Name: 효소 적, 화학 (메틸화) 및 물리 (질량 분석, 핵 자기 공명) 기법을 사용하여 공장 벽 Heteroxylans의 연속 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 49 s
Description: 배우세요 헤테로자일란의 환원 말단과 내부 글리코실 서열을 효소적 가수분해와 질량 분석, 핵 자기 공명을 통해 특성화하는 방법을. 이 통합 접근법은 식물 세포벽 다당류의 미세 구조 변화를 연구하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 프로젝트는 Food Futures Flagship을 통해 고섬유질 곡물 클러스터에 제공된 Commonwealth Scientific and Research Organisation Flagship Collaborative Research Program의 자금으로 지원되었습니다. AB는 또한 ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls(CE110001007)에 대한 ARC(Australia Research Council) 보조금의 지원을 인정합니다.

2- 아미노 벤즈 아미드와 W-졸 AX를의 감소 끝 1. 라벨은 (RE) 설탕 잔류 물 (2AB) <ol><li> 이들 형광 유도체 다당류 골격 사슬의 환원 말단을 변환하는 65 ° C에서 2 시간 동안 1 M의 NaBH 3 CN (시아 노 수소화 붕소 나트륨) (PH 5.5)의 존재하에 2AB (0.2 M)과 W-졸 AX를 부화. 주의 :이 물과 접촉 할 때의 NaBH 3 CN 독성 시아 나이드 기체를 방출 할 때 다음 단계 퓸 후드에서 수행되어야한다. <ol><li> 을 NaBH 3 CN (62.8 mg)을 칭량하고, 1 M의 NaBH 3 CN 용액을 조제 물에 microcentrifuge 관 (1.5 mL) 중의 (1 ㎖)에 녹인다. (65)에서 가열 한 M을 NaBH 3 CN 용액 (1 ml)에 2AB 시약 (27.2 ㎎)을 녹이고 &#160; ° C 10 % 아세트산으로 pH 5.5, 반응 혼합물 (0.2 M 2AB 1 M의 NaBH 3 CN)의 pH를 조정. </li><li> W-그래서에 반응 혼합물의 200 μL (0.2 M 2AB 1 M의 NaBH 3 CN)를 추가캡 유리관에서 패 AX를 (1 mg) 및은 볼텍스 믹서를 사용하여 혼합한다. 65에서 2 시간 동안 품어 &#160; 흄 후드에서 C를 °. RT에 정지 쿨 4 권을 추가합니다. 무수 에탄올. </li><li> 감기 저장소에 다당류를 침전 (4 ° C) O / N을 정지 놓습니다. </li><li> 원심 분리기 (1,500 XG, 10 분, RT)은 상층 액을 제거합니다. 각 세척 사이에 원심 분리, 무수 에탄올 (4 배), 아세톤 (1 배) 및 메탄올 (1 배)로 광범위하게 펠렛을 씻으십시오. 40 ° CO / N에서 진공 건조. 참고 : 광범위한 세척도 잔류 2AB을 제거합니다. </li></ol></li></ol> 2 AB 레이블 된에서 Xylo 올리고당의 2 세대 W-졸 AX를 <ol><li> 2AB는 마이크로 원심 튜브에서 아세트산 나트륨 완충액 500 μL (100 mm의 pH를 5) (1.5 ml)에 W-AX를 졸 (1 mg)을 표지 녹인다. endoxylanase의 4 단위 (GH (11), [M1]) 추가 37 부화 &#160; 16 시간 동안 C를 °. </li><li> 반응 믹스트을 가열하여 효소 활성을 파괴끓는 물을 욕조에 10 분 동안 URE. RT에 정지 쿨과 모자를 유리 튜브에 전송할 수 있습니다. 4 권을 추가합니다. 절대 에탄올과 냉장의 서스펜션을 배치 (4 ° C) O / N은 ​​소화되지 않은 다당류를 침전한다. </li><li> 원심 분리기 (1,500 XG, 10 분, RT)은 소화되지 않은 다당류 (펠렛)를 분리하고 endoxylanase은 (뜨는) xylo 올리고당을 생성합니다. 깨끗한 유리 튜브에 뜨는을 가만히 따르다과 따뜻한 물을 욕조 (40 ° C)에 배치합니다. </li><li> 종료점 부피 (~ 500 μL)을 질소 기류하에 에탄올을 증발시켰다. 4 시간 동안 -80 ° C에서 뜨는을 동결하고 xylo 올리고당을 복구하는 동결 건조기에서 냉동 뜨는을 건조. </li></ol> KOH-졸 AX를하고 2AB의 라벨에서 Xylo 올리고당의 3 세대 <ol><li> (섹션 2.1-2.4) 전술 한 바와 같이 xylo 올리고당을 생성하는 endoxylanase와 KOH-졸 AX를 (GH (11), [M1]을) 취급합니다. </li><li> endox 치료ylanase은 (섹션 1.1.1-1.1.2) 전술 한 바와 같이 2AB 반응 혼합물 (0.2 M 2AB, 1 M을 NaBH 3 CN)과 KOH-졸 AX를에서 xylo 올리고당을 생성합니다. </li><li> 깨끗한 유리 튜브에 뜨는을 가만히 따르다과 따뜻한 물을 욕조 (40 ° C)에 배치합니다. 종료점 부피 (~ 500 μL)을 질소 기류하에 에탄올을 증발시켰다. 4 시간 동안 -80 ° C에서 뜨는을 동결하고 xylo 올리고당을 복구하는 동결 건조기에서 냉동 뜨는을 건조. </li></ol> 4. MALDI-TOF-MS <ol><li> MALDI-매트릭스 솔루션의 제조 <ol><li> 튜브 (MALDI 매트릭스 용액)을 0.1 % 포름산을 함유하는 50 % 아세토 니트릴 (500 ㎖)에 2,5- dihydroxbenzoic 벤조산 (DHB)의 작은 국자를 추가한다. 신속 용해 경우, DHB의 또 다른 작은 국자를 추가, 소용돌이를 사용하여 섞는다. 참고 : MALDI-매트릭스 솔루션의 최적 농도는 10 μg의 인 / μL -1. </li></ol></li><li> MALDI-대상 플레​​이트의 제조 <ol><li> aqueo을 증착우리가 (기본) 샘플 (5 ~ 10 μg의)을 올리고당 MALDI-타겟 판 위에 (W-졸 및 / 또는 KOH-졸). 별도의 팁을 사용하여 0.3 ㎕를 MALDI-매트릭스 솔루션을 추가로 pipetting 아래로 섞는다. 혼합물을 실온에서 건조하도록 허용합니다. 참고 : 제대로 건조 샘플이 자리의 중심을 향해 가리키는 긴 바늘 모양의 결정으로 구성되어야합니다. 입금 스티커 및 / 또는 더럽혀진 경우 샘플이 너무 농축 또는 그의 염으로 구성 될 수도 있고, 이러한 침전물은 양호한 스펙트럼을 생성 할 가능성이 샘플을 추가로 정제한다. </li><li> MS는 소스로 표적 판을 소개하고 양 (+ 필자) 이온 모드로 동작한다. 