Name: 체외 HIV 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: 학습하세요 체외 HIV-말라리아 공동 감염 모델에서 선천성 면역 반응을 측정하는 방법을. Plasmodium falciparum과 말초혈액 단핵세포를 공동 배양하고 유세포 분석으로 사이토카인 활성을 평가합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

C.A.M.F.와 L.S.는 프로토콜 설계, 데이터 수집 및 분석, 논문 초안 작성에 참여했습니다. 
저자는 Kain 박사, Loutfy 박사, Wasmuth 박사, Ayi 박사의 기여에 감사드립니다.
C.F.는 CTN/Ontario HIV Treatment Network(OHTN) 박사후 연구원의 지원을 받았습니다.L.S.는 OHTN Junior Investigator Development Award의 지원을 받고 있습니다. 본 연구는 캐나다 보건 연구소(CIHR) 운영 보조금(MOP-13721 및 115160)과 CIHR New Investigator Catalyst 보조금의 지원을 받았습니다.

<ol><li>Graham, A. L., Cattadori, I. M., Lloyd-Smith, J. O., Ferrari, M. J., Bjørnstad, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+consequences+of+coinfection%3A+cytokines+writ+large%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+parasitology%22%5BJournal%5D)">Transmission consequences of coinfection: cytokines writ large.</a> Trends in parasitology. 23 (6), 284-291 (2007).</li>
<li>French, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+rates+of+malarial+fever+with+deteriorating+immune+status+in+HIV-1-infected+Ugandan+adults%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+%28London%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Increasing rates of malarial fever with deteriorating immune status in HIV-1-infected Ugandan adults.</a> AIDS (London, England). 15 (7), 899-906 (2001).</li>
<li>Hoffman, I. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+Plasmodium+falciparum+malaria+on+HIV-1+RNA+blood+plasma+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+%28London%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">The effect of Plasmodium falciparum malaria on HIV-1 RNA blood plasma concentration.</a> AIDS (London, England). 13 (4), 487-494 (1999).</li>
<li>Kamya, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+HIV-1+infection+on+antimalarial+treatment+outcomes+in+Uganda%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of HIV-1 infection on antimalarial treatment outcomes in Uganda: a population-based study.</a> The Journal of infectious diseases. 193 (1), 9-15 (2006).</li>
<li>Kublin, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Plasmodium+falciparum+malaria+on+concentration+of+HIV-1-RNA+in+the+blood+of+adults+in+rural+Malawi%3A+a+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of Plasmodium falciparum malaria on concentration of HIV-1-RNA in the blood of adults in rural Malawi: a prospective cohort study.</a> Lancet. 365 (9455), 233-240 (2005).</li>
<li>Mermin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+co-trimoxazole+prophylaxis%2C+antiretroviral+therapy%2C+and+insecticide-treated+bednets+on+the+frequency+of+malaria+in+HIV-1-infected+adults+in+Uganda%3A+a+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of co-trimoxazole prophylaxis, antiretroviral therapy, and insecticide-treated bednets on the frequency of malaria in HIV-1-infected adults in Uganda: a prospective cohort study.</a> Lancet. 367 (9518), 1256-1261 (2006).</li>
<li>Patnaik, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+HIV-1+serostatus%2C+HIV-1+RNA+concentration%2C+and+CD4+cell+count+on+the+incidence+of+malaria+infection+in+a+cohort+of+adults+in+rural+Malawi%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Effects of HIV-1 serostatus, HIV-1 RNA concentration, and CD4 cell count on the incidence of malaria infection in a cohort of adults in rural Malawi.</a> The Journal of infectious diseases. 192 (6), 984-991 (2005).</li>
<li>Whitworth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+HIV-1+and+increasing+immunosuppression+on+malaria+parasitaemia+and+clinical+episodes+in+adults+in+rural+Uganda%3A+a+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Effect of HIV-1 and increasing immunosuppression on malaria parasitaemia and clinical episodes in adults in rural Uganda: a cohort study.</a> Lancet. 356 (9235), 1051-1056 (2000).</li>
<li>Xiao, L., Owen, S. M., Rudolph, D. L., Lal, R. B., Lal, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmodium+falciparum+antigen-induced+human+immunodeficiency+virus+type+1+replication+is+mediated+through+induction+of+tumor+necrosis+factor-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Plasmodium falciparum antigen-induced human immunodeficiency virus type 1 replication is mediated through induction of tumor necrosis factor-alpha.</a> The Journal of infectious diseases. 177 (2), 437-445 (1998).</li>
<li>Francesconi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV%2C+malaria+parasites%2C+and+acute+febrile+episodes+in+Ugandan+adults%3A+a+case-control+study%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+%28London%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">HIV, malaria parasites, and acute febrile episodes in Ugandan adults: a case-control study.</a> AIDS (London, England). 15 (18), 2445-2450 (2001).</li>
<li>Finney, C. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+infection+deregulates+Tim-3+expression+on+innate+cells%3A+combination+antiretroviral+therapy+results+in+partial+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+acquired+immune+deficiency+syndromes%22%5BJournal%5D)">HIV infection deregulates Tim-3 expression on innate cells: combination antiretroviral therapy results in partial restoration.</a> Journal of acquired immune deficiency syndromes. 63 (2), 161-167 (2013).</li>
<li>Finney, C. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+infection+deregulates+innate+immunity+to+malaria+despite+combination+antiretroviral+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+%28London%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">HIV infection deregulates innate immunity to malaria despite combination antiretroviral therapy.</a> AIDS (London, England). 27 (3), 325-335 (2013).</li>
<li>Ljungstrom, I., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLjungstrom%2C+I+%22Methods+in+Malaria+Research%22">Methods in Malaria Research</a>. , 4th edition, MR4/ATCC. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.mr4.org/Publications/MethodsinMalariaResearch.aspx">http://www.mr4.org/Publications/MethodsinMalariaResearch.aspx</a> (2013).</li>
<li>Heid, C. A., Stevens, J., Livak, K. J., Williams, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+quantitative+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Real time quantitative PCR.</a> Genome Res. 6 (10), 986-994 (1996).</li>
