Name: 활동 기반 식욕 부진 설치류 모델을 사용하면 거식증의 신경 생물학적 기초 연구에 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: 학습하세요 활동 기반 식욕 부진 모델을 사용하여 청소년 암컷 마우스에서 거식증의 신경생물학적 기전을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 식이 제한과 운동 활동 모니터링을 통해 행동 변화를 관찰합니다.

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이 작품은 CA에 장애 연구를 먹는 Klarman 재단 교부금 프로그램에 의해 지원되었다; 의 발전을위한 국립 센터에서 건강 보조금 CA에 R21MH091445-01, R21MH105846 CA에, R01NS066019-01A1 CA에, R01NS047557-07A1 CA에, 캘리포니아에 NEI 코어 부여 EY13079, R25GM097634-01 CA에, UL1 TR000038에 대한 국립 연구소 TGC, 캘리포니아에 뉴욕의 연구 과제 기금에 번역 상 과학; 및 풀 브라이트 보조금은 C를 YW하기

이 프로토콜에 설명 된 모든 절차는 뉴욕 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (동물 복지 보증 # 1 A3317-01)에 따라 있습니다. 참고 :이 프로토콜은 사춘기 여성 C57BL / 6 마​​우스에 최적화되어 있습니다. 동물은 50 % ± 10 %에서 72 ° ± 2 °, 실내 습도에서 RT를 유지하는 시설에 수용되었다. 실내 조명은 매일 오전 7시에서 오후 7시까지 켜져. 바퀴를 실행하는 케이지 1. 준비 <ol><li> 멀리 송신기의 무선 범위 내에서 물과 발 트래픽,하지만 케이지 랙에 충분히 가까이를 실행, 동물 들고 객실에 안전 영역에서 컴퓨터와 USB 인터페이스 허브를 설정합니다. 컴퓨터와 USB 인터페이스 허브 모두 벽 콘센트에서 전원을 공급받을 수 있는지 확인하고 USB 인터페이스 허브는 USB 케이블을 통해 컴퓨터에 연결합니다. 컴퓨터와 USB 허브 모두에​​ 전원을 전원 백업 장치를 사용한다. </li><li> 컴퓨터 (T)를 연결합니다O USB 케이블을 이용한 USB 인터페이스 허브 주행 륜 장비를 포함. </li><li> 컴퓨터를 부팅하고 아이콘을 더블 클릭하여 실행 휠 소프트웨어를 시작합니다. </li><li> 실행중인 각 차륜의 기지로 세 AAA 배터리를 설치하고 휠 관리자 소프트웨어가 송신기를 인식하고 있는지 확인합니다. 제목 아래 프로그램 창에서 각 바퀴 목록 &quot;휠 센서를.&quot; </li><li> 실험의 특정 사양에 따라 데이터 수집 구성을 설정. </li><li> 침구, nestlets, 물을 무료로 이용할 수, 그리고 실행중인 휠 마우스를 사용할 때마다 주제에 대해 케이지를 준비합니다. 일반적으로, 8 마우스는 신경 해부학 연구를위한 실험마다 사용된다. 더 마우스 적절한 파워 통계적 행동을 보장하기 위해 시험이 필요할 수있다. </li><li> 실행중인 휠 케이지 벽, 음식 바구니, 또는 케이지 상단의를 건드리지 않고 자유롭게 움직일 수 있는지 확인하십시오. 몇 번 각각의 휠 스핀과 그 T 확인그 소프트웨어는 각각의 휠에 대한 휠 카운트를 업데이트한다. </li></ol> 2. 적응도 상 <ol><li> 개별적으로 실행중인 휠 케이지 각 마우스 대상 (연령 P36 여성 C57BL / 6 마​​우스)를 놓습니다. </li><li> 식품 호퍼에 건조 식품 (약 100g)의 미리 무게 양을 추가하고 미리 무게 전체 컨테이너 케이지에 젖은 음식 (약 50 g)을 배치합니다. </li><li> 프로그램 창에서 파일 메뉴에서 &quot;시작 취득&quot;옵션을 선택하여 휠 활동 데이터 수집 및 데이터 저장을 시작합니다. 