이온 소스 (1)에서 19.0 kV로, 이온 소스 (2)에서 16.3로 kV의 가속 전압을 조정은 70 % 이상으로 레이저 출력을 조정한다. MALDI-대상 접시에 샘플 지점을 선택하고 레이저 촬영을 시작하기 위해 시작을 클릭합니다. 참고 : 대상의 모든 영역 신호를 생성하지 않습니다. 특정 장소 만에 하나 때문에 몇 레이저 샷에 대한 신호를 줄 것이다샘플 / 매트릭스 혼합물 또는 결정의 특성 고갈. <ol><li> 만족스러운 신호 - 대 - 잡음을 구하는 취득 평균 동안 약 200 무작위 스펙트럼을 타겟의 상이한 영역에 레이저를 이동. </li></ol></li></ol></li></ol> 5. ESI-QTOF-MS <ol><li> RP를 사용하여 전기 분무 이온화 (ESI) 온라인 크로마토 그래피 분리와 비행 (QTOF) MS 악기의 사중 극자 시간과 함께 나노 HPLC를 사용하여 endoxylanase 생성 된 올리고당 (기본)을 분석 C-18 컬럼 (75 μm의는 X 150mm, 3.5 μm의 비드 크기). <ol><li> 유리 병에 endoxylanase 생성 된 수성 올리고당 혼합물을 전송하고 HPLC 오토 샘플러에 배치합니다. 60 분에 걸쳐 각각 아세토 니트릴의 이동상을 0.1 % (v / v)의 물, 포름산 0.1 % (v / v)의 포름산 5-80%의 용출 구배를 프로그램. </li><li> 0.2 μL / 분의 유속을 조정한다. 스캔 범위에서 긍정적 인 이온 모드를 조정커튼 가스 (10) GS1 4 원 온도 100 ℃ 이온 분무 전압 2300 V, 잠재적 50 디 클러스터링 : 300-1,600 m / z 다음과 같이 초 ESI 소스 조건을 사용하여 0.5g / 주사의 주사 속도 V.를 실행 LC 크로마토 그래피 프로그램과 용출 올리고당. 그 결과 총 이온 크로마토 그램 (TIC)는 소프트웨어에 의해 자동으로 저장됩니다. </li><li> 저장된 TIC를 열고 추출 크로마토 그램을 선택합니다. 명령 줄에서 예상 질량 (예를 들어, 271, 403, 535, 667, 799 및 931m / Z)를 입력합니다. 입력을 클릭하여 스캔 크로마토 그램. 제조자의 지시에 따라 (14) 소프트웨어를 사용하여 ESI-QTOF MS 크로마토 그램 데이터의 선택 이온 스캔 처리한다. </li></ol></li></ol> 6. ESI-MS N <ol><li> 주사기를 사용하여의 nanospray 팁에 50 % 아세토 니트릴 샘플 당 O 메틸화 올리고당 1~2 μL를 넣고 (Pettolino 외. (1)에 의해 기술 된 바와 같이 메틸화). 손질유리 커터를 사용하여 나노 분무 팁은 MS에 부착 된 개별 나노 분무 홀더에 맞게. </li><li> 긍정적으로 예상 질량 범위 (200-1,500 m / z)와 커튼 가스 (10), ionspray 전압 1,900 V의 극성에 따라 질량을 설정합니다. </li><li> 관련 창을 열고 총 이온 스캔 (ESI-MS 1)를 얻었다 데이터 파일 이름을 입력 획득 버튼을 누릅니다. 그 다음 STOP 버튼을 누릅니다. </li><li> 관심의 피크를 단편화하는 제품 이온에서 스캔 유형을 변경합니다. 관심의 질량을 입력합니다 (예 : 885m / z) 조각화 및 질량 범위 (200~900m / Z)를 조절합니다. 획득 버튼을 누르면 부모 이온의 전체 조각 (885m / Z)를 달성하고 조각 이온 스캔 (ESI-MS 2) 취득 (위 / 아래로 화합물 탭) 충돌 에너지를 조정합니다. </li><li> 관심 (예를 들어, 711m / z)의 조각 이온의 질량을 입력하고 질량 범위를 조정 (200~720m / z). 획득 버튼의을 눌러전구체 이온의 전체 조각 (711m / z)를 달성 단편 이온 스캔 (ESI-MS (3))를 취득하는 충돌 에너지를 조정 거라고. </li></ol> 7. H 1 NMR 분광학 <ol><li> D 2 O의 플라스틱 시험관 (1.0 ㎖, 99.9 %) (15 ml)에 올리고당 endoxylanase 생성 혼합물 (KOH 졸, 기본 체) (~ 500 μg의)을 녹인다. 4 시간 동안 -80 ° C에서 현탁액을 동결하고 xylo 올리고당을 복구하는 동결 건조기에서 동결 된 현탁액을 건조. </li><li> 완전 D 2 O로 H 2 O를 교환하기 위해 7.1 회 반복 </li><li> D 2 O에 (0.6 ml를, 99.9 %)을 건조 올리고당을 분해하고 내부 표준으로 아세톤 0.5 μL (D 2 O 5 %)를 추가합니다. NMR의 샘플 튜브에 중수 소화 올리고당을 전송합니다. </li><li> 상단에 의한 NMR 튜브를 포함하는 샘플을 잡고 플라스틱 스피너에서 샘플 튜브를 삽입합니다. 샘플 깊이 게이지의 회 전자를 놓습니다. 고름H는 샘플 상하 깊이 게이지의 중심선이 동일하도록 시료의 깊이를 조절하기 위해 시료 튜브를 당기거나. </li><li> 깊이 게이지를 제거하고 냉동 프로브가 장착 된 600 MHz의 NMR 분광계에 부착 된 자동 샘플러로 샘플을 삽입합니다. </li><li> 로그인 및 오픈 분광계 제어 소프트웨어. 샘플 파일 이름을 입력합니다. 기존 데이터 집합을 열고 다음 새 이름으로 저장 &quot;EDC&quot;명령을 사용합니다. 자동 샘플러의 샘플의 위치 번호를 입력하고 &quot;ENTER&quot;키를 누릅니다. 참고 :이 프로브의 상부에 위치한다 자석 구멍에 조심스럽게 샘플 튜브를 드롭 것 &quot;ENTER&quot;버튼을 누르면. </li><li> 명령 줄에서 &quot;edte&quot;를 입력하여 원하는 샘플 온도를 설정합니다. 다음 단계로 진행하기 전에 원하는 값에 도달하기 위해 시료 온도 기다린다. 입력 명령 행에서 &quot;잠금&quot;적절한 용매를 선택 (D 2 O). &amp; # 기다립니다(34); 창 하단에 표시 완료 &quot;메시지를 잠급니다. </li><li> 명령 줄에서 &quot;ATMM&quot;를 입력하고 ATMM 메뉴 바의 상단에있는 &quot;최적화&quot;를 클릭합니다. 선택된 채널 (이 경우 1 H)에 대한 조정 및 프로브의 매칭 시작을 선택합니다. </li><li> 균일 한 자기장이 명령 줄에서 &quot;ZG&quot;를 입력하고 입력하여 sample.Acquire 주위에 신호를 얻을 때까지 약간의 조정이 자기장에 대한되는 shimming 프로세스에 대한 명령 줄에서 &quot;topshim&quot;를 입력합니다. </li><li> 2.225 ppm으로 아세톤 내부 표준에 언급 한 H 화학 시프트 제조업체의 지시에 따라 소프트웨어 (15)를 사용하여 스펙트럼을 분석한다. </li></ol>

