Name: 물 박탈, 사카린 페이딩 또는 확장 액세스 교육을받지 않은 쥐에 에탄올의 강화 속성을 평가하는 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: 배우세요 쥐에서 에탄올 자가투여를 위한 조작적 조건화 방법을. 물 박탈이나 사카린 페이딩 없이 신경생물학 및 약리학 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작품은 스웨덴 연구위원회에 의해 지원되었다.

모든 절차는 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 NIH 가이드에 따라 실시된다. 1. 동물 관리 및 주택 <ol><li> 반전 12 시간 명암주기와 온도 (21 ° C) 및 습도 제어 환경에서 쌍으로 도착에서 225g - 식민지에 도착하면, 집 남성의 Wistar 쥐 200 무게. 참고 : 실험의 이론적 근거에 따라 쥐 단일 수용 할 수있다. </li><li> 쥐 실험을 시작하기 전에 최소 1 주일 동안 동물 사육장 광 사이클에 적응 일상을 처리 할 수있다. 1 회 동물의 무게를. </li><li> 쥐에게 Chow 및 실험 기간 동안 수돗물 무료로 액세스 권한을 부여 (물 부족 12 응답을 개시 할 필요가 없습니다). 어두운 테스트 룸의 명암 사이클의 어두운 단계에서 모든 행동 테스트를 실시한다. 참고 : 우리가 일상적으로 젊은 성인 남성의 Wistar 쥐 (출생 후 일 62-65)를 사용하지만,이 페이지를rotocol은 이론적으로 다른 쥐의 변종뿐만 아니라 성별 / 나이 차이를 조사하기에 적합 할 수있다. </li></ol> 2. 조작 적 교육 <ol><li> 30.5 × 29.2 × 24.1 cm를 측정하고 침구 늘어서 그리드 바닥과 폐기물 팬을 포함하는 동일한 조작 적 챔버의 모든 행동 훈련과 테스트를 수행 환기 배기 팬이 장착 사운드 감쇠 칸막이에 수납, (냄새 신호를 줄이기 위해 동물 사이에서 변경) . 주 : 랫트는 훈련 일 1 조건화 조절하여 훈련 한 H +와 어두운주기 + 8 시간 사이에 (a 레버 응답은 보강제를 획득 할 필요가있다). 알코올 훈련 전에 알코올이나 음식 또는 유체 형성에 아무런 사전 노출이 없습니다. </li><li> 자극 조명, 주사기 펌프 및 액체 컵 콘센트 옆에 위치 두 개폐식 레버를 각 조작 적 챔버를 착용. 적절한 소프트웨어를 사용하여 컴퓨터에 의해 인터페이스 챔버 및 제어. 노트:대부분의 공급 업체는 챔버를 제어하는 ​​데 필요한 자기 관리에 필요한 모든 구성 요소를 포함하는 패키지뿐만 아니라 소프트웨어와 인터페이스를 제공합니다. </li><li> 제조업체의 지침에 따라 20 % 에탄올 강화의 고정 비율 (FR) 일정 (응답 만 응답 지정된 수의 후 강화 된에 조건화 일정을) 시작 조작 적 조절 프로그램을 작성합니다. 예를 들어, 고정 된 비율 1, 래트는 증강제를 (a FR1 프로그램의 예를 들면, 기업 코드 파일 섹션 참조) 수득 한 응답을 생성한다. 다음 명령을 실행합니다. <ol><li> 상기 세션의 시작을 표시하기 위해, 알코올 가용성 신호를 두 개의 레버를 연장한다. 에탄올 (활성)과 관련된 레버에 하나의 레버를 눌러 잘 마시는 인접 물에 20 % 에탄올 100 μL의 볼륨의 전달에 의해 보상과에 의해 신호 수반 5의 제한 시간을 시작 참고 : 의 조명레버 위의 큐 - 빛. 큐 라이트는 훈련의 1 일에 도입된다. </li><li> 가 더 예약 된 결과가 없음에도 불구하고 제한 시간 동안 기록이 응답. 다른 레버 (비활성)에 기록 응답은 그들이 행동 결과를하지 않는다. 주 : 비활성 레버 비 특정 행동을 평가하는 제어부로서 기능한다. </li><li> 활성 레버 (응답 속도) 및 적립 20 % 에탄올 보상의 수에 응답 수를 기록한다. </li><li> 30 분 경과 후, 상기 세션의 종료를 알리기 위해, 알코올 가용성의 끝을 표시하는 두 개의 레버 철회. </li><li> 저장 한 모든 데이터를 보관. </li></ol></li><li> 교육 세션을 시작하기 전에 각각의 조작 적 실의 모든 장치의 적절한 기능 (개폐식 레버, 유체 분배기)를 확인합니다. </li><li> (190) 증거 (95 %) 수돗물에 희석 에탄올의 20 % v / V를 에탄올 용액을 준비합니다. 