향상된 세포 접착 폴리 테트라 플루오로 에틸렌에 젖은 화학 및 펩티드 고정화

이 절차의 전반적인 목표는 플로럴 카본 폴리머 폴리테트라플루오로에틸렌 또는 PTFE에 대한 습식 화학 기반 표면 처리를 제공하는 것입니다. 이 방법은 의료용 폴리머의 생체 적합성을 개선하는 방법과 같은 생체 재료 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 최소한의 장비만 필요하고 이 방법이 다른 방법에 비해 더 일반적으로 적용할 수 있다는 것입니다.

나트륨 나프탈렌 용액의 준비는 엄격하게 무수성 조건을 필요로합니다. 0.25g의 나트륨 금속을 작은 조각으로 잘라 용해를 향상시킵니다. PTFE 코팅된 자기 교반 막대가 장착된 나사로 덮인 100ml 유리병에 20ml의 테트라하이드로퓨란이 포함된 1.4g의 나프텔린 용액에 나트륨 금속을 추가합니다.

용해를 더욱 향상시키기 위해 용액을 적당히 가열합니다. 최종 용액은 어둡고 약간 녹색을 띠며 엄격하게 건조한 조건에서 보관할 수 있습니다. 0.5mm 두께의 호일 재료에서 12mm 직경의 PTFE 디스크를 펀칭합니다.

한쪽을 표시하면 이소 프로판올이 깨끗합니다. 겸자를 사용하여 1-2분 동안 활성화 용액에서 PTFE 샘플을 개별적으로 배양합니다. 흰색에서 짙은 갈색으로의 색상 변화는 성공적인 치료를 나타냅니다.

그런 다음 THF로 두 번 헹군 다음 이소 프로판올로 헹굽니다. 처리된 샘플을 20% 트리클로로아세딕산을 함유한 30% 과산화수소로 3시간 동안 산화시킵니다. 물로 씻고 말리십시오.

이제 표면이 약간 갈색을 띱니다. 산화된 디스크를 건조 THF에서 50% HMDI로 2시간 동안 처리합니다. 그런 다음 THF로 헹구고 말리십시오.

마지막으로, 이소 시안산염 함유 샘플을 물에 2-3 시간 동안 가수분해하고 건조시킵니다. 표시된 면이 위로 향하게 하여 각 아미네이트 디스크를 24웰 플레이트의 개별 웰에 놓습니다. 1.5ml의 에폭사이드 용액을 추가하여 샘플이 완전히 덮이도록 합니다.

2시간 동안 배양한 후 물로 두 번, 탄산염 완충액으로 한 번 씻습니다. 새로운 24웰 플레이트의 개별 웰 바닥에 0.5밀리리터 펩타이드 50마이크로리터와 0.1%아지드화나트륨을 함유한 50밀리몰 탄산염 완충액, pH 9를 추가합니다. 에폭시 기능성 디스크를 펩타이드 용액의 방울 위에 거꾸로 조심스럽게 놓습니다.

우물 바닥과 PTFE 디스크 사이의 공간이 모세관 작용으로 인해 완전히 젖었는지 확인하십시오. 챔버 바닥에 젖은 티슈 페이퍼를 놓아 얻은 가습 분위기의 습식 챔버에서 최소 3시간 동안 또는 밤새 플레이트를 배양합니다. 배양 후에는 물로 3회 세척하고 50% 이소프로판올 물로 최소 30분 동안 살균합니다.

세포 파종 전에, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 샘플을 멸균 인산염 완충 식염수로 헹굽니다. 중요한 화학 반응 단계의 결과는 적외선 분광법으로 모니터링되었습니다. 나트륨 나프탈아미드를 사용한 초기 활성화는 이중 결합을 생성하고, 미미한 정도로, 하이드록실 기능성을 생성합니다.

탄소 이중 결합을 나타내는 신호는 산화 시 사라지고 거의 독점적으로 하이드록실 그룹을 지니는 표면을 생성합니다. 활성화 및 산화로 인한 색상 변화는 예상되는 화학적 성질과 일치합니다. 공액 이중 접합 시스템은 갈색을 띨 것으로 예상되며 이중 접합 시스템이 손실되면 밝아집니다.

또한, 표면 형태학에서 활성화 및 산화의 가능한 결과는 주사 전자 현미경을 통해 조사되었습니다. 치료의 해로운 영향은 거의 관찰되지 않았습니다. 내피 세포 접착 펩타이드, 아르기닌, 글루타민, 아스파르트산 발린을 고분자 표면에 고정화하여 내피 세포 성장을 지원합니다.

처리되지 않은 물질에서는 세포 부착 및 증식이 거의 발생하지 않는 반면, 변형은 2주 동안 집락화를 강력하게 지원합니다. 임상 적용의 예로서, 변형은 팽창된 PTFE로 만든 상업적으로 이용 가능한 이식편의 원래 재료에 대해 동일하게 수행되었으며 1주일 동안 유사한 결과가 나타났습니다. 이 기술을 마스터하면 약 12시간이 걸립니다.

이 절차는 PTFE에만 해당된다는 점을 명심해야 합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 PTFE를 표면화하는 방법과 후속 단계에서 펩타이드를 고정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 절차에 따라 다당류 또는 탯줄 인자와 같은 다른 분자도 유사한 방식으로 고정될 수 있습니다.

독성이 강하고 부식성이 있는 화학 물질로 작업하는 것은 위험하며 표준 예방 조치를 취해야 합니다.