<ol><li>Pettolino, F. A., Walsh, C., Fincher, G. B., Bacic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+the+polysaccharide+composition+of+plant+cell+walls%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Determining the polysaccharide composition of plant cell walls.</a> Nature Protocols. 7, 1590-1607 (2012).</li>
<li>Ratnayake, S., Beahan, C. T., Callahan, D. L., Bacic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reducing+end+sequence+of+wheat+endosperm+cell+wall+arabinoxylans%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">The reducing end sequence of wheat endosperm cell wall arabinoxylans.</a> Carbohydr. Res. 386, 23-32 (2014).</li>
<li>Bacic, A., Harris, P. J., Stone, B. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBacic%2C+A+%22The+Biochemistry+of+Plants%2C+Vol.+14%2C+Carbohydrates%22">The Biochemistry of Plants, Vol. 14, Carbohydrates</a>. Preiss, J. 14, Academic Press. San Diego. 297-371 (1988).</li>
<li>York, W. S., O'Neill, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+control+of+xylan+biosynthesis+-+which+end+is+up%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Biochemical control of xylan biosynthesis - which end is up?</a> Plant Biol. 11, 258-265 (2008).</li>
<li>Fincher, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revolutionary+times+in+our+understanding+of+cell+wall+biosynthesis+and+remodeling+in+the+grasses%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Revolutionary times in our understanding of cell wall biosynthesis and remodeling in the grasses.</a> Plant Physiol. 149, 27-37 (2009).</li>
<li>Faik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xylan+Biosynthesis%3A+News+from+the+Grass%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Xylan Biosynthesis: News from the Grass.</a> Plant Physiol. 153, 396-402 (2010).</li>
<li>Scheller, H. V., Ulskov, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemicelluloses%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Hemicelluloses.</a> Annu. Rev. Plant Biol. 61, 263-289 (2010).</li>
<li>Bacic, A., Stone, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+%281%E2%86%923%29-+and+%281%E2%86%924%29-linked+%CE%B2-D-glucan+in+the+endosperm+cell-wall+of+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">A (1→3)- and (1→4)-linked β-D-glucan in the endosperm cell-wall of wheat.</a> Carbohydr. Res. 82 (13), 372-377 (1980).</li>
<li>Comino, P., Collins, H., Lahnstein, J., Beahan, C., Gidley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+soluble+and+insoluble+cell+wall+fractions+from+rye%2C+wheat+and+hull-less+barley+endosperm+flours%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Hydrocolloids%22%5BJournal%5D)">Characterisation of soluble and insoluble cell wall fractions from rye, wheat and hull-less barley endosperm flours.</a> Food Hydrocolloids. 41, 219-226 (2014).</li>
<li>Pena, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+irregular+xylem8+and+irregular+xylem9%3A+Implicationsfor+the+Complexity+of+Glucuronoxylan+Biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis irregular xylem8 and irregular xylem9: Implicationsfor the Complexity of Glucuronoxylan Biosynthesis.</a> Plant Cell. 19, 549-563 (2007).</li>
<li>Andersson, S. I., Samuelson, O., Ishihara, M., Shimizu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+reducing+end-groups+in+Spruce+xylan%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">Structure of the reducing end-groups in Spruce xylan.</a> Carbohydr. Res. 111, 283-288 (1983).</li>
<li>Mazumder, K., York, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+analysis+of+arabinoxylans+isolated+from+ball-milled+switchgrass+biomass%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">Structural analysis of arabinoxylans isolated from ball-milled switchgrass biomass.</a> Carbohydr. Res. 345, 2183-2193 (2010).</li>
<li>Kulkarni, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ability+of+land+plants+to+synthesize+glucuronoxylans+predates+the+evolution+of+tracheophytes%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiol%22%5BJournal%5D)">The ability of land plants to synthesize glucuronoxylans predates the evolution of tracheophytes.</a> Glycobiol. 22 (2012), 439-451 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Agilent+MassHunter+Workstation+Software+-+Quantitative+Analysis+Familiarization+Guide%22">Agilent MassHunter Workstation Software - Quantitative Analysis Familiarization Guide</a>. , Agilent Technologies. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G3335_90061_Quant_Familiarization-EN.pdf">http://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G3335_90061_Quant_Familiarization-EN.pdf</a> (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Topspin+User+Manual%22">Topspin User Manual</a>. , Bruker. Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.nmr.ucdavis.edu/docs/user_manual_topspin_ts30.pdf ">http://www.nmr.ucdavis.edu/docs/user_manual_topspin_ts30.pdf </a> (2010).</li>
<li>Domon, B., Costello, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+nomenclature+for+carbohydrate+fragmentation+in+FAB-MS%2FMS+spectra+of+glycoconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Glycoconjugate.+J%22%5BJournal%5D)">A systematic nomenclature for carbohydrate fragmentation in FAB-MS/MS spectra of glycoconjugates.</a> Glycoconjugate. J. 5, 397-409 (1988).</li>
<li>Hoffmann, R. A., Leeflang, B. R., De Barse, M. M. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+by+1H-n.m.r.+spectroscopy+of+oligosaccharides%2C+derived+from+arabinoxylans+of+white+endosperm+of+wheat%2C+that+contain+the+elements+----4%29%5Balpha-L-Araf-%281----3%29%5D-beta-D-Xylp-%281----+or+----4%29%5Balpha-+L-Araf-%281----2%29%5D%5Balpha-L-Araf-%281----3%29%5D-beta-D-Xylp-%281----%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">Characterisation by 1H-n.m.r. spectroscopy of oligosaccharides, derived from arabinoxylans of white endosperm of wheat, that contain the elements ----4)[alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1---- or ----4)[alpha- L-Araf-(1----2)][alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1----.</a> Carbohydr. Res. 221, 63-81 (1991).</li>
<li>Gruppen, H., Hoffmann, R. A., Kormelink, F. J. M., Voragen, A. G. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+by+1H+NMR+spectroscopy+of+enzymically+derived+oligosaccharides+from+alkali-extractable+wheat-flour+arabinoxylan%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr.+Res%22%5BJournal%5D)">Characterisation by 1H NMR spectroscopy of enzymically derived oligosaccharides from alkali-extractable wheat-flour arabinoxylan.</a> Carbohydr. Res. 233, 45-64 (1992).</li>
<li>Kosik, O., Bromley, J. R., Busse-Wicher, M., Zhang, Z., Dupree, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+enzymatic+cleavage+of+cellulose+using+polysaccharide+analysis+by+carbohydrate+gel+electrophoresis+%28PACE%29%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Studies of enzymatic cleavage of cellulose using polysaccharide analysis by carbohydrate gel electrophoresis (PACE).</a> Methods Enzymol. 510, 51-67 (2012).</li>
</ol>

