Name: C57BL / 6 마우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: 학습하세요 C57BL/6 마우스에서 BM12 림프구 전이를 이용한 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 모델의 면역세포 역학을 유동세포측정법으로 분석하는 방법을. 이 기법은 T follicular helper 세포, 생식중심 B 세포 및 형질세포의 확장을 특성화하여 자가면역 질환의 분자 경로와 치료 표적을 연구하는 데 활용됩니다.

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이 연구는 루푸스 연구소, NCI 보조금 CA138617, NIDDK 보조금 DK090978, 샬롯 슈미들랍 상(E.M.J.에게) 및 앨버트 J. 라이언 펠로우십(J.K.에게)의 일부 지원을 받았습니다. NIH AR-47363, NIH DK78392 및 NIH DK90971의 일부 지원을 받는 Cincinnati Children's Hospital Medical Center 류마티스학과의 Research Flow Cytometry Core에서 제공하는 지원과 기기에 감사드립니다.

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BM12 유도 모델은 SLE의 세포 및 분자 프로세스를 연구하는 비교적 간단하고 효율적인 방법입니다. 자기 항원에 대해 지시 적응 적 전송 CD4 T 세포의 활성화는 만성 여기 기술 된 바와 같이, 유동 세포 계측법에 의해 측정 될 수 TFH, GC B 세포와 플라즈마 세포의 축적에 이르게. 빠르고 쉽게 SLE 환자에서 발생하는 것과 유사하고, 궁극적으로 병리 적자가 항체의 축적을 제어하는​​자가 면역 배 중심 공정에서 후보 유전자 및 신규 치료법의 역할을 할 수 심문이 모델을 이용하여 미래 연구. 또한, 여기에 설명 유세포 분석을 비롯한 면역 글로불린의 추가 개발을 포함 마우스 모델을 연구하는 데 사용하지만,자가 면역, 감염, 및 알레르기에 한정 될 수 없다. 인간의 질병의 모든 동물 모델과 마찬가지로이 모델은 한계가있다. 어떤 질병 (STABLE)와 속도 감안할 때OPS와 그 크기는 SLE의 개발에 관련된 모든 유전자는이 모델에 필요한 병원성 될 가능성이 없다. 데이터가 ...