참고 : 에탄올 용액을 실온에서 유지 될 수있다. 따라제조 업체에 재고 에탄올 솔루션은 최대 99.98 %까지 할 수있다. 또한 대부분의 출판 원고에서, 에탄올 농도는 일반적으로 볼륨 / 볼륨으로 제시하면서, 일부는 중량 / 부피로 제시 수 있습니다. </li><li> 20 % 에탄올 용액으로 주사기를 입력하고 주입 라인의 누출이나 기포가 없는지 확인합니다. 수동으로 에탄올이 제대로 최초의 강화 응답에서 콘센트에 배달됩니다 있는지 확인 주입 라인을 통해 에탄올의 작은 볼륨을 누릅니다. 종이 타월로 용기를 건조하고 세션을 시작하기 전에 비어 있는지 확인합니다. </li><li> 20 % 에탄올 강화의 FR 일정을 제어하는 ​​소프트웨어를로드 </li><li> 에 FR1 일정에서 기차 operant- 및 약물 순진 쥐 30 분 세션 동안 물 부족없이 20 %의 에탄올을 자기 - 관리합니다. <ol><li> 전송 케이지를 사용하여 테스트 룸에 동식물 사육장에서 쥐를 전송. </li><li> 하나의 챔버에 각각 쥐를 할당합니다.전송 케이지에서 각각의 쥐를 가지고 할당 된 자기 관리 챔버에 넣어. </li><li> 매일 일관된 실험의 조건을 유지하십시오. 따라서, 항상 매일 같은 자기 관리 챔버에서 거의 같은 시간을 쥐를 테스트합니다. </li><li> 20 % 에탄올 강화의 FR1 일정을 시작하는 소프트웨어를 시작합니다. </li><li> 세션의 끝에, 자기 관리 챔버에서 래트를 제거한 동물 사육장에 반환. </li><li> 위해 수동으로 알코올 용액은 동물에 의해 소비되는 것을 확인하기 위해, 종이 타월을 사용하고 용기가 건조되었는지 확인합니다. 다르게는, 1 또는 2 mL를 주사기를 사용하여 소비되지 않은 양을 추정하기 위해 상기 용기 내에 남아있는 유체를 수집한다. 보다 정밀한 측정을 위해 (또한 더 비싸다), 소량의 정확한 계산을 허용하는 액체 수용 컵에 접속 lickometer 시스템과 각 챔버를 장착 할 수있다 : 참고자기 관리 세션 동안 래트 s의 제조. </li><li> 표면 살균제 각 챔버의 벽과 그리드 바닥을 청소합니다. </li><li> 사용 후 70 % 에탄올 용액을 세정함으로써 주입 라인을 유지한다. 사용하지 않을 때에는, 몰드와 먼지를 방지하기 위해 캡을 삽입한다. </li></ol></li><li> 각 세션 후에 수집하고 생성 된 데이터를 분석한다. 특히, 활성 레버를 누를의 평균 수, 얻어진 알코올 보상의 평균 개수뿐만 아니라 비활성 레버 프레스의 평균 수를 계산한다. 참고 : 대부분의 논문에서, 알코올 소비도 g / kg (체중)의 에탄올 섭취로 제시됩니다. 에탄올 섭취는 다음 식을 이용하여 계산 될 수있다 : <img alt="Equation1" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation1.jpg" /> 소비 볼륨 (ML) - 0.789 g / mL의 - 실온에서 단일 볼륨 / 보상과 에탄올의 밀도 ± 얻은 보상의 수입니다. 예를 들어, 쥐 400g 무게 경우 20 rewa를 받았습니다20 % v / V를 에탄올 용액의 RDS : <img alt="Equation2" src="/files/ftp_upload/53305/53305equation2.jpg" /></li><li> (15 세션의 최소 변화없이 마지막 3 세션에서 얻은 보상의 총 수의 15 % 이상으로 정의)의 성능 안정화 될 때까지 일주일 세션을 5/6 일 실시. 주 : 쥐 FR1에 안정된 기준에 도달하면, 조건화 프로그램 알코올 상을 수득하는데 필요한 반응의 수를 증가 제조업체의 지시에 따라 변경 될 수있다. 고정 율은, 예를 들어 우발적 인 보강을 최소화하기 위해 FR2 FR3 또는 증가 될 수있다. </li><li> 혈액 에탄올 농도를 측정한다 : <ol><li> 자기 관리 세션에서 얻은 보상이 쥐에 의해 소비되어 있는지 확인하려면 자기 투여 후 혈중 에탄올 농도를 측정한다. 쥐가 안정 기준에 도달하면 즉시 다음과 같은 측면 꼬리 정맥에서 혈액을 수집세션. 