Name: 마우스 해마에 올리고머 아밀로이드 - 베타의 정위 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: 배우세요 마우스 해마 치아마루에 올리고머 아밀로이드-베타를 정위 주입하는 방법을 통해 신경독성을 연구하세요. 이 기술은 생체 내에서 세포 사멸 병리를 재현하여 알츠하이머병의 병리 기전을 규명하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 신경 질환의 국립 연구소에 의해 지원과 뇌졸중 알츠하이머 병 연구 투자 노화 (CMT에) NS081333, 알츠하이머 협회 보조금 NIRG-10-171721과 (어에) 정신 건강 보조금 MH096702의 국립 연구소 및 국립 연구소를 부여했다 (YYJ과 JB에) 컬럼비아 대학 파일럿 부여 AG008702에서 센터.

참고 : 모든 동물 실험의 경우, 기관 및 관리 및 실험 동물의 사용을위한 국가 가이드 라인을 따라야했다. 1. 외과 수술 도구 및 솔루션을 준비 <ol><li> 모든 스테인레스 스틸 수술 도구를 압력솥. </li><li> 멸균 분자량 그레이드 탈 증류수 200 증명 무수 에탄올을 희석하여 70 % 에탄올을 준비한다. </li><li> 해밀턴 주사기에 29 G 바늘을 연결합니다. 1 분 동안 반복 그리기 및 배출 nanopure 물에 의해 해밀턴 주사기와 바늘의 내부를 청소합니다. 70 % 에탄올로이 절차를 반복합니다. <ol><li> 해밀턴 주사기의 플런저와 바늘을 제거합니다. 공기는 층류 후드 O / N에서 부분 건조. </li><li> 사용 전에 30 분 동안 자외선 바늘과 주사기를 조사. </li></ol></li><li> 0.9 %의 체적 농도로 최종 중량에 대한 분자 수준의 물에 용해하여 염화나트륨 식염수 용액을 준비한다. Sterili0.2 ㎛의 기공 필터를 통해 여과하여 용액을 ZE. </li></ol> 2. 올리고머 Aβ 1-42 준비 <ol><li> 빠 &#39;등 13 책에서 설명한대로 Monomerize과 정확히 5 mm로 DMSO에 재조합 인간 Aβ 1-42을 재현 탁. </li><li> 수술 전 하루에 100 μm의 멸균 (1X) PBS로 5 mM의 Aβ 1-42 희석. </li><li> 분쇄가 잘 솔루션을 섞는다. </li><li> 4C에서 12 시간 동안 Aβ 1-42 솔루션을 품어. 참고 : 이러한 PBS에 DMSO를 희석 또는 스크램블로 제어 솔루션 / Aβ ​​1-42 펩타이드는 Aβ 1-42와 같은 방법으로 준비되어야한다 역. </li></ol> 사출 좌표를 결정 (3) <ol><li> 정확한 전후방 (AP), 중간 - 측면 (ML)를 결정하기 위해 성인 마우스 뇌 아틀라스를 사용하고 지느러미 - 복부 (DV)는 관심 (14)의 뇌 영역 좌표. 아니테 : 우리는 브레 그마에서 다음 좌표를 대상으로 해마의 치아 이랑을 고른 기술 설명하기 : AP를, -2.00 mm; ML은 1.3 mm의 ±; DV, -2.2 mm이다. AP 값을 선행 음의 부호는 브레 그마의 2.00 mm의 후방을 나타냅니다. ML 값을 선행 ± 기호 중앙에서 왼쪽과 오른쪽 방향을 나타냅니다. 마지막으로, DV 앞에 음의 부호는 뇌의 표면으로부터 복부 이동 나타낸다. </li></ol> 4. 정위 프레임 설정 <ol><li> 수술 얼굴 마스크, 깨끗한 실험실 코트, 멸균 수술 장갑을 착용 할 것. </li><li> 정위 악기와 70 % 에탄올로 마우스 어댑터를 닦습니다. </li><li> 카운터에 무균 수술 드레이프를 놓습니다. </li><li> 무균 수술 드레이프의 상단에 마우스 어댑터 정위기구를 놓습니다. </li><li> 70 % 에탄올로 마우스 가열 패드를 닦습니다. 정위 프레임 침대 위에 가열 패드를 놓습니다. 범용 LABORA를 사용하여마우스 어댑터 침대 위에 가열 패드 아래 테이프에 토리 라벨 테이프. <ol><li> 제조업체의 지시에 따라 온수 순환기 펌프에 전기 패드를 부착합니다. </li><li> 따뜻한 물 순환기 펌프의 전원을 켜고 37 ° C의 온도를 설정하고,이 온도에 도달 할 때까지 기다립니다. </li></ol></li><li> 제조업체의 지시에 따라 전동 수직 주입 축에 그것을 돌려서 정위 프레임에 29 G 바늘 50 μL 해밀턴 주사기를 부착합니다. </li><li> 비드 살균기를 켜고는 제조업체의 설정 온도에 도달 할 때까지 기다립니다. 참고 :이이 동물 사이에 스테인레스 스틸기구를 살균하는 데 사용됩니다. 이 악기를 살균 구슬과의 접촉 20 초 걸립니다. </li><li> 핫 플레이트의 전원을 켜고 42 ° C로 설정하고 꼭대기 깨끗한 빈 새장을 배치합니다. </li><li> 해밀턴 주사기를 고정대에 고정시킨 상태에서, 상기 전동 정위의 I를 사용njector Aβ 1-42 솔루션을 그립니다. 참고 : 주사기로 솔루션의 4 개 이상의 μL를 그려 후 주입 볼륨을 설정합니다 정위 인젝터를 사용합니다. 제조업체의 지시에 따라 인젝터를 작동. </li></ol> 5. 동물 준비 <ol><li> 규모의 무게를 이용하여 마우스의 무게를 결정합니다. </li><li> 복강 (IP)을 주입하여 100 ㎎ / ㎏ 케타민 10 ㎎ / ㎏ 자일 라진에서 케타민 / 자일 라진 칵테일 마우스를 마취. 발가락 핀치 반사의 손실에 의해 마취의 깊이를 모니터링합니다. </li><li> 마우스가 진정 된 후 머리 깎기을하고 두개골을 통해 피부를 노출 머리를 면도. </li><li> 정위 침대 위에 가열 패드 위에 마우스를 놓습니다. </li><li> 치아 가드 내부의 앞니의 치아를 입을 열고 배치 할 주걱을 사용합니다. 마우스의 얼굴에 코 부분을 고정합니다. 부드럽게 너무 꽉을 단속. </li><li> 포지머리를 보호하는 청각 (外耳道)에 양자 귀 크로스바를 기. 이 두개골을 돌 때까지 각 크로스바를 이동 한 다음 그것을 고정 나사를 켭니다. <ol><li> 머리가 부드럽게 머리를 아래로 밀어 검지 손가락을 사용하여 고정되어 있는지 확인하십시오. 머리가 제대로 고정되어 있다면 그것은 포기하지 않거나 누르면 이동합니다. </li></ol></li><li> 촉촉한 그들을 유지하는 눈 아이 크림 또는 점안제의 드롭을 적용한다. 