전신성 홍 반성 루푸스 (SLE)는 항핵 항체 (ANA) 생산 및 사구체 신염을 특징으로 prototypically 복잡한자가 면역 질환이다. 많은 다른 피부를 포함하여 후유증, 심장 - 폐 및 간 병변은 몇몇 개인의 질병과 관련이있다. 미국에서 보급 추정치는 여성과 소수 민족 (3)에서 특히 높은 빈도로, 150,000-1,500,000 1, 2에서 널리 다릅니다. SLE의 원인이 식별 곤란 하였지만, 전신성자가 면역에 절정 다양한 유전 적 및 환경 적 요인의 상호 작용으로부터 발생하는 것으로 생각된다. 많은 동물 모델은 질병 발병과 진행으로 이어지는 요인을 연구하기 위해 사용되었다. SLE의 클래식 마우스 모델은 P 등 안에 1000mg F1 모델과 NZM 유도체, MLR / LPR 변형 및 BXSB / YAA 변형 및 유도 시스템 NZB x를 포함하여 유 전적으로 걸리기 마우스 균주를 포함ristane 및 만성 이식편 대 숙주 질환 (cGVHD) 모델 4. GVHD 모델에서자가 항체 생산의 초기 보고서는 F1 전송 5에 부모에 대한 다양한 마우스 균주 또는 햄스터 균주를 사용 - 8; 루푸스와 같은 질병을 연구하는 데 더 일반적인 방법은 현재 DBA / 2 부모 → (C57BL / 6 ×의 DBA / 2) F1, 여기에 설명 된 BM12 전송 모델을 포함한다. 각 모델은 자신의주의를 가지고 있지만, 그들은 일반적으로 인간의 질병의 임상 적 특징과 상관 관계 기능의 공통 집합을 공유합니다. 마우스 모델에서 가장 흔히보고 된 파라미터는, 비장 종대, 신장염, ANA 생산을 포함하고, 세포 수준에서, T 모낭 헬퍼 세포 (TFH), 배 중심 (GC) B 세포와 플라즈마 세포의 팽창. H2 - - AB1 BM12 / KhEgJ (BM12) 마우스, 변형 내가 유도 BM12 모델은 IA BM12 B6 (C)에서 림프구의 입양 전송에 의해 달성된다MHC 클래스 II에 3 아미노산 치환을 제외하고 C57BL / 6 dentical, IA에 C57BL / 6 (B6) 마우스 나. 받는 사람 장갑차에 의한 기증자 CD4 T 세포의 Alloactivati​​on는 증상이 밀접하게 SLE를 닮은으로 cGVHD로 연결됩니다. 특히, 이러한 도너 유래 TFH의 팽창, 수신자 유래 GC의 B 세포와 플라즈마 세포의 팽창 및 항 dsDNA, 항 ssDNA를 방지 염색질 및 안티 RBC 항체 9 포함한 아나의 생산을 포함한다. 시간이 지남에 따라,받는 사람 마우스는 사구체 간질에 IgG의 예금 및 신장 (10)의 혈관 영역과 관련된 사구체 신염을 개발한다. 우리는 최근 인간의 질병과 유사한, 나는이 모델 11 IFN 유형에 대한 중요한 역할도 있습니다, 것으로 나타났습니다. 특히, 인간 SLE 대한 정의 기준은 항 dsDNA의 존재 하에서 SLE와 호환 신염의 개발이 마우스 모델의 두드러진 특징은 둘 다 12 항체를 포함한다. 있다 SE자연 모델에 비해 BM12 모델의 veral 장점. 자발적으로 SLE 같은 징후를 개발 클래식 모델은 녹아웃하거나 유전자 변형 마우스 어렵고 시간이 많이 소요하는 교차 만든다 하이브리드 마우스 변종이 아닌 B6 배경에 B6 배경, 또는 대형 유전 좌위에 근친 마우스 균주 중 하나에 의존한다. BM12 유도 모델, 유전자 변형 마우스는 특정 유전자 질환에 중요 할 수있는 셀룰러 구획의보다 신속한 식별을 허용 도너 또는 수신자 중 하나의 역할을 할 수있다. 또한, BM12 모델 질환 개발은 대부분 자발적 모델 수개월에 비해 아나의 출현까지 단지 2 주 필요한 훨씬 빠르다. 또한, 서로 다른 시점에서 질환이 자발적 모델 달리 BM12의 → B6의 모델에서 질병의 발병 및 진행은 고도로 동기화된다. 이것은 수 b 적절한 크기의 코호트 생성을 허용전자는 질병 개발의 모든 단계에서 중재 또는 치료 전략에 사용됩니다. 다음은 B6 배경에 C57BL / 6 마​​우스에 BM12 림프구의 입양 전송, 또는 유전자 변형에 의해 전신성 홍 반성 루푸스와 같은자가 면역을 개시하기위한 상세한 프로토콜입니다. 또한, 우리는 TFH, GC B 세포를 열거하는 유세포 염색 프로토콜을 기술하고, 형질 세포 - 세포 유형은 인간의 질병과 관련된. 중요한 것은, 이러한 프로토콜은 SLE의 대부분의 마우스 모델에서 질병의 특성 및 기타 질병 모델에서 TFH, GC B 세포와 플라즈마 세포를 식별하기 위해 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>나6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>CD45.1+ BoyJ 마우스 균주</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>Bm12 마우스 균주</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>유전형 분석을 위한 제한 소화 효소</td></tr><tr><td>1X RBC 용해 버퍼</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>혈장 분리 튜브 (PST)</td><td>BD</td><td>365974</td><td>디칼륨 EDTA</td></tr><tr><td>혈청 분리 튜브 (SST)</td><td>BD</td><td>365967</td><td>혈액 수집 튜브와 응고 활성제 / SST 젤</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE 헬스케어</td><td>17-1440-02&nbsp;</td><td>고밀도 세포 분리 솔루션</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>고밀도 세포 분리 솔루션</td></tr><tr><td>GL-7-biotin</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>고정 생존도 염료 ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>1.2ml FACS 튜브 인서트, 랙형</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&trade; 라운드 바텀 튜브</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

c57bl / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 bm12 유도 성 모델 (sle)

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

전신성 홍반성 루푸스(SLE)는 다양한 임상적, 면역학적 증상을 보이는 자가면역 질환입니다. 여러 자발적이고 유도 가능한 동물 모델은 bm12 전달 모델을 포함하여 인간 질병의 일반적인 구성 요소를 반영합니다. bm12 비장 세포 또는 정제된 CD4 T 세포의 이식 시, C57BL/6 마우스는 높은 수준의 순환 항핵 항체를 수반하는 T 여포 보조 세포(Tfh), 생식 중심(GC) B 세포 및 형질 세포의 큰 빈도로 빠르게 발달합니다. 이 모델은 순수한 C57BL/6 배경의 마우스를 사용하기 때문에 연구원들은 비교적 짧은 기간에 형질전환 또는 녹아웃 마우스 균주의 질병 진행을 빠르고 쉽게 연구할 수 있습니다. 여기에서는 다중 색상 유세포 분석을 통한 모델 및 정량 Tfh, GC B 세포 및 형질 세포의 유도를 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 중요한 것은 이러한 프로토콜이 SLE의 대부분의 마우스 모델에서 질병을 특성화하고 다른 질병 모델에서 Tfh, GC B 세포 및 형질 세포를 식별하는 데에도 사용할 수 있다는 것입니다.