우리는 공개할 것이 없습니다.

대부분의 매트릭스 상 세포벽 다당류는 겉으로는 무작위로 매우 다양있는 식물 종, 발달 단계 및 조직 유형 3에 따라 (글리코 및 비 글리코 잔류 모두 포함) 백본을 교체했습니다. 다당류 이차 유전자 산물이기 때문에 그 서열은 주형 유도되지 않고, 핵산과 단백질의 존재와 같은 단일 분석 방법들은 시퀀싱, 따라서 존재하지 않는다. 정제 된 링크 관련 가수 분해 효소의 유용성은 크로마토 그래피 분별 될 수 올리고당 다당을 분해하는 강력한 도구를 제공하고, 화학적 및 물리적 방법과 조합하여 사용될 때 완전히 서열 분석 하였다. 도전은 성공적이 될 해결하기 위해 여전히 원래의 다당류 서열 - 하나에 이러한 복잡한 혼합물을 다시 조립하는 것입니다. 여기에서 우리는 접근 방식 (응용 캘리포니아의 그 순서를 설명N 설립 효소 적, 화학적 환원 말단 (RE) 및 heteroxylans의 내부 영역 글리코 서열 (들) 모두의 구조적 특성에 대한 물리적 기술의 통합에 의존하는...

Heteroxylans는 잔디의 주요 벽과 모든 피자 식물 3-6의 2 차 벽의 주된 비 셀룰로오스 다당류있는 다당류의 가족입니다. 크 실란 백본은 유형과 글리코 (글루 쿠 론산 (GlcA), 아라비 노스 (Araf)) 및 비 - 글리코 (O 아세틸, 페룰 산) 조직 유형, 발달 단계 및 종 7에 따라 잔류와 대체 패턴에 차이가 있습니다. 밀에서 벽 (밀 및 aestivum L.) 배젖은 주로 아라비 (AX를) (70 %) 및 (1 → 3)로 구성되어 있습니다 (1 → 4) -β-D 글루칸 (20 %) 셀룰로오스 heteromannans 소량으로 (2 % 씩) 8. 자일란 백본 주로 (주로 O-2 위치 및 정도는 덜 O-3 위치)로 치환 된 모노 - 및 디 - 치환 된 α-L-아와 (O-2, O-3 위치) 다양 - 미 치환 될 수 있고 F 잔류 9. 환원 말단 (RE) 이종의(예를 들면, 가문비 스 (Picea의 구상)) (예를 들어, 애기 장대) dicots에서 크 실란 10 겉씨 11 특징 테트라 사카 라이드의 글리코 시퀀스를 포함 -β-D-Xyl 피 - (1 → 3) -α-L-라곤 피 - (1 → 2) -α-D-갈 P는 A- (1 → 4) -D-Xyl 피. heteroxylan 생합성 기능 (생물 산업)를 이해하기 위해서는 충분히 종류 및 치환 패턴뿐만 아니라 환원 말단 (RE)의 순서를 이해하는 자일란 골격을 시퀀싱하는 것이 중요하다. 단부 (RE) 및 heteroxylans 내부 영역 글리코 서열 (들)을 감소시키는 구조 특성에 사용될 특정 기술이 논문에 기재되어있다. 기술은 효소 (endoxylanase) 가수 분해 전의 heteroxylan 사슬의 환원 말단 (RE) (2- 아미노 벤즈 아미드 (2AB)에) 태그를 형광체에 의존한다. 특히 RE 서열이 접근했다먼저 뉴욕 실험실 10,12-13에 의해보고하지만 지금은 격리 자신의 소스의 독립적 인 모든 heteroxylans에 동일하게 적용 할 설립 기술의 조합을 내부 영역의 염기 서열을 포함하도록 확장하고 있습니다. 이 방법은 (가능) 적절한 엔도 가수 분해 효소를 사용하여 폴리 사카 라이드의 다른 클래스에 적용될 수있다. 설명한 바와 같이, 본 연구에서는 디 먹인 밀 배유 세포벽 물 (W 졸 천을)로 추출 알콜 불용성 잔사 (AIR)와 순차적으로 분리하고 1M KOH 1 %의 NaBH 4 (KOH 졸 프랑)을 함유 한 Ratnayake에서 외. (2014) 2. W- 및 KOH 졸 FRS 모두로부터 방출 된 올리고당은 함께 HPLC로 ESI-QTOF-MS 결합 MALDI-TOF-MS의 조합을 사용하여 수행 한 다음 메틸화 모두 천연 및 메틸화 올리고당의 상세한 구조 분석이다 RP C-18 컬럼을 사용하여 온라인 크로마토 그래피 분리및 ESI-MS 없음. Endoxylanase는 KOH 졸 AX를 또한 핵 자기 공명 (NMR)에 의해 분석되었다 분해.

<table><tbody><tr><td>2 아미노벤즈아미드(2AB)</td><td>시그마-알드리치(www.sigmaaldrich.com)</td><td>A89804</td><td></td></tr><tr><td>소듐보로하이드라이드(NaBH4)시</td><td>그마-알드리치(www.sigmaaldrich.com)</td><td>247677</td><td>위험, 주의해서 취급:</td></tr><tr><td>시아노보로하이드라이드나트륨(NaBH3CN)156159</td> <td>www.sigmaaldrich.com 위험</td><td></td><td>, 취급 주의:</td></tr><tr><td>endo-1,4-&beta;-Xylanase M1 (Trichoderma viride에서) (120101a)</td><td>Megazyme (www.megazyme.com)</td><td>E-XYTR1</td><td></td></tr><tr><td>중수소 산화물 (D2O)</td><td>Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)</td><td>151882</td><td></td></tr><tr><td>동결 건조기 (CHRIST-ALPHA 1-4 LD plus)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RP C18 Zorbax eclipse plus column&nbsp;</td><td>애질런트&nbsp;</td><td></td><td>(2.1&times; 100 밀리미터; 1.8 &마이크로; M 비드 크기)&nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로플렉스 MALDI-TOF MS&nbsp; &nbsp; (모델 - MicroFlex LR)</td><td>(Bruker Daltonics, 독일)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>(ESI) -(QTOF) MS&nbsp; &nbsp; (모델 # 6520)</td><td>(애질런트, 팔로알토, 캘리포니아)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ESI-MSn &nbsp;- 이온 트랩&nbsp; (모델 # 1100 HCT)</td><td>(애질런트, 캘리포니아주 팔로알토).</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bruker Avance III 600MHz -NMR</td><td>Bruker Daltonics, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Topspin(버전 3.0)-Biospin- 소프트웨어&nbsp;</td><td>브루커&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GC-MS (모델 # 7890B)</td><td>애질런트&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

효소 적, 화학 (메틸화) 및 물리 (질량 분석, 핵 자기 공명) 기법을 사용하여 공장 벽 heteroxylans의 연속

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

이 프로토콜은 단부 (RE) 및 heteroxylans 내부 영역 글리코 서열 (들)을 감소시키는 특성을 위해 사용되는 특정 기술을 설명한다. 탈 먹인 밀 배유 세포벽은 알코올 불용성 (W 졸 천을)로 추출 잔사 (AIR) 1 순차적 Ratnayake 외 기재된 바와 같이 1 M KOH 1 %의 NaBH 4 (KOH 졸 천을)를 함유로서 단리 하였다 등. (2014) 2. 두 개의 서로 다른 접근 방법은 (그림 1의 개요 참조)를 채택하고 있습니다. 처음에는 그대로 W 졸 AX를 원래 RE 골격 쇄 당 잔기 태그를 2AB로 처리하고 2AB 표지 RE 각각 올리고당을 감소 내부 영역의 혼합물을 생성하는 endoxylanase로 처리 하였다. 두 번째 접근에서, KOH 졸 천을 먼저 2AB 연속적으로 표시되는 당사슬의 혼합물을 생성하는 가수 분해 endoxylanase. 모두에서 enzymically 발표 ((UN) 태그) 올리고당W- 및 KOH 졸 FRS는 MALDI-TOF-MS, RP-HPLC-ESI-QTOF-MS 및 ESI-MS n의 조합을 사용하여 수행 한 다음 메틸화 모두 천연 및 메틸화 올리고당의 상세한 구조 분석이다. Endoxylanase는 KOH 졸 AX를도 또한 아노 머 구성에 대한 정보를 제공하고, 핵 자기 공명 (NMR)에 의해 특징 분해. 이러한 기술은 적합한 엔도 가수 분해 효소를 사용하여 폴리 사카 라이드의 다른 클래스에 적용될 수있다.

