Name: 자기 조립, 분해 Thermoresponsive Hydrogels 반응 압출, 마이크로, 통해 여러 길이 가늠 자에를 조작 하 고 전기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 7 s
Description: 배우세요 온도 반응성 하이드로겔 제조 방법을 hydrazone 가교화학을 이용하여 다양한 크기와 형태를 제어하는 기술입니다. 이 프로토콜은 약물 전달 및 조직 공학 응용을 위한 분해성 소재 개발에 활용됩니다.

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자연 과학 및 공학 연구 위원회의 캐나다 (NSERC), NSERC 만들기에서 자금-저자 (통합 디자인의 세포 외 매트릭스) 20/20 프로그램: NSERC 안과 생체 재료 연구 네트워크, 그리고 연구의 온타리오 교육부와 혁신 초기 연구원 수상 프로그램은 인정 했다.

1입니다. Hydrazide-기능성된 고분자의 합성
참고: 다음과 같은 구체적인 제조 법 30 mol %hydrazide 기능화 함께 PNIPAM 모방 thermoresponsive POEGMA 전조 폴리머 (포10)에 대 한 제공 됩니다. 이 같은 일반 메서드를 사용 하 여 다른 위상 전환 온도 PNIPAM 및 POEGMA 전조 고분자를 준비 하실 수 있습니다 하지만 (다양 한 POEGMA 고분자에 대 한 수정에 대 한 섹션 1.2 참조)21 사용 유형 및 코어 단위체의 비율을 수정 , 25 , 27.
<ol><li>2,2'-azobis(2-methylpropionate) (AIBMe, 초기자)의 37 밀리 그램으로 디 에틸렌 글리콜 메타 크 릴 산 (M(EO)2MA), 3.1 g oligoethyleneglycol 메타 크 릴 산의 0.9 g 무게 (OEGMA475, 475 g/mol n = 7-8 에틸렌 산화물 반복 단위), 523의 µ L 아크릴산 (AA, comonomer), 그리고 20 mL 유리 섬광 유리병에 thiolglycolic 산 (TGA, 체인 전송 에이전트)의 7.5 µ L.</li>
	<li>가0 (실내 온도 전이 온도 POEGMA), M(EO)2MA (없음 OEGMA475) 4.0 g 사용 하 여. 포100 (아무 전이 온도 POEGMA), 4.0 g OEGMA475 (없음 M(EO)2MA)의 사용 합니다. 참고: 중간 단계 전환 온도 달성 될 수 있다 M(EO)2MA의 OEGMA475, 중간 혼합물의 사용에 따라 루 츠 외 에 23
</li>
	<li>하나 이상의 목과 둥근 바닥 플라스 크에 dioxane (5 mL/g 총 단위체)에서 모든 시 약을 디졸브.</li>
	<li>30 분 동안 질소 (UHP 급) 흐름 반응 제거.</li>
	<li>일단 제거, 질소 및 400 rpm 자석 교에서 4 h 75 ° C에서 유지를 미리가 열된 기름 목욕에 플라스 크를 배치 합니다.</li>
	<li>4 h 후 50 ° C와 200 rpm으로 설정 회전 증발 기를 사용 하 여 용 매를 제거 합니다.</li>
	<li>이온을 제거 된 물 150ml에 결과 폴리머 제품을 분해.</li>
	<li>배 어 금 니 과잉에는 폴리머에 통합 하는 AA 잔류물의 수에 추가 하는 아디 산 dihydrizide (ADH) (이 예제에서는 AA 구성 단위체 단위 생산, conductometric 적정에 의하여 폴리머에의 29 mol %).</li>
	<li>4.75 0.1 M HCl을 사용 하 여 pH 해결책의 pH를 조정 합니다.</li>