눈 수술을 통해 습기가 있는지 확인합니다. </li><li> 수술 부위는 70 % 에탄올이어서 두개골 위에 피부에 betadine 용액을 적용 멸균 면봉을 사용하여 소독. 교류 betadine 2 회 이상 세정 70 % 에탄올을 수행한다. </li></ol> 6. 수술 및 주입 <ol><li> 두피의 중간 선에 2-3mm 절개를 만들기 위해 메스를 사용하고 두개골, 랜드 마크의 시상 봉합, 브레 그마 및 람다을 노출 1.0-1.5 cm에 절개 라인을 확장하는 직선 미세 가위를 사용정위 좌표에 기반들. 떨어져 피부를 유지하기 위해 마이크로 클램프를 사용합니다. 참고 : 브레 그마 및 람다 위치는 마우스 뇌지도 책 &quot;정위 좌표에서 마우스 뇌&quot;(14)에 설명되어 있습니다. </li><li> , 면봉을 가지고 멸균 식염수에 담가하고 두개골을 청소하는 데 사용합니다. 그런 다음, 두개골을 건조 깨끗하고 마른 면봉을 사용합니다. </li><li> 브레 그마에 점을 표시하기 위해 멸균 고급 볼펜을 사용합니다. 바늘의 끝이 바로 브레 그마의 점에 닿을 수 있도록 해밀턴 주사기의 위치를​​ 정위 미세 조작기를 사용합니다. <ol><li> DV 좌표를 기록합니다. </li><li> 두개골의 AP 축이 레벨이 바늘의 끝이 람다 지점을 터치 있도록 후방 해밀턴 주사기를 이동할 수 있는지 확인합니다. </li><li> DV 위치를 기록합니다. 0.5 mm 내에있는 DV는 브레 그마 및 람다 좌표를 확인하십시오. 주 : 목표는 브레 그마 및 람다 간의 DV 차이를 최소화하는 것이다. </li></ol></li><li> M을 사용하여icromanipulator는 브레 그마 점에 다시 해밀턴 주사기 바늘 끝을 반환합니다. </li><li> 시작 AP의 위치를​​ 기록합니다. </li><li> 좌표 시작 AP로부터 2.00 mm를 감산하여 끝 AP의 위치를​​ 계산한다. </li><li> 좌표 최종 AP에 해밀턴 주사기 바늘의 위치를​​ 변경하기 위해 미세 조작기를 사용합니다. </li><li> 현재 ML 좌표를 기록합니다. </li><li> 왼쪽 계산과 오른쪽 ML을 종료하면 추가 또는 좌표 ML 시작에서 1.3 mm를 차감하여 조정한다. </li><li> 끝 ML 좌표 중 하나에 해밀턴 주사기 바늘을 이동하는 미세 조작기를 사용합니다. <ol><li> 모두 종료 ML 좌표에 두개골의 표면에 바늘 끝을 터치 DV 좌표를 기록하고 값이 0.5 mm 내에 있는지 확인하십시오. 주 : 목표 ML 좌표 끝 둘 사이 DV 차이를 최소화하는 것이다. </li><li> 결말에 두개골이 지남에 0.5 cm의 바늘을 끌어 조정한다. 일에 점을 표시하기 위해 멸균 고급 볼펜을 가지고두개골의 전자 표면. 두개골의 반대쪽에 대해이 단계를 반복합니다. </li></ol></li><li> 방법 중 명확한 해밀턴 주사기를 스윙. </li><li> 드릴 0.8 mm의 드릴 헤드를 연결합니다. 두 손으로 드릴을 가지고 안정성을 위해 테이블​​의 표면에 팔꿈치를 설정하고 왼쪽 또는 오른쪽 ML 하나가 좌표에 샤피 점보다 약간 드릴 헤드를 배치합니다. 두개골에 구멍을 소개하는 두개골 표면에 드릴 팁을 내려 드릴을 활성화합니다. 반대편에 대해이 단계를 반복합니다. 참고 : 일부 출혈은 새로 도입 된 구멍에서 발생할 수 있습니다. 다음이 출혈이있는 경우 피를 가볍게 두 드리 깨끗한 마른 면봉을 사용합니다. </li><li> 새로 도입 된 ML 구멍 중 하나를 통해 다시 위치로 해밀턴 주사기를 이동합니다. 바로 두개골을지나 해밀턴 바늘을 낮 춥니 다. 이 시점에서 뇌에 구멍을하지 않도록주의. 확인하려면 바늘 쉬르 두개골이 당신의 검지 손가락을 부드럽게 만들기 위해 두개골에 바늘을 밀어 통과전자 바늘 구멍을 종료하지 않습니다. </li><li> 시작 DV 좌표를 기록합니다. </li><li> 끝 DV가 시작 DV 좌표를 2.2 mm를 뺀 좌표 계산합니다. </li><li> 좌표 아래로 종료 DV에 바늘을 낮 춥니 다. </li><li> 0.5 μL / 분의 속도로 치아 이랑 Aβ 1-42 4 μl를 펌핑하도록 정위 인젝터 펌프를 활성화. </li><li> 주입이 완료되면 바늘은 주사 부위에서 용액의 역류를 최소화하기위한 추가적인 1 분 동안 그대로 유지하자. </li><li> 뇌의 다른 측면에 바늘을 이동하고 6.13-6.18 단계를 반복합니다. </li></ol> 7. 동물 제거 및 수술 후 관리 <ol><li> 귀 바, 얼굴 / 코 가드를 풉니 다. 장치에서 마우스를 제거합니다. </li><li> 두피를 닫습니다 끌어 후 봉합과 상처를 봉인 한 학생 표준 패턴 집게를 사용합니다. </li><li> 수화에 대한 IP를 통해 마우스로 멸균 생리 식염수 1 ㎖를 주입한다. </li><li> 에JECT의 프레 노르 핀 (0.1 ㎎ / ㎏) 피하는 통증을 완화합니다. </li><li> 이 깨어날 때까지 42 ° C 핫 플레이트 위에 설정 깨끗한 빈 새장에 마우스를 유지하고 충분한 음식과 물과의 주택 케이지로 돌아갑니다. </li><li> 피하 주사를 통해 통증 완화를위한 3 일간 매 12 시간을 부 프레 노르 핀을 관리합니다. </li></ol> 8. 봉합사 제거 <ol><li> IP 100 ㎎ / ㎏ 케타민 10 ㎎ / ㎏ xlyazine에서 케타민 / 자일 라진 칵테일 마우스를 마취. 참고 :이이 7~10일 수술 후 이루어집니다. </li><li> 봉합사를 제거하기 위해 학생 표준 패턴 집게 똑바로 미세 가위를 사용합니다. </li><li> 수화에 대한 IP를 통해 마우스로 멸균 생리 식염수 1 ㎖를 주입한다. </li><li> 이 깨어날 때까지 42 ° C 핫 플레이트 위에 설정 깨끗한 빈 새장에 마우스를 유지하고 충분한 음식과 물과의 주택 케이지로 돌아갑니다. </li></ol> 9. 동물의 희생 및 조직 처리 <ol><li> 마우스 및 P 마취4 % 파라 포름 알데히드 (15)와 함께 erfuse 뇌를 제거하고 16 냉동 절편을 위해 그것을 처리합니다. 참고 : 동물 희생의 타이밍이 실험에 따라 달라집니다. 그러나 우리의 연구에 우리는 7, 14 일 수술을 게시 선택했다. </li></ol>