<li>Universal SYBR green quantitative PCR protocol [Internet]. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/sybr-green-qpcr.html">http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/protocols/biology/sybr-green-qpcr.html</a> (2014).</li>
<li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2-DDCT+method%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-DDCT method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li>
<li>Hensmann, M., Kwiatkowski, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+basis+of+early+cytokine+response+to+Plasmodium+falciparum%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Cellular basis of early cytokine response to Plasmodium falciparum.</a> Infection and immunity. 69 (4), 2364-2371 (2001).</li>
<li>Artavanis-Tsakonas, K., Riley, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+response+to+malaria%3A+rapid+induction+of+IFN-gamma+from+human+NK+cells+by+live+Plasmodium+falciparum-infected+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Innate immune response to malaria: rapid induction of IFN-gamma from human NK cells by live Plasmodium falciparum-infected erythrocytes.</a> J Immunol. 169 (6), 2956-2963 (2002).</li>
<li>Lambros, C., Vanderberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synchronization+of+Plasmodium+falciparum+erythrocytic+stages+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+parasitology%22%5BJournal%5D)">Synchronization of Plasmodium falciparum erythrocytic stages in culture.</a> The Journal of parasitology. 65 (3), 418-420 (1979).</li>
<li>Ludlow, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+inhibits+phagocytosis+and+inflammatory+cytokine+responses+of+human+monocyte-derived+macrophages+to+P.+falciparum+infected+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">HIV-1 inhibits phagocytosis and inflammatory cytokine responses of human monocyte-derived macrophages to P. falciparum infected erythrocytes.</a> PloS one. 7 (2), e32102(2012).</li>
<li>Weinberg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+and+functional+activity+of+cryopreserved+mononuclear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+diagnostic+laboratory+immunology%22%5BJournal%5D)">Viability and functional activity of cryopreserved mononuclear cells.</a> Clinical and diagnostic laboratory immunology. 7 (4), 714-716 (2000).</li>
<li>Fowke, K. R., Behnke, J., Hanson, C., Shea, K., Cosentino, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%3A+a+method+for+evaluating+the+cryopreservation+of+whole+blood+and+peripheral+blood+mononuclear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunological%22%5BJournal%5D)">Apoptosis: a method for evaluating the cryopreservation of whole blood and peripheral blood mononuclear cells.</a> Journal of immunological. 244 (1-2), 139-144 (2000).</li>
<li>Jeurink, P. V., Vissers, Y. M., Rappard, B., Savelkoul, H. F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+responses+in+fresh+and+cryopreserved+peripheral+blood+mononuclear+cells%3A+kinetics+of+cell+viability%2C+cellular+subsets%2C+proliferation%2C+and+cytokine+production%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">T cell responses in fresh and cryopreserved peripheral blood mononuclear cells: kinetics of cell viability, cellular subsets, proliferation, and cytokine production.</a> Cryobiology. 57 (2), 91-103 (2008).</li>
<li>Kvarnström, M., Jenmalm, M. C., Ekerfelt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+cryopreservation+on+expression+of+Th1+and+Th2+cytokines+in+blood+mononuclear+cells+from+patients+with+different+cytokine+profiles%2C+analysed+with+three+common+assays%3A+an+overall+decrease+of+interleukin-4%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Effect of cryopreservation on expression of Th1 and Th2 cytokines in blood mononuclear cells from patients with different cytokine profiles, analysed with three common assays: an overall decrease of interleukin-4.</a> Cryobiology. 49 (2), 157-168 (2004).</li>
<li>Venkataraman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cryopreservation+of+immune+responses.+XI.+Heightened+secretion+of+tumor+necrosis+factor-alpha+by+frozen+human+peripheral+blood+mononuclear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Effects of cryopreservation of immune responses. XI. Heightened secretion of tumor necrosis factor-alpha by frozen human peripheral blood mononuclear cells.</a> Cryobiology. 34 (3), 276-283 (1997).</li>
<li>Venkataraman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+cryopreservation+on+immune+responses.+X.+Decrease+in+interleukin-12+production+by+frozen+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+is+mediated+by+the+endogenously+hypersecreted+interleukin-10%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Effects of cryopreservation on immune responses. X. Decrease in interleukin-12 production by frozen human peripheral blood mononuclear cells is mediated by the endogenously hypersecreted interleukin-10.</a> Cryobiology. 33 (5), 581-588 (1996).</li>
<li>Reimann, K. A., Chernoff, M., Wilkening, C. L., Nickerson, C. E., Landay, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+lymphocyte+immunophenotype+and+proliferative+responses+in+cryopreserved+peripheral+blood+mononuclear+cells+from+human+immunodeficiency+virus+type+1-infected+donors%3A+implications+for+multicenter+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22The+ACTG+Immunology+Advanced.+Clinical+and+diagnostic+laboratory+immunology%22%5BJournal%5D)">Preservation of lymphocyte immunophenotype and proliferative responses in cryopreserved peripheral blood mononuclear cells from human immunodeficiency virus type 1-infected donors: implications for multicenter clinical trials.</a> The ACTG Immunology Advanced. Clinical and diagnostic laboratory immunology. 7 (3), 352-359 (2000).</li>
<li>Bennett, S., Breit, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variables+in+the+isolation+and+culture+of+human+monocytes+that+are+of+particular+relevance+to+studies+of+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+leukocyte+biology%22%5BJournal%5D)">Variables in the isolation and culture of human monocytes that are of particular relevance to studies of HIV.</a> Journal of leukocyte biology. 56 (3), 236-240 (1994).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

