착 성을 몰래까지 그것은 유리체 피질의 성공적인 박리가 발생했는지 여부를 결정하는 것이...

이 방법의 목적은 구체적으로 vitreodynamic 분석의 목적을 위해, 사체로부터 눈, 유리질 코어 및 피질 손상으로, 전체 그대로 유리체를 분리하는 기술이다. 유리체 생리학 분야는 유체 역학 연구원 등, 다양한 분야 연구자, 성장함에 따라, 유리체 1의 물리적, 역학적 특성을 조사하고 있습니다. 이를 위해, 그것은 세부 사항에 다양한 분야의 연구자를 지원하기 위해 전체 그대로 유리체를 분리하는 기술이 필수적이다. Sebag 등. 2 등 (3) 인간의 시체 눈에 우아한 전체 유리체 해부를 수행하고 그 결과의 그림을 보여 주었다. 그러나, 사용되는 기술은 독립적으로 복제하는 방법을 할 수 없을 것이다 디테일 비전문가에 설명되지 않았다. 다른 연구는 이러한 포부 또는 부분 절개와 같은 간단한 방법을 사용하여 시체의 눈에서 유리체 수확 한그 중 둘은 전체 그대로 유리체가 발생하지 않습니다. Gisladottis 등. 4, 쑤 외. (5)는 시체의 눈에서 수확 유리체 유머의 투과성을 조사합니다. 유리체 추출 할 수있는 방법을 설명하지 않았다 때문에, 그것은 그들이 주사기 유리체를 흡입하는 것으로 가정 하였다. 와트 등. 6은 수술 기법과 토끼 유리체 유머를 분리하는 방법을 설명함으로써 한 단계 더 갔다. 그러나,이 방법은 유리질 코어의 단리없는 유리체 피질 초래한다. Skeie 등. (7)는 고유 한 후에 4 개의 영역으로 편성 유리체 우아 분석을 위해 각각의 부분을 절개하는 방법을 설명했다. 그러나이 기술은, 전체로서 유리체 그대로 발생하지 않는다. 현재의 기술은 현재 사체의 눈을 수행하는 생물 물리학 적 실험을 용이하게하기 위해 개발되었다. 이전 방법으로 설명보브는, 1) 없음이 완전히 전체 유리체를 분리하지 않기 때문에 제한됩니다, 2) 수확 유리체 코어 피질 3) 유리체 해부학 적 구조가 유지되지 않습니다, 균질화, 또는 4) 해부 기술은 적절하게 다른 분야의 연구자들에 의해 복제에 대해 자세히 설명하지 않습니다 . 또한 공막과 맥락막, 유리체의 가시화에 의한 불투명도가 그대로 안구 제한된다. 이것은 전체 눈 안에 이루어질 수 측정의 정밀도 및 가능성을 제한한다. 또한, 유리체 주변 해부학 적 구조는 유리질의 생화학 적 및 물리적 특성의 연구를 혼동 할 수있다. 최근 몇 년 동안, 유리체 과학의 몸은 엄청나게 성장하고 전체 유리체는 개별 부품과는 다른 특성을 가지고 있다고 생각하는 이유가있다. vitreodynamics의 researc의 유리체의 물리적, 역학적, 화학적 특성을 조사에 관심이 증가하고있다이러한 약물 전달, 체내 산소 (8)과 유리체 절제술 임상 의학에서 응용 프로그램이 시간. 유리체를 조작 약리학 제제를 사용 약리 vitreodynamics는, 유리체 결과 9을 향상 시키는데 사용될 수있다. 생체 역학적 특성은 유리 체내 약물 전달 기술 10-12을 개선하는데 사용될 수있다 유리질 유체의 흐름을 모델링하는 데 사용된다. 유리체의 다양한 세그먼트의 물리적 특성은 vitreo - 망막 산소 수송 (13)을 이해하는 데 매우 중요하다. 제안 된 유리체 박리 기술은 그대로 유리체 유머의 다양한 속성을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 벤치 탑 실험이 더 나은 시각화 전체 그대로 유리체 기관에서 수행 할 수 있습니다. 요약하면, 유리체의 연구를위한 현재의 방법은 어느 적절히 설명을 생략하거나, 불완전한 절연 및 유리질 코어 피질 초래한다. 따라서, 예를 수행 할 필요가있다투명한 눈 모델 xperiments은 시체의 눈에 존재하는 유리체의 해부학을 유지하면서.