데이터가 저장 될 디렉토리를 선택합니다. 실험을 수동으로 중지 될 때까지 계속해서 소프트웨어는 휠의 회전 수를 기록한다. </li><li> 조명이 방에서 해제 된 시간에 매일 동물, 젖은 식품, 건조 식품의 무게를 측정. 무게가 50g 이하로 떨어지면 건조 식품 리필, 그리고 음식이 밖으로 건조 또는 침구 더러워진 경우 젖은 음식 용기를 교체. 수동으로 야호를 기록L은 디지털 데이터의 손실의 경우도이 시간에 매일 카운트. </li></ol> 3.부터 식품 제한 <ol><li> 음식 제한의 첫 날 정오 (또는 실내 조명을 끌 예정이다 7 시간 전)에 케이지에서 모든 습식 및 건식 음식을 제거합니다. </li><li> 같은 날에, 암주기의 시작에서, 동물 및 바퀴 개수의 중량을 기록한다. 식품 호퍼에 건조 식품 (약 50g)의 미리 무게 양과 무게 보트 케이지에 젖은 음식 (약 5g)의 사전 무게 양을 놓습니다. </li><li> 각 동물에 대한 침구 및 nestlets와 신선한 케이지를 준비합니다. </li><li> 2 시간 후, 제조 된 신선한 케이지 주행 륜을 전송. 이 케이지 변화는 동물이 어떤 음식 부스러기가 떨어 또는 침구에 저장했다 한 경우, 다음 수유 시간까지 제한 음식을 유지 보장합니다. 더러워진 두 한줌 (약 500 ml)에, 케이지의 변화 응력을 감소시키기 위해 추가이전 케이지에서 침구, 새 케이지에 동물을 이동합니다. </li><li> 먹게 된 음식의 양을 결정하기 위해 남아있는 습윤 및 건조 식품의 중량을 기록한다. 식품 접속 구간의 끝에서 휠 수를 기록한다. </li></ol> 식품 제한 동안 동물 건강 모니터링 (4) <ol><li> 매일 암주기의 시작에서, 동물 및 바퀴 개수의 중량을 기록한다. 케이지에 건식 및 습식 음식을 미리 무게 양을 놓습니다. </li><li> 동물의 체중은 음식 제한 전에 초기 체중의 75 % 아래로 떨어지면, 실험에서 제거. 참고 : 과도한 기아의 다른 징후는 케이지 주위에 이동 구부리고 자세와 무능력을 포함한다. 동물은 터치에 추위와 음식 액세스의 2 시간 동안 식사를하지 못할 수 있습니다. </li><li> 각 동물에 대한 침구 및 nestlets와 신선한 케이지를 준비합니다. </li><li> 2 시간 후, 제조 된 신선한 케이지 주행 륜을 전송. TW 추가오 한줌 이전 케이지에서 오염 된 침구의 (약 500 ㎖), 새 케이지에 동물을 이동합니다. </li><li> 먹게 된 음식의 양을 결정하기 위해 남아있는 습윤 및 건조 식품의 중량을 기록한다. 식품 접속 구간의 끝에서 휠 수를 기록한다. </li></ol> 5. 실험 종료 <ol><li> 음식 제한 사흘 후 ABA 실험을 종료. 뇌 조직의 수집을 위해 동물을 안락사, 또는 동물이 추가 행동 테스트를 진행하기 전에 복구 할 수 있습니다. </li><li> 프로그램 창에서 파일 메뉴에서 &quot;최종 인수&quot;옵션을 클릭합니다. </li><li> 케이지에서 실행 바퀴를 제거하고 휠베이스에서 배터리를 제거합니다. </li><li> 동물을 복구 할 수있는 경우, 식품에 건조 호퍼 미리 칭량 된 양의 음식을 반환하고 복구 동안 음식 동물 광고 무제한 액세스를 허용한다. </li></ol> 6. 데이터 분석 <ol><li> 저장실험의 시작시에 선택 디렉토리 .wls 파일 실험 LL 휠 데이터. </li><li> 파일 메뉴에서 &quot;내보내기&quot;옵션을 선택하여 스프레드 시트로 데이터 내보내기. &quot;소스 데이터 파일&quot;옵션에 .wls 원하는 파일을 선택합니다. 시작 및 종료 날짜와 시간을 선택하고 휠 센서 목록에서 수출을 위해 각 휠 센서를 선택합니다. </li></ol>

