Name: 에 참여 호스트 요인의 높은 처리량 검사에 대한 현미경 기반 분석 실험 브루셀라 HeLa 세포의 감염 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 29 s
Description: 학습하세요 현미경 기반 고처리량 스크리닝을 통해 Brucella 감염에 관여하는 HeLa 세포의 숙주 인자를 식별하는 방법을. siRNA 스크리닝과 자동화된 이미지 분석 파이프라인을 활용하여 감염 메커니즘을 연구하고 치료 전략 개발에 활용할 수 있습니다.

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이 작업은 SystemsX.ch Swiss Initiative for Systems Biology의 틀에서 각각 연구 및 기술 개발(RTD) 프로젝트 InfectX 및 TargetInfectX에 대한 51RT 0_126008 및 51RTP0_151029 보조금의 지원을 받았습니다. 스위스 국립과학재단(SNSF)의 보조금 310030B_149886 인정합니다. S.H.L과 A.C.의 연구는 Biozentrum의 국제 박사 과정 "Fellowships for Excellence"의 지원을 받았습니다. Simone Muntwiler는 기술 지원을 인정받았습니다. pNF106을 제공해 주신 Dirk Bumann님과 pJC43 및 pJC44를 제공해 주신 Jean Celli님께 감사드립니다.

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</ol>

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

박테리아 병원체는 진핵 숙주 세포를 자신에게 유리하게 조작하기 위한 수많은 전략을 진화시켰습니다. 급성 감염을 일으키는 병원체는 종종 면역 체계의 심각한 경각심과 감염된 세포의 생존력 상실을 동반하는 급속한 증식을 보입니다. 대조적으로, 만성 감염을 일으키는 브루셀라 및 기타 병원체는 숙주 세포 내에서 오래 지속되는 상호 작용을 확립합니다. 따라서 박테리아는 세포 항상성을 방해하지 않고 숙주 세포 기능을 미세 조정해야 합니다. 게놈 규모에서 감염 과정에 관여하는 숙주 세포 인자를 식별하기 위한 일반적인 전략은 예를 들어 감염의 기능적 판독과 결합된 siRNA에 의한 체계적인 유전자 고갈을 사용하는 것입니다. 여기에서는 형광 박테리아 검출을 기반으로 한 고함량, 고처리량 스크리닝에 적합한 프로토콜을 제시합니다.
성공적인 대규모 스크리닝의 중요한 측면은 강력한 자동 이미지 분석 및 감염 점수와 관련이 있습니다. 여기에 설명된 방법은 일반적으로 매우 강력한 DAPI 염...