혈관 내로 23 G 바늘을 삽입하고 모세관을 사용하여 50 μL의 혈액 샘플을 수집한다. </li><li> 10 ML의 헤드 스페이스 바이알에 50 μL 혈액 샘플을 전송하고 (1) 50 μL 추가 : 내부 표준으로 1,000 이소 프로필 알코올을. 에탄올 표준에서 300 밀리그램 / dL 이상으로 표준 곡선 (10)을 준비합니다. 제조사의 설정에 따라 컬럼 크로마토 그래피 (13) 헤드 스페이스 샘플러 프로세스 샘플. </li></ol></li><li> 진보적 인 비율 <ol><li> 보상 (14)을 소비하는 동물의 의욕을 평가하는 진보적 인 비율 (PR) 일정을 사용합니다. PR은 보강제를 얻는 반응의 수가 점차적으로 증가되는 조건화에서 일정하다 (다른 측면에서, 래트를 각각의 연속적인 보상을 위해 열심히 할). 참고 : 달리가 PR 세션이 시간 초과되지 않고, 세션 FR하고 30 분 완성 된 비율없이 경과 한 번 종료됩니다. <ol><li> 할당 된 조건화 상자에 쥐를 놓고 수그들이 보강의 홍보 일정에 따라 20 % 에탄올에 대한 응답 : 내 세션 응답 요구 사항이나 비용 (레버 프레스 즉, 수를 증가를 제외하고는 FR 일정에 사용 된 것과 동일한 모든 실험 조건을 유지, (단계 2.3 참조) ... 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24, 28, 32 주 : 다음의 예는 다음 식에 따라) 단일 에탄올 혜택을받을 활성 레버에 필요한 PR 프로그램은 기업 코드 파일 섹션에서 제공된다. </li><li> 30 분은 보상하지 않고 경과되면 PR 세션을 종료합니다. 참고 : 브레이크 포인트가 PR 세션 동안 마지막으로 완료 응답 요구 사항으로 정의된다. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. 테스트 알코올 자기 관리의 조작 적 모델의 예측 타당성 주 : 래트 안정적인 자기 관리 기준을 취득한 후 (공정 2 참조), 그것으로 예측 모델의 타당성을 평가할 수있다날트렉손의 효능, 20 % 에탄올 자기 관리를 감소시키는 알코올 의존에 대한 현재 FDA 승인 약물 테스트. 응답이 확실하게 높을 때 우리는 교육 (FR2) 동안 달성 가장 높은 FR에서이 테스트를 수행하는 것이 좋습니다. 예측 유효성이 확립되면, 모델은 새로운 약물 후보를 평가할 수있다. <ol><li> 시험 하루 전에 피하 식염수 주사를 쥐에게 이전에 두 개의 연속적인 자기 관리 세션의 최소 중에 주입을 길들하는 자기 관리 세션 또는 에탄올에 대해 응답하는 변화 없음으로 정의 된 식염수 주사 (에 의해 영향을받지 때까지 30 분을 제공 마지막 2 세션에서 얻은 보상)의 총 수의 15 % 이상. </li><li> 날트렉손 식염수에 용해하고 동물에게 주사를 용이하게하기 위해 중립 도달하도록 pH를 조절한다. 1.0 ㎖ / 부피의 약물 주입은 투여의 피하 경로를 사용하여 세션 전에 30 분 kg이다. 참고 : 리터그래서 0.1, 0.3 및 1 ㎎ / ㎏이 프로토콜에 사용되는, 1 ㎎ / kg - ature 0.1의 범위 사이의 용량 선택에 대한 좋은 증거를 제공합니다. 참고 : 자신의 힘이 피하 주사가되는과 다를 수 있지만 연구, 날트렉손에 대한 관리 모두 피하 및 복강 내 경로의 사용을 나타냅니다 더 강력한 30 배 복강 내 주사 (15) 그. 날트렉손의 주입이 라우트의 사용이 유효 0.1 및 1 mg의 농도 사이의 범위에있는 각종의 실험실에 의해 복제 된 바와 같이 이러한 이유로, 우리는 피하 경로를 사용하는 것이 / 12,15,16을 kg이다. </li><li> 시험 당일시 30 분 자기 관리 세션 전에 네 날트렉손 투여주기 (0, 0.1, 0.3 및 1 ㎎ / ㎏) 중 하나를 가로 질러 간 주제 디자인에 균형 잡힌 / 임의의 순서로 쥐를 주입. </li><li> 각 투여주기 사이에 쥐가 두 개의 연속적인 자기 관리 세션의 최소 또는 동안 응답 할 때까지 약을 세척 할 수 있습니다에탄올은 다시 기준선이다. 주 :이 결과, 테스트의 끝에서, 모든 쥐 네 선량 각각 주입 하였다. </li><li> 이 단계 후에, 가장 효과적인 투여 량 (1 ㎎ / ㎏)을 선택하고 진보적 인 비 일정을 사용하여 알코올 섭취 동물의 동기에 날트렉손의 효과를 시험한다 (단계 2.12 참조). </li></ol>

