Name: 마우스의 이소성 자궁 심장 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: 배우세요 마우스 경부 심장 이식술을 통해 허혈-재관류 손상 및 이식편 거부 반응을 연구하는 방법을. 커프 기법을 활용하면 복잡한 봉합 없이 신속하고 일관된 실험 결과를 얻을 수 있습니다.

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M.-A. Deutsch는 Dr. Rusche Forschungsprojekt (2014), Deutsche Stiftung für Herzforschung 및 Deutsche Gesellschaft für Thorax- Herz- und Gefäßchirurgie의 지원을 받습니다. M. Krane은 Deutsche Stiftung für Herzforschung (F/37/11), Deutsches Zentrum für Herz Kreislauf Forschung (DZHK B 13-050A; DZHK B 14-013SE) 및 Deutsche Forschungsgemeinschaft(KR3770/7-1; KR3770/9-1)

모든 실험은 독일 심장 센터 뮌헨과 바이에른, 독일 (GZ. 55.2-1-54-2532.3-17-13)의 정부에 의해 승인되었다. 동물은 특정 병원체 무료 시설에 보관하고 의학 연구를위한 국가 사회와 국립 아카데미에서 제공하는 &quot;실험 동물의 관리 및 사용을위한 가이드&quot;에 의해 공식화 &quot;실험 동물 관리의 원칙&quot;을 준수하여 인간의 치료를받은 과학 및 국립 보건원 (NIH 출판 NO. 86-23가 1985 년 개정)에 의해 출판. 참고 : 두 개의 곡선 집게 및 선박 dilatators 포함 멸균 미세 수술 장비의 완전한 세트는, 절차 (그림 2a) 필요합니다. 수술 전후 예방 적 항생제는 일상적으로 필요한 것은 아니지만 면역 동물에 표시 될 수있다. 동물 단말기 이소 플루 란 흡입을 이용하여 희생되었다. 기증자 준비 및 이식 수확 &lt;OL&gt; <li> 복강 내 (IP)에 의해 동물의 주사 미다 졸람 (5.0 ㎎ / ㎏), 메데 토미 (0.5 ㎎ / ㎏) 및 펜타닐 (0.05 ㎎ / ㎏ 체중)를 마취. 수술 분야에 부정사 위치에 마우스를 놓고 페달 철수 반사에 의해 수술 내성을 확인합니다. </li><li> 클로르헥시딘으로 피부를 세 번 소독하고 중간 선 복부 절개를 수행합니다. 하대 정맥을 노출 왼쪽에 젖은 거즈로 장을 후퇴. </li><li> 항 응고에 대한 하대 정맥을 통해 0.4 mL의 생리 식염수에 희석 헤파린의 50 IU를 주사. 헤파린 후 용기를 1 분 절개. </li><li> 다이어프램을 열고 심장을 노출하는 양자 개흉술을 수행합니다. 앞쪽에 가슴 벽 우량 반영 클램프와 장소에서 개최됩니다. </li><li> 흉선을 제거하고 퉁명스럽게 대동맥과 폐동맥 사이의 결합 조직을 해부하다. 우측 상대 정맥을 절개. </li><li> 의 수준에서 동원 상행 대동맥에 구멍30 G 바늘 팔 머리 트렁크는 5 ML의 주사기에 장착 천천히 4 ℃ 저온 심정지 용액 3 ㎖에 과도한 압력없이 retrogradually 마음을 관류. 관상 동맥에 공기의 유입을 피하십시오. 추가로 심정지를 향상 그래프트 상 빙냉 식염수 놓는다. </li><li> 팔 머리 트렁크의 기원에 근위 대동맥을 가로로 쪼개다. </li><li> 8-0 실크 심장에 가까운 열등 우수한 venae 모두 cavae을 결찰과 합자로 원심을 가로로 쪼개다. </li><li> 같은 말단 가능한 폐 트렁크를 무료 해부하다. 8-0 실크 분기에 가까운 폐 동맥을 결찰하고 원심을 가로로 쪼개다. </li><li> 단일 8-0 실크 봉합사로 모두 함께 폐 혈관을 결찰하고 그들을 가로로 쪼개다. </li><li> 기증자로부터 심장을 제거하고 이식까지 얼음처럼 차가운 심정지 용액에 보관하십시오. </li></ol> 2.받는 사람 준비 <ol><li> 준비11 호 메스 또는 현미경 가위로 폴리이 미드 튜브를 절단하여 문합을위한 커프스. 