우리의 프로토콜은 가장 사실적으로 체외에서 HIV-말라리아 공동 감염을 연구하기 위해 최적화되었습니다. 첫째, 신선한 인간의 적혈구와 혈청은 말라리아 기생충 문화가 필요합니다. 이 말라리아 기생충의 건강한 인구를 얻기 위해 매우 중요합니다. 라이브 P. 사용시 사이토 카인 생성을 훨씬 더 빠르고 강력한 같이 기생충 해물 라이브 기생충 치환 될 수 없다 원충은 적혈구 (PfRBC) 17, 18에 감염된. 또한, NK 세포와 같은 세포 유형의 활성화는, 전체 PfRBCs 필요하고, 기생충 해물으로 효율적으로 작동하지 않는다. 이는 PfRBC와 백혈구 사이의 직접 접촉의 필요성에있을 수 있습니다 또는 세포 표면 수용체 (18)과 상호 작용하는 기생충 유도 리간드의 불안정한 성격 때문일 수 있습니다. 말라리아 PfRBC 문화는 물론 실험에 앞서 (프로토콜 4) 동기화해야합니다. 동기화 PfRBCs은 실험 데이터의 재현성을 향상시킬 수 있습니다. 이...

공동 감염, 복수의 동시 감염 감염은 자연 환경의 규범이다. 공동 감염 질환의 병리에 각각 감염의 임상 적 관리에 큰 영향을 미칠 수 있습니다. 공동 감염, 백신 및 약물 효능뿐만 아니라 진단 테스트의 맥락에서 부정적인 영향을받을 수있다 (1에서 검토). 그러나, 그것의 중요성에도 불구하고, 병원균 연구의 대부분은 하나의 감염을 고려한다. 말라리아 및 HIV-1 (HIV)는 전 세계적으로 이환율과 사망률의 원인을 선도하고 있습니다. 10 - 말라리아와 에이즈 endemicity 분야 공동 감염의 위험에 수백만의 사람들을 가하고 그 결과 더 심한 임상 질환 2의 위험, 넓은 지리적 중복을 공유 할 수 있습니다. 두 질환에 부정적인 상호 작용합니다. HIV 감염자 높은 HIV 바이러스 부하와 CD4 + T 세포 수가 일시적으로 감소하면서, 말라리아 감염 중에 알 수말라리아 기생충 부담과 임상 중증 말라리아의 위험이 공동 감염된 개인 2,3,5,7,8,10에서 더 높다. 에이즈 말라리아의 심각성을 증가하는 메커니즘은 완전히 이해하여 추가 조사를 보증하지 않습니다. 여기에서 우리는 체외에서 연구 할 수있는 말라리아 및 HIV 동시 감염하는 방법을 설명합니다. 특히,이 방법은 HIV 감염의 맥락에서 말라리아 특이 면역 반응의 시험을 허용한다. 우리 프로토콜 배양 P. HIV 만성 감염 기증자로부터 체외에서 격리 갓 절연 말초 혈 단핵 세포를 이용한 다기능 공 배양 시스템 (PBMC를)을 기술 원충은 적혈구 (PfRBC)를 기생. 이러한 응답에 HIV 항 바이러스 요법의 효과는 또한 HIV (+) 도너 전후 요법 전향 채취 한 PBMC를 사용하여 검사 할 수있다. 우리는 HIV 감염의 영향을 조사하기 위해,이 시스템을 사용한말라리아 관련 선천성 면역 반응에 대한 11, 12, 및 NK 세포에서 손상되는 말라리아 관련 IFNγ 및 TNF 반응을 확인할 수 있었다 HIV (+) 도너 전후 HIV 항 바이러스 요법에서 NKT 세포, γδ T 세포 . 또한, 우리는 단핵구 기능 또한 HIV (+) 기증자에 손상되는지 결정하지만, 이후 HIV에게 항 레트로 바이러스 치료를 복구하기 위해이 시스템을 사용할 수 있었다.

<table><tbody><tr><td>alanine</td><td>Sigma</td><td>A7377</td><td></td></tr><tr><td>항체 (다른 표 참조)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm with BD GolgiPlug</td><td>BD</td><td>555028</td>에는 <td>brefeldin A, cytofix/cytoperm buffer 및 perm/wash buffer가 포함됩니다</td></tr><tr><td>BD Vacutainer ACD Solution A</td><td>BD</td><td>364506</td><td></td></tr><tr><td>BD Vacutainer Sodium Heparin</td><td>BD</td><td>17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (칼슘 없음, 마그네슘 없음)</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Sigma</td><td>F1051</td><td>사용 전 열 비활성화</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PLUS</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>겐타마이신 (10 mg/ml)</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td></td></tr><tr><td>Hema3 염색 세트</td><td>Fisher</td><td>122-911</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>하이포잔틴</td><td>시그마</td><td>H9636</td><td></td></tr><tr><td>아이오노마이신</td><td>시그마</td><td>I3909</td><td></td></tr><tr><td>MEM 