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</ol>

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ABA 모델의 중요한 측면은 시간의 제한된 기간에 제한 음식 액세스를 실행중인 휠과 (2) 음식 제한에 자발적 운동 (1) 무료로 이용할 수 있습니다. 주행 륜에 대한 액세스는 동물이 휠을 사용하도록 선택할 수있게하는 운동 동물의 동기 음식 제한의 효과의 표시를 제공한다. 반대로, (오히려 칼로리 제한보다) 시간 제한 음식 접속이 실험은 어떤 동물이 음식 액세스의 제한 시간 동안 실행하도록 선택하는 정도를 모니터링하여 자발적인 음식 제한을 측정 할 수 있습니다. 이러한 방식으로, ABA가 발생 자체 기아의 우수한 모델이다. 마우스 동작 데이터에서 잡음을 최소화하기 위해, 예측 스트레스 동물 경험의 양을 최소화하는 것이 중요하다. 예를 들어, 동물의 처리는 일단에만 계량 중에 방해되는 동물, 최소로 유지되어야일. 동물을 처리 실험 훈련과 동물을 취급 편안해야합니다. 가능하면 한 사람이 추가 스트레스를 피하기 위해 실험을하는 동안 동물을 처리해야합니다. 향수 및 향수는 피해야한다. 계량 및 식품 배달 시간은 임의의 불확실성을 최소화하기 위해, 가능한 한 정기적으로 이루어져야한다. 데이터 손실을 막기 위해, 그것은 정전시 백업 전원 공급 장치를 통해 컴퓨터에 전원을 공급하는 것이 가장 좋습니다; 전력도 잠시 중단 컴퓨터를 다시 시작하고, 데이터 수집이 중단됩니다 원인이됩니다. 또한, 매일 휠 송신기들의 배터리 수명을 감시하는 것이 중요하다. 배터리 레벨이 약 해지면, 상기 송신기는 간헐적 따라서 동물의 활성을 과소, 허브에 데이터를 전송하지 못할 수있다. 여기에 설명 된 마우스 프로토콜은 래트 4에 사용 된 표준 프로토콜을 변형시켰다. 청소년 여성 마우스때문에 기아에 많은 과도한 체중 감량과 죽음에 더 취약하다. 따라서, 다음과 같이 변경 ABA의 적어도 3 일의 생존을 향상시키기 위해 이루어졌다. 첫째, 음식 제한의 첫 날 정오에보다는 전날의 오후 8시 음식을 제거하여 단축되었다. 또한, 식품의 액세스 시간은 2 시간으로 1 시간 증가시키고 습식 식품의 유용성은 또한 탈수의 영향을 최소화하기 위해 첨가 하였다. 우리는 마우스에 젖은 음식을 관리하는 것은 매우 식품 제한 삼일을 통해 자신의 상태를 개선 것을 발견했다. 젖은 음식없이 체중 훨씬 빠르게 하강시키고 동물 식품 제한된 환경에서 제거했다. 이러한 변경 사항은 쥐가 음식 제한의 세 전체 일을 통해 생존하고 쉽게 ABA에서 복구 할 수 있도록하기에 충분했다. ABA에 대한이 프로토콜은 고려해야 할 몇 가지 중요한 제한이 있습니다. 첫째, 각각의 마우스를 수용 할 필요가있다순서대로 실행중인 휠 케이지는 각각 독립적으로 마우스의 휠 활동을 모니터링 할 수 있습니다. 이 동물의 사회적 고립, ABA뿐만 26 공부되는 신경 회로의 일부로서 중에 동물의 행동에 영향을 미칠 수있는 공지의 스트레스 초래한다. 지금까지이 그 공동 수용 생쥐의 개별 활동을 모니터링 할 수있다 가능한 장비 없지만 이것은 각 동물에 닿는 태그 RFID 기술을 이용하여 추적 풀수 문제가 될 것 같다. 음식 제한시 공동 주택 동물의 또 다른 잠재적으로 피할 수없는 결과는 동물들이 케이지 동료를 향해 공격적이 될 수 위험입니다. 각 공급 세션 후 동물의 케이지를 변경하면 우리가 침대에서 하나로 인해 동물 쌓아 두는 음식을 소개했다 또 다른 스트레스 요인이다. 우리는 신선한 케이지에 이전 케이지에서 오염 된 침구의 상당한 양을 도입하여 새로운 케이지의 스트레스를 최소화하는 것을 목표로하고 있습니다. <p class="jove_content"&gt; ABA 모델을 사용하여 다른 그룹은 반송 스케줄을 위해 다른 파라미터를 선택했다. 명암 사이클의 어두운 단계에서 시간을 먹이의 선택은 표준이 아닙니다. 우리는 빛이 밤의 마우스가 습관적으로 더 경고 및 활성이 기간 동안이기 때문에, 동물이 먹을 수있는 자연적인 시간을 허용하도록 해제 시간에 동물에게 먹이를하기로 결정했습니다. 일부 그룹은 하루에 13,27의 불빛 온 기간 동안 동물을 먹이. 이 실험의 편의상 일 수 있고, 그것은 광 단계 동안 음식 수당 시간 기간 생존을 개선하기 위해 증가되어야한다는 것을 주목하는 것이 중요하다. 또한 수유하는 동안 실행중인 휠에 대한 액세스를 차단하는 것은 생존을 향상시킬 수 있음을 제안 할 수있다, 그러나 우리는이 더 자기 기아를 악화, 실행보다는 먹는 몇몇 동물에 의해 결정이다 행동의 매우 흥미로운 점을 제거 느낌 ABA 모델의 형태지만의 특징을 포착과 관련된 인간의 행동. 그것은이 프로토콜은 청소년 여성 C57BL / 6 마​​우스를 위해 특별히 최적화 된 것이 중요합니다. 상이한 마우스 균주, 성별이나 연령대가 사용되는 경우, 프로토콜의 일부 매개 변수 변경을 요구할 수있다. 또한 RT 설치류 28 ABA의 정도에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 우리는 증가하고, 우리의 연구에 RT를 변경하지 않았지만 RT는 ABA 동물들 사이에서 생존율을 향상시킬 가능성이있다. 이러한 같은 인간 질환의 동물 모델을 사용하는 장점은, 그 제어 설정에서 자발적인 운동과 음식에 대한 액세스 제한에 의해 유도되는 뇌의 해부학 적 및 생리 학적 변화를 연구하는 것이 가능하다. ABA 모델에서 마우스의 사용은 형질 전환 동물과 유전자 조작을 이용하여 바이러스 감염 강력한 유전 적 접근법의 사용을 허용한다. 앞으로의 연구는 특히 탄성 유전자의 효과를 연구 겨냥또는 음식 제한에 의한 과잉 행동과 자기 기아에 취약점을 해결합니다.