<table><tbody><tr><td>0.3 집게</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E1793</td><td></td></tr><tr><td>Westcott Tenotomy 가위 곡선 오른쪽</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E3320 R</td><td></td></tr><tr><td>메스 핸들 번호 3</td><td>VWR</td><td>25607-947</td><td></td></tr><tr><td>메스 블레이드, # 11, # 3 핸들</td><td>VWR</td><td>470174-844</td><td></td></tr></tbody></table>

vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

저자는 사후 적출된 돼지 눈에서 온전한 유리체 코어와 피질을 분리하는 효과적인 기술을 제안합니다. 이전 연구에서는 이러한 해부의 결과가 밝혀졌지만 자세한 단계는 설명되지 않았기 때문에 해당 분야 외부의 연구자들은 자신의 방법을 복제할 수 없었습니다. 다른 연구에서는 유리체 구조의 해부학적 구조를 유지하지 않는 흡인 또는 유리체 코어만 분리하는 부분 절개를 통해 유리체를 채취합니다. 제안된 방법은 유리체 코어와 피질이 손상되지 않은 상태로 유리체 전체를 분리하는 동시에 유리체 해부학적 구조와 구조적 무결성을 유지합니다. 이 방법에서는 먼저 적출된 돼지 눈에서 전체 두께의 공막 피판을 만들고 이를 통해 맥락막 조직을 공막에서 분리할 수 있습니다. 그런 다음 공막 피판이 확장되고 맥락막이 공막에서 완전히 분리됩니다. 마지막으로, 맥락막-망막 조직을 유리체에서 떼어내어 고립된 온전한 유리체를 남깁니다. 제안된 유리체 박리 기법은 유리체액의 물리적 특성을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 특히 이 방법은 약물 전달, 유리체-망막 산소 운반 및 안구 내 대류와 관련된 실험 연구에서 의미가 있습니다.

프로토콜을 따르는 것은 그대로 코어와 피질 (그림 3) 성공적인 유리체 박리로 이어질 것입니다. 이 유리체 피질에 부착 망막의 잔여 부분으로부터 명백하다. 본래 전체 유리체 특정 vitreodynamic 실험을위한 여러 가지 방법으로 사용될 수있다. 우리의 경우에는, 확산 유리체 그대로 산소의 속도와 그 대응하는 시간 상수 (도 2)의 조사 하였다. 우리의 방법을 사용하여 (코어 및 Cortex) 해부 하였다 유리체는 공지 된 노출 표면적을 갖는 유리 비이커에 넣었다. 이것은 단지 유리체 코어 6를 분리 이전에 발행 된 방법을 사용하여 수확 유리체에 비교 하였다. 다른 모든 요소는 실험 및 제어 그룹에서 일관성 유지했다. 유리질 표면은 공지 된 산소 장력 (~ 160 mmHg로)이 공기에 노출시켰다. 유리체 내의 산소 장력이 낮은 (&lt;10 mmHg로)이었다. vitr의 비율을 바탕으로겔 상태의 유리체에 대한 의해 풍수 등. <...

이 프로토콜의 목표는 사후 적출된 돼지 눈에서 온전한 유리체핵과 피질을 전체적으로 분리하는 효과적인 기술을 보여주는 것입니다.

Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

이 절차의 전반적인 목표는 사후 및 핵이 있는 돼지 안구에서 온전한 유리체 중심부와 피질을 분리하는 효과적인 기술을 보여주는 것입니다. 이는 먼저 주변 각막 결막을 절제하여 공막을 노출시킴으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 전층 공막 플랩을 생성하고 확장합니다.그 다음 맥락막을 공막에서 분리하고, 맥락막-망막 조직을 유리체로부터 벗겨냅니다. 최종적으로, 손상되지 않은 유리체 핵과 피질 전체를 적출하여 유리액의 물리적, 생체역학적 및 화학적 특성을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 부분 유리체 적출과 같은 기존의 다른 방법들과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 유리체의 해부학적 구조를 유지하면서 온전한 유리체 핵과 피질 전체를 분리할 수 있다는 점입니다. 먼저 적출된 안구를 주변의 과잉 조직을 통해 스티로폼 해부판에 핀으로 고정하는 것으로 시작하십시오.안구가 완전히 고정되면, 미세 핀셋과 미세 가위를 사용하여 각막연(limbus) 부위의 결막을 절개하고 둔성 박리로 공막에서 분리합니다. 둔성 박리를 진행하면서 추가적인 박리가 가능하도록 각막연을 따라 결막을 절개합니다. 그 다음, 가능한 한 많은 공막이 노출되도록 안구 전체 둘레에서 소량의 결막만 남기고 모두 제거합니다.다음으로, 메스를 사용하여 각막연에서 평행하게 약 5mm, 후방으로 3mm 지점까지 공막 절개를 조심스럽게 시행하여 암갈색의 맥락막이 보일 때까지 절개하여 공막 플랩을 만듭니다. 그런 다음 공막과 맥락막 사이의 층을 따라 조직을 조심스럽게 둔성 박리하여, 두 조직 사이의 공간을 넓히기 위해 맥락막을 부드럽게 안쪽으로 밀어 넣을 수 있을 때까지 진행합니다. 날카로운 미세 가위를 사용하여 첫 번째 절개선에 수직 방향으로 공막을 다시 절개하여 T자형 절개창을 만듭니다.그 다음, 공막 조직을 하부의 맥락막으로부터 제거하기 위해 원주 방향으로 둔성 박리를 계속 진행하고, 맥락막을 공막에서 부드럽게 밀어내어 플랩을 확장합니다. 각막연에 수직으로 만든 절개선이 시신경에 도달하고, 각막연에 평행하게 만든 절개선이 안구 원주의 최소 45도에 이를 때까지 맥락막을 공막에서 부드럽게 둔성 박리합니다. 이 플랩을 이용하여 안구의 반대편에서도 둔성 박리를 반복합니다.그 다음, 두 공막 플랩을 절개하여 맥락막의 넓은 영역을 노출시킵니다. 이제 눈의 둘레를 따라 둔성 절개를 계속합니다. 맥락막을 공막에서 박리하고, 노출된 영역 내의 나머지 맥락막 망막 조직을 제거합니다.시신경에서부터 시작하여 맥락막에 절개창을 냅니다. 그 다음 핀셋을 사용하여 하층의 유리체로부터 조직을 조심스럽게 벗겨냅니다. 유리체 전체를 손상 없이 얻을 때까지 맥락막을 둔성 박리하고 계속해서 벗겨냅니다.그 다음, 각막에 부착된 공막연을 사용하여 유리체 전체를 원하는 위치에 배치합니다. 이 시점에서 유리체는 여전히 전방 공막 및 수정체에 부착되어 있어야 합니다. 마지막으로, 공막 내측과 수정체 주변에서 유리체를 둔탁하게 박리합니다.공막을 모두 제거하려면, 필요에 따라 둔탁한 도구를 사용하여 수정체를 유리체로부터 걷어내십시오. 방금 시연한 프로토콜을 따르면, 유리체 피질에 부착된 잔여 망막 조각을 통해 확인할 수 있듯이 핵과 피질이 온전한 상태로 유리체 절제가 성공적으로 이루어질 것입니다. 이 이미지에서 볼 수 있듯이, 온전한 전체 유리체액은 특정 바이러스혈증 실험을 위해 여러 가지 방법으로 사용될 수 있습니다.예를 들어, 여기서는 유리체 피질이 존재하는 상태에서 온전한 유리체 내 산소의 확산 속도와 그에 해당하는 시상수를 연구하였습니다. 산소의 확산은 더 긴 간격에 걸쳐 일어났습니다. 날카로운 도구를 사용하는 것은 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안 적절한 취급 및 폐기와 같은 예방 조치를 항상 취해야 함을 잊지 마십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 동영상은 사후의 눈에 인간의 유리 신체의 다양한 반투명 구조를 차별하고 해부를위한 효과적인 기법을 보여줍니다.