AX를가 2AB 표지 RE 올리고당의 혼합물 및 자일란 쇄 (도 1의 내부 영역으로부터 유래되지 않은 표지 (2AB 라벨없는) 올리고당의 시리즈를 생성 W-졸 Endoxylanase 소화 2AB는 표지]에서 Ratnayake 외. 2). 크로마토 그래피 방법의 시리즈는 이성질체의 착체 혼합물을 분별하기 위해 사용된다. 최종적으로, MS 기술은 다음 기술에 의해 해당 MS 서열화 된 이성질체 구조를 식별하기 위해 사용된다. 여기에서 우리는 오히려 접근 방식의 포괄적 인 예보다, 대표을 제시한다. 2AB 표지 네이티브 W 졸 AX를 (도 2A)로부터 유래 당사슬의 MALDI-TOF-MS 스펙트럼 신호는 표지 된 일련 나타내는 매우 풍부한 의사 - 분...

이 프로토콜은 효소(엔톡실라나아제) 가수분해 전에 RE에 2개의 아미노벤즈아미드를 태그한 다음 질량 분석법(MS) 및 핵 자기 공명(NMR)을 사용하여 결과 올리고당을 분석함으로써 헤테록실란의 말단(RE) 및 내부 영역 글리코실 서열의 구조적 특성화에 사용되는 특정 기술을 설명합니다.