신경성 식욕 부진 (가) 음식 섭취, 과도한 운동, 체중을 얻는 불합리한 두려움의 과도한 제한을 특징으로하는 정신 질환이다. 가장 치명적인 정신 질환 (1)의 하나는, 현재까지 어떠한 약물 치료를 받아이 없으며, 신경 생물학적 메카니즘 및 질환의 효과를 제대로 이해된다. 우리는 질병의 특징 증상과 관련된 신경 생물학 및 신경 화학적 변화를 탐구하는 동물 모델을 연구하고있다. 활동 기반 거식증 (ABA)는 설치류에서 설명한 바이오 행동 현상을 모델링 2,3의 일부 특성. 그들은 음식 제한 3,4의 발병 이전에 실행 이상을 실행 - 실행중인 휠 체험 음식 제한에 자발적 운동에 무료로 액세스 할 수있는 설치류, 많은, 전부는 아니지만, 과잉 행동하게합니다. 에 의해 전시 된 오버 운동을위한 많은 제안 설명이 있었다ABA 동물 및 환자 : 그것은 구하고 행위 (5)의 형태인지,기구는 식품 제한 (6)의 응력에 대처하기 위해, 대사 7 기아 유도 드롭 동안 체온을 높이는 시도하거나 hypoleptinemia 8의 결과 . 이 설치류 모델은 제한된 음식 접속시 실행하는 데 사용 중단에 의해 체중 감소, 과잉 행동, 자발적 음식 제한의 증상을 재현, 불안과의 상관 관계는 9,10 형질 및 취약점은 인생의 초기 경험 (11)에 의해 영향을 미쳤다. 설치류 모델 ABA가 스트레스 모델을 고려하는 동안,이 정확하게 면역 기능 (12)을 증가 보여 인간 환자에 반영되지 않을 수 있습니다. 모두 설치류와 인간의 환자 중, 어떤 사람들은 다른 사람보다 더 많은 취약점을 보여줍니다. 역학 연구에 대한 위험 요인을 규명하기 위해 노력하고 있지만, 상대적으로 적은 연구는 vulnerab 개인차에 대한 신경 생물학적 기초를 이해하려고했습니다설치류에 ABA 유도에 ility. 그것은 ABA 패러다임이 널리 사용되며, 동물 모델로서의 사용이 광범위 6,13-15를 평가되었음을 주목하는 것이 중요하다. 이 현재 작업의 기여는 사춘기 암컷 마우스에서 유도 ABA 청소년 쥐 생존을 향상시키기 위해 기존의 설치류 모델을 만들 필요가 있었다 변형을 대략적으로 사용되는 특정 방법을 간략하게 설명한다. 또한, 우리는 동물 모델의 다른 양상을 연구하기 위해 ABA 동작 패러다임과 결합 될 수있는 다양한 방법을 논의한다. 마우스 ABA 모델은 엄격 질환의 신경 생물학의 탐사를 할 수 있습니다. 이것은 의심 할 여지없이, 한 사람의 취약점으로 기여하는 사회 문화적 영향에서 분리입니다. ABA 모델은 않도록 재발 음식 제한 액세스 또는 휠과 조합 응력 다른 형태의 효과를 조사하기 위하여 사용될 수있다재발 (16)의 일부 측면을 촬영합니다. 뇌 불안 센터의 억제 성 신경 전달 물질 시스템의 기능은, 전자 현미경 기법 4,16,17를 이용하여 연구되었다. 수지상 arborization은 Neurolucida 이용한 추적 및 해마 CA1 18,19의 필드 (17)와 편도체 피라미드 세포의 분석을 이용하여 연구되었다. &#160; 불안에 따라 음식의 제한 및 휠 접근의 효과는 상승으로 행동 검사를 이용하여 연구 플러스 10 미로되었다. 취약점의 유전 적 기초는 마우스 (9)의 다른 근친 균주를 사용하여 연구되어왔다. 약리 조작 전에 인간 실험 20-24에 동물 모델에서 시험 될 수있다. 유전자 변형 동물과 유전자의 과도 최저은 특정 분자 경로의 조작 ABA 패러다임의 동작에 영향을 미칠 수있는 방법을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. ABA에 차동 취약점시 초기 생활 동안 스트레스의 영향 승이 방법을 통해 해결 될 수있는 또 다른 화제 울드.

<table><tbody><tr>마우스 <td>Med Associates</td><td>ENV-044</td><td></td>USB 인터페이스 허브<td>용 무선 러닝 휠</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Med Associates</td><td>DIG-804</td><td></td></tr><tr><td>휠 매니저 소프트웨어</td><td>Med Associates</td><td>SOF-860</td><td></td></tr><tr><td>휠 매니저 데이터 분석</td><td>Med Associates</td><td>SOF-861</td><td></td></tr><tr><td>다이어트 젤 76A</td><td>클리어 H2O</td><td>72-07-5022</td><td></td></tr><tr><td>마우스 다이어트 5001</td><td>PMI</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

활동 기반 식욕 부진 설치류 모델을 사용하면 거식증의 신경 생물학적 기초 연구에

Using the Activity-based Anorexia Rodent Model to Study the Neurobiological Basis of Anorexia Nervosa