브루셀라 종은 α-프로 테오 박테리아의 클래스에 속하는 그람 음성, 통성 세포 내 병원균이다. 그들은 이러한 풍토 지역에서 심각한 경제적 손실을 초래 소, 염소, 또는 양 등 자연 호스트에서 낙태와 불임의 원인. 브루셀라 병은 전 세계적으로 매년 50 만 새로운 인간 감염 1 위에 일으키는 가장 중요한 인수 공통 질병 중 하나입니다. 인간에 ​​전송 가장 일반적으로 이러한 저온 살균하지 않은 우유로 감염된 동물과 직접 접촉하거나 오염 된 음식의 섭취에 의해 발생합니다. 열성 질환의 증상은 브루셀라 병의 진단에 어려움이 발생하는 불특정입니다. 처리되지 않은 경우, 환자는 관절염, 심내막염, 및 신경 병증이 같은 더 심각한 증상으로 만성 감염을 개발할 수 있습니다. 세포 수준에서 브루셀라 식세포는 비 식세포에 침입 할 수 있으며, 세포 내에서 복제브루셀라 함유 공포 (BCV)라고 함. 박테리아의 내면화는 라 세미,의 Rho와 Cdc42 3의 직접적인 활성화에 의해 액틴 세포 골격의 재 배열이 필요합니다. 진핵 숙주 세포 내부에서 BCV는 세포 내 이입 경로를 따라 트래 피킹과 리소좀과의 상호 작용에도 불구하고, 세균 분해 4 않도록 관리한다. 소낭 ATPase에 의해 BCV의 산성화가 박테리아 타입 IV 분비 시스템 (T4SS) (5)의 발현을 유도 할 필요가있다. 브루셀라는 복제 성 틈새 시장을 확립하기위한 T4SS 분비 세균 이펙터는 세포 내 틈새 시장 (7)의 설립의 결함에 T4SS 6의 삭제 또는 기공을 ATP 아제 리드의 억제 때문에, 필수적인 것으로 생각된다. 박테리아는 그들이 때까지 인신 매매의 단계에서 복제되지 않는다 응급실에서 파생 된 액포 실 (8)에 도달한다. 세포 증식이 발생되면, BCV는 CL에서 발견이러한 calnexin 및 글루코스 -6- 인산 (6)와 같은 ER 마커 OSE 협회. 브루셀라는 ER-같은 구획, 세포를 입력 리소좀 저하를 방지하고, 마지막으로 복제하는 분자 메커니즘은 크게 알려지지 않은 남아있다. 감염의 여러 단계에 관여하는 호스트 요소는 주로 대상으로 접근 또는 초파리 세포 (9)에서 수행되는 작은 규모의 작은 간섭 RNA (siRNA를) 스크린에 의해 확인되었다. 다음은 브루셀라 감염시 개별 호스트 요인의 기여에 광명을 비춰했지만 우리는 전체 과정의 포괄적 인 이해에서 멀리 아직도이다. 여기서, 자동 폭 필드 형광 현미경 및 자동화 된 이미지 분석과 함께 대규모 RNA 간섭 (RNAi의) 검사를 사용하여 인간 숙주 인자의 식별을 허용 프로토콜이 제시된다. HeLa 세포의 뒷면의 siRNA로 형질 describ 수행에드 이전 10, 11 약간의 수정과. 엔드 포인트 분석은 상기 출구와 인접 셀의 감염을 제외한 브루셀라 세포 수명의 많은 부분을 포함한다. 상기 엔드 분석에서 확인 된 히트를 특성화하기 위해, 감염의 초기 단계에 관여하는 인자들을 확인하는 변형 프로토콜이 사용된다. 구조적 GFP를 발현하는 브루셀라 아 보르 투스 균주 박테리아 이틀 동안 세포를 감염시킬 수있는 엔드 포인트 분석에 사용된다. 이 기간 동안, 박테리아는 ER-파생 된 복제 성 틈새 시장 세포, 트래픽을 입력하고 요정 핵 공간에 복제합니다. GFP 신호의 하이 레벨은 안정적으로 복제 박테리아를 포함 개별 셀을 검출 할 수있다. 고 처리량 분석에 브루셀라 항목을 연구하기 위해, 세포 내 및 세포 외 박테리아를 구별 할 수있는 것이 중요하다. 이 방법은 여기 circumv 제시세포 내 및 세포 외 박테리아의 엔트 차 항체 염색. 그것은을 DsRed의 구성 성 발현과 함께 테트라 사이클린 - 유도 GFP를 발현하는 브루셀라 변형에 기초한다. 구성 적을 DsRed 마커의 존재는 샘플에 존재하는 모든 균을 식별 할 수있다. GFP 발현 젠타 의해 동시에 세포 외 박테리아의 불 활성화와 함께 무독성 테트라 사이클린 유사체 anhydrotetracycline (ATC)의 첨가 (GM)에 의해 유도된다. 셀 배리어 성 항생제 GM은 세포 외 박테리아를 죽이고 있지만, ATC는 숙주 세포를 선택하고 박테리아 세포 내에서 선택적으로 GFP 발현을 유도 할 수있다. 이 듀얼 기자는 넓은 필드 현미경을 사용하여 세포 외 박테리아 (만을 DsRed 신호)에서 단일 세포 내 세균 (GFP 및을 DsRed 신호)의 강력한 분리 할 수​​ 있습니다. 세포 브루셀라 의해 검출 GFP 발현에 도달하기 위해 우리는 ATC에 의해 유도 4 시간이 RELI 초래한다는 발견수 신호. 선택적으로 세포 내 세균에 GFP를 표현하는 유사 유도 방식은 세포 내 시겔 (12)을 연구하기 위해 이전에 사용되었습니다.