효소 적, 화학 (메틸화) 및 물리 (질량 분석, 핵 자기 공명) 기법을 사용하여 공장 벽 Heteroxylans의 연속

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

전체적인 목표는 수용성 헤테로자일란의 원래 환원 말단 당 잔기에 태그를 지정하고 엔도자일라네이스(endoxylanase)로 처리하여 표지된 올리고당 혼합물을 생성함으로써, 헤테로자일란의 환원 말단 및 내부 영역 당쇄 서열을 분석하는 것입니다. 이 방법은 계획된 성장 발달뿐만 아니라 비생물적 및 생물적 스트레스 요인에 반응하여 나타나는 올리고당 또는 다당류의 미세 구조 변화와 같은 당생물학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 모든 글리칸 또는 다당류의 환원 말단 서열과 내부 영역 서열을 분석하는 통합적인 접근 방식을 제시한다는 점입니다.1 mL의 물에 1 M 소듐 시아노보로하이드라이드 용액을 준비합니다. 그 다음, 반응 혼합물의 pH를 10% 아세트산으로 pH 5.5로 조정하고 65 °C에서 가열하여 27.2 mg의 2AB 시약을 소듐 시아노보로하이드라이드 용액에 녹입니다. 캡이 있는 유리 튜브에 들어있는 1 mg의 수용성 아라비노자일란에 반응 혼합물 200 µL를 첨가하고 볼텍스 믹서를 사용하여 혼합합니다.흄 후드 내에서 샘플을 65 °C로 2시간 동안 배양하십시오. 배양 후, 현탁액을 실온으로 냉각시키고 4배 부피의 절대 에탄올을 첨가합니다. 다당류를 침전시키기 위해 현탁액을 저온 저장고에 넣어 하룻밤 동안 보관하십시오.그런 다음, 샘플을 원심분리하고 상층액을 제거합니다. 각 세척 단계마다 원심분리를 수행하며, 펠릿을 절대 에탄올, 아세톤 및 메탄올로 충분히 세척합니다. 펠릿을 40 °C에서 하룻밤 동안 진공 건조합니다.마이크로 원심분리 튜브에 준비된 2AB 표지 수용성 arabinoxylan 1 mg을 sodium acetate 완충액 500 µL에 녹입니다. endoxylanase 4 units를 첨가하고 37 °C에서 16시간 동안 배양합니다. 반응 혼합물을 끓는 물 중탕에서 10분 동안 가열하여 효소 활성을 제거합니다.현탁액을 실온으로 냉각하고 캡이 있는 유리 튜브로 옮깁니다. 절대 에탄올을 4배 부피로 첨가한 후, 소화되지 않은 다당류를 침전시키기 위해 현탁액을 저온 보관함에 하룻밤 동안 둡니다. 원심분리하여 엔도자일라나아제(endoxylanase)로 생성된 올리고당으로부터 소화되지 않은 다당류를 펠렛 형태로 분리합니다.그 후, 상층액을 깨끗한 플라스틱 튜브에 따라내고 따뜻한 수조에 넣습니다. 질소 가스 기류 하에서 에탄올을 최종 부피까지 증발시킵니다. 상층액을 -80 °C에서 4시간 동안 냉동시킨 후, 냉동 건조기로 냉동된 상층액을 건조하여 자일로올리고당을 회수합니다.KO8 수용성 아라비노자일란으로부터 자일로올리고당을 생성하고 2AB 라벨링을 수행하는 방법은 텍스트 프로토콜을 참조하십시오. MALDI 매트릭스 용액을 준비하려면, 0.1% formic acid가 포함된 50% acetonitrile 500 millilitres가 들어있는 튜브에 DHB를 소량 첨가합니다. 볼텍서를 사용하여 혼합합니다.빠르게 용해되면 DHB를 소량 더 추가하십시오. 천연 수용성 올리고당 샘플을 MALDI 타겟 플레이트에 도포합니다. 별도의 팁을 사용하여 MALDI 매트릭스 용액 0.3 µL를 추가하고 피펫팅으로 섞어줍니다.혼합물을 실온에서 건조시킵니다. 타겟 플레이트를 MS 소스에 넣고 양이온 모드(positive ion mode)로 작동시킵니다. 가속 전압을 1번 이온 소스에서는 19 kilovolts로, 2번 이온 소스에서는 16.3 kilovolts로 조정합니다.레이저 출력을 70% 이상으로 조정하십시오. MALDI 타겟 플레이트에서 샘플 스팟을 선택하고 시작을 클릭하여 레이저 조사를 시작합니다. 역상 C18 컬럼을 이용한 온라인 크로마토그래피 분리가 결합된 전기분무 이온화 사중극자 비행시간형 MS(ESI-Q-TOF MS) 장비 및 nano HPLC를 사용하여 내인성 엔도자일라네이스(native endoxylanse)에 의해 생성된 올리고당을 분석하십시오.엔도자일라나제(endoxylanase)로 생성된 수용성 올리고당 혼합물을 바이알에 옮겨 HCLC 오토샘플러에 넣습니다. 이동상으로 각각 0.1% formic acid 포함 물과 0.1% formic acid 포함 acetonitrile을 사용하여, 60분 동안 5%에서 80%까지의 용리 구배를 설정합니다. 액체 크로마토그래피 프로그램을 실행하여 올리고당을 용리시킵니다.'샘플 추가'를 누르고 샘플 이름을 입력한 뒤 '확인' 버튼을 누릅니다. 질량 분석법 메소드 파일을 선택하고 '제출' 버튼을 누릅니다. 그런 다음 샘플 분석을 시작합니다.결과물인 총 이온 크로마토그램(total ion chromatogram, TIC)은 소프트웨어에 의해 자동으로 저장됩니다. 