<ol><li>Baleriola, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonally+Synthesized+ATF4+Transmits+a+Neurodegenerative+Signal+across+Brain+Regions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions.</a> Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).</li>
<li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration%3A+lessons+from+the+Alzheimer%27s+amyloid+beta-peptide.+Nature+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews.</a> Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).</li>
<li>Knowles, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+p75+neurotrophin+receptor+promotes+amyloid-beta%281-42%29-induced+neuritic+dystrophy+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).</li>
<li>Troy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Amyloid-induced+neuronal+apoptosis+requires+c-Jun+N-terminal+kinase+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation.</a> Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).</li>
<li>Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APP+transgenic+modeling+of+Alzheimer%27s+disease%3A+mechanisms+of+neurodegeneration+and+aberrant+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+structure+%26+function%22%5BJournal%5D)">APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis.</a> Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).</li>
<li>Gotz, J., Ittner, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+Alzheimer%27s+disease+and+frontotemporal+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia.</a> Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).</li>
<li>Calhoun, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron+loss+in+APP+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuron loss in APP transgenic mice.</a> Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).</li>
<li>Oakley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraneuronal+beta-amyloid+aggregates%2C+neurodegeneration%2C+and+neuron+loss+in+transgenic+mice+with+five+familial+Alzheimer%27s+disease+mutations%3A+potential+factors+in+amyloid+plaque+formation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).</li>
<li>Jean, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caspase-2+is+essential+for+c-Jun+transcriptional+activation+and+Bim+induction+in+neuron+death%5BTitle%5D)+AND+%22The+Biochemical+journal%22%5BJournal%5D)">Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death.</a> The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).</li>
<li>Sotthibundhu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid%281-42%29+induces+neuronal+death+through+the+p75+neurotrophin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).</li>
<li>Kar, S., Quirion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+peptides+and+central+cholinergic+neurons%3A+functional+interrelationship+and+relevance+to+Alzheimer%27s+disease+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+brain+research%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology.</a> Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).</li>
<li>Leranth, C., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+septal+region+in+the+rat+brain%3A+cholinergic-GABAergic+interconnections+and+the+termination+of+hippocampo-septal+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+comparative+neurology%22%5BJournal%5D)">Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers.</a> The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).</li>
<li>Fa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+oligomeric+beta-amyloid+1-42+and+induction+of+synaptic+plasticity+impairment+on+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Second edn, Academic Press. (2001).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).</li>
<li>Currle, D. S., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+freezing+and+cryosectioning+E12.5+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).</li>
<li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+amyloid+beta-protein+dimers+isolated+from+Alzheimer+cortex+directly+induce+Tau+hyperphosphorylation+and+neuritic+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).</li>
<li>Lambert, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusible%2C+nonfibrillar+ligands+derived+from+Abeta1-42+are+potent+central+nervous+system+neurotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).</li>
<li>Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMasters%2C+CL+%22Cold+Spring+Harbor+perspectives+in+medicine%22">Cold Spring Harbor perspectives in medicine</a>. 2 (6), a006262(2012).</li>
<li>Chakrabarti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+agonists+for+attenuation+of+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research+bulletin%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).</li>
<li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li>
<li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picomolar+amyloid-beta+positively+modulates+synaptic+plasticity+and+memory+in+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).</li>
<li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+amyloid-beta+is+necessary+for+hippocampal+synaptic+plasticity+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of%22%5BJournal%5D)">Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory.</a> Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).</li>
<li>Akpan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+caspase-9+inhibitor+reduces+caspase-6-dependent+axon%2Fneuron+loss+and+improves+neurological+function+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).</li>
<li>Fulmer, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-derived+BDNF+supports+myelin+protein+synthesis+after+cuprizone-induced+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).</li>
<li>Thakker-Varia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropeptide+VGF+is+reduced+in+human+bipolar+postmortem+brain+and+contributes+to+some+of+the+behavioral+and+molecular+effects+of+lithium%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).</li>
<li>Greferath, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlarged+cholinergic+forebrain+neurons+and+improved+spatial+learning+in+p75+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice.</a> The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).</li>
<li>Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+GABAergic+and+cholinergic+neurons+in+the+rat+diagonal+band%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band.</a> Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).</li>
<li>Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+innervation+of+the+rat+dentate+gyrus%3A+an+immunocytochemical+and+electron+microscopical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study.</a> Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).</li>
<li>Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+beta+mediates+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+memory%22%5BJournal%5D)">Amyloid beta mediates memory formation.</a> Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).</li>
</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