<table><tbody><tr><td>트립틱 소이 한천 (TSA)</td><td>BD</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>트립틱 소이 국물 (TSB)</td><td>Fluka</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>카나마이신 설페이트</td><td>시그마-알드리치</td><td>60615</td><td></td></tr><tr><td>탈지유</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>250ml 스크류 캡 병</td><td>코닝</td><td>8396</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>시그마-알드리치</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>태아 송아지 혈청(FCS)</td><td>Gibco</td><td>10270</td><td>열 비활성화</td></tr><tr><td>트립신-EDTA (0.5%)</td><td>Gibco</td><td>15400-054</td><td>10x 원액, PBS에서 1:10 희석</td></tr><tr><td>Scepte 2.0 세포 계수기</td><td>Merck Milipore</td><td>PHCC20060</td><td>대체 세포 계수 장치 사용 가능</td></tr><tr><td>Greiner CELLSTAR 384웰 플레이트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2062</td><td></td></tr><tr><td>박리 가능한 알루미늄 호일</td><td>Costar</td><td>6570</td><td></td></tr><tr><td>시약 디스펜서: "Multidrop 384 시약 디스펜서"</td><td>Thermo Scientific</td><td>5840150</td><td>대체 시약 디스펜서를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>트랜스펙션 시약: "Lipofectamine RNAiMAX</td><td>Invitrogen</td><td>13778-150</td><td></td></tr><tr><td>자동 플레이트 세척기: "플레이트 세척기 ELx50-16"</td><td>BioTek</td><td>ELX5016</td><td>이 플레이트 세척기에는 384웰 플레이트에 적합한 16채널 매니폴드가 포함되어 있습니다. 생물 안전 캐비닛에 맞고 세척 중 플레이트를 덮는 뚜껑이 있어 에어로졸 생성의 위험을 줄입니다. 유사한 기능을 가진 대체 플레이트 와셔를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>겐타마이신</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>G1397</td><td></td></tr>, <tr><td>안히드로테트라사이클린, 염산염</td>, <td>시그마-알드리치</td>, <td>37919</td>, <td>100 &#956; 100% 에탄올에 있는 g/ml 해결책은 -20°C에 유지된다; C 알루미늄 호일</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>20012</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>시그마-알드리치</td><td>P6148</td><td>0.2m hepes 완충액, pH 7.4에 용해 빛으로부터 보호. -20 &deg에서 보관하십시오. C는 사용 전날 갓 해동합니다. 주의: PFA는 흡입, 피부 접촉 또는 삼키면 독성이 있습니다.</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>시그마-알드리치</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마-알드리치</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>로슈</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>스크램블 siRNA</td><td>Dharmacon</td><td>D-001810-10</td><td></td></tr><tr><td>Kif11 siRNA</td><td>Dharmacon</td><td>L-003317-00</td><td></td></tr><tr><td>ARPC3 siRNA</td><td>Dharmacon</td><td>L-005284-00</td><td></td></tr><tr><td>Brucella