	<li>PH가 안정 되 면 추가 N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide (EDC) 현재 AA 잔류물의 수에 5 어 금 니 과잉에).</li>
	<li>반응의 산도 4.75 dropwise 추가 0.1 M HCl 4 h 이상 유지 합니다.</li>
	<li>밤새 저 어 반응을 남겨 주세요.</li>
	<li>부 어 3 ~ 30 cm 긴 투 석 튜브 (3500 다 분자량 컷오프, 1 인치 두께), 제품 솔루션 spillage을 최소화 하기 위해 깔때기를 사용 합니다. 튜브 클램프 무결성; 향상의 작은 (~ 2 cm) 세그먼트를 접는 작성 전에 튜브의 하단을 핀치 클램프를 사용 하 여 (기포 제거를 누르면) 맨 반복 충전 완료 되 면. 이온된 수 100 초과 양의 내부 튜브를 배치 하 고 적어도 6 h, 완전히 교체 물 원하는 순도 달성 하기 위해 투 석의 6 주기를 두고.</li>
	<li>최종 건조 폴리머 제품을 얻기 위해 dialyzed 샘플 lyophilize</li>
</ol>2입니다. 알데하이드-기능성된 고분자의 합성
<ol><li>알데하이드-전조 단위체 N-(2,2-Dimethoxyethyl) 메타 크 릴 산 (DMEMA)의 합성<ol>
<li>500 mL 3 목 둥근 바닥 플라스 크에 20 %w / v NaOH 솔루션의 장소 200 mL.</li>
		<li>얼음 목욕에서 솔루션을 냉각 하 고 반응 동안 얼음 0 ° C의 온도 유지.</li>
		<li>Aminoacetyl 알 데히드 디 메 틸 아 세 탈의 50 mL 냉각된 NaOH 솔루션을 추가 합니다.</li>
		<li>템포의 0.1 g에 추가 ((2,2,6,6-Tetramethylpiperidin-1-yl) oxyl) 템포 완전히 해소 될 때까지 자기 볶음 바를 사용 하 여 400 rpm에서 저 어.</li>
		<li>Methacryloyl 염화 dropwise 뷰 렛 2 시간 이상 사용 하 여 48 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>2 시간 후 알루미늄 호 일와 밤새 저 어 두고 반응 배를 커버.</li>
		<li>1 L 분리 깔때기에 석유 에테르의 75 ml 반응 제품을 추가, 떨고, 기체 제거, 및 최상위 계층을 삭제 하 여 제품을 추출 합니다.</li>
		<li>추가 하 여 하단 레이어 제품 각 추출 단계에서 원시 제품으로 다음 추출 주기 단계 2.1.7 세 번을 반복 합니다.</li>
		<li>최종 하단 레이어 제품 및 100 mL 비 커에 제거 합니다.</li>
		<li>추가 ~ 5 g 황산 마그네슘 (Mg2등4) "스노우 글로브"까지 단위체와 비 커에 효과 관찰.</li>
		<li>100ml Mg2제거 하 부 흐 너 깔때기를 통해 필터링 등4.</li>
		<li>Tert-부 틸 메 틸 에테르, 때마다 깔때기를 통해 린스 솔루션을 붓는의 ~ 75 mL로 두 번 비 커를 씻어.</li>
		<li>500 mL 둥근 바닥 플라스 크에 제품을 전송 하 고 실내 온도에서 회전 증발 기를 사용 하 여 용 매를 증발 최종 제품 수집 200 RPM.</li>
	</ol>
</li>
	<li>알데하이드-기능성된 고분자의 합성 참고: 다음과 같은 구체적인 제조 법 30 mol % 알데하이드 기능화 함께 PNIPAM 모방 POEGMA 전조 폴리머 (포10)에 대 한 제공 됩니다. 다른 단계 전환 온도 PNIPAM 및 POEGMA 전조 폴리머 같은 일반 메서드를 사용 하 여 준비 될 수 있다 하지만 (다양 한 POEGMA 고분자에 대 한 수정에 대 한 섹션 1.2 참조)21 사용 유형 및 코어 단위체의 비율을 수정 , 25 , 27.<ol>
<li>2,2'-azobis(2-methylpropionate) (AIBMe), 디 에틸렌 글리콜 메타 크 릴 산 M(EO)2MA, 3.10 g 37 밀리 그램을 무게를 올리고 ethyleneglycol 메타 크 릴 산의 0.1 g (OEGMA475, 475 g/mol, n = 7-8 에틸렌 산화물 반복 단위), 1.30 g의 N-(2, 2- dimethoxyethyl) 아크릴 아 미드 (DMEMA) 및 thiolglycolic 산 (TGA) 20 mL 유리 섬광 유리병에 7.5 µ L.</li>
		<li>가0 (실내 온도 전이 온도 POEGMA), M(EO)2MA (없음 OEGMA475) 4.0 g 사용 하 여. 포100 (아무 전이 온도 POEGMA), 4.0 g OEGMA475 (없음 M(EO)2MA)의 사용 합니다. 참고: 중간 단계 전환 온도 얻을 수 있습니다 M(EO)2MA의 OEGMA475, 중간 혼합물의 사용에 따라 루 츠 외에 따르면. 23
</li>
		<li>하나 이상의 목과 둥근 바닥 플라스 크에 dioxane (5 mL/g 총 단위체)에서 모든 시 약을 디졸브.</li>
		<li>30 분 동안 질소 (UHP 급) 흐름 반응 제거.</li>
		<li>제거, 질소 및 400 rpm 자석 교에서 4 h 75 ° C에서 미리가 열된 기름 목욕 플라스 크 장소 관리.</li>
		<li>4 h 후 50 ° C와 200 rpm으로 설정 회전 증발 기를 사용 하 여 용 매를 제거 합니다.</li>
		<li>결과 폴리머 제품 이온된 H2o.의 100 mL에 녹</li>
		<li>녹은 솔루션에 50 mL의 1 M HCl 추가 하 고 DMEMA에 아 세 탈 기능을 완벽 하 게은 하 24 h 자석 교 반 (400 RPM)에서 저 어.</li>
		<li>반응 완료 후, 폴리머 솔루션 단계 1.13에 의하여 투 석 튜브로 전송 합니다.</li>
		<li>최종 건조 폴리머 제품을 얻기 위해 dialyzed 샘플 lyophilize</li>
	</ol>
</li>
</ol>3입니다. Hydrazone 가교 된 대량 Hydrogels의 제조
<ol><li>Hydrazide와 10mm 버퍼링 하는 인산 염 (PBS), 별도로 알데하이드 기능성된 고분자 또는 원하는 농도의 솔루션을 만들 원하는 어떤 수성 버퍼를 분해. 참고: 5-40 wt % 사이 질량 농도 일반적으로 사용 가능한 높은 기능 그룹 분수는 고분자에 존재 하는 경우 더 낮은 농도에서 겔 화와.</li>
	<li>싱글 배럴 주사기를 사용 하 여 전송 솔루션, 각 전조 솔루션 (~ 1 mL 각) 더블 배럴 주사기 (2.5 mL 볼륨, 1:1 비율 주사기)의 별도 배럴으로 정적 믹서 (1.5"길이)와 (선택적으로) (일반적으로 18 G, 주사기에 부착 된 로드 1.5"길이 생체 외에서 연구에 대 한) 및 (선택적으로) 주사기 (일반적으로 18 G, 1.5" 생체 외에서 연구를 위한 길이).</li>
	<li>실리콘 고무 시트에 원하는 두께, 모양, 및 펀치 구멍 직경의 금형을 준비 합니다. 참고: 일반적인 실험에 표준 펀치 세트 1/16"두꺼운 실리콘 고무 시트 (저수지 ~ 300 µ L의 총 볼륨) 안에 7 m m 직경 원통형 구멍 펀치를 사용 됩니다.</li>
	<li>표준 유리 현미경에 실리콘 몰드 금형에 구멍 뚫은 구