커프는 원통형 몸체 및 혈관 클램프의 배치를위한 확장 (원주의 1 / 3의), 1mm (도 2b)의 길이가 각각 이루어져있다. </li><li> 동물을 마취하고 전술 한 바와 같이 수술 내성을 확인. 유체 교체 0.25 ml의 따뜻한 식염수의 피하 (SC)를 주입한다. </li><li> 전기 면도기를 사용하여 오른쪽 자궁 지역의 머리를 제거하고 따뜻한 패드 앙와위에서 동물을 배치합니다. 호흡을 손상시킬 수있는이 같은 전면 사지를 overstretching 피하면서 테이프의 가닥 다리를 고정합니다. 건조 함을 방지하기 위해 안과 용 연고를 사용하여 눈을 커버. 수술 부위를 클로르헥시딘으로 3 회 소독한다. </li><li> 경정맥 노치에 오른쪽 하악 각도에서 가로 피부 절개를합니다. </li><li> 퉁명스럽게 내선 동원ernal 경정맥. 바이폴라 집게와 곁가지를 소작하고 그들을 가로로 쪼개다. </li><li> 턱밑 샘에서 정맥과 합류의 수준에서 합자 사이의 외부 경정맥을 나눈다. </li><li> 커프를 통해 외부 경정맥을 당겨 커프의 확장에 혈관 클램프를 배치하여 근위 혈관을 폐색. 합자를 제거 1:10 헤파린 식염수로 혈관 내강을 관개. </li><li> 커프를 통해 혈관 벽을 에버트와 사전 원주 8-0 실크 봉합사로 고정합니다. </li><li> 흉쇄 근육의 피상적 인 부분을 제거합니다. </li><li> 오른쪽 경동맥을 동원 경동맥 분기 아래 합자 사이의 혈관을 가로로 쪼개다. </li><li> 커프를 통해 경동맥을 당겨 커프의 확장에 Yasargil 클램프를 배치하여 근위 혈관을 폐색. 합자를 제거 1:10 헤파린 식염수로 혈관 내강을 관개. </li><li> 부드럽게 dilat전자 혈관 dilatator와 동맥 내강은 커프를 통해 혈관 벽을 에버트와 사전 원주 8-0 실크 봉합사로 고정합니다. </li><li> 이식 주입을위한 충분한 공간을 확보하기 위해, 턱밑 샘의 오른쪽 엽을 제거합니다. </li><li> 이식까지 촉촉한 수술 필드를 유지합니다. </li></ol> 3. 이식 주입 <ol><li> 거꾸로 내측 지향 대동맥과 측면 폐동맥과받는 사람 자궁 경부 지역에서 이식을 놓습니다. </li><li> 경동맥과 팔목에 걸쳐 이식의 대동맥을 당겨 원주 8-0 실크 봉합사로 문합을 확보. </li><li> 그 앞쪽 측면에 폐 트렁크를 절개와 외부 경정맥과 팔목에 그것을 잡아 당깁니다. 또 원주 8-0 실크 봉합사로 문합을 확보. </li><li> 경동맥의 언 클램프에 의해 다음, 외부 경정맥에 클램프를 제거합니다. 마음은 혈액 즉시 채 웁니다. R을 향상시키기eperfusion는 이식 상에 37 ° C 따뜻한 식염수를 놓습니다. 일반적으로 심장은 1 분 내에 동 율동을 개발하고 있습니다. 정맥 사이트에서 커프 확장을 제거합니다. </li><li> 올바른 이식 위치를 확인, 문합은 비틀림없이 긴장이없는 선박이어야합니다. 이 이후 피부의 소작 혈관은 상처 치유를 손상시킬 수는 없습니다. 일반적으로 출혈 자발적으로 중지합니다. 단일 8-0 연속 봉합으로 피부를 닫습니다. </li></ol> 4. 수술 후 케어 <ol><li> 유체 교체 0.25 ml의 따뜻한 식염수 사우스 캐롤라이나를 주입한다. </li><li> 마취제는 날록손 (1.2 ㎎ / ㎏), 플루 마제 닐 (0.5 ㎎ / ㎏)과는 흉골 드러 누움을 유지하기에 충분한 의식을 회복 할 때까지 따뜻한 패드 위에 동물 왼쪽 SC atipamezol (2.5mg / 체중 kg)을 주사 길항. 비정상적인 행동을 등록하는 적어도 하나의 추가 시간 동안 동물을 관찰한다. 완전히 recove 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다빨간색. </li><li> 부 프레 노르 핀과 선제 진통제를 제공 (0.05 ㎎ / ㎏ SC 세 하루에 번) 또는 시술 후 72 시간의 최소 기간 동안 지역 기관 프로토콜에 따라 다른 진통제. </li><li> 외과 의사와 수의사는 동물을 정기적으로 볼 수 있습니다. 체중 감소&gt; 15 %, 무관심, 부종 또는 외과 측 감염 동물의 경우 단말기 이소 플루 란 흡입을 사용하여 안락사된다. </li></ol>