1) 무균 기술을 사용합니다 : 실험자 또는 외과 의사가 반드시 성공적으로 Aβ 1-42 주사를 달성하기 위해 2) 올바르게 정확한 좌표와 관심의 뇌 영역을 식별; 3) 적절 AP 및 ML 축 평준화 뇌 정위 프레임에 마우스를 보호 할 수; 4) 정밀 미세 조작기를 작동 할 수있는 능력을 가지고; 5) 적절한 수술 치료를 보장합니다. 이러한 주요 단계는 다음 경우 마우스없이 관찰 감염으로 수술을 생존해야한다. 시험관에 있던 연구는 우리와 다른 Aβ 1-42 직접 해마에 주입이 광고의 주요 기능 중 하나를 묘사, 신경 세포 죽음 1,4,9,10을 이끌어내는 것으로 나타났습니다. 변성 한 마커의 증가에 의해 보완된다 치아 이랑의 체적 감소에 의해 도시 된 바와 같이, 변성은 주사 부위의 부근에서 명확하게 알 수있다. 또한, T그는 콜린성 라벨링 감소 및 BF 1,10에서</su...

아밀로이드 - 베타 (Aβ 1-42)으로 구성되어 아밀로이드 플라크 예금, 알츠하이머 병 (AD)의 병리의 핵심 기능입니다. 많은 연구는 신경 세포의 죽음, 시냅스 영양 장애, 손실 및 기능 장애를 유발 재조합 올리고머 Aβ 1-42의 높은 독성 수준을 보여 주었다; 뿐만 아니라 학습과 기억 적자 1-4으로. 영향을받는 뇌 영역은 해마, 대뇌 피질, 그리고 기저 전뇌와 편도체 (5, 6)와 같은 피질 하 구조를 포함한다. 지금까지 광고의 Aβ 1-42 병리학을 시뮬레이션하려고 여러 형질 전환 마우스 모델이있다. 변형에 따라이 동물은 AD의 선택 병리학 적 기능을 검사에 유용하다는 것을 증명한다. 불행하게도,이 트랜스 제닉 라인들, 및 APP23 5XFAD 제외한 이들 마우스는 완전히 신경 손실, AD의 핵심 양태를 복제하지 않는다. 심지어 APP23 및 5XFAD에서 관찰되는 신경 세포의 손실, 신경 세포의 죽음 obser와VED는 몇 가지 선택 지역 7,8에, 미묘한 나이 의존하고 분리 하였다. 야생형 마우스의 뇌에 Aβ 올리고머 1-42의 직접 주입 amyloidopathy 1,9,10의 신경 세포 죽음의 측면을 복제 생체 모델의 우수한을 제공합니다. 일반적으로 사용되는 형질 전환 마우스 모델과 달리 Aβ 올리고머 1-42 주입 모델은 급성 공간 및 시간 방식으로 Aβ에게 1-42 수준을 높이기에 이상적입니다. 이 모델 야생형 마우스를 사용하는 장점은 트랜스 제닉 마우스에 도입 라인 돌연변이 잠재적 보상 또는 부작용을 제거한다. 과거의 연구는 해마에 Aβ 1-42의 독성 수준을 주입하여 일주 (1)의 내부에 주입 부위의 근방에서 신경 세포 사멸을 유도하는 것으로 나타났다. 또한, Aβ 1-42은 콜린성 뉴런 (11) 기저 전뇌 독성 관찰과 일관성이 있음을해마에 프로젝트 콜린성 신경 세포 (BFCN) 인구는 효과적으로 뇌에서 고립 된 신경 회로의 시험을 허용, 생쥐에서 베타 - 아밀로이드 주입 1,10 다음 7~14일 내 20-50% 감소된다. 대부분의 제어 / 차량 및 올리고머 Aβ 1-42 솔루션 해마 (12)의 치아 이랑에 동측 BFCN 프로젝트 때문에 비교가 좌우 반구 (1) 사이에 만들어 질 수 뇌의 양쪽에 주입 될 수있다. 이 보고서에서 우리는 성인 야생 형 C57BL / 6J 마우스에 대한 자세한 수술과 주사 방법을 제공 할 것입니다. 이 마우스 변형 때문에 연구의 광범위한 사용으로 선택된다. 기술적으로, 임의의 뇌 영역은 그러나 여기서 우리는이 기술을 설명하기 위해 대상으로 해마의 치아 이랑을 사용, 주입 대상이 될 수있다.

