Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sunil Ratnayake; Kristina Ford; Antony Bacic

doi:10.3791/53748

효소, 화학적(메틸화) 및 물리적(질량 분석법, 핵 자기 공명) 기술을 사용한 식물 벽 헤테록실란의 염기...

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Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

효소, 화학적(메틸화) 및 물리적(질량 분석법, 핵 자기 공명) 기술을 사용한 식물 벽 헤테록실란의 염기서열분석

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11:49 min

March 24, 2016

DOI: 10.3791/53748-v

Sunil Ratnayake¹, Kristina Ford¹, Antony Bacic¹

¹ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls, School of BioSciences,University of Melbourne

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

이 프로토콜은 효소(엔톡실라나아제) 가수분해 전에 RE에 2개의 아미노벤즈아미드를 태그한 다음 질량 분석법(MS) 및 핵 자기 공명(NMR)을 사용하여 결과 올리고당을 분석함으로써 헤테록실란의 말단(RE) 및 내부 영역 글리코실 서열의 구조적 특성화에 사용되는 특정 기술을 설명합니다.

전반적인 목표는 수용성 heravenaxylans의 원래 환원 말단 당 잔류물을 태그하고 엔톡실라나아제로 처리하여 표지 dolara 당류의 혼합물을 생성함으로써 heteroxylans의 환원 말단 및 내부 영역 당류 서열을 특성화하는 것입니다. 이 방법은 계획된 성장 발달에 대한 반응으로 올리고당 또는 다당류의 미세 구조 변경과 같은 글리코믹 분야의 주요 질문과 비생물적 및 생물학적 스트레스 요인에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 모든 글리칸 또는 다당류의 내부 재생서열뿐만 아니라 n 염기서열을 줄이는 염기서열분석에 대한 통합적 접근 방식을 설명한다는 것입니다.

물 1ml에 1몰 시아노보로하이드라이드 나트륨 용액을 준비합니다. 그런 다음 섭씨 65도에서 가열하고 반응 혼합물의 pH를 10% 아세트산으로 pH 5.5로 조정하여 27.2mg의 2AB 시약을 나트륨 시아노보로하이드라이드 용액에 용해시킵니다. 캡이 있는 유리관에 있는 수용성 아라비녹실란 1mg에 반응 혼합물 200마이크로리터를 넣고 와류 믹서를 사용하여 혼합합니다.

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