저장된 TIC를 열고 크로마토그램 추출(extract chromatogram)을 선택하십시오. 명령줄에 예상 질량을 입력하십시오.제조업체의 지침에 따라 소프트웨어를 사용하여 선택한 이온 스캔을 처리하기 전, Enter를 클릭하여 크로마토그램을 스캔하십시오. 시린지를 사용하여 50% acetonitrile에 녹인 per O methylated oligosaccharide 샘플 1~2 µL를 나노스프레이 팁에 주입하십시오. MS에 장착된 개별 나노스프레이 홀더에 맞게 유리 절단기로 나노스프레이를 다듬으십시오. 질량은 예상 질량 범위에 맞게, 커튼 가스는 10으로, 이온 스프레이 전압은 1900 V로, 극성은 양성으로 설정하십시오.acquire 버튼을 눌러 관련 창을 엽니다. 그 다음, 데이터 파일 이름을 입력하여 총 이온 스캔(total ion scan)을 수행한 후 stop 버튼을 누릅니다. 관심 있는 조각을 분석하기 위해 스캔 유형을 product ion에서 fragment로 변경합니다.단편화하려는 분석 대상 질량을 입력하고 질량 범위를 조정하십시오. 획득 버튼을 누르고 충돌 에너지를 조정하여 모이온의 완전한 단편화를 유도한 다음 단편 이온 스캔을 획득하십시오. 10 mL 플라스틱 시험관에 1 mL의 중수소 산화물을 넣고 엔도자일라네이즈로 생성된 올리고당 혼합물을 용해하십시오.현탁액을 -80 °C에서 4시간 동안 동결시킨 후, 동결 건조기에서 냉동 현탁액을 건조하여 자일로올리고당을 회수합니다. 다음으로, 건조된 올리고당을 0.6 mL의 중수(deuterium oxide)에 녹이고 내부 표준물질로 중수에 희석한 5% 아세톤 0.5 µL를 첨가합니다. 중수화된 올리고당을 NMR 시료 튜브로 옮깁니다.시료가 들어 있는 NMR 튜브의 윗부분을 잡고 플라스틱 스피너에 삽입합니다. 스피너를 시료 깊이 측정기에 놓습니다. 시료 튜브를 밀거나 당겨 시료의 깊이를 조정하여, 시료 상단과 하단 깊이 측정기의 중심선이 일치하도록 합니다.깊이 측정기를 제거하고, 크라이오프로브가 장착된 600 megaHertz NMR 분광계에 연결된 자동 시료 주입기에 시료를 삽입합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 NMR 실험을 수행하고 결과 스펙트럼을 분석합니다. 2AB로 라벨링된 천연 수용성 아라비노자일란 유래 올리고당의 MALDI-TOF MS 스펙트럼 신호에는 라벨링되지 않은 내부 영역의 중성 및 산성 올리고당 시리즈와 환원 말단이 원래 2AB로 라벨링된 올리고당이 포함됩니다.여기에 2AB 표지된 수용성 아라비노자일란을 엔도자일라나아제로 처리하여 생성된 내부 영역 올리고당 유래 천연 올리고당의 ESI 컷오프 MS 크로마토그램에서 선택된 이온 스캔 결과가 제시되어 있습니다. 또한 2AB 표지가 된 환원 말단 올리고당 유래 천연 올리고당과 동일한 방식으로 생성된 영역 산성 올리고당의 스캔 결과도 함께 제시되어 있습니다. MS 내에서 퍼-O-메틸화된 올리고당의 기상 분해 과정 중에 생성된 비메틸화 히드록시기는 분지 패턴과 글리코실 서열을 확인하는 데 사용되는 14 Dalton 질량 차이 흔적을 제공합니다.특정 질량에 대해 여러 이성질체 구조가 가능하므로, 단편화 이벤트로 생성된 각 흉터는 실선으로 표시됩니다. Y-이온은 빨간색으로, B-이온은 검은색으로 표시됩니다. 질량 대 전하비 885에서 4개의 펜토스 당 잔기와 자일리톨로 구성된 per-o-methylated 환원 및 중성 glycosal alditol의 전기분무 이온화 탠덤 MS 스펙트럼을 분석한 결과, 환원 말단 glycosal 서열은 환원 말단 자일리톨 잔기에 결합된 아라비노스 측쇄 및/또는 환원 말단 자일리톨과 그 전 단계의 자일리실 잔기 모두로 구성되어 있음을 나타냅니다.본 절차 이후, 항체 에피토프 특이성 및 미세 구조 변화의 신속한 스크리닝과 같은 질문에 답하기 위해 크로마토그래피 프로파일링 및 전기영동과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 이 기술의 개발 이후, 글리코믹스 분야의 연구자들은 다양한 조직 유형, 발달 단계 및 종에서 글리칸 또는 비-글리칸 잔기의 치환 유형 및 패턴을 포함하여 글리칸의 구조적 특징을 탐구할 수 있는 길이 열렸습니다. 이 접근 방식은 적절한 엔도하이드롤레이스를 사용하여 다른 종류의 다당류에도 적용될 수 있습니다.금속 수화물과 소듐 사이아노보로하이드라이드(sodium cyanoborohydride)를 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으므로, 본 절차를 수행하는 동안에는 항상 적절한 장갑 착용 및 흄 후드 내 작업과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 점을 잊지 마십시오.