비필수 아미노산(10mM)</td><td>Gibco</td><td>11140</td><td></td></tr><tr><td>PMA</td><td>시그마</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 분말</td><td>Life-Technologies</td><td>31800-022</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 L-글루타민 및 HEPES</td><td>열 포함 Scientific</td><td>SH30255.01</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨 (분말, 세포 배양)</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>피루브산 나트륨 (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>11360</td><td></td></tr><tr><td>Tris (Trizma base)</td><td>Sigma</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Ambion</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue (0.4%)</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>BD CompBead</td><td>BD</td><td>552843, 552845</td>는 <td>사용된 항체에 따라 다릅니다</td></tr><tr><td>기생충 가스 혼합물</td><td>특별 주문</td><td></td><td>3% CO2, 1% O2, balance N2</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.2 &#956; m 필터 장치</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>유리 슬라이드</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>T25 플라스크,</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75 플라스크,</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50ml 튜브</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>24 웰 배양 플레이트</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>플러그가 뽑혀 있습니다, 파스퇴르 피펫이</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>막혔습니다. 파스퇴르 피펫이 막혔습니다.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 이송 피펫</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈구분석기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유세포 분석기 (3 레이저)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유세포 분석에 사용되는 항체</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-TNF</td><td>eBiosciences</td><td>551487</td><td>FITC (fluorophore)
2 &#956; l</td></tr><tr><td>안티-IFN&#947;</td><td>Biolegend</td><td>506507</td><td>PE (형광단) 
20 &#956; l</td></tr><tr>PE-Cy7 (형광단) <td>300914</td><td>Anti-CD8</td><td>Biolegend</td><td> 
1 &#956; l</td></tr><tr><td>안티 CD14</td><td>Biolegend; BD Biosciences</td><td>325624; 551487</td><td>Biotin (형광단) 
0.5 &#956; l
Streptavin PE-TR (형광단) 
0.1 &#956; l</td></tr><tr><td>안티 CD56</td><td>Biolegend</td><td>318322</td><td>PerCP / Cy5.5 (형광단) 
5 &#956; l</td></tr><tr><td>안티-&#947; &#948;</td><td>Biolegend</td><td>331212</td><td>APC (형광단)
5 &#956; l</td></tr><tr><td>안티 CD3</td><td>Biolegend</td><td>300426</td><td>APC-Cy7 (형광단) 
5 &#956; l</td></tr><tr><td>안티-CD4</td><td>바이오레전</td><td>드 317424</td><td>퍼시픽 블루 (형광단)
1 &#956; 엘</td></tr></tbody></table>

