Protocol for the Direct Conversion of Murine Embryonic Fibroblasts into Trophoblast Stem Cells

Caroline Kubaczka; Hubert Schorle

doi:10.3791/54277

JoVE Journal
Developmental Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Developmental Biology

Protocol for the Direct Conversion of Murine Embryonic Fibroblasts into Trophoblast Stem Cells

영양막 줄기 세포로 쥐 배아 섬유 아세포의 직접적인 변환을위한 프로토콜

Full Text

8,074 Views

08:57 min

July 25, 2016

DOI: 10.3791/54277-v

Caroline Kubaczka¹, Hubert Schorle¹

¹Department of Developmental Pathology,Institute of Pathology, University of Bonn Medical School

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에서는 Tfap2c, Gata3, Eomes 및 Ets2의 10일 과발현을 통해 쥐 배아 섬유아세포를 완전한 기능을 갖춘 안정적인 영양막아세포 줄기세포로 직접 전환하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 쥐 섬유아세포에서 선의의 유도 영양막아세포 줄기세포 또는 iTSC를 생성하는 것입니다. 이 방법은 배아와 여분의 배아 계통을 분리하는 장벽의 특성에 관한 줄기세포 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 형질전환 발현이 일시적으로만 활성화되어 안정적으로 전환된 세포의 선택을 용이하게 한다는 것입니다.

생물 안전 레벨 2 실험실에서 적절한 개인 보호 장비를 사용하여 100ml 접시 5개를 폴리-L-라이신 용액 5ml로 덮고 플레이트를 부드럽게 흔들어 코팅 용액이 고르게 분포되도록 합니다. 접시를 섭씨 37도의 인큐베이터에 30분 동안 넣은 다음 폴리-L-라이신을 흡인하고 PBS로 접시를 한 번 헹굽니다. 다음으로, 10 밀리리터의 293 T 세포 배지에 접시 당 10-6 번 293 T 세포를 7 번 플레이트하고 접시를 소용돌이 모양으로 세포를 고르게 분포시키고 접시를 인큐베이터로 되돌립니다.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos