Directed Protein Packaging within Outer Membrane Vesicles from <em>Escherichia coli</em>: Design, Production and Purification

Nathan J. Alves; Kendrick B. Turner; Scott A. Walper

doi:10.3791/54458

에서 외부 막 소포 내에서 감독 단백질 포장 대장균 : 디자인, 생산 및 정제

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Biochemistry

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Directed Protein Packaging within Outer Membrane Vesicles from Escherichia coli: Design, Production and Purification

에서 외부 막 소포 내에서 감독 단백질 포장 대장균 : 디자인, 생산 및 정제

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10:21 min

November 16, 2016

DOI: 10.3791/54458-v

Nathan J. Alves^1,2, Kendrick B. Turner¹, Scott A. Walper¹

¹Center for Bio/Molecular Science & Engineering,Naval Research Laboratory, ²Department of Emergency Medicine,Indiana University of School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

다양한 응용 분야에 걸쳐 구현하기 위해 향상된 효소 안정성을 제공하는 효소 포장 외막 소포체(OMV)의 생산, 정제 및 사용을 위한 프로토콜이 제시됩니다.

이 절차의 전반적인 목표는 in vitro 촉매 시약으로 사용하기 위해 효소로 채워진 박테리아 외막 소포를 정제하고 특성화하는 것입니다. 이 효소 분리 기술을 사용하면 배양 배지에서 박테리아 OMV를 수확한 다음 유기인산염 화합물의 무세포 촉매 작용을 수행하는 데 사용할 수 있습니다. 박테리아 OMV 내의 지시 포장은 종종 효소 활성의 점진적이고 지속적인 손실을 초래하는 기존 기술과 달리 다양한 반응 및 저장 조건에서 효소 안정성을 크게 향상시킵니다.

이 기술의 의미는 치료제 개발, 복원 또는 무세포 촉매 시스템 개발과 같은 여러 분야와 관련된 단백질의 패키징으로 확장됩니다. 이 프로토콜은 E.coli에서 OMV를 정제하는 방법을 자세히 설명하지만, 패키징 전략을 수정한 기술은 다양한 미생물 세포 배양에서 OMV를 정제하는 데 쉽게 사용할 수 있습니다. 텍스트 프로토콜에 따라 박테리아에서 외막 소포 또는 OMV를 생성한 후 온전한 박테리아 배양 배지를 7, 000배 G, 섭씨 4도에서 15분 동안 원심분리합니다.

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