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우리는 다양한 실험 설정에서 90 % 이상의 성공률과 200 개 이상의 심장 이식을 완료했습니다. 여기에 설명 된 기술로, 전체 절차는 숙련 된 의사에 의해 60 분 내에 완료 될 수있다. 장기 조달 전에 자궁 혈관을 제조함으로써, 총 그래프트 허혈 시간을 20 분으로 제한 할 수있다. 주입 (온 허혈 시간) 대 시간 봉합술 (16)에 비해 커프 기술을 이용하여 현저하게 짧다. 대신 단순히 이전에 5,17 설명 된대로 심장을 절개, 우리는 임상 적으로 사용 심정지 솔루션과 저체온증에 의해 이식을 관류하여 심장 마비를 유도한다. 결정질 Custodiol HTK 용액 10 밀리몰 / ℓ 칼륨과 나트륨, 칼슘, 마그네슘의 낮은 농도를 포함하고 효과적으로 마음을 체포. 첨가제 히스티딘, 트립토판 - 케 토글 루타 레이트가 산증을 감소 ATP를 제공하고, 세포막 보호 뒤링 허혈. 이 오픈 심장 수술 동안 제어 심장 마비의 임상 적 상태와 유사한 ...

심장 이식 모델은 자주 I / R 상해, 동종 이식 거부 반응, 이식 후 혈관 및 면역 에이전트의 효율성을 조사하는 데 사용됩니다. 마우스 모델은 공지 된 면역 학적 및 유전 적 배경이 많은 근친 형질 전환 균주 및 상대적으로 낮은 비용의 실험 가용성과 같은 많은 이점을 결합한다. 1973 년 생쥐의 복부 심장 이식하는 기술이 먼저 코리 등 1에 의해 설명되었다. 이 모델에서 이식받는 사람의 복부 대동맥과 하대 정맥에 주 폐동맥의 상행 대동맥의 엔드 - 투 - 측 문합에 의해 revascularized된다. 1991 년 생쥐의 자궁 심장 이식 봉합 기술은 첸 등의 알 2에 의해 설명되었다. 이 모델에서 역행 관상 동맥의 관류는 GR의 상행 대동맥에받는 사람의 경동맥 동맥의 문합에 의해 설립선미. 정맥 혈액 우심방, 우심실에 관상 정맥동을 통해 배수 및받는 사람의 외부 경정맥 정맥 (그림 1)에 폐동맥을 통해 배출됩니다. 복부 이식 주입에 비해 자궁 모델은 덜 침습적이며, 이식의 표면 위치는 추가로 추적 검사 (예 촉진, 심장 초음파 검사, 생체 내에 형광 현미경) 3,4를위한 아주 쉽게 접근 할 수 있습니다. 기술 향상 5,6에도 불구하고,이 모델의보다 광범위한 사용은 문 합부 누출과 혈전증의 발생률이 높은과 작은 혈관의 봉합 문합을 수행하기 때문에 기술적 인 문제에 국한되고있다. 1991 년, 마츠우라 등. 혈관벽 크게 자궁 심장 이식 7의 모델을 용이하게 합성 실린더 위에 everted되는 커프 기술을 소개했다. 이 기술은 푸이었다rther 신장 (8), 췌장 (9), 사지 (10), 간 11, 12, 13, 14 폐 및 혈관 이식 (15) 등 다양한 실험 이식 모델에 채택했다. 봉합 기술에 비해 필요한 문합을위한 시간과, 따라서, 온 허혈 손상 시간이 짧고에 커프 (16)의 기술을 이용하여 상당히 적은 혈관 합병증이있다. 또한, 높은 성공률로 동작을 수행하도록 미세 작은 외과 훈련 할 수있다. 커프 기술의 단점은 대뇌 재관류를 변경할 수 경동맥의 결찰 필수이다. 이 비디오 논문에서는 생쥐의 자궁 심장 이식을위한 개선 및 단순화 된 커프 기술을 제시한다.