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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

이 프로토콜, 우리가 얻고, 물 부족, 확장 액세스 훈련의 사용을 요구하지 않는 에탄올자가 투여 고전 모델과 달리, 래트에서 20 % 에탄올 안정한 경구자가 투여를 유지하는 새로운 방법을 제시하고 있으며, 또는 사카린 / 자당 12 페이딩. 또한, 날트렉손, 알코올 의존에 대한 현재 FDA 승인 약물 치료는 성공적으로 알코올 자기 관리 및이 프로토콜과 훈련의 Wistar 쥐의 알코올을 소비하는 의욕을 감소시킨다. 이 날트렉손 비 의존적 래트 16-18 알코올 소비를 감소 시키는데 효과적임을 보여주는 이전보고와 일치하는 바와 같이 이러한 결과는 프로토콜의 중요한 약리학 적 유효성을 제공한다. 날트렉손은 알코올 섭취와 임상 시험의 두 동물 모델에서 유망한 결과를 보여 주었다 아편 수용체 길항제이다. 동물 모델에서, 날트렉손 알코올 소비 자기-A를 감소 시키는데 효율적비 특정 동작 (비활성 레버 프레스) (12)에 영향을주지 않고 비 의존성 동물에서 16,17,19...

약물의 강화 효과를 연구하기위한 동물 모델의 개발은 인간의 약물 중독을 연구하는 중요한 도구를 입증했다. 구체적으로는, 조작 적자가 투여는 경구 섭취 에탄올 용액의 양의 보강 효과를 평가하기위한 가장 효과적인 방법 중 하나이며 광범위하게 사용되는 행동 모델이다. 이러한 모델의 개발과 초기 문제는 대부분의 설치류 용 에탄올의 높은 농도의 주요 혐오 맛, 알코올 1 거의 또는 전혀 경험이있는 사람에서 공유하는 현상이었다. 이 장벽을 극복하기위한 표준 프로토콜은 물 부족을 필요로 및 / 또는 사카린 또는 자당의 수집 및 자기 관리의 유지 보수를 위해 페이딩. 그러나 이러한 두 가지 접근 방법은 유리하지 않다. 이들은 단순히 에탄올 개시 응답 및 획득의 상대 성공률을 얻기 위해 트레이닝 장시간을 필요로한다. 감미제의 사용은 전위 바이어스를 소개자기 관리 데이터의 해석. 이러한 제한은 다음과 프로토콜에 적용되지 않습니다. 간단히, 삼손과 동료 2는 20 % 자당의 달콤한 용액에 에탄올을 용해하고 훈련 4 주 동안 단맛을 페이드 아웃하는 것은 물에 10 % 에탄올에 대한 응답을 시작하는 데 필요한 것으로 나타났습니다. 또한, 안정적인 에탄올 섭취는 통상 6~8 주 1-3에 달성된다. 이 접근법은 매우 문제가된다. 연구자들은 에탄올 자기 관리를 측정하기 위해 시작하기 전에 첫째, 교육의 오랜 기간을 필요로한다. 음식 제한 동물의 음식 제공 레버를 사전에 약물 교육의 일일 및 약물에 대한 응답 안정은 종종 10 달성 - - 반면, 코카인이나 헤로인 정맥 자기 관리는 0을 필요로 십이일 4,5. 이 방법의 또 다른 한계는 사카린 자당 쥐에 매우 보람 뇌의 활성화 패턴들을 유도한다는 사실따라서 에탄올 자기 관리에 교란 가능성을 도입 남용 약물에 imilar는 6-9을 연구. 마지막으로 인해 실패 수집 및 / 또는 불충분 한 응답 속도로 지속적으로 실험에서 제외 쥐의 상당 부분과 수집 및 응답 속도, 10에서이 방법 쇼 변동성을 이용하여 에탄올 용액, 자기 관리를 취득 쥐. 대조적으로,이 프로토콜, 우리는 수집 물 부족, 수 크로스 / 사카린 페이딩 또는 확장 된 액세스 훈련을 필요로하지 않는 수용액을 20 % 에탄올을 경구자가 투여 유지하기위한 단순하지만 효율적인 방법을 제안한다. 최근의 연구는 경구 에탄올 그 자체 투여 따라서 우리 experim 20 % 에탄올 용액을 선택하기위한 이론적 근거를 제공하고, 20 %의 에탄올 농도에서 자기 - 투여시 최고 에탄올 섭취 역 U 자형 투여 량 반응 곡선을 표시 발견ental 디자인 11.

