Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

Viviana Meraviglia; Alessandra Zanon; Alexandros A. Lavdas; Christine Schwienbacher; Rosamaria Silipigni; Marina Di Segni; Huei-Sheng Vincent Chen; Peter P. Pramstaller; Andrew A. Hicks; Alessandra Rossini

doi:10.3791/52885

비 통합 에피 솜 플라스미드를 사용하여 냉동 버피 코트에서 유도 만능 줄기 세포의 생성

JoVE Journal
Developmental Biology

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Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

비 통합 에피 솜 플라스미드를 사용하여 냉동 버피 코트에서 유도 만능 줄기 세포의 생성

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10:52 min

June 5, 2015

DOI: 10.3791/52885-v

Viviana Meraviglia*¹, Alessandra Zanon*¹, Alexandros A. Lavdas¹, Christine Schwienbacher¹, Rosamaria Silipigni², Marina Di Segni², Huei-Sheng Vincent Chen³, Peter P. Pramstaller¹, Andrew A. Hicks¹, Alessandra Rossini¹

¹Center for Biomedicine,European Academy Bozen/Bolzano (EURAC), ²Laboratory of Medical Genetics,Fondazione IRCCS Ca´ Granda, Ospedale Maggiore Policlinico, ³Del E. Webb Center for Neuroscience, Aging & Stem Cell Research,Sanford-Burnham Medical Research Institute

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

유도 만능 줄기 세포 (iPSCs)의 임상 응용 프로그램 및 기초 연구에 대한 환자의 특정 조직의 소스를 나타냅니다. 여기서는 비 - 에피 솜 통합 플라스미드를 사용하여 바이러스 프리 iPSCs에 냉동 버피 코트로부터 얻은 인간의 말초 혈 단핵 세포 (PBMNCs)를 재 프로그래밍 상세한 프로토콜을 제시한다.

이 절차의 전반적인 목표는 비용 효율적이고 바이러스가 없는 프로토콜을 사용하여 얼어붙은 버피 코트에서 얻은 인간 말초 혈액 단핵 세포에서 유도 만능 줄기 세포를 생성하는 것입니다. 이는 먼저 밀도 구배 없이 전혈 원심분리 후 Buffy coats에서 PB MNC를 분리한 다음 특정 혈액 배양 배지에서 증식함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 전기천공법을 통해 Buffy coat PB MNC를 에피솜 플라스미드로 transfection하는 것입니다.

그런 다음 형질주입된 PB MNC를 새로운 마우스 배아 섬유아세포 공급세포에 도금합니다. 마지막 단계는 배양액에서 유도 만능 줄기 세포를 수동으로 선택하고 증식을 위해 새로운 공급 세포 플레이트로 옮기는 것입니다. 궁극적으로, PB MNC를 전형적인 인간 형태를 가진 유도 만능 줄기 세포로 효율적으로 재프로그래밍하는 것은 면역 형광 및 유전자 발현 측정을 통해 입증될 수 있습니다.

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