신경성 식욕 부진 (가) 과도하게 제한 칼로리 섭취와 신체 활동의 비정상적으로 높은 수준을 특징으로하는 정신 질환이다. 도전 질병 인한 신경 생물학의 기본 이해의 부족으로, 치료, 정신과 질환 중 가장 높은 사망률을 갖는다. 신경 과학자 취약성쪽으로 기여할 수 있고,에 의해 영향을받을 수있는 방법을 연구하는 신경 회로 동물 모델을 이용하고,이 요구를 해결한다. 활동 기반 거식증 (ABA)는 그 모델 거식증의 주요 증상을 설치류에서 설명한 바이오 행동 현상이다. 실행중인 휠 경험 음식 제한에 자발적 운동에 무료로 액세스 할 수있는 설치류, 그들은 과민이 될 때 - 음식에 무료로 액세스 할 수있는 동물보다 더 많은 실행. 여기, 우리는 ABA가 사춘기 여성 C57BL / 6 마​​우스에 유도하는 절차를 설명합니다. 출생 후 하루 36 (P36)에서, 동물은 실행에 자발적 운동에 액세스 보관되어 있습니다휠. 주행 륜에 순응 4 일 후, P40에서, 모든 음식 케이지로부터 제거된다. 다음 3 일 동안, 음식은 매일 2 시간 동안 (동물에게 무료 음식 액세스를 허용) 케이지에 반환됩니다. 음식 제한의 네 번째 하루를 보낸 후, 음식을 무료로 이용할 반환하고, 실행중인 휠은 동물이 복구 할 수 있도록 케이지에서 제거됩니다. 휠 활동을 실행 연속 멀티 일간의 분석은 쥐가 음식 제한의 발병 다음 24 시간 내에 과민하게 보여줍니다. 쥐들은 음식에 접근 할 수있는 동안 제한된 시간 중에도 실행. 또한, 휠 실행의 일중 패턴은 음식 제한의 경험에 의해 파괴된다. 우리는 특정 뇌 영역과 음식 제한에 의한 과잉 행동에 탄력 및 취약성과 신경 화학적 변화를 연루하는 동물의 휠 실행 행동의 다양한 측면에 신경 생물학적 변화의 상관 관계를 할 수 있었다.

인간 거식증 유사한 인구 ABA의 효과를 연구하기 위해, 이러한 실험은 여성 사춘기 마우스에서 수행되었다. 따라서, 휠 적응은 하루 P36에 곧 쥐에서 사춘기 이후에 시작됩니다. 순응 단계 P36-P40에서 수행되고, 음식 제한 P40-P43에서 발생한다. 사춘기 마우스는 성장을 계속하고 있으며, 이들의 체중은 전체 성인기에 접근함에 따라 증가하는 것을 계속. 휠 순응 동안, 쥐는 일반적으로 중량에 중량 고원 소량을 잃는다. 음식 제한의 시작 후, ABA 동물의 체중은 크게 (도 1)를 감소시킨다. ABA 그룹에서 동물의 체중은 주행 륜에 액세스하지 않은 음식 제한이 발생하지 않았다 (CON) 동물을 제어하기 위해 비교 될 수있다. 각 동물의 휠 활성 다양한 방식으로 분석 될 수있다 : (1) 일 (24 시간) 휠ABA 동물의 활동은 동물이 음식 제한의 시작 (그림 2) 후 과도하게 실행하기 시작 것을 보여주는, 플롯 할 수 있습니다. (2) 각 동물의 휠은 휠 활성 활성의 주기성 패턴을 보여준다 (도 3)를 분석 소프트웨어를 사용하여 미세한 규모로 검사 할 수있다. 동물을 실행하는 대신 먹을 것을 선택하기 때문에 (3) 식품 액세스의 2 시간 동안 휠 활동은 자발적인 음식 제한을 나타냅니다. 음식 제한이 시작되면 (4), 일부 동물의 섭식 시간 직전 기간 활동의 증가를 보여준다. 음식의 발표 이전에 운동 활성에이 매일 증가는 (그림 4) &quot;식품 선행 활동&quot;이라고합니다. 거리 및 휠 드웰 타임 모두를 연속적으로 모니터링된다 (5) 동물 실행하는 속도는, 비교 될 수있다. 이러한 매개 변수의 변화는 휠에서 실행의 학습 단계를 반영 할 수있다. 16보다 중량 손실을 더 휠 활성을 나타내 동물 - 예를 들어, ABA 마우스 체중의 변화는 차륜 주행에서 일상의 변화와 상관 관계. 같은 연구에서, 또한 해마 CA1 피라미드 세포의 GABA 성 신경 지배의는 ABA의 제 경험 과다 감소 하였다 동물에서 증가 된 것으로 나타났다. ABA 래트를 이용한 연구에서, α4 소단위를 함유하는 GABA 수용체의 발현이 항진 ABA (25)에, 또는 탄력성 감소와 상관 관계가 있음을 발견 하였다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52927/52927fig1.jpg" /> ABA. 체중 데이터 중 그림 1. 체중 변화는 다섯 사춘기 암컷 마우스의 한 코호트에서 표시됩니다. 마우스는 실험 전체 7 일간 실행 휠 접속했다. 처음 네 일 추가로 3 일 동안 부과 된 음식을 제한 후 적응 단계였다. 일 0 음식 제한의 시작을 나타냅니다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 표시합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52927/52927fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52927/52927fig2.jpg" /> 그림 2. 매일 휠 활동 전에 음식 제한의 발병 후. 일간 (24 시간) 휠 활동 한 마우스에 대해 표시됩니다. 일 0 음식 제한의 시작을 나타냅니다. 후 거의 2 배에 의해 총 일상 휠 활동 증가음식 제한의 시작. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52927/52927fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52927/52927fig3.jpg" /> 그림 3. 지속적으로 팔일 실험을 통해 실행 휠 활동을 감시. 스크린 샷은 휠 분석 소프트웨어에서 표시됩니다. 이것은 주행 륜 액세스 여덟 일 간의 단일 마우스 (횡축에 시간)의 휠 활동 (세로축 바퀴 개수)을 나타낸다. 활동 플롯 아래 빛이 방에에 끌 때 시간을 나타내는 오버레이이다. 음식 제한이 시작하기 전에, 동물은 빛을주기 동안 최소한의 활동을 보여줍니다. 제 1 수직 점선은 음식 제한의 시작을 나타냅니다, 세 이후의 라인은 2 시간 공급이 하루를 시작 나타내고, 빨간색 화살표는 일 표시빛 단계에서 식품 선행 활동의 전자 출현. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52927/52927fig3highres.jpg" style="font-size: 14px; line-height: 28px;" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52927/52927fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/52927/52927fig4.jpg" /> 그림 4. 휠 활동은 하루의 모든 시간에 걸쳐 증가하지만, 가장 극적으로 이전에 음식 액세스 할 수 있습니다. 휠 실행하는 기간에 하루의 네 6 시간 부문에 대해 표시됩니다. &quot;FR 전에&quot;표시된 바 적응 단계의 마지막 두 일 동안 바퀴 카운트의 평균 수를 나타냅니다. &quot;FR 중&quot;으로 표시된 바 음식 제한 pH를 제 이틀 나타낸다ASE. 동물 최소한 6 일 동안 실행중인 휠없이 회복하는 것이 허용되었다 후 &quot;복구&quot;활동의 수준을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52927/52927fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