abortus 2308</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pJC43 (apHT::GFP)</td><td></td><td></td><td>Celli et al.12</td></tr><tr><td>pAC042.08 (apht::d sRed, tetO::tetR-GFP)</td><td></td><td></td><td>Construction: pJC44 4를 EcoRI로 절단한 후 Klenov 효소로 뭉툭한 말단을 생성하고 SalI로 절단했습니다. TetR-GFP는 프라이머 prAC090 및 prAC092를 사용하여 pNF106으로부터 증폭되었습니다. SalI로 분해한 후, TetR-GFP 생성물을 절단된 pJC44 벡터에 연결시켰다.</td></tr><tr><td>프라이머 prAC090</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>TTT TTG AAT TCT GGC AAT TCC GAC GTC GAA ACC</td></tr><tr><td>프라이머 prAC092</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>TTT TTG TCG ACT TTG TCC TAC TCA GGA GAG CGT TC</td></tr><tr><td>HeLa CCL-2</td><td>ATCC</td><td>CCL-2</td><td></td></tr><tr><td>ImageXpress 마이크로</td><td>분자 장치&nbsp;</td><td>IXM IMAGING</td><td>MSCOPE 정밀 전동 Z-스테이지가 장착된 자동 세포 이미징 현미경. 자동 현미경 검사를 위한 대체 시스템과 아래에 명시된 하드 및 소프트웨어를 위한 대체 구성 요소를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>고속 레이저 자동 초점</td><td>분자 장치&nbsp;</td><td>1-2300-1037</td><td></td></tr><tr><td>CFI Super Fluor 10X objective</td><td>Nikon&nbsp;</td><td>MRF00100</td><td>N.A 0.50, W.D 1.20mm, DIC 프리즘: 10X, 스프링 장착</td></tr><tr><td>광도 CoolSNAP HQ 흑백 CCD 카메라</td><td>분자 장치&nbsp;</td><td>1-2300-1060</td><td>1,392 x 1,040 이미징 픽셀, 6.45 x 6.45 &마이크로; m 픽셀, 12비트 디지털화</td></tr><tr><td>MetaXpress 소프트웨어</td><td>분자 장치&nbsp;</td><td>9500-0100</td><td></td></tr><tr><td>LUI-Spectra-X-7</td><td>Lumencor</td><td>SPECTRA X V-XXX-YZ</td><td>라이트 엔진. 다음과 같은 광원이 사용됩니다 : 보라색 (DAPI), 청록색 (GFP), 녹색 / 노란색 (RFP)</td></tr> <tr><td>DAPI</td><td>Semrock</td><td>FF01-377 / 50-25</td><td></td>용 단일</tr><tr><td>대역 익사이터 DAPI 용 단일 대역 방출기</td><td>Semrock</td><td>FF02-447 / 60-25</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 용 단일 대역 이미터 Demrock</td><td></td><td>FF409-DI03-25x36</td><td></td></tr><tr>GFP <td>Semrock</td><td>FF02-472 / 30-25</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>용 단일 대역 익사이터GFP</td><td>Semrock</td><td>FF01-520/35-25</td><td></td>용 단일 밴드 이미터</tr><tr><td>GFP</td><td>Semrock</td><td>FF495-DI03-25X36</td><td></td></tr>용 <tr><td>단일 밴드 이미터, RFP</td><td>Semrock</td><td>FF01-562/40-25</td><td></td></tr>용 <tr><td>단일 밴드 이미터, RFP</td><td>Semrock</td><td>FF01-624/40-25</td><td></td></tr>용 <tr><td>단일 밴드 이미터, RFP</td><td>Semrock</td><td>FF593-DI03-25x36</td><td></td>용 단일 밴드 이미터</tr>,</tbody></table>