<table><tbody><tr><td>초고 MDF 사운드 감쇠 큐비클, 내부: 22"W x 22"H x 16"D</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-018MD</td><td></td></tr><tr><td>수정 된 상단, 폐기물 팬 및 포토 빔이있는 초고형 모듈 식 테스트 챔버</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-007CT-PH</td><td></td></tr><tr><td>쥐 또는 작은 영장류 용 스테인레스 스틸 그리드 바닥</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-005</td><td></td></tr><tr><td>개폐식 레버</td><td>메드 어소시에이츠 Inc.</td><td>ENV-112CM</td><td>2 by SA 챔버</td></tr><tr><td>자극 조명, 1" 백색 렌즈, 모듈식 패널 Med</td><td>Associates Inc.</td>에 장착됨<td>ENV-221M</td><td>2 by SA 챔버</td></tr><tr><td>듀얼 컵 액체 용기 18 ga 스테인레스 스틸 파이프</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-200R3AM</td><td></td></tr><tr><td>단일 속도 주사기 펌프, 3.33rpm</td><td>Med Associates Inc.</td><td>PHM-100</td><td></td></tr><tr><td>액체 전달 키트</td><td>Med Associates Inc.</td><td>PHM-122-18</td><td></td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 입력 / 16 출력 패키지</td><td>Med Associates Inc.</td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>메드 - PC 소프트웨어</td><td>메드 어소시에이츠 Inc.</td><td>SOF-735</td><td></td></tr><tr><td>http://www.mednr.com/</td> <td>메드 어소시에이츠 주식회사</td><td></td><td>오픈 소스이며 연구자에게 MEDState 표기법 코드</td></tr><tr><td>Kendall Monoject 20 cc Syringes, Regular Luer Tip</td><td>VWR International</td><td>MJ8881-520657</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, Pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC</td><td>Decon Labs</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨 주입, USP</td><td>Hospira</td><td>0409-4888-50</td><td></td></tr><tr><td>Naltrexone 염산염</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N3136-1G</td><td></td></tr><tr><td>23 G BD PrecisionGlide Needles</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>Minivette POCT 50 &micro; L, K3EDTA</td><td>Sarstedt</td><td>17.2113.150</td><td>모세혈관 채혈용</td></tr></tbody></table>

물 박탈, 사카린 페이딩 또는 확장 액세스 교육을받지 않은 쥐에 에탄올의 강화 속성을 평가하는 방법

A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

조작 적 경구 자기 관리 방법은 일반적으로 동물의 에탄올 보강 특성을 연구하는 데 사용됩니다. 그러나, 표준 방법은 쥐에 응답 조건화을 시작 사카린 / 크로스 페이딩, 물 부족 및 / 또는 확장 훈련이 필요합니다. 이 논문은 신속하게 실험자에 편리하고, 따라서 에탄올 조작 적 자기 관리 연구에서 감미료를 사용하는 잠재적 인 혼란을 제거, 물 부족 또는 사카린 / 크로스 페이딩을 필요로하지 않습니다 에탄올에 대한 응답 조건화를 시작하는 새롭고 효율적인 방법을 설명합니다. 이 방법의 Wistar 래트는 일반적으로 취득 훈련 2 주 미만으로 20 % 에탄올 용액 자체 투여를 유지한다. 또한, 혈중 에탄올 농도와 보상을 적극적으로 30 분 자기 관리 세션에 상관 관계가있다. 또한, 날트렉손은 밝혀졌다 알코올 의존에 대한 FDA 승인 약물은 에탄올 자기 관리를 억제설치류에서, 투여 량 의존적으로하여 쥐에서 알코올의 강화 특성을 연구하는 새로운 방법의 사용을 검증, 쥐의 자기 관리 20 % 에탄올 알코올을 소비하는 알코올 섭취와 의욕을 감소시킨다.