여기에서는 암컷 청소년기 마우스에서 활동 기반 거식증(ABA)을 유도하는 프로토콜을 제시합니다. ABA는 달리는 바퀴에 접근할 수 있는 설치류에게 음식 제한을 가함으로써 유발되는 과잉 행동 상태입니다. 이 현상은 신경성 식욕 부진증의 근본적인 신경생물학을 연구하기 위한 모델로 사용되고 있습니다.

Anorexia nervosa (AN) is a psychiatric illness characterized by excessively restricted caloric intake and abnormally high levels of physical activity. A ...

이 절차의 전반적인 목표는 청소년기 암컷 생쥐에게 활동 기반 거식증을 유도하는 것입니다. 이는 먼저 생쥐를 러닝휠에 적응시킨 후, 최소 3일 동안 러닝휠 활동을 지속적으로 모니터링함으로써 수행됩니다. 그 다음, 생쥐에게 제한적인 먹이 섭취 일정을 적용하고 자발적인 휠 러닝의 변화를 기록합니다.궁극적으로, 이 활동 기반 거식증 모델은 음식 섭취가 제한되었을 때 신경생물학적 변화가 동물의 행동 변화와 연관되어 있음을 보여줄 수 있습니다. 이 활동 기반 거식증 모델이 거식증에 대한 회복력과 취약성의 기초가 되는 신경화학 및 신경해부학적 측면에서 개별적인 차이를 규명함으로써, 신경성 식욕부진증의 치료법을 개선하는 데 도움이 되기를 바랍니다. 이 방법은 신경성 식욕부진증에 대한 통찰을 제공할 뿐만 아니라, 불안 장애를 동반하는 다른 질환에도 적용될 수 있습니다.일반적으로 개체 간의 차이로 인해, AIA 기반의 활동에 대한 각 동물의 취약성이 매우 다양하므로 이 방법은 어려움이 있을 수 있습니다. 따라서 동물의 체중 감소, 섭식 및 활동을 면밀히 모니터링해야 하거나, 동물들이 적응할 수 있도록 해야 합니다. 설정을 시작하려면, 컴퓨터와 USB 허브를 흐르는 물이나 사람의 통행이 없는 동물실 내에 설치하되, 런닝 휠의 송신기 범위 내에 배치하십시오.또한 허브의 스위치를 사용하여 컴퓨터와 USB 허브에 백업 전원 공급 장치를 사용하십시오. 모니터링할 모든 러닝 휠의 채널 번호와 일치하도록 채널 번호를 설정하십시오. 이제 러닝 휠 관리 소프트웨어를 시작하고 소프트웨어가 각 송신기를 인식하는지 확인하십시오.각 바퀴는 프로그램 창의 휠 센서(wheel sensors) 항목 아래에 표시됩니다. 소프트웨어가 각 바퀴에 ID 번호를 자동으로 부여합니다.이 번호를 휠에 기록해 두는 것이 도움이 될 수 있습니다. 휠이 인식되지 않는 경우, 휠의 배터리를 교체하십시오. 다음으로, 베딩 네슬렛(nestlets), 자유로운 음수 가능 환경 및 러닝 휠이 갖춰진 케이지를 각 마우스 실험군을 위해 준비하십시오.러닝 휠은 케이지 벽면, 먹이 바구니 또는 케이지 상단에 닿지 않고 자유롭게 움직여야 합니다. 또한, 소프트웨어에서 휠 회전 수가 업데이트되고 있는지 확인하십시오. 동물을 적응시키기 위해 각 마우스를 러닝 휠이 설치된 케이지에 개별적으로 수용하고, 케이지 내에 약 100 g의 건식 사료와 50 g의 습식 사료를 제공하십시오.소프트웨어에서 'start acquisition'을 선택하여 데이터 획득 및 저장을 시작하십시오. 파일 메뉴에서 중지될 때까지 데이터가 저장될 디렉토리를 선택하십시오.소프트웨어는 매일 명암 주기 중 암기가 시작되기 직전에 연속적으로 기록합니다. 동물의 체중을 측정하고, 습식 사료와 건식 사료의 무게를 측정합니다. 건식 사료 용량의 내용물이 50 grams 미만인 경우 건식 사료를 보충하고, 습식 사료 용기를 교체합니다.먹이가 마르거나 베딩으로 인해 오염된 경우, 같은 시간에 휠 횟수를 수동으로 기록하십시오. 식이 제한 첫날의 디지털 데이터를 백업하려면, 명기(light cycle)의 중간 지점에 케이지 내의 모든 습식 및 건식 먹이를 제거하십시오. 