에 참여 호스트 요인의 높은 처리량 검사에 대한 현미경 기반 분석 실험<em&gt; 브루셀라</em&gt; hela 세포의 감염

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

브루셀라 종은 자연 호스트로 동물을 감염 통성 세포 내 병원균이다. 인간에게 전송은 가장 일반적으로 감염된 동물과 직접 접촉하거나 오염 된 음식의 섭취에 의해 발생되고 심한 만성 감염으로 이어질 수 있습니다. 브루셀라 전문 및 비 전문 식세포의 세포 침입과 소포체 (ER) 유래 액포 내에서 복제 할 수 있습니다. 응급실과 같은 구획 브루셀라 숙주 세포에 진입, 리소좀 분해 회피 및 복제에 필요한 숙주 요인은 거의 알려져 남아있다. 여기에서 우리는 HeLa 세포에서 브루셀라 항목 및 복제에 관련된 호스트 요인을 파악하기 위해이 분석에 대해 설명합니다. 다른 검사 방법을 적용 할 수 있지만 프로토콜은 RNA 간섭의 사용을 설명한다. 분석법은 형광 표지 된 세균의 검출에 사용 자동 형광 표지 된 숙주 세포에 기초와이드 필드 현미경. 형광 이미지는 단일 셀 기반 감염 득점을 허용 CellProfiler에서 표준 이미지 분석 파이프 라인을 이용하여 분석한다. 엔드 분석에서, 세포 내 복제 이틀 감염 후 측정한다. 이 확산 성공적으로 이렇게 강하게 숙주 세포 내에서 증식 할 것이다 세포 내 틈새를 설립 세균 항목입니다. 브루셀라 후 12 시간의 주위에 시작되는 자신의 복제 성 틈새 트래픽에 박테리아를 할 수 있습니다. 세포 내 박테리아가 크게 개별 세포 또는 세포 비 - 복제 성 박테리아를 능가하기 때문에, 구조적으로 GFP를 발현하는 균주를 사용할 수있다. 강한 GFP 신호는 감염된 세포를 식별하기 위해 사용된다. 대조적으로, 엔트리 분석을 위해 세포 내 및 세포 외 박테리아를 구별하는 것이 필수적이다. 여기에서, 테트라 사이클린 - 유도 GFP에 대한 변형 부호화가 사용된다. 유도겐타 마이신에 의한 세포 외 박테리아의 불 활성화와 동시에 GFP의 세포 내 박테리아 GFP를 발현 할 수있는 함께 세포 및 GFP 신호에 기초하여 박테리아 세포의 분화를 가능하게한다. 세포 내 증식이 시작되기 전에이 단일 세포 내 박테리아의 강력한 탐지 할 수 있습니다.

도 1a는 자동으로 엔드 분석에서 감염된 세포를 식별하는 데 사용되는 이미지 분석의 일례를 나타낸다. DAPI 염색 HeLa 세포의 핵이 확인되었고, 25 픽셀 핵 연장하여 핵 주위 8 화소의 폭 조갑 핵 및 보로 노이 셀 바디를 산출 하였다. 박테리아가 주로 조갑 핵 공간 확산 때문에, 셀이 영역에서 강도 GFP 감염 및 비감염 세포를 구별 할 수있는 가장 강력한 측정이다. 일부 경우에 세균이 핵으로 큰 정도에 조갑 핵 또는 오버레이 외부 증식 발견된다. 따라서, 두 개의 추가 오브젝트는 감염된 세포의 식별을 고려 하였다. 분할뿐만 아니라 GFP 강도 측정은 화상 해석 소프트웨어 CellProfiler이 수행되었다. 브루셀라 <str옹&gt; 숙주 세포 3의 성공적인 침략을위한 굴지의 재 배열...

브루셀라 감염과 관련된 숙주 인자에 대한 현미경 기반 고처리량 스크리닝을 위한 두 가지 분석이 설명됩니다. 진입 분석은 Brucella 진입에 필요한 숙주 인자를 검출하고 종말점 분석은 세포 내 복제에 필요한 숙주 인자를 검출합니다. 대체 접근법에 적용할 수 있지만, HeLa 세포의 siRNA 스크리닝은 프로토콜을 설명하는 데 사용됩니다.

에 참여 호스트 요인의 높은 처리량 검사에 대한 현미경 기반 분석 실험<em&gt; 브루셀라</em&gt; HeLa 세포의 감염

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by ...