<table><tbody><tr><td>케타민 HCl (100 mg/ml)</td><td>Henry Schein Medical</td><td>1049007</td><td>동물 1kg당 케타민 100 mg 케타민</td></tr><tr><td>자일라진 (20 mg/ml)</td><td>Henry Schein Medical</td><td>사용 불가</td><td>동물 1kg 당 10 mg 자일라</td></tr><tr><td>진 Buprenex (0.3 mg/ml)</td><td>Henry Schein Medical</td><td>1217793</td><td>동물 1 kg 당 0.1 mg 부프레넥스</td></tr><tr><td>A&beta; 1-42</td><td>David Teplow/UCLA</td><td>이용 불가</td><td>100 &mu; M; 이 아밀로이드는</td></tr><tr><td>A&beta 논문에 사용되었습니다. 1-42</td><td>Bachem</td><td>H-1368</td>은 <td>Teplow lab A&beta의 아밀로이드 대신 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 1-42</td><td>American Peptide</td><td>62-0-80B</td><td>는 Teplow lab</td></tr><tr><td>Scrambled A&beta의 아밀로이드 대신 사용할 수 있습니다. 1-42</td><td>American 펩티드</td><td>62-0-46B</td><td>A&beta 비교를 위한 대조 펩티드로 사용될 수 있습니다; 1-42</td></tr><tr><td>NU4 항체 (Oligomeric Amyloid 항체)</td><td>Gift from William Klein/Northwestern U.</td><td>사용할 수 없음</td><td>1:2,000 희석</td></tr><tr><td>항-아밀로이드 올리고머 항체&nbsp; (다클론 토끼)</td><td>EMD Millipore</td><td>AB9234</td><td>는 Nu4 대신 사용될 수 있으며; 최종 사용자에 의해 테스트되어야 합니다.</td></tr><tr><td>6E10 항체 (Monoclonal Mouse) (Amyloid 항체)</td><td>Biolegend</td><td>sig-39320</td><td>1:1,000 희석</td></tr><tr><td>ChAT 항체 (Polyclonal Goat)</td><td>Millipore</td><td>AB144P</td><td>1:100 희석</td></tr><tr><td>DeadEnd 형광 TUNEL 시스템</td><td>Promega</td><td>G3250</td><td>제조사의 지시사항을 따르십시오. </td></tr><tr>DAPI <td>Invitrogen</td><td>P36935</td><td>와 함께 Prolong Gold Antifade Reagent</td> 사용 <td>슬라이드를 커버슬립할 때 사용</td></tr><tr><td>Fluorogold</td><td>Fluorochrome, LLC</td><td>사용할 수 없음</td><td>2% 용액</td></tr><tr><td>절대 에탄올(200 proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td> Novex 10-20% Tricine gel Life Technologies EC6625BOX <td>살균 및 소독을 위한 70% 에탄올 제조용</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>A&beta 분리를 위해; 1-42</td></tr><tr><td>Novex Tricine SDS 실행 버퍼 (10X)</td><td>Life Technologies</td><td>LC1675</td><td>10-20% Tricine 젤 실행용</td></tr><tr><td>Novex Tris-Glycine 전송 버퍼 (25X)</td><td>Life Technologies</td><td>LC3675</td><td>10-20% Tricine 젤 전송 SuperSignal</td></tr><tr><td>Western Blot Enhancer</td><td>Thermo Scientific</td><td>46640</td><td>A&beta 향상용; 1-42 신호; 제조업체의 프로토콜</td></tr><tr><td>Protran BA79 니트로셀룰로오스 블로팅 멤브레인, 0.1 &mu; m</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>10402088</td><td>10-20% Tricine 젤 전송을 위한</td></tr><tr><td>Xcell SureLock Mini-Cell</td><td>Life Technologies</td><td>EI0001</td><td>전기영동 아파라투스 10-20% Tricine 젤</td></tr><tr><td>실행을 위한 GenTeal Lubricant Eye Gel</td><td>Novartis</td><td>사용할 수 없음</td><td>수술 중 마우스 눈을 촉촉하게 유지하는 데 사용할 수 있음; 현지 약국에서 찾을 수 있습니다 &#160; </td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>Refresh Optive Lubricant Eye Drops</td><td>Allergan</td><td>사용할 수 없음</td><td>수술 중 마우스 눈을 촉촉하게 유지하기 위해; 지역 약국에서 찾을 수 있습니다. GenTeal</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Stoelting</td><td>50998</td> 대신 사용할 수 있습니다. <td></td></tr><tr><td>라운드/테이퍼 스패튤라</td>를 살균하고 소독하기 위해&nbsp;<td>VWR</td><td>82027-490</td><td>동물 입을 열기 위해</td></tr><tr><td>Bulldog Serrefines 클램프 (턱 치수. 9X1.6 mm; 길이 28 mm)</td> <td>Fine Science Tools</td><td>18050-28</td><td>옵션; 주사 중 두피 피부를 분리하기 위해</td></tr><tr><td>스트레이트 파인 가위(절삭날 25mm; 길이 11.5 cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td>두피 절단용</td></tr><tr><td>#3 메스 손잡이</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>#11 수술용 칼날</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td>두피 절개용</td></tr><tr><td>Student Standard Pattern Forcep (Tip Dims. 2.5x1.5 mm; 길이 11.5 cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>91100-12</td><td>봉합 중 두피를 닫는 데 사용</td></tr><tr><td>트리머 콤보 키트</td><td>Kent Scientific</td><td>CL9990-1201</td><td>털 면도용</td></tr><tr><td>T/Pump Warm Water Recirculator&nbsp;</td><td>켄트 사이언티픽&nbsp;</td><td>TP-700</td><td>수술 중 동물을 따뜻하게 하기 위한</td></tr><tr><td>재사용 가능한 워마이닝 패드 (5" x 10")</td><td>Kent Scientific&nbsp;</td><td>TPZ-0510FEA</td><td>수술 중 동물을 따뜻하게 하기 위해 T/Pump 온수 순환기에 부착하기 위해</td></tr> 무선 <tr><td>마이크로 드릴</td><td>스톨팅</td><td>58610</td><td>0.8mm 강철 버를 사용하여 두개골에 구멍을 뚫습니다</td></tr>.<tr><td> 신생아 쥐 어댑터</td><td>스톨팅</td><td>51615</td><td></td></tr><tr><td>마우스 스테레오택시 기구</td><td>스톨팅</td><td>51730</td> 대신 <td>사용할 수 있습니다. 이것은 스톨팅 고양이 대신 사용할 수 있습니다. #51615</td></tr><tr><td>Quintessential 스테레오택시 인젝터</td><td>스톨팅</td><td>53311</td><td></td></tr><tr><td>드라이 글라스 비드 살균기</td><td>스톨팅</td><td>50287</td><td>스테인레스 스틸 기구 살균용</td></tr><tr><td>멸균 수술용 드레이프 (18" x 26")</td> <td>Stoelting</td><td>50981</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton 주사기 50 ml, 모델 705 RN SYR, NDL</td><td>Hamilton Company</td><td>7637-01</td><td>뇌 주입용; 다른 용액에 대해 다른 주사기를 사용하십시오</td></tr><tr><td>29 G Needle, Small Hub RN</td><td>NDL Hamilton Company</td><td>7803-06</td><td>뇌 주사를 위해 Hamilton 주사기에 부착하기 위해</td></tr><tr><td>1 ml BD 투베르큘린 주사기</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td>마취 및 식염수 투여용</td></tr><tr><td>30G 바늘 (0.5")</td><td>VWR</td><td>BD305106</td><td>마취 및 식염수 투여용</td></tr><tr><td>휴대용 전자 CS 시리즈 저울 (오하우스)</td><td>VWR</td><td>65500-202</td><td>마취 용량을 결정하기 위한 동물의 무게를 측정하기 위해</td></tr><tr><td>핫 플레이트(상판 치수. 7.25x7.25 인치)</td><td>VWR</td><td>47751-148</td><td>수술 후 동물을 따뜻하게 하기 위해</td></tr><tr><td>Sofsilk Silk Suture C-1 절단 3/8, 12mm</td><td>Covidien</td><td>S1173</td><td>상처 봉합</td></tr> 용 <tr><td>Vetbond 조직 접착제 (3M)</td> <td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-361931</td><td>옵션 : 상처 봉합 보조용; 봉합사와 함께 사용하십시오.</td></tr><tr><td>면팁 나무 축 멸균 애플리케이터</td><td>Fisher scientific</td><td>22-029-488</td><td>수술 상처 청소 및 건조용</td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus 현미경 슬라이드</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12-550-15</td><td>뇌 절편 수집용</td></tr><tr><td>VWR 마이크로 커버 유리 24 X 50 mm</td><td>VWR</td><td>48393241</td><td>현미경 슬라이드 장착용</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nalgene 주사기 필터 0.2 &mu; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>194-2520</td><td>식염수 살균 용</td></tr><tr>Viscot Medical <td>Medline</td><td>VIS1422SRL91</td>의<td>멸균 이중 팁 피부 마커</td><td>두개골에 좌표를 표시하기 위해</td></tr></tbody></table>