이후 암기(dark time)가 시작될 때 동물의 체중과 휠 횟수를 기록하십시오.그다음 호퍼에 건식 사료 약 50 g을 넣고, 휠 보트에 습식 사료 5 g을 제공합니다. 이어서 각 동물에 맞게 베딩과 네슬렛이 준비된 새 케이지를 준비합니다. 사료 이동 후 2시간이 지나면, 러닝 휠과 오염된 베딩 한 줌 정도를 준비된 케이지로 옮깁니다.생쥐들을 먹이가 없는 새 케이지로 옮깁니다. 먹이 섭취 기간이 끝나면, UNE 먹이의 무게와 휠 회전 수를 기록합니다. 실험 기간 동안 이 과정을 매일 반복합니다.동물의 체중이 초기 체중의 75% 미만으로 떨어지는 시점이 발생하면, 해당 동물을 실험에서 제외하십시오. 동물을 실험에서 제외해야 함을 나타내는 과도한 기아의 다른 징후로는 구부정한 자세와 케이지 내 이동 불가 능력이 있습니다. 또한, 동물의 몸이 만졌을 때 차갑게 느껴지거나 2시간의 식이 제공 시간 동안 먹이를 섭취하지 않을 수 있습니다.3일간의 식이 제한 후 실험을 종료합니다. 조직을 채취하기 위해 동물을 안락사시키거나 동물이 회복되도록 합니다. 소프트웨어에서 추가 행동 테스트를 수행하려면 파일 메뉴의 획득 종료(end acquisition) 옵션을 클릭하십시오.데이터는 이제 실험 시작 시 선택한 디렉터리의 WLS 파일에 저장됩니다. 케이지에서 러닝 휠을 제거한 다음 배터리를 분리하십시오. 회복 중인 동물에게는 먹이를 자유롭게 섭취할 수 있도록 허용해야 합니다. 이제 데이터를 스프레드시트로 내보내십시오.파일 메뉴에서 내보내기 옵션을 선택하고 소스 데이터 파일 옵션에서 원하는 WLS 파일을 선택하십시오. 다음으로 시작 및 종료 날짜와 시간을 선택하고, 마지막으로 내보낼 각 휠 센서를 선택하십시오. 휠 센서 목록에서 b의 영향을 연구하기 위해 필요에 따라 데이터를 분석할 수 있습니다.인간의 신경성 식욕부진증과 유사한 개체군을 모델링하기 위해, 암컷 청소년 마우스를 P 36에 휠에 적응시켰습니다. 사춘기가 시작된 직후인 P 40부터 식이 제한을 시작하자 체중이 급격히 감소하였으며, 대조군 동물에게는 러닝 휠을 제공하지 않고 식이 제한도 실시하지 않았습니다. 기아 상태의 동물들은 식이 제한이 시작된 후 과도하게 달리는 행동을 보였습니다.휠 활동에 대한 세부 분석 결과, 일주기 패턴이 나타났습니다. 흥미롭게도, 먹이 섭취가 가능한 기간 중에도 굶주린 동물들은 러닝 휠을 사용하는 것을 선택했습니다. 식이 제한이 시작된 후, 일부 동물들은 먹이 공급 직전에 활동량이 증가하는 모습을 보였으며, 이를 먹이 기대 활동(food Anticipatory activity)이라고 부를 수 있습니다. 활동 기반 시나리오를 수행할 코호트를 설정하는 작업은 적절하게 수행될 경우 몇 시간 내에 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행하는 동안, 최소 하루에 한 번은 휠 회전 수를 수동으로 기록하는 것이 중요합니다. 전원 공급선의 예기치 않은 중단이나 배터리 소진은 이 절차를 따르는 과정에서 컴퓨터로 생성되는 휠 카운팅을 방해할 수 있습니다. 활동 기반 식욕부진 유도가 뇌 해부 구조, 생물물리학적 특성 및 행동에 어떤 영향을 미치는지와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 면역 세포 화학, 전기 생리학 및 행동 테스트와 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

식이 지방 함량에 영향 에너지 섭취와 포유류의 신체 지방 성분 모두. 선택 일련의 실험에서 고지방 음식에 대한 쥐 '환경 설정을 검사하여, 높은 지방 음식에 대한 자신의 선호에 유전 적 차이와 약물 개입을 테스트 할 수 있습니다.