그림 1에 FR1 일정에 훈련 operant- 및 약물 순진 위 스타 쥐의 대표적인 자기 관리 행동 (8 개 집단이 239 쥐의 총 금액)를 보여줍니다 물 부족 또는 사카린 / 크로스 페이딩없이 20 %의 에탄올을 자기 - 관리 30 분 세션 동안. 이 프로토콜로, 쥐가 레버 이미 매우 빠르게 에탄올 보상을 얻기 위해 눌러 첫 번째 세션 (그림 1A) 동안 10 개 이상의 보상을 획득을 시작합니다. 그들은 0.86 g / kg의 평균 에탄올 섭취에 해당하는 FR1 (그림 1B)에 23.7 ± 0.7 보상의 평균을 획득, 자기 관리의 세션 (10)에 의해 활성 레버 안정적인 응답 속도에 도달합니다. 도 2는 알콜 자기 - 투여에 날트렉손 다른...

이 프로토콜은 빨리 물 부족하거나 응답을 시작하는 페이딩 사카린 / 크로스를 필요로하지 않는 표준 방법과 달리, 쥐에서 에탄올에 대한 응답 조건화를 시작하는 새롭고 효율적인 방법을 설명합니다.

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 실험자에게 편리하며, 표준 방법과 달리 수분 제한이나 사카린-자당 페이딩(saccharin sucrose fading)이 필요하지 않은 방법을 통해 쥐의 알코올에 대한 조작적 반응을 빠르게 유도하는 것입니다. 따라서 이 방법은 쥐의 알코올 추구 과정에서 알코올 보상의 신경생물학 및 신경약리학에 관한 핵심 질문을 해결하는 데 매우 유용한 도구입니다. 이 기술의 주요 장점은 쥐의 알코올 반응을 유도하기 위해 사카린-자당 페이딩 과정이 필요하지 않다는 점입니다.먼저 에탄올 자가 투여 절차에서 감미료 사용으로 인해 발생할 수 있는 잠재적 문제점을 제거합니다. 본 실험을 위해 200에서 225g 무게의 쥐를 준비합니다. 여기서는 Wistar 수컷 쥐가 사용되었습니다.실험 근거에 따라 동물을 개별 또는 쌍으로 사육하십시오. 온도와 습도가 조절된 환경에서 12-12시간 역전 광주기(light-dark cycle)를 유지하고, 암기(dark phase) 동안 실험을 수행하십시오. 매주 동물의 체중을 측정하고, 실험 시작 전 최소 일주일 동안 적응 기간을 가지십시오.쥐의 먹이와 물 섭취를 제한하지 마십시오. 이는 조건 형성에 필요하지 않습니다. 모든 행동 훈련은 플러드 그리드와 폐기물 팬이 갖춰진 동일한 크기의 오퍼런트 챔버에서 수행하십시오.챔버는 통풍구가 있는 방음 큐비클에 장착되어야 합니다. 각 챔버에는 자극등, 시린지 펌프 및 두 개의 개폐식 레버가 있어야 합니다. 레버는 액체 컵 용기의 측면에 위치해야 합니다.각 챔버는 컴퓨터 인터페이스를 통한 자동 제어 하에 있어야 합니다. 이 소프트웨어를 사용하여 필요에 따라 조작성 조건화 프로그램을 준비하십시오. 예를 들어, 다음 명령들을 실행하십시오.두 개의 레버를 확장하여 세션의 시작을 알리고 알코올 이용 가능 여부를 신호합니다. 에탄올 레버를 누르면 인접한 음용 웰(drinking well)에 20% ethanol 100 µL가 제공되도록 하고, 5초 동안 타임아웃 시간을 갖게 합니다. 타임아웃 상태는 레버 위의 큐 라이트(cue light)를 점등하여 알립니다.다른 레버는 눌렀을 때 프로그램된 결과가 없으며, 비특이적 행동에 대한 대조군 역할을 합니다. 타임아웃 기간 중에도 쥐가 레버를 어떻게 사용하는지 기록하되, 쥐에게는 아무런 결과가 주어지지 않습니다. 30분 후, 두 레버를 회수하여 세션이 종료되었음을 알립니다.95% 에탄올과 수돗물로 제조한 에탄올 용액을 주사기에 채웁니다. 탭 라인에 공기 방울이 유입되지 않도록 주의하며 용액을 주입합니다. 용액의 흐름을 수동으로 확인합니다.항상 장치를 수동으로 테스트하십시오. 또한, 모든 세션을 시작하기 전에 용액 수용기를 항상 건조시키십시오. 세션을 시작하기 전, 소프트웨어 제어 프로그램을 로드하고 모든 기능이 정상적으로 작동하는지 확인하십시오.운반용 케이지를 이용하여 쥐들을 시험실로 이동시키고, 각 챔버에 쥐를 한 마리씩 배치합니다. 시험실의 온도와 습도는 사육실과 동일하게 유지하십시오. 각 세션마다 동일한 시간대에, 일관된 방식으로 쥐들을 챔버에 넣습니다.