<table><tbody><tr><td>겸자 JFC-7.2</td><td>S & T</td><td>P-00036</td><td>곡선 팁 0.20mm</td></tr><tr><td>용기 확장기 D-5a</td><td>S& T</td><td>S-00124</td><td></td></tr><tr><td>Adventita 가위</td><td>S & T</td><td>S-00102</td><td></td></tr><tr><td>혈관 클램프 B-1V</td><td>S& T</td><td>S-00396</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil Clip</td><td>Peter Lazic</td><td>65,097</td><td>3.5mm 길이</td></tr><tr><td>양극성 집게</td><td>Micromed</td><td>148-100-011</td><td>팁 0.25mm</td></tr><tr><td>폴리이미드 튜브</td><td>River Tech Medical</td><td></td><td>19-24 게이지</td></tr><tr><td>8.0 실크 합자</td><td>Catgut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK 솔루션</td><td>필수 제약</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

생쥐의 이소성 경추 심장 이식은 이식 및 심혈관 연구에서 유용한 도구입니다. 커프 기술은 작은 혈관의 까다로운 봉합 문합을 피함으로써 이 모델을 크게 단순화하여 따뜻한 허혈 시간을 줄입니다. 복부 이식편과 비교했을 때, 경추 모델은 덜 침습적이며 이식된 이식편은 추가 후속 검사를 위해 쉽게 접근할 수 있습니다. 문합은 이식편의 상행 대동맥을 수혜자의 총경동맥이 있는 커프 위로 당기고, 외부 경정맥이 있는 커프 위로 주 폐동맥을 당기는 방식으로 수행됩니다. 적절한 커프 크기를 선택하고 혈관을 완전히 가동하는 것은 성공적인 혈관 재생에 중요합니다. 허혈-재관류(I/R) 손상은 이식편에 심정지 용액을 관류하고 저체온증을 통해 최소화할 수 있습니다. 이 기사에서는 단순화되고 개선된 커프 기술에 대한 기술적 세부 정보를 제공하여 기본적인 미세 수술 기술을 갖춘 외과의가 높은 성공률로 절차를 수행할 수 있도록 합니다.