<em&gt; 체외</em&gt; hiv 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

말라리아와 HIV 동시 감염은 점점 더 건강의 우선순위가 되고 있습니다. 그러나 현재 말라리아나 HIV에 대한 대부분의 연구는 각 감염에 개별적으로 초점을 맞추고 있습니다. 이러한 각 병원체의 질병 역학을 독립적으로 이해하는 것이 중요하지만 이러한 병원체 간의 상호 작용을 조사하고 이해하는 것도 중요합니다. 
우리는 HIV 감염의 맥락에서 말라리아에 대한 숙주 면역 반응을 연구하기 위해 HIV-말라리아 동시 감염의 다목적 체외 모델을 개발했습니다. 우리의 모델은 세포 상등액, 세포 표면 및 세포 내 단백질 마커, RNA 발현 수준에서 분비되는 인자를 연구할 수 있게 해줍니다. 사용된 실험 설계 및 방법은 변동성을 제한하고 데이터 신뢰성과 재현성을 높입니다. 
이 모델에 사용된 모든 병원체는 자연 인간 병원체(Plasmodium falciparum 및 HIV-1)이며, 감염된 모든 세포는 자연적으로 감염되어 신선하게 사용됩니다. 우리는 P. falciparum 에 기생하고 지속적인 체외 배양으로 유지되는 인간 적혈구를 사용합니다. 우리는 만성 HIV에 감염된 지원자로부터 새로 분리된 말초 혈액 단핵 세포를 얻습니다. 사용되는 모든 질환에는 적절한 대조군이 있으며(P. falciparum 기생균 vs. 정상 적혈구), HIV에 감염된 모든 공여자는 HIV에 감염되지 않은 대조군을 가지고 있으며, 이 대조군으로부터 세포는 당일에 채취됩니다. 이 모델은 HIV 감염의 맥락에서 말라리아 기생충과 인간 면역 세포 간의 상호 작용을 연구할 수 있는 현실적인 환경을 제공합니다.

그래프 NKT 세포 집단을 수득 CD56 + CD3 + γδ- 게이트들을 이용하여, NKT 세포에서 IFNγ 생산 (도 2)의 레벨을 도시한다 (데이터는 보이지 않음). 세포 염색 전에 72 시간 동안 배양 하였다. 일단 10 만 CD3 + 세포는 사이토 NK, NKT 및 γδ 세포 (관심의 세포)의 충분한 인구를 얻는 흐름에 취득한, 스테인드. 5,600 NKT 세포의 최소 각 그래프에 표시된다. TNF 생산은 동일한 방식으로 수득된다 (데이터는 미도시). (-)에 노출 된 개인 PfRBC 그래프 명확 IFNγ 생산은 HIV (+) HIV에 비해 개인의 세포에서 낮은 것을 보여준다. 유동 세포 계측법 분석은 매우 주관적이다. 이는 각각의 실험에 대한 모든 적절한 제어를 갖는 것이 필수적이다 (도 2 참조). 배경 레벨은 사이토 카인 염색 진정한 표현 가능 FMO 샘플들을 이용하여 계산된다.PMA / 이오 노마 이신...

인간 동시 감염은 체외에서 복제하기 어렵습니다. 그러나 인간 말라리아 기생충은 HIV에 자연적으로 감염된 갓 분리된 인간 말초 혈액 단핵 세포와 마찬가지로 체외에서 쉽게 배양할 수 있습니다. 이는 HIV 동시 감염의 맥락에서 말라리아 기생충에 대한 조기 면역 반응을 연구하기 위한 훌륭한 모델을 제공합니다.

<em&gt; 체외</em&gt; HIV 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

다음 실험의 전반적인 목적은 만성 HIV 감염 환경에서 말라리아에 대한 선천성 면역 반응을 관찰하는 것입니다. 이를 위해 먼저 인간 적혈구에서 살아있는 P. falciparum 기생충을 배양한 후, 두 번째 단계로 HIV 양성 및 비감염 기증자로부터 얻은 말초혈액 단핵구(PBMC)를 말라리아 기생충에 감염된 적혈구와 함께 공동 배양합니다.최종적으로 유세포 분석을 통해 HIV 감염인의 선천 면역 세포 사이토카인 활성도를 비감염 대조군과 비교하여 평가합니다. 이 방법은 공동 감염 분야의 핵심적인 질문들을 해결하는 데 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어, HIV와 같은 하나의 감염이 말라리아와 같은 두 번째 감염의 면역 반응에 어떤 영향을 미치는지 등이 있습니다. 기생충의 동기화를 위해 기생충 배양액을 원심 분리하고, 침전물 내의 트로포조이트 단계 기생충을 상온에서 37 °C 알라닌 용액 19배 부피로 용해합니다. 15분 후, RPMI 0에서 세포를 두 번 원심 분리합니다.두 번째 세척 후 R-P-M-I-A 내의 헤마토크릿을 3%로 조정합니다. 그 다음 플라스크에 가스를 충전하고 트로포조이트(trophozoites)가 5~10% 기생률에 도달할 때까지 37 °C 인큐베이터에 보관하여 샘플의 기생률을 계산합니다. 혈액층에서 10 µL 샘플을 취해 유리 슬라이드 위에 분주하고, 혈액이 건조된 후 두 번째 유리 슬라이드를 사용하여 혈액의 박층 도말 표본을 만듭니다.제조업체의 프로토콜에 따라 HEMA 3-염색 키트를 사용하여 슬라이드를 염색합니다. 감염된 적혈구의 총 수를 계산하기 위해, 광학 현미경으로 300개의 세포를 계수하고 진한 보라색으로 염색된 기생충 감염 적혈구 수와 연분홍색의 비감염 세포 수를 비교하여 헤마토크리트를 결정합니다.헤모사이토미터(hemo cytometer)를 사용하여 기생충 배양액 밀리리터당 적혈구 수를 측정합니다. 그 다음 기생충 배양액을 다시 원심 분리하고, R-P-M-I-S plus에서 밀리리터당 6×10⁶개의 기생충 감염 적혈구 농도로 세포를 재현탁합니다. HIV 양성 또는 HIV 음성 공여체로부터 얻은 혈액 샘플에서 인간 PBMC를 분리하기 위해, 차가운 DPBS를 혈액 샘플과 동일한 부피로 넣어 희석합니다. 이어서 각 샘플당 50mL 튜브에 실온의 Ficoll 15mL를 첨가합니다.25 mL의 혈액 DPBS 용액을 넣은 후, 혈액과 DPBS 용액 혼합물을 최대 25 mL까지 조심스럽게 층

an-vitro-model-for-measuring-immune-responses-to-malaria-context-hiv

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

<em&gt; 체외에서</em공부하기&gt; 공동 감염 모델<em&gt; Plasmodium falciparum</em인간의 기본 단핵구 파생 면역 세포에서&gt; - HIV-1 상호 작용

이 비디오는 인간 면역결핍 바이러스 1형, HIV-1에 의한 인간 자궁 점막 조직의 생체 외 감염 및 공기-액체 계면에서 젤라틴 스펀지 위에 대한 유지 관리를 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 인간 조직 내에서 HIV-1 복제 및 발병 기전을 모니터링할 수 있습니다.

생체 외 조건에서 HIV 발병기전을 연구하기 위한 인간 자궁경부 점막 감염 모델

이 비디오는 체외 말라리아-HIV 동시 감염 세포 배양 모델의 생성을 보여줍니다. Plasmodium falciparum 기생된 적혈구와 공동 배양된 HIV 감염 말초 혈액 단핵 세포는 잠재적으로 서로의 성장을 지원하고 HIV 및 말라리아 동시 감염에서 면역 반응 및 질병 진행에 대한 통찰력을 제공합니다.

말라리아-HIV 동시 감염의 체외 세포 배양 모델 생성

우리는 HIV 특정 CD4 T 세포에 의한 사이토 카인 분비의 조절에 면역 경로의 역할을 조사하기 위해 시험 관내 분석을 개발 하였다.

시험 관내 분석에서 HIV 특정 CD4 T 세포의 이펙터 기능에 면역 경로의 영향을 평가하기

결핵 및 말라리아는 인간과 열대 빈곤 인구의 사망률과 사망의 주요 원인에서 가장 널리 감염의 두 가지입니다. 우리는 감염의 자연 경로를 통해 두 병원체 공격 후 마우스에서 말라리아 결핵 동시 감염의 결과를 연구하는 실험 모델 시스템을 구축.

자연의 전송에 결핵 말라리아 동시 감염을 연구하는 실험 모델 결핵균와 변형체 berghei</i

무 세포 HIV-1 입자와는 달리, 감염된 CD4 + T 세포를 형질 효과적으로 수지상 세포 (PDCS)에 의해 감지된다. 이 원고는 타입 I IFN의 방출에 의해 평가로서 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 또는 격리 PDCS는 PDCS 의해 선천성 센싱을 평가하는 HIV-1 감염 T 세포와 공동 배양 방법을 설명한다.

HIV-1 감염 CD4의 타고난 감지 평가<sup&gt; +</sup&gt;를 사용하여 형질 수지상 세포에 의한 T 세포<em&gt; 예 생체 내</em&gt; 공동 문화 시스템.

적혈구 내에서 말라리아 기생충 침입하여 및 복제합니다. merozoite 침공과 기생충의 정확한 평가는 말라리아 감염의 과정을 평가에 따라서 매우 중요합니다. 여기에서 우리는 말라리아의 마우스 모델에서 이러한 매개 변수의 측정을위한 기반 프로토콜 유동 세포 계측법을 설명합니다.

유동 세포 계측법에 의해 쥐 말라리아 기생충의 생체 내 평가와 Merozoite 침공

이 프로토콜은 HIV 감염에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 된 골수/간/흉선 마우스 모델을 구성하는 방법을 설명합니다.

인간화 된 마우스 모델에 HIV 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성

우리는 실험용 뇌 말라리아의 마우스 모델을 설명하고 자기 공명 영상을 사용하여 생체 내에서 염증 및 미세 혈관 병리학을 추적할 수 있는 방법을 보여줍니다.

자기 공명 영상을 이용한 실험용 뇌 말라리아 모델에서의 부종 발달 및 미세 혈관 병리학 적 추적

이 프로토콜의 전반적인 목표는 Plasmodium falciparum 감염에 자연적으로 드러나는 개인의 혈장 또는 혈장에 존재하는 항체의 용량을 측정하는 방법에 대한 지침을 제공하여 기생충에 감염된 적혈구 (IEs)의 phagocytosis를 opsonize 및 유도하는 것입니다.

유동 세포측정 기반 분석체에 의한 플라스모듐 팔시파룸 기생충에 자연적으로 획득된 식세포증-유도 항체 측정

여기서 우리는 감염의 혈액 단계에서 Plasmodium 에 대한 세포 면역의 메커니즘을 밝히는 데 도움이되는 새로운 방법을 설명합니다. 이것은 세포 독성 림프구에 의한 감염된 적혈구 사멸을 측정하는 시험관 내 분석입니다.

체외 세포독성 림프구에 의한 변형체 감염 적혈구 사멸 분석

학습하세요 체외 HIV-말라리아 공동 감염 모델에서 선천성 면역 반응을 측정하는 방법을. Plasmodium falciparum과 말초혈액 단핵세포를 공동 배양하고 유세포 분석으로 사이토카인 활성을 평가합니다.

더 많은 동영상 탐색