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DOI: 10.3791/52905-v
Rebeccah J. Katzenberger1, Carin A. Loewen2, R. Tayler Bockstruck1, Mikal A. Woods3, Barry Ganetzky2, David A. Wassarman1
1Department of Cell and Regenerative Biology,University of Wisconsin-Madison, 2Department of Genetics,University of Wisconsin-Madison, 3Department of Natural Sciences,University of Puerto Rico-Aguadilla
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
여기에서 우리는 초파리에서 폐쇄 머리 외상성 뇌 손상 (TBI)를 입힐 수있는 방법을 설명합니다. 이 방법은 파리에 사용할 실험 도구와 기술의 광대 한 배열을 사용 TBI 병리의 기초 세포와 분자 메커니즘을 조사하기 위해 게이트웨이를 제공합니다.
이 절차의 전반적인 목표는 폐쇄성 두부 외상성 뇌 손상을 입히는 것입니다. 파리에서. 이것은 먼저 바닥에서 1인치 떨어진 유리병에 파리를 넣음으로써 수행됩니다.
두 번째 단계는 바이알을 HIIT 장치에 부착하는 것입니다. 다음으로, 스프링을 특정 각도로 편향시키고 바이알을 방출하여 완전히 정지시킵니다. 궁극적으로, 다양한 행동 형태학적 및 분자 분석을 사용하여 그로 인한 외상성 뇌 손상의 결과를 특성화할 수 있습니다.
설치류 체중 감소 방법과 같은 기존 방법에 비해 이 방법의 주요 장점은 짧은 기간 동안 많은 동물을 연구할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 외상성 뇌 손상의 결과가 개인마다 다른 이유와 같은 외상성 뇌 손상 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 시작하려면 함께 제공되는 텍스트 프로토콜의 표 1에 나열된 원료를 조립하십시오.
한 쌍의 펜치를 사용하여 클램프를 구부려 스프링에 단단히 고정되도록 합니다. 그런 다음 보드의 너비를 기준으로 클램프를 중앙에 놓고 외부 클램프를 보드 가장자리와 같은 높이로 서로 맞눕니다. 보드의 길이와 평행이 되도록 스프링을 조정한 다음 4개의 나사를 사용하여 스프링 위와 보드에 클램프를 부착합니다.
다음으로 벨크로 접착 테이프 스트립을 감습니다. 스프링의 자유 끝 주위쯤에 이르면 벨크로의 바깥쪽 가장자리가 스프링 끝과 같은 높이가 되어야 합니다. 얼음 양동이 덮개를 거꾸로 놓고 중앙에 단단히 고정하여 나무 판자에 단단히 고정합니다.
얼음 양동이 덮개의 돌출된 부분이 긴 가장자리가 보드의 너비와 평행이 되도록 방향을 지정합니다. 얼음통 덮개가 보드와 물체 사이에 끼어 움직이지 않도록 전체 장치를 벽과 같은 고정된 물체에 밀어 넣습니다. 그런 다음 종이 각도기를 판지 바닥에 테이프로 붙이고 바이알 트레이를 날리고 보드 길이에 대해 가장자리에 세워 90도 표시가 스프링과 정렬되도록 합니다.
완벽한 수직 위치로 다시 당기면 빈 바이알에 마취된 이산화탄소 파리를 1개에서 60개 사이에 놓고 꼭 맞는 면봉을 사용하여 바이알을 막습니다. 그런 다음 바이알 바닥에서 1인치 떨어진 곳에 선을 긋고, 바이알 측면에서 파리를 쓰러뜨린 다음 새로 그린 선과 일치할 때까지 면봉을 밀어 넣습니다. 파리가 이산화탄소로부터 이동성을 회복할 때까지 5분 동안 기다립니다.
다음으로, 벨크로의 안쪽 가장자리가 바이알 상단과 같은 높이가 될 때까지 스프링의 끝을 바이알에 삽입합니다. 이렇게 하면 스프링이 평평하게 놓인 상태에서 단단한 압축 피팅을 만들어 바이알을 스프링에 고정합니다. 이때 바이알의 1인치가 얼음 양동이 덮개의 돌출된 부분과 겹치는지 확인하십시오.
바이알이 얼음 양동이 덮개에 충격을 가하면 큰 소리가 나므로 청력 보호구를 착용하십시오. 그런 다음 오른손으로 왼손의 엄지와 검지를 사용하여 벨크로 영역에서 바이알을 잡고 보드를 벤치 상단까지 단단히 잡습니다. 그런 다음 스프링을 원하는 각도로 완벽하게 똑바로 당긴 다음 스프링을 놓습니다.
스프링이 완전히 멈출 때까지 기다렸다가 스프링에서 바이알을 제거합니다. 바이알을 벤치 상단에 놓고 파리가 최소 5분 동안 회복할 때까지 기다립니다. 이 기간 동안 파리는 천천히 정상적인 움직임을 회복합니다.
다음으로, 나중에 분석하기 위해 파리를 파리 먹이가 있는 바이알로 옮기거나 파리를 다시 타격하면 바이알을 여러 번 재사용할 수 있습니다. 이 실험의 목적은 24시간 시점의 사망률 지수에 대한 부상의 중증도의 영향을 확인하는 것이었습니다. 외상의 정도는 방출 전 스프링의 편향 각도가 0도에서 90도까지 결정되었습니다.
이 실험은 0일에서 7일 된 파리와 20일에서 27일 된 파리의 두 가지 다른 나이의 파리를 대상으로 수행되었습니다. 그 결과, 부상이 심할수록 사망률이 높아진다는 것을 알 수 있다. 나이가 많은 파리는 봄 편향이 50도 이상일 때 어린 파리에 비해 사망률 지수가 증가했습니다.
이 비디오를 보고 나면 파리를 사용하여 외상성 뇌 손상을 입히는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
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