마우스 해마에 올리고머 아밀로이드 - 베타의 정위 주입

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

알츠하이머 병은 고령화에 영향을 미치는 신경 퇴행성 질환이다. 질병의 주요 신경 병리학 적 특징은 아밀로이드 - 베타의 과잉 생산과 고통받는 사람들의 뇌 영역에서 아밀로이드 베타 플라크의 증착이다. 지난 몇 년 동안 과학자들은 아밀로이드 - 베타 병리를 복제하려고 많은 알츠하이머 병 마우스 모델을 생성했다. 불행히도, 마우스 모델은 선택적 질환 특징을 모방. 신경 세포 사망, 알츠하이머 병 환자의 뇌에서 현저한 효과가 현저 이들 마우스에서 부족하다. 뉴런 가장 독성임이 입증되었다 아밀로이드 - 베타의 형태 - - 따라서, 우리 등은 직접 아밀로이드 - 베타의 수용성 올리고머 종을 주입하는 방법을 채용 한 stereotaxically 뇌로. 이 보고서에서 우리는 선택 뇌 영역에 아밀로이드 - 베타 수준을 증가의 수술 기법을 문서화하는 남성 C57BL / 6J 마우스를 사용합니다.콜린성 회로에 의해 접속되어 기저 전뇌와 함께이 뇌 구조체가 변성 질환의 영역 중 하나 나타내므로 투여 대상은 해마의 치아 이랑이다. 브로카의 대각선 대역의 수직 사지에서 세포 사멸 및 콜린성 뉴런 손실에 수반하는 증가가있을 정위 주입을 통해 치아 이랑에서 아밀로이드 베타 상승의 결과, 1 주 내에 치아 이랑에서 신경 세포 손실의 증가를 나타내 기저 전뇌의. 이러한 효과는 2 주까지 관찰된다. 우리의 데이타는 현재 아밀로이드 베타 주입 모델은 단기간에 특정 영역의 신경 세포 사멸을 해결하기위한 대안이 마우스 모델을 제공한다는 것을 시사한다. 이 모델의 이점은 아밀로이드 - 베타가 시공간하게 증가 될 수 있다는 것이다.

인간 재조합 올리고머 Aβ 1-42의 제조 본 방법은 단량체, 이량 체, 삼량 체 및 사량 체 (도 1A)으로 이루어진 수용성 올리고머 종을 산출한다. 이러한 저 분자량 Aβ 1-42 종 아니지만 브릴과 플라크 뉴런 1,4,9,17-19 가장 독성 수많은 설정에 도시되어있다. 올리고머 Aβ 1-42은 마우스의 뇌에서 Aβ 1-42 신경 세포 사멸을 유도하는지 여부를 결정하기 (100 μM 원액 4 μL)를 9개월 오래 야생형 C57BL 하나 반구에서 해마의 DG에 주입 하였다 / 6J 마우스. C57BL / 6J위한 해마의 중량은 약 0.018 g을 것으로 추정되므로 Aβ 1-42의 전달은 약 100 μg의 / g이었다된다. 아밀로이드 베타 1 용해에 사용 된 DMSO의 동일한 볼륨으로 구성 - 같은 마우스 뇌의 반대편 DG는 제어 / 차량 용액을 주입했다42 ...

여기에서는 아밀로이드-베타의 직접 입체성 뇌 주입을 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 방법론은 뇌 뉴런에 대한 아밀로이드-베타의 단기적인 영향을 해결하기 위한 대안적인 생체 내 마우스 모델을 제공합니다.