sequencing-plant-wall-heteroxylans-using-enzymic-chemical-methylation

Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

식물 바이오 매스는 바이오 연료 생산에 사용될 수있는 주요 탄소 중립 되살릴 수있는 자원입니다. 식물 바이오 매스는 주로 세포 벽, lignocellulosics를 칭했다 구조적으로 복잡한 복합 재료로 구성되어 있습니다. 여기서 우리는 내용과 polyphenolic의 리그닌의 구성의 포괄적인 분석을 위해 프로토콜을 설명합니다.

식물 세포 벽의 종합 작곡 분석 (리그노셀룰로오스성 바이오 매스) 부 I : 리그닌

식물 바이오 매스는 바이오 연료 생산에 사용될 수있는 주요 탄소 중립 되살릴 수있는 자원입니다. 식물 바이오 매스는 주로 세포 벽, lignocellulosics를 칭했다 구조적으로 복잡한 복합 재료로 구성되어 있습니다. 여기서 우리는 콘텐츠와 벽 파생 탄수화물의 구성의 포괄적인 분석을 위해 프로토콜을 설명합니다.

식물 세포 벽의 종합 작곡 분석 (리그노셀룰로오스성 바이오 매스) 2 부 : 탄수화물

빠른 방법은 세포외 기질에서 다당류의 구조에 대한 통찰력을 얻을 수 설명되어 있습니다. 방법은 glycosylhydrolases의 특이성과 물질의 미세한을 분석 수 있도록 질량 분석계의 감도 활용합니다. 이 기술은 조직 자체에서 직접 사용할 수 적용할 수 있습니다.

세포외 다당류의 OLIgo 질량 프로파일 (OLIMP)

Microarrays를 사용하여 식물 세포의 벽 폴리머의 Glycan 프로파일

이 프로토콜은 라만 이미징 및 다 변수 분석을 사용하여 식물 세포 벽에서 리그닌, 셀룰로오스 및 헤미 셀룰로오스를 시각화하는 일반적인 방법을 제시합니다.

라만 이미징과 다변량 분석을 결합하여 식물 세포벽에서 리그닌, 셀룰로오스 및 헤미 셀룰로스를 시각화합니다.

다 당 류 젤 전기 이동 법 (속도), 예를 들어, mannan를 사용 하 여 구조 분석을 위한 프로토콜을 설명 합니다.

속도 사용 하 여 식물에 Mannan 세포 벽 다 당 류 구조 특성

다차원 고체 NMR 분광학 및 동적인 핵 분극 (DNP) 조사 13C,15N 표시 된 곰 팡이 및 식물 견본을 준비 하기 위한 프로토콜 제공 됩니다.

곰 팡이의 준비 및 동적인 핵 분극 고체 NMR을 사용 하 여 구조 설명에 대 한 식물 재료

마이크로어레이 폴리머 프로파일링(MAPP)은 생물학적 샘플에서 글라이칸의 조성 분석을 위한 고처리량 기술입니다.

고처리량 글라이칸 분석을 위한 마이크로어레이 폴리머 프로파일링(MAPP)

본 프로토콜은 밀 식물에서 주로 β-1,3-glucanase 및 peroxidase와 같은 세포벽 관련 효소를 연구하고 특성화하는 데 사용되는 절차를 설명합니다. 그들의 활동 수준은 밀-RWA 상호 작용 중에 증가하며 세포벽 강화를 통해 식물 방어 반응에 관여하여 진딧물 먹이를 억제합니다.

#946;-1,3-Glucanase 및 Peroxidase Physicochemical 특성 Diuraphis noxia 감염에 대한 밀 세포벽 방어 메커니즘 설명

단백질의 입체 구조와 역학은 단백질 구조 및 기능 사이의 관계를 이해하기위한 열쇠이다. 고해상도 질량 분광법과 결합 수소 교환은 단백질의 형태 적 역학 연구뿐만 아니라 접촉 인터페이스 및 알로 스테 릭 효과를 포함하여 단백질 - 리간드와 단백질 - 단백질 상호 작용을 특성화하기 위해 다양한 방법이다.

수소 환율 질량 분석을 사용하여 단백질의 역학 분석

배우세요 헤테로자일란의 환원 말단과 내부 글리코실 서열을 효소적 가수분해와 질량 분석, 핵 자기 공명을 통해 특성화하는 방법을. 이 통합 접근법은 식물 세포벽 다당류의 미세 구조 변화를 연구하는 데 활용됩니다.

효소 적, 화학 (메틸화) 및 물리 (질량 분석, 핵 자기 공명) 기법을 사용하여 공장 벽 Heteroxylans의 연속

더 많은 동영상 탐색