병에 걸린 마우스는 질량과 세포 수 (그림 2)의 측면에서 비장을 2 ~ 3 회 건강한 쥐의 크기를 나타내는, 적은 14 일 종대을 개발한다. 비장 세포는 순차적으로 빛 산란 (SSC-에 의해 FSC-A)에 문이있다, 이중선 (FSC-으로 FSC-W 또는 -H), 생존 세포 (생존 염료의 낮은 염색) 및 CD4 + TCRβ + (그림의 제거 3A). 공여 세포는 CD45.1 및 CD45.2 (도 3b, 왼쪽 아래)에 기초하여 수신자 세포로부터 구별된다. PD-1, CXCR5,과 Bcl-6, 및 ICOS (도 3B, C)의 상향 조절을 특징으로 공여 세포는 주로, T의 모낭 헬퍼 (TFH) 세포의 표현형을 채택한다. 수신자 CD4 T 세포 집단의 일부는 또한 TFH (도 3b...

bm12 림프구가 C57BL/6 수용자로 이식되는 것은 전신 홍반성 루푸스의 확립된 모델입니다. 여기에서는 이 모델을 사용하여 질병을 시작하는 방법과 유세포 분석을 통해 T 여포 보조 세포, 생식 중심 B 세포 및 형질 세포를 특성화하는 방법을 설명합니다.

C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

이 절차의 전반적인 목표는 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE)의 BM 12 모델에서 유세포 분석법을 통해 T follicular helper 세포, germinal center, B 세포 및 형질 세포의 확장을 특성화하는 것입니다. 이 방법은 특정 분자 경로를 표적으로 하는 치료제가 질병의 진행을 중단하거나 늦출 수 있는지와 같은 루푸스 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 SLE 모델의 주요 장점은 순수 C57BL/6 배경의 마우스를 사용한다는 점이며, 이를 통해 연구자는 비교적 짧은 기간 내에 형질전환 또는 knockout 마우스 계통에서 질병 진행을 쉽고 빠르게 연구할 수 있습니다.BM 12 공여자 세포를 분리하여 마우스에 주입한 후, 텍스트 프로토콜에 따라 이식 효율을 결정하고 마우스를 안락사시킨 다음, 70% 에탄올을 가볍게 뿌려 마우스의 복부를 적신 후 수술용 가위를 사용합니다. 생식기에서 약 1cm 위 지점에 작은 표면 절개를 만들고, 복막 근막을 유지한 상태에서 복부 피부를 흉골 방향으로 당깁니다. 5mL 주사기에 18게이지 바늘을 장착하고, 바늘 끝이 동물의 머리 쪽을 향하게 하여 근막 평면과 15도 각도를 이루도록 배치합니다.바늘을 복부의 우하복부에 삽입하십시오. 복수를 흡인하는 동안 바늘이 장으로 인해 막히는 것을 방지하기 위해 바늘을 맹장 끝단 근처에 위치시킵니다. 그다음, 마우스를 조심스럽게 옆으로 돌리십시오.그다음 복수를 천천히 시린지로 흡입합니다. 복수를 회수한 후, 시린지를 이동시켜 시린지 측면의 눈금을 통해 흡입된 부피를 기록합니다. 복수를 5 mL 라운드 바텀 튜브에 옮기고, 나중에 혈액을 수확하기 위해 얼음에 보관합니다.이전에 발표된 방식대로 대정맥 또는 하대정맥(IVC)에서 채혈합니다. 인형용 포셉을 사용하여 장을 마우스의 왼쪽으로 조심스럽게 이동시켜 IVC를 노출시킵니다. 1mL 주사기에 장착된 27.5 gauge 바늘을 IVC에 삽입하고, 용혈을 최소화하기 위해 400~500 µL의 혈액을 천천히 채취합니다.추가적인 관련 조직을 적출하기 위해 0.5 milliliter 마이크로 원심분리기 튜브, 혈청 또는 혈장 수집 튜브에 혈액을 천천히 주입합니다. 장을 동물의 오른쪽으로 조심스럽게 밀어 넣고 췌장을 당겨 비장을 제거합니다. 부착되어 남아 있는 췌장 조직이나 비장 림프절을 모두 제거합니다.그다음 적출 직

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연구

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Medicine

의학

이 동영상은 어떻게 조직 병리학하여 심각도를 평가하기 위해 SJL 마우스 및 면역 hypophysitis를 유도하는 방법을 보여줍니다.