이 고속 처리 현미경 기반 분석의 전반적인 목표는 HeLa 세포의 Brucella 감염에 관여하는 숙주 인자를 식별하는 것입니다. 이 방법은 세포 내 병원체인 Brucella의 군집 형성을 촉진하거나 억제하는 숙주 단백질을 식별하는 것과 같이 숙주-병원체 상호작용 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 실험실에서 이미지 분석에 이르는 반자동화된 워크플로우를 통해 로봇을 이용한 효율적인 고속 처리 실험 구축이 가능하다는 점입니다.따라서 이 방법은 siRNA 스크리닝을 통해 Brucella의 숙주 상호작용에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 프로토콜의 대부분은 다른 스크리닝 전략, 예를 들어 siRNA 라이브러리 등에 적용될 수 있습니다.텍스트 프로토콜에 따라 HeLa 세포를 배양하고 siRNA를 이용한 스크리닝 플레이트를 준비한 후, 검정색 384 웰 플레이트를 실온에서 300 ×g로 20분간 원심 분리하여 해동합니다. FCS가 포함되지 않은 실온의 DMEM을 사용하여 트랜스펙션 배지를 준비합니다. 트랜스펙션 시약을 1:200 비율로 희석하고 사용 전 주의 깊게 혼합합니다.시약 분주기를 사용하여 384웰 플레이트의 각 웰에 transfection medium 25 µL를 첨가하고, 플레이트를 앞뒤로 움직여 용액을 혼합합니다. siRNA transfection 시약 복합체가 형성될 수 있도록 플레이트를 상온에서 1시간 동안 배양합니다. 그동안 75 cm² 플라스크의 subconfluent 세포를 세척하기 위해 배양액을 흡입하여 제거하고 0.05% trypsin EDTA in PBS 2.5 mL를 1회 첨가하여 HeLa 세포를 준비합니다.그 다음 신선한 trypsin 1.5 milliliters를 첨가하고, 세포가 둥글게 될 때까지 플라스크를 37 °C에서 2~3분 동안 배양합니다. 미리 데워둔 dmem 60%FCS 10 milliliters를 사용하여 세포를 재부유시킵니다. 이어서 자동 세포 계수기를 사용하여 세포 수를 측정한 후, 16%FCS가 포함된 dmem에서 1 milliliters당 10,000 cells 농도의 세포 현탁액을 준비합니다.트랜스펙션 시약이 들어 있는 각 웰에 세포 현탁액 50 µL를 추가합니다. 이를 통해 웰당 500개의 세포가 들어가게 됩니다. 플레이트를 앞뒤로 움직여 세포를 고르게 분산시킵니다.그런 다음, 세포가 가라앉을 수 있도록 플레이트를 상

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: Casanova, A. 외. 헬라 세포의 브루셀라 감염에 관여하는 숙주 인자의 고처리량 스크리닝을 위한 현미경 기반 분석법. J. Vis. 경험 (2016)이 영상은 상피세포에서 브루셀라 아포터스 감염을 siRNA 매개 STING 넉다운으로 고처리량으로 영상화하여 세포 내 박테리아 복제와 숙주 선천 면역 반응에서 세포질 DNA 감지의 역할을 조사합니다.

숙주 상피 세포에서 세포내 브루셀라 아포터스 감염의 고처리량 영상

우리는 endomembrane 파열을 추적하는 방법을 설명하면 세포 내 박테리아에 의해...

액포 파열의 단일 세포 측정은 세포 내 병원균에 의해 발생

이 기술은 이전 포유류의 세포의 감염에 대한 자연 protozoan 호스트 세포에 미리 재배되고 세균 병원균의 세포 성장을, 수확 정상화하고 계량화 할 수있는 방법을 제공합니다. 이 메소드는 프라이밍 단계뿐만 아니라 대상 셀 유형에 대한 호스트 세포의 다양한 수용하기 위해 수정할 수 있습니다.

Protozoan - 중이오 박테리아와 취급하기 쉬운 포유류의 세포 감염

우리는 고속 3D 라이브 세포 형광 현미경과 고해상도 cryo - 전자 단층 촬영을 결합하여 상호 현미경 방법을 설명합니다. 우리는 이미지 동적 호스트 헬라 세포와 상호 작용하는 작은 HIV-1 입자에 의해 상호 방식의 기능을 보여줍니다.