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

이 절차의 전반적인 목표는 Liga meric a beta 1 42를 해마의 치상회(dentate gyrus)에 입체정으로 주입하는 것입니다. 이것은 먼저 베타 1 42 솔루션인 liga meric을 준비하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 주입 좌표를 결정하는 것입니다.다음으로 외과 수술로 동물의 두개골을 노출시키고 바늘 삽입을 위해 두 개의 구멍을 삽입합니다. 마지막 단계는 주사기 바늘을 최종 위치로 이동하고 베타 1 42를 주입하는 것입니다. 궁극적으로, 입체택시 Abeta 1 42 주입 방법은 살아있는 동물에서 Abeta 1 42의 독성 효과를 조사하는 데 사용됩니다.기존 형질전환 Abeta 42 마우스 모델에 비해 이 기술의 주요 장점은 올리고머 ALA 42를 특별하고 일시적인 방식으로 높일 수 있고 형질전환 마우스 모델에는 없는 세포 사멸 병리를 안정적으로 재현할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 알츠하이머병에서 병리학적 과정이 어떻게 퍼져 나가는지와 같은 알츠하이머 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 절차를 시작하려면 마취된 쥐의 머리를 면도하여 피부를 노출시킵니다.다음으로, 입체성 프레임의 가열 패드에 마우스를 놓습니다. 그런 다음 앞니를 치아 보호대에 고정하고 마우스의 얼굴 위에 코 조각을 고정합니다. 그런 다음 이어바를 청각 마우스에 배치하여 머리를 고정하여 확인합니다.머리가 고정되어 있으면 부드럽게 눌러 움직이지 않도록 합니다. 그런 다음 양쪽 눈에 연고를 바르면 촉촉함을 유지할 수 있습니다. 그 후, Betadine을 두개골 위의 피부에 도포하여 수술 부위를 소독한 다음 멸균 면봉으로 70% 에탄올을 투여합니다.베타딘과 에탄올 세척을 번갈아 가며 두 번 더 수행합니다. 이제 메스로 두피 정중선을 2-3mm 절개합니다. 곧고 가는 가위를 사용하여 절개 선을 약 1.0cm까지 연장하여 두개골의 시상 봉합사, bgma 및 lambda를 노출시킵니다.그런 다음 집게를 사용하여 피부를 잡아당깁니다. 멸균 식염수를 적신 멸균 면봉으로 두개골을 청소합니다. 그런 다음 깨끗하고 마른 면봉을 사용하여 두개골을 말리십시오.다음으로 점을 표시합니다. Bre ma 위치에서 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 바늘 끝이 bgma의 점에 닿도록 Hamilton 주사기를 배치합니다. 그런 다음 DV 좌표를 Lambda 포인트에 점을 표시하고 주사기를 Lambda 포인트로 후방으로 이동하여 두개골의 AP 축이 수평인지 확인합니다.바늘 끝은 bgma 포인트와 마찬가지로 Lambda 포인트에 닿아야 합니다. 그런 다음 DV 위치를 기록하십시오. Bre, MA 및 Lambda의 DV 좌표는 0.5mm 이내여야 합니다.이제 바늘 끝을 BMA 점으로 되돌립니다. 시작 AP 위치를 기록합니다. 그런 다음 시작 ap에서 2mm를 빼서 끝 ap 위치를 계산합니다.주사기 바늘을 최종 AP 좌표로 조정하고 재배치합니다. 다음으로, 현재 ML 좌표를 기록합니다. 시작 ml에서 1.3mm를 더하거나 빼서 왼쪽 및 오른쪽 끝 ml 좌표를 계산합니다.주사기 바늘을 조정하고 끝 ML 좌표로 이동합니다. 바늘 끝을 양쪽 끝 ML 좌표의 두개골 표면에 터치하고 DV 좌표가 0.5mm 이내인지 확인합니다. 마지막 ml 좌표에서 바늘을 두개골 위로 0.5-1cm 위로 당깁니다.두개골에 어두운 색의 매우 미세한 점 마커로 점을 표시합니다. 두개골의 반대쪽 쪽에 대해 이 단계를 반복합니다. 그런 다음 주사기를 멀리 옮깁니다.왼쪽 또는 오른쪽 ml에 구멍을 뚫습니다. 0.8mm 드릴 비트를 사용하여 두개골을 조정합니다. 반대쪽 쪽에 대해 이 단계를 반복합니다.그런 다음 주사기를 새로 도입된 구멍 중 하나로 이동합니다. 바늘을 두개골 바로 지나갈 때까지 내리고, 바늘이 두개골을 통과했는지 확인하기 위해 뇌에 구멍을 뚫지 않도록 주의하십시오. 바늘이 구멍에서 나오지 않도록 바늘을 두개골에 부드럽게 밀어 넣습니다.다음으로 시작 DV 좌표를 기록합니다. 끝 dv를 계산합니다. 시작 DV.Coordinate에서 2.2mm를 빼서 조정하고 바늘을 끝 db까지 내립니다.그런 다음 입체택시 주입기 펌프를 설정하여 베타 1 42 4마이크로리터를 분당 0.5마이크로리터의 속도로 치상회에 주입합니다. 주입 후 주사 부위에서 용액의 역류를 최소화하기 위해 바늘을 1분 더 제자리에 두십시오. 그런 다음 바늘을 뇌의 반대편으로 옮기고 절차를 반복합니다.이제 이어바의 나사를 풉니다. 학생 표준 패턴 집게를 사용하여 두피를 당기고 봉합사로 상처를 봉합합니다. 노즈 가드를 제거하고 마우스를 제거합니다.수분 공급을 위해 1ml의 멸균 식염수를 마우스에 직접 주입하고 통증 완화를 위해 kg당 0.1mg의 부프레노르핀을 피하 주사합니다. 그런 다음 깨어날 때까지 마우스를 섭씨 42도 열판 위에 놓인 깨끗하고 빈 케이지로 옮깁니다. 그런 다음 충분한 음식과 물과 함께 마우스를 하우징 케이지로 되돌립니다.이 그림은 9개월 된 마우스의 좌측 및 우측 치상회(dentate gyrus)에 베타 1 42와 비히클을 주입한 것을 보여줍니다. 파선은 주입이 견인된 것을 나타내고 화살표는 축소된 치상회를 나타냅니다. Abeta 1 42 주입 후 일주일 이내에 치상회는 7일과 14일에 분자층과 주사 부위에 가까운 다형성 세포층에서 Abeta 1 42 수치 상승을 보였다.Abeta 1 42는 터널 양성 염색의 증가와 치상회(dentate gyrus) 두께의 감소를 유도하여 Abeta 1 42의 신경퇴행성 효과를 확인했습니다. 여기서, 역행 추적자 플루오로 골드는 Abeta 1 42와 함께 치상회에 공동 주입되었습니다. 주사 후 7일 후, 플루오고드가 기저 전뇌에서 검출되었는데, 이는 콜린성 뉴런을 통한 라벨의 역행 수송을 시사합니다.기저 전뇌(basal forebrain)에 있는 플루오갈드 양성 뉴런(Fluorgold positive neuron)은 정량화를 위해 선택되었습니다. 주입 후 7일 후, Abeta 1 42는 터널에서 증가를 이끌어냈고 채팅에서는 감소를 이끌어냈습니다. 기저 4개의 뇌에 있는 양성 뉴런: 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 약 30분 안에 완료할 수 있습니다.이 절차에 따라 다른 방법을 사용하여 뇌에 대한 아밀로이드 주입의 기계론적 효과를 다루기 위한 분자 메커니즘 연구와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다. 저희 영상을 시청해 주셔서 감사드리며, 이 방법이 여러분의 실험에 도움이 되기를 바랍니다.

stereotaxic-infusion-oligomeric-amyloid-beta-into-mouse

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

알츠하이머병 중 하나는 기능은 Aβ의...