SJL 마우스의 실험적 면역 Hypophysitis의 유도

이 비디오는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질과 불활성화된 결핵균의 조합을 주입하여 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 유도하는 방법을 보여줍니다. 이 모델을 통해 연구원들은 질병 메커니즘을 연구하고 치료 개입을 테스트할 수 있습니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

실험자가 면역 뇌척수염 (EAE)는 다발성 경화증의 설립 동물 모델입니다. C57BL / 6 마우스는 중추 신경계 자기 반응성 면역 세포에 의해 야기 오름차순 이완성 마비를 초래 미엘린 희소 돌기 아교 세포의 당 단백질 (MOG) 펩티드 35-55 (MOG 35-55)로 면역화된다. 질병 유도 및 모니터링을위한 프로토콜이 논의 될 것이다.

수초 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 쥐에 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 유도

이 원고는 다양한 질병 단계에서 각각 유세포 분석 및 정량적 PCR을 사용하여 림프절, 비장, 혈액 및 척수의 면역 세포 분포 및 mRNA 사이토카인 수치를 평가하는 방법과 함께 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델의 유도 및 채점 방법을 설명합니다.

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

이 프로토콜은 실험적 자가면역 뇌척수염에 대한 약물 치료가 면역 세포 침투를 억제한 결과로 중추신경계 보호를 보여주는지 또는 면역 세포 침투의 맹공격 동안 신경 보호를 보여주는지 확인하는 방법을 설명합니다.

자가 면역 탈수 초화의 약리 개입에 대한 CNS 보호 대 결정 면역 시스템 억제

여기에서 우리는 C57BL에 있는 bleomycin의 내적 주입에 의하여 폐 상해의 유도다음 전체 탯줄에서 장악된 정맥 주입된 인간 중간엽 기질 세포의 항섬유성 활성을 조사하는 효과적인 방법을 제시합니다. /6 마우스. 이 프로토콜은 다른 치료제의 전임상 시험으로 쉽게 확장될 수 있다.

Bleomycin의 내시경 주입에 의한 마우스 폐 손상의 유도

본 프로토콜은 마우스에서 루푸스 진행을 추적하는 방법을 기술한다. 세포 침윤과 신장에서의 단백질 침착을 기반으로 루푸스 신염을 특성화하기위한 두 가지 추가 절차가 제시됩니다.

단백뇨, 백혈구의 신장 침윤 및 루푸스가 발생하기 쉬운 MRL / lpr 마우스에서 단백질의 신장 침착 분석

본 프로토콜은 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질을 사용하는 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 임상 스코어링 시스템을 사용하여 질환 과정을 모니터링하는 것을 설명한다. 실험적 자가면역 뇌척수염 관련 증상은 마우스 대퇴골 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 분석 및 오픈 필드 테스트를 사용하여 분석되어 질병 과정을 종합적으로 평가합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 다양한 평가 지표

실험적 자가면역 뇌척수염은 다발성 경화증에서 가장 널리 사용되는 쥐 모델 중 하나입니다. 현재 프로토콜에서는 남녀 모두의 C57BL/6J 마우스에 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드를 면역하여 주로 꼬리와 팔다리의 상행 마비를 초래합니다. 여기서는 EAE 유도 및 평가 프로토콜에 대해 논의합니다.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

본 연구에서는 SKG 마우스에서 CD4+ T 세포를 이식하여 류마티스 관절염(RA) 마우스 모델을 확립하는 프로토콜을 보고하며, 이를 통해 RA에 대한 면역학적 기전, 병리학적 진행 및 새로운 치료법 개발을 조사하기 위한 빠르고 신뢰할 수 있는 실험 도구를 제공합니다.

An Adoptive Transfer Model of Rheumatoid Arthritis in Mice

학습하세요 C57BL/6 마우스에서 BM12 림프구 전이를 이용한 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 모델의 면역세포 역학을 유동세포측정법으로 분석하는 방법을. 이 기법은 T follicular helper 세포, 생식중심 B 세포 및 형질세포의 확장을 특성화하여 자가면역 질환의 분자 경로와 치료 표적을 연구하는 데 활용됩니다.

C57BL / 6 마​​우스의 전신 홍 반성 루푸스의 BM12 유도 성 모델 (SLE)

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