지방 성향 : 먹는 행동의 소설 모델 쥐에

렌티 바이러스는 cDNA를 표현 또는 shRNA를 생쥐의 특정 뇌 영역에서 유전자 발현을 조절할 수의 정위 주입. 여기, 우리는 오픈 필드 테스트 (OFT)과 강제 수영 시험 (FST)와 같은 행동 작업으로 정위 주사를 결합하는 프로토콜을 제시한다.

정위 사출 기술을 적용하는 것은 동물의 행동에 유전 적 영향을 연구하기

설치류는 행동과 복잡한 정신 장애의 분자 기질을 조사하기에 적합한 모델입니다. 깨어 있는 설치류의 뇌 미세주입은 질병 기질을 밝히는 데 사용할 수 있습니다. 효율적이고 사용자 정의 가능한 뇌 미세주입 방법과 동기 부여를 정량화하는 조작적 패러다임의 실행이 제시됩니다.

쥐 뇌 미세 주입은 분자 기판 동기를 행동을 연구하기 위해

개별적으로 음식에 제한 된 액세스 주어진 실행 바퀴와 함께 지 내게 쥐 음식 소비에 있는 감소를 개발 하 고 실행 바퀴에 활동. 이 실험적인 현상 활동 기반 거식 증을 이라고 합니다. 이 패러다임 신경 생물학 분야를 연구 하 고 거식 증 nervosa의 기본 동작에 대 한 실험 도구를 제공 합니다.

쥐의 활동 기반 거식 증을 평가

주제는 식사 중 접시의 체중 감소를 기록 하는 컴퓨터에 연결 된 규모에 접시에서 음식을 먹는다. 컴퓨터 화면에 대 한 의견 그녀 먹는 동작을 따라서 몸 무게를 정상화 하는 기준 곡선에 맞게 주제를 수 있습니다.

먹는 소설 피드백 시스템을 사용 하 여 동작의 제어

이 논문 조작 조화 자동 높은 처리량의 행동 모니터링 시스템 IntelliCage 시스템을 사용 하 여 Alzheimer의 질병의 유전자 모델 인지 평가 대 한 프로토콜을 설명 합니다.

자동화, Alzheimer의 질병, IntelliCage를 사용 하 여 여러 유전자 모델에서 인지 기능에 대 한 장기적인 행동 분석 결과

이 프로토콜은 설치류에서 과식과 비만을 모델링하기 위해 매우 맛있는 서양식 카페테리아 식단의 사용을 설명합니다. 여기에서는 식품 선택, 준비 및 측정에 대한 자세한 개요를 제공하고 견고하고 재현 가능한 표현형을 생성하는 데 도움이 되는 방법론 적 요인을 설명합니다.

설치류에서 다이어트 유발 비만 모델링을위한 신뢰할 수있는 방법으로 맛있는 서양식 카페테리아 다이어트

M&amp;M(지방과 설탕으로 만든 매우 맛있는 음식)에 간헐적으로 접근하는 것을 사용하여 쥐에서 폭식 모델이 확립되었습니다. 이 고지방, 고설탕 식품에 간헐적으로 접근하는 생쥐는 음식에 지속적으로 접근하거나 전혀 접근하지 않는 쥐에 비해 스트레스와 같은 행동, 칼로리 섭취 증가 및 표준 차우보다 해당 음식을 선호하는 것으로 나타났습니다.

생쥐의 간헐적 폭식 모델

이 기사는 조증과 같은 행동과 우울증과 같은 행동을 모두 포착하는 양극성 장애의 독특한 쥐 모델을 유도하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

양극성 장애에 대한 쥐 모델 개발

신생아 중환자 실 네트워크 신경 행동 학적 스케일 (NNNS)는 위험에 처한 유아에 대한 평가로 개발되었다. 이 문서의 목적은 NNNS을 설명 NNNS 절차의 비디오 예제를 제공하고 시험에 사용 된있는 방법을 논의하는 것입니다.

평가 및 고위험 신생아의 평가 : 신생아 중환자 실 네트워크 신경 행동 학적 규모

학습하세요 활동 기반 식욕 부진 모델을 사용하여 청소년 암컷 마우스에서 거식증의 신경생물학적 기전을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 식이 제한과 운동 활동 모니터링을 통해 행동 변화를 관찰합니다.

활동 기반 식욕 부진 설치류 모델을 사용하면 거식증의 신경 생물학적 기초 연구에

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