β - 아밀로이드 Oligomeric의 준비 1-42</subHippocampal 조각에 시냅틱 소성 장애의>와 유도

이 비디오는 아밀로이드-베타(Aβ) 펩타이드 특이적 항체를 쥐의 해마에 지속적으로 주입하는 기술을 보여줍니다. 이 연구는 올리고머와 항체 간의 상호 작용을 연구하기 위해 쥐 해마에 용해성 Aβ 올리고머(Aβo)를 주입하는 것과 결합된 Aβ 펩타이드 특이적 항체의 제어 주입을 위해 양측 캐뉼라 시스템을 이식하는 방법을 사용합니다.

Aβ 펩타이드 특이적 항체 및 Aβ 올리고머를 쥐 해마에 제어 주입

이 비디오는 알츠하이머병의 마우스 모델을 확립하기 위해 아밀로이드 베타를 치상회에 정확하게 입체적으로 주입하는 방법을 보여줍니다. 정확한 좌표 결정과 아밀로이드 베타 단백질의 제어된 전달은 신경 세포 분해를 초래하여 기억 처리를 방해하고 알츠하이머병 발병에 기여합니다.

알츠하이머병 모델을 위한 아밀로이드-베타 단백질의 직접 입체성 뇌 주입

출처: Arango-Lievano, M. et. al., 대뇌혈관 구조의 종단 생체 내 이미징: 중추신경계 질환과의 관련성. J. Vis. Exp. (2016)이 비디오는 형광 표지된 아밀로이드 플라크와 대뇌 혈관 구조를 시각화하기 위한 생체 내 이광자 이미징을 보여줍니다. 파란색 형광은 플라크를 표시하고 녹색 형광은 뇌 혈관을 강조합니다. 관심 영역의 3D 지도와 고해상도 모자이크 이미징은 아밀로이드 플라크와 대뇌 혈관의 상세한 상호 작용을 보여줍니다.

알츠하이머병 마우스 모델에서 대뇌혈관 및 아밀로이드 플라크의 생체 내 이미징

출처: Slezia, A. et al. 간질 초점에 γ-아미노부티르산(GABA)을 전기영동으로 전달하면 생쥐의 발작을 예방할 수 있습니다. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 마취된 마우스에서 발작 활성을 억제하기 위한 감마-아미노부티르산(GABA)의 전기영동 전달을 보여줍니다. 치료 효능을 평가하기 위해 프로브 이식, 신경 활동 기록, 발작 유도 및 미세유체 이온 펌프를 통한 제어된 GABA 전달과 관련된 단계를 간략하게 설명합니다.

마취된 마우스의 간질 초점에 GABA의 전기영동 전달

마이크로 RNA는 뇌의 구조와 기능에 중요한 역할을한다. 여기에 우리가 과다 발현은 설계 miRNA의 발현 렌티 바이러스의 정위 주사를 사용하여 해마 miRNA의를 적용하는 방법을 설명합니다. 이 방법은을 평가하는 상대적으로 빠른 방법으로 사용할 수...

의 정위 주입 MicroRNA의 발현 마우스 해마 CA1 영역으로 렌티 바이러스 및 행동 결과의 평가

아밀로이드-β (Aβ)의 동물 모델에 정의 된 수량 및 Aβ 단편 종의 관리를 가능하게하고 각 연구 그룹 내의 개별 차이를 줄여 주사 하였을. 이 프로토콜은 정상 마우스에서 알츠하이머와 같은 행동 이상의 생산을 가능하게 정위기구없이 Aβ​​의 뇌실 (ICV) 주입을 설​​명합니다.

일반 마우스의 아밀로이드-β의 펩티드의 뇌 실내 주사는 급성 치매와 같은인지 적자를 유도합니다

이 논문은 신경전달물질 수용체의 발현을 정량화하는 방법과 광유전학 도구의 바이러스 전달과 동결-파괴 복제 면역 표지 기술의 조합을 사용하여 식별된 시냅스 전후 요소로 시냅스에서 분석된 패턴을 설명합니다.

Optogenetic 및 동결 골절 복제 Immunolabeling는 마우스 편도체에서 글루타메이트 수용체의 입력 특정 배열을 검사하기 위해 결합

생체 내에서 Aβo의 효과를 연구하기 위해 Aβo의 신경독성 효과를 상쇄하기 위해 삼투압 펌프를 사용하여 해마에 Aβo 항체(6E10)를 지속적으로 주입하는 용해성 Aβo의 반복적인 해마 주입을 기반으로 하는 모델을 개발했습니다.

만성 아밀로이드 - 베타 올리고머 주입의 동물 모델에서 신경 퇴행은 삼투 펌프와 항체 치료 인 퓨즈에 의해 상쇄되어

마우스에 utero 서바이벌 수술 개발하는 동안 유전자 발현의 분자 조작 수 있습니다. 여기 우리는 배아 하루 마우스 뇌 (E) 9.5에 r​​etroviral 벡터의 주사를 안내 고주파 초음파 이미징의 사용을 설명합니다.

마우스 Forebrain에 초음파 유도 Microinjection Utero에서 E9.5에서

배우세요 마우스 해마 치아마루에 올리고머 아밀로이드-베타를 정위 주입하는 방법을 통해 신경독성을 연구하세요. 이 기술은 생체 내에서 세포 사멸 병리를 재현하여 알츠하이머병의 병리 기전을 규명하는 데 활용됩니다.

마우스 해마에 올리고머 아밀로이드 - 베타의 정위 주입

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