그 다음 소프트웨어를 실행하여 세션을 시작하십시오. 세션이 종료되면 쥐들을 사육실로 되돌리고 소독제를 사용하여 조작성 조건 형성 케이지를 세척하십시오. 세션은 매일, 주 5~6회 실시하십시오.각 세션 후, 활성 레버 누름, 비활성 레버 누름 및 알코올 보상의 평균 횟수를 계산합니다. 3회 연속 세션 동안 보상 값이 15% 이상 변하지 않을 때 수행 능력이 안정화된 것으로 간주합니다. 안정된 기저선 상태의 쥐를 대상으로 조작을 수행할 수 있습니다. 안정화된 기저선 상태의 쥐를 위한 가능한 조작 방법 중 하나는 에탄올 보상에 대한 동기를 평가하는 것입니다.이를 위해 점진적 비율 일정(progressive ratio schedule)을 적용합니다. 초기에는 레버를 한 번 누를 때마다 일정량의 알코올이 제공되도록 챔버를 설정하되, 알코올 강화제가 제공된 후에는 다음 제공을 위해 필요한 레버 누름 횟수를 계속해서 늘립니다. 각 동물은 마지막으로 획득한 강화제를 위해 수행한 누름 횟수에 해당하는 중단점(break point)에 도달하게 됩니다.이 모델은 승인된 알코올 중독 치료제인 naltrexone을 사용하여 예측 타당성을 평가하였습니다. 실제로 예측 타당성이 입증되었으며, 따라서 이 모델은 새로운 약물 후보 물질을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 우선, 쥐가 주사에 익숙해지도록 각 세션 30분 전에 식염수를 주입하십시오.세션 결과를 분석하고, 마지막 두 세션 간의 보상 횟수 차이가 15% 이하일 때 다음 단계로 진행하십시오. 그런 다음, pH를 중성으로 조정한 식염수에 naltrexone을 넣어 투여하십시오. 서로 다른 처리군과 처리하지 않은 대조군 간의 테스트 순서를 무작위로 정하십시오.약물 투여 사이에 각 쥐가 처치 없이 식염수만 노출되는 일반 세션을 두 번 거치게 합니다. 이는 세척 기간(washout period) 역할을 하며, 쥐의 상태를 초기화합니다. 최종적으로 각 조건화된 쥐가 모든 처치 수준을 한 번씩 받고, 대조군 처치를 한 번 받을 때까지 테스트를 반복합니다.데이터를 분석한 후, 점진적 비율 테스트(progressive ratio testing) 기간 동안 동물에게 투여할 가장 효과적인 용량을 선택할 수 있습니다. 설명된 프로토콜을 사용하여, 8개의 서로 다른 코호트에서 유래한 239마리의 쥐를 대상으로 수분 제한이나 사카린-설탕 페이딩(saccharin sucrose fading) 없이 알코올 보상을 자가 투여하도록 훈련시켰습니다. 쥐들은 빠르게 레버 누르기를 시작하여 첫 번째 세션에서 10회 이상의 보상을 얻었습니다.결과적으로 쥐들은 안정적인 반응률을 얻었으며, 각 30분 세션당 약 24회의 보상을 획득했습니다. FDA 승인 약물인 naltrexone을 세 가지 농도로 테스트했습니다. 예상대로 naltrexone 처리는 알코올 자가 투여의 용량 의존적 감소를 유도하였으며, 이는 본 프로토콜에 대한 중요한 약리학적 검증을 제공하였습니다.또한 예상대로, break point 측정치의 감소에서 알 수 있듯이 naltrexone은 점진적 비율 계획(progressive ratio schedule) 하에서 쥐의 알코올에 대한 동기를 감소시켰습니다. 이 영상을 시청한 후에는 수분 제한이나 사카린-설탕 페이딩(saccharin sucrose fading) 절차를 사용하지 않고 쥐의 에탄올 조작적 반응을 빠르게 유도하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이 프로토콜을 통해 쥐는 약 2주 만에 약리학적으로 유의미한 혈중 알코올 농도를 나타내는 안정적인 자가 투여율을 습득하게 됩니다.이 절차를 수행할 때는 일일 조건을 최대한 일정하게 유지하는 것이 중요합니다. 또한 첫 번째 강화 반응부터 에탄올이 수용기에 정확하게 전달되는 것이 매우 중요한데, 어떠한 오작동이라도 발생하면 에탄올 자가 투여의 습득이 변경되거나 지연될 수 있기 때문입니다. 본 절차 이후에는 알코올 탐색 및 섭취의 신경학적 기초를 연구하기 위한 다른 실험들을 수행할 수 있습니다.