우리 팀은 성공적으로 약 20 훈련 수술 후 설명 된 기술을 수행 할 수 있습니다. 가장 어려운 부분은 쉽게 다시 플립 여러 시도가 찢어 벽을 초래할 수 있기 때문에, 커프스 위에 경동맥 혈관 벽을 에버트한다. 훈련 기간 후에, 평균 총 수술 시간은 60 ± 8 분이었다. 약 20 분은 기증자 수확, 자궁 혈관 문합과 피부 폐쇄에 대한 15 분 준비를위한 25 분 필요합니다. 심근 I / R 상해의 조사를 위해 우리는 92 %의 수술 성공률 다양한 실험 설정에서 동계 C57BL / 6 마​​우스에 200 개 이상의 작업을 수행. 조기 사망은 문합을 수행하기에 어려움 (N = 3), 문 합부 누출 (N = 2)의 원인 및 심폐 실패 (N = 10)이었다. 하나의 동물에 의한 신경 손상을 복구 후 안락사되었다. 수술 생존자 중, 이식 생존에&gt; 95 %였다칠일 (그림 4). 동계 이식받는 사람의 숫자는 3 개월 이상 계속 살아있다. 예방 적 항생...

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

본 영상은 동계생 mice를 이용한 허혈 재관류 손상 연구 또는 동종 동물 간의 이식편 거부 반응 연구를 위한 경부 심장 이식 실험 모델을 제시합니다. 절차의 첫 번째 단계는 공여자 mouse로부터 심장을 적출하는 것입니다. 이식편은 실험 설정에 따라 얼음 위에서 Cardioplegic 용액에 최대 4시간 동안 보관됩니다.다음 단계는 수혜 마우스의 우측 경부 혈관을 준비하는 것으로, 절단된 외경정맥과 경동맥의 혈관벽을 커프(cuff) 위로 뒤집어 결찰사로 고정합니다. 이 절차의 마지막 단계는 수혜 마우스에 이식편을 심는 것입니다. 이식편의 상행 대동맥을 경동맥과 함께 커프 위로 당겨 고정하고, 폐동맥 간을 외경정맥과 문합합니다.최종적으로 클램프를 제거하고 재관류를 시작합니다. 일반적으로 심장은 1분 이내에 동성 리듬을 회복합니다. 복부 이식편 삽입과 비교하여 경부 심장 이식 방식은 침습도가 더 낮으며 동물이 더 빠르게 회복합니다.또한 문합 시 cal를 사용함으로써 작은 혈관의 봉합을 완전히 피할 수 있어, 기술적으로 더 실행 가능한 모델이 됩니다. isof fluorine으로 마우스에 사전 진정을 유도한 후, 마취제를 복강 내 주사하여 마취시키고 발바닥의 회피 반사를 확인하여 수술 내성을 확인합니다. 그런 다음 마우스를 수술대 위에 앙와위로 고정합니다.그 다음 클로르헥시딘으로 피부를 3회 소독합니다. 이제 복부 정중선 절개를 수행하고, 젖은 거즈를 사용하여 장을 왼쪽으로 젖혀 하대정맥(inferior vena cava)을 노출시킵니다. 그런 다음 응고를 방지하기 위해 0.4 milliliters의 식염수에 희석한 50 units의 헤파린을 하대정맥(IVC)에 주입합니다.1분 후, 혈관 내에서 횡격막을 절개하고 양측 흉강 절개술을 시행하여 심장을 노출시킨 다음, 전흉벽을 상방으로 젖혀 클램프로 고정합니다. 이어서 흉선을 제거하고 대동맥과 폐동맥 간의 결합 조직을 둔탁하게 박리하여 우상방 VA cva를 절개합니다. 그런 다음 30게이지 바늘을 사용하여 완두동맥 분지점에서 가동화된 하행 대동맥을 천자하고, 3mL의 얼음처럼 차가운 심정지액을 사용하여 심장에 서서히 역행성 관류를 시행합니다.과도한 압력을 가하지 마십시오. 공기가 주입되지 않도록 하십시오. 또한, 심정지 상태를 더욱 강화하기 위해 이식편에 얼음처럼 차가운 식염수를 떨어뜨려 줍니다.