Proteomic 분석을위한 인적 유리 바디 요소의 해부

해부 기술은 유리체, 망막, 그리고 마우스 눈에서 렌즈, 원심 분리에 의해 분리하고, 단백질 as​​says과 특성화의 내장 적출을 보여줍니다.

Proteomic 분석을위한 마우스 유리체 및 망막의 내장 적출

비인간 영장류 (NHP)는 해부학적 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 망막 세포 치료법을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 이 원고는 NHP 눈의 망막 색소 상피 세포의 피하 학적 이식 방법과 황반 조작과 관련된 수술 내 합병증을 방지하기위한 전략을 설명합니다.

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

이 논문은 설치류의 안구 미세 해부에 대한 프로토콜을 제시합니다. 이 과정에는 니티팅 멤브레인(즉, 세 번째 눈꺼풀)과 함께 안구의 적출술이 포함됩니다. 그런 다음 후방 안구 컵과 전방 안구 컵을 분리합니다.

설치류 눈의 미세 해부

유리체 및 수액에서 cell-free DNA를 추출하여 유리체 망막 림프종 진단을 위한 분자 연구를 수행하는 절차가 여기에 확립되어 있습니다. 이 방법은 샘플의 세포 구성 요소에서 DNA를 동시에 추출하거나 보조 테스트를 위해 비축할 수 있는 기능을 제공합니다.

유리체 망막 림프종의 진단 및 모니터링을 위한 유리체 및 수성 체액 검체의 Cell-Free DNA 추출

이 프로토콜은 단백질체학, 대사체학 및 글리코믹스를 포함한 분자 다운스트림 분석을 위한 고품질 인간 방수액 및 유리체 액체 생검의 표준화된 수집, 주석 및 바이오뱅킹을 위한 통합 생물 저장소 플랫폼을 제공합니다.

분자 분석을 위한 인간 수성 및 유리체 액체 생검의 바이오뱅킹

산화 스트레스 및 사이토카인과 같은 당뇨병/당뇨병성 망막병증 관련 모욕으로 인한 사망에 대한 망막 혈관의 복원력을 모니터링하기 위해 보호 분석법이 개발되었습니다.

마우스의 당뇨병 관련 사망으로부터 망막 혈관 보호를 감지하기 위한 분석

비종양성 지구본의 철저한 그로잉 및 표준화된 절편은 고품질의 재현 가능한 조직병리학적 절편을 얻는 데 중요합니다. 성인 및 태아의 비종양 지구본의 표준화된 매출에 대한 지침이 여기에 제공됩니다. 사례 기반 의사 결정에 대한 기준을 포함하여 구체 절편에 대한 다양한 옵션을 시연하고 논의합니다.

태아의 눈을 포함한 비종양성 지구의 그로잉(Grossing of non-neoplastic globes, including petal eyes)

여기에서는 확장된 생체 외 실험을 위해 쥐의 눈에서 망막을 분리하는 자세한 방법론을 제공합니다. 이 프로토콜은 살아있는 조직에서 망막 신경교세포를 제자리 로 유지함으로써 제공되는 연구 방법을 활용하고자 하는 연구자가 기술적으로 까다로운 접근 방식에 접근할 수 있도록 하는 것을 강조합니다.

마우스 망막의 신경교세포(glial interactions)를 연구하기 위한 생체 외 이식 모델(Ex vivo Explant Model for Study Glial Interactions in the Mouse Retina)

이 방법은 공초점 반사 현미경을 사용하여 유리체에서 콜라겐 섬유의 천연 구조를 시각화합니다.

유리체 콜라겐 섬유 네트워크를 시각화하기 위한 공초점 반사 현미경을 위한 돼지 눈 준비

배우세요 사후 돼지 눈에서 완전한 유리체 핵과 피질을 분리하는 해부 기법을 통해 안과학 연구를 수행하는 방법을. 이 방법은 유리체 유머의 해부학적 구조를 보존하여 물리적 및 생화학적 특성 연구에 활용할 수 있습니다.

Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

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