a-method-for-evaluating-reinforcing-properties-ethanol-rats-without

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

에 대한 에탄올의 sedating 효과를 측정하는 간단한...

파리에서 에탄올 민감도를 측정하는 간단한 방법

음식이나 약물 이점 단서에 대한 응답을하는 것은 금욕의 기간 동안 증가하고 이것은 재발 행동으로 증가 자화율과 관련 있습니다. 자기 관리 자당을 가지고 쥐이 '갈망의 배양 "을 평가하기위한 우리가 세부 절차를.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

operant 에탄올 동안 쥐의 뇌에 에탄올 농도의 시간 코스를 결정하는 방법은 자기 관리가 설명되어 있습니다. 가 생성되는 작은 볼륨에 필요한 감도를 가지고 있기 때문에 불꽃 이온화 검출과 가스 크로마토 그래피는, dialysate 샘플에 에탄올을 수량화하는 데 사용됩니다.

가스 크로마토 그래피에 의한 operant 에탄올 자기 관리 및 에탄올 결정시 에탄올의 Microdialysis

구강 자기 관리 : 현재의 연구는 실험실 쥐의 입맛 솔루션의 보강 효과를 평가하기위한 새로운 절차를 평가합니다. 이를 위해 조작 적 서로 다른 농도의 달콤한 솔루션의 구강 내 주입을위한 (즉, 레버를 눌러) 응답은 강화를 지속적으로 진보적 인 비율의 일정에 따라 측정 하였다.

실험실 쥐에 Tastants의 강화 속성을 평가하기위한 새로운 방법 : 조작 적 구강 자기 관리

절차는 쥐에서 알코올 추구 행동의 갱신을 설명한다 트리거 알코올 연관된 환경 콘텍스트의 용량을 연구.

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초파리에서 에탄올 민감도와 빠른 내성을 측정하기 위한 간단한 분석은 이러한 중요한 에탄올 관련 행동을 조사하기 위해 이 모델 유기체의 사용을 용이하게 합니다. 여기에서는 파리의 에탄올 감도와 빠른 내성을 측정하기 위한 비교적 간단하고 확장 가능한 분석법이 설명됩니다.

에탄올 진정 감도 및 신속한 공차 측정을위한 저렴하고 확장 가능한 행동 분석<em&gt; 초파리</em

이 연구의 목적은 쥐의 지방과 설탕의 소설 섭취 후 도파민 경로 및 터미널 사이트에서 동시에 변화를 측정하기 위해 휴대 C-FOS 활성화를 사용하여 신뢰할 수있는 면역 조직 기술을 서술하여 보상 관련 분산 뇌 네트워크를 식별하는 것입니다.

흰쥐의 나이브 설탕과 지방 섭취에 따라 변연계와 Mesocortical 도파민 보상 사이트에서 C-에 Fos 활성화의 동시 검출

우리는 보람 유도 및 보상 상태의 변화에 대한 조치로 자발적인 에탄올 소비를 사용하여 초파리 (Drosophila의 melanogaster의) 경험을 nonrewarding위한 프로토콜을 설명합니다.

사용 보상 추구 행동의 변화를 측정하는 간단한 방법<em&gt; 노랑 초파리</em

여기에 제시 된 쥐에서 우울증과 같은 과금 행동을 연구하는 프로토콜입니다. 그것은 두 개의 잘 확립 된 행동 방법, 자당 환경 설정 및 참신 유도 hypophagia 테스트, 자동화 된 식품 및 액체 섭취 모니터링 시스템을 결합, 간접적으로 대리 매개 변수를 사용 하 여 설치류 행동을 조사.

자동 식품 섭취 모니터링 시스템을 사용하여 쥐에서 자당 선호 및 참신 유도 Hypophagia 테스트

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