그 다음, 완두동맥 기시부 근위측에서 대동맥을 절단하고, 심장 근처에서 하대정맥과 양측 상대정맥을 결찰합니다. 결찰 후 ATO silk를 사용하여 각 혈관의 원위측을 절단합니다. 이어서 폐동맥 간을 가능한 한 원위측까지 노출시킨 후, 분지 지점 근처에서 폐동맥들을 결찰합니다.OSE 실을 사용하여 결찰 부위의 원위부에서 이 혈관들을 절단하십시오. 마지막으로 결찰할 혈관은 폐정맥이며, 단일 OSE 실 결찰사로 한꺼번에 결찰할 수 있습니다. 그 후 이 정맥들을 절단하여 공여자로부터 심장을 적출하십시오.현미경 하에서 작업을 시작할 때까지 심장을 얼음처럼 차가운 심정지액에 보관하십시오. 가위나 11번 메스 날을 사용하여 폴리아미드 튜브를 절단함으로써 문합을 위한 커프를 준비합니다. 공여자에게 했던 것과 동일하게 수혜자를 수술 준비시킨 후, 수분 보충을 위해 0.25 milliliters의 따뜻한 생리식염수를 피하 주사하십시오.다음으로, 오른쪽 경부 지역의 털을 깎고 마우스를 온열 패드 위에 앙와위로 놓은 뒤 다리를 테이프로 고정합니다. 이때 앞다리를 너무 과하게 늘리면 호흡에 지장을 줄 수 있으므로 주의하십시오. 그런 다음 안연고를 바르고 클로르헥시딘 스크럽을 사용하여 수술 부위를 세 번 소독합니다. 이제 오른쪽 하악각에서 경정맥 절흔까지 피부를 횡으로 절개하여 수술을 시작합니다.그 다음 외경정맥을 둔탁하게 박리하고, 바이폴라 포셉을 사용하여 측가지들을 소작한 후 절단합니다. 하악선에서 오는 정맥과 합류하는 지점의 결찰선 사이에서 외경정맥을 분리합니다. 외경정맥이 완전히 분리되면, 커프를 통해 외경정맥을 끌어당깁니다.그다음 커프의 연장 부위에 혈관 클램프를 배치하여 혈관의 근위부를 폐쇄합니다. 이제 결찰사를 제거하고 혈관 내강을 1~10 ml의 헤파린 생리식염수로 세척합니다. 혈관 벽을 커프 위로 덮어씌우고 미리 설정된 원주 방향의 ose 실크 결찰사로 혈관을 고정하여 커프에 완전히 부착시킵니다.이제 흉쇄유돌근의 표층부를 제거합니다. 다음으로 우측 총경동맥을 박리합니다. 그 후 경동맥 분기점 아래에 두 개의 결찰사를 배치하고 그 사이의 혈관을 절단합니다.이제 경동맥을 커프(cuff)를 통해 끌어당기고, 커프 근위측의 연장부에 혈관 클램프를 장착합니다. 혈관을 폐쇄하려면 결찰사를 제거하고, 혈관 내강을 1~10 µL의 헤파린 처리된 식염수로 세척합니다. 그다음 혈관 확장기를 사용하여 내강을 부드럽게 확장합니다.이전과 마찬가지로, 커프에 혈관 부착을 완료합니다. 이 절차에서 가장 어려운 부분은 카테터 혈관의 혈관 부피를 커프 위로 뒤집는 것인데, 이는 쉽게 원래대로 돌아가기 때문입니다. 따라서 적절한 커프 크기를 선택하기 위해 동맥을 완전히 가동화하고, 뒤집기 전에 혈관 내강을 부드럽게 확장시키는 것이 중요합니다.이식을 준비하기 위해 하악선(submandibular gland)의 우엽을 제거하고 수술 부위를 촉촉하게 유지하십시오. 이식편을 수 recipient 경부 영역에 뒤집어서 배치하며, 대동맥은 내측으로, 폐동맥은 외측으로 향하게 합니다. 그 다음 이식편의 대동맥을 경동맥과 함께 커프 위로 당겨 올린 후, 8-O 실크 봉합사로 원주형 문합을 하여 고정합니다.다음으로, 폐동맥 간의 전면부를 절개하여 외경정맥과 함께 커프 위로 당겨줍니다. 다른 결찰사를 사용하여 이 문합 부위를 고정합니다. 이제 외경정맥의 클램프를 제거하고 이어서 경동맥의 클램프를 제거하면, 혈액이 심장으로 빠르게 채워지며 재관류가 촉진됩니다. 