동적 상호 작용의 3 차원 구조 분석을위한 상호 현미경

여기서는 작은 간섭 합성 RNA(siRNA), 화학 화합물 및 진균 결핵 돌연변이 라이브러리의 고처리량/고함량 스크린에 적용되는 표현성 분석을 설명합니다. 이 방법은 자동 공초점 현미경 검사를 사용하여 형광으로 표지된 숙주 세포 내의 형광표지 진균 결핵의 검출에 의존합니다.

고처리량/고함량 스크리닝에 적용된 세포내 진균의 정량화를 위한 현미경 표티픽 분석

이 비디오 기사는 성공적으로 전체 동물의 척추 생물을 사용하여 복합 검사 및 약물 발견을위한 새로운 강력한 도구를 제공하는 제브라 피쉬 배아 많은 수의 감염 및 분석하기 위해 설립 된 높은 처리 파이프 라인에 대해 설명합니다.

설립과 연구에 높은 처리량 설정 최적화<em&gt; 표피 포도 구균</em&gt;와<em&gt; Mycobacterium의 박테</em&gt; 감염 신약 개발의 모델로

Coxiella burnetii의는 인수 공통 질병 Q 열병에 대한 책임 의무적 세포 내 그람 음성 세균이다. 여기에서 우리는 Coxiella 형광 트랜스포존 돌연변이의 발생뿐만 아니라 자동 식별 및 결과 국제화, 복제 및 세포 독성 표현형의 분석 방법을 설명합니다.

세대와의 멀티 표현형 높은 콘텐츠 상영<em&gt; Coxiella burnetii의</em&gt; 트랜스포존 돌연변이

(1) 세포 내 세균 병원체를 표적으로 하는 진핵 세포 침투 항균제를 동시에 식별하고 (2) 진핵 세포 독성을 평가하기 위해 고처리량 실시간 분석이 개발되었습니다. 그 후 동일한 기술의 변형이 디지털 디스펜싱 기술과 결합되어 용이한 고해상도, 용량 반응, 2차원 및 3차원 시너지 연구를 가능하게 했습니다.

높은 처리량, 실시간, 세포 내 항균 활동의 이중 판독 테스트 및 진핵 세포의 세포 독성

우리는 현재의 연구에서 형질 전환 마우스에서 파생 된 림프구를 사용하여 새로운 형광 기반의 분석을 제시한다. 이 분석은 억제 또는 림프구의 활성을 촉진하거나 용량을 부여 소분자의 고 처리량 스크리닝 (HTS)에 적합하다.

작은 분자의 높은 처리량 스크리닝 적합한 형광 계 분석 림프구

우리는 다 잘 형식 polyacrylamide 기반 분석 결과 부착 세포의 세균성 감염에 기질 경직성의 영향 조사에 대 한 개발 했습니다. 이 분석 결과 cytometry, immunostaining, 그리고 견인 힘 현미경 검사 법, 양적 측정 셀, 그들의 기질, 및 병원 성 박테리아 사이 biomechanical 상호 작용의 수와 호환 됩니다.

부착 세포의 세균성 감염에 기질 경직성의 영향을 공부 다 잘 형식 Polyacrylamide 기반 분석

이 연구는 박테리아 생존력을 신속하게 평가하기 위해 형광 및 발광을 사용하여 최근에 생성된 이중 리포터 균주를 사용하여 Mycobacterium abscessus 에 대한 고처리량 스크리닝을 위한 분석을 개발했습니다. 이 프로토콜은 이 약물 내성 박테리아에 대한 신약을 스크리닝하려는 연구자들과 관련이 있습니다.

Mycobacteria에 대한 고처리량 약물 스크리닝을 위한 분석 개발

학습하세요 현미경 기반 고처리량 스크리닝을 통해 Brucella 감염에 관여하는 HeLa 세포의 숙주 인자를 식별하는 방법을. siRNA 스크리닝과 자동화된 이미지 분석 파이프라인을 활용하여 감염 메커니즘을 연구하고 치료 전략 개발에 활용할 수 있습니다.

에 참여 호스트 요인의 높은 처리량 검사에 대한 현미경 기반 분석 실험

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