이식편 위로 가온 생리식염수를 떨어뜨려 줍니다.정상적으로 심장은 1분 이내에 동리듬(sinus rhythm)을 시작합니다. 이제 정맥 부위의 커프 연장선을 제거하고 이식편을 확인하십시오. 문합 부위는 장력이 없어야 하며 혈관에 꼬임이 없어야 합니다.피부 혈관을 소작하지 마십시오. 이는 상처 치유를 저해할 수 있으므로, 출혈이 자연적으로 멈추도록 한 뒤 단일 연속 봉합법으로 피부를 폐쇄하십시오. 수술 후, 동물에게 0.25 mL의 따뜻한 식염수를 피하 주사하십시오.다음으로, 마약성 약물을 길항시키기 위해 약물 칵테일을 피하 주사합니다. 동물이 흉복와위(stern recumbent) 자세를 유지할 수 있을 때까지 가온 패드 위에서 회복시키십시오. 완전히 회복되었다고 판단하기 전까지 최소 한 시간 동안 동물을 관찰하십시오.회복 후, 마우스는 최소 3일 동안 단독 사육해야 합니다. 최소 72시간 동안 진통제를 투여하십시오. 또한, 심각한 체중 감소 여부를 확인하기 위해 매일 동물의 체중을 측정하고 전반적인 건강 상태를 모니터링하십시오.설명된 프로토콜을 사용하여, 조직병리학적 검사를 위해 동계 Black six 마우스에 이식을 수행하였습니다. 이식편은 hematoxylin and eosin 및 Sirius red로 염색하였습니다. 이식하지 않은 동물의 절편을 대조군으로 사용하여 비교하였습니다.장기 허혈. 재관류는 조직 부종을 동반한 강한 염증 반응을 유발했다. 별표로 표시된 백혈구 침윤이 나타나는 충혈 및 미세혈관 폐쇄가 관찰되었다.화살표로 표시된 바와 같이 심한 적색 염색은 뚜렷한 간질성 콜라겐 침착을 나타냈습니다. 이러한 콜라겐 침착은 대조군에서는 관찰되지 않았습니다. 이 이식 모델은 심혈관 및 이식 연구에서 유용한 도구입니다.실험을 시작하기 전에 심근 허혈 재관류 손상을 조사하는 것이 특히 유용합니다. 이 기술을 통해 재현 가능한 수술 결과를 얻을 수 있는지 확인하십시오. 그렇지 않으면 문합술 단계에서 큰 편향이 발생할 수 있으므로, 온허혈 시간은 20분 미만으로 제한해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

여기에서, 우리는 새로운 심장 보호 전략을 조사하기 위하여 확고하게 확립되고 이용된 정형포피성 심혼 이식의 전임상 대형 동물 (돼지) 모형을 기술합니다.

정형외 심장 이식의 전 임상 돼지 모델

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 프로토콜은 마우스에서 커프가 없고 봉합 기반인 경추 이종성 심장 이식 기법을 제시하여, 이물질 간섭이 최소화된 생리학적 조건에서 기증자 특이적 면역 관용을 평가하기 위해 두 번째 이종성 심장 이식편을 신뢰성 있게 배치할 수 있도록 설계되었습니다.

마우스의 기증자 특이적 면역 내성을 평가하기 위한 2차 이종성 심장 이식을 위한 커프스 없는 봉합선 기반 자궁경부 모델

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

배우세요 마우스 경부 심장 이식술을 통해 허혈-재관류 손상 및 이식편 거부 반응을 연구하는 방법을. 커프 기법을 활용하면 복잡한 봉합 없이 신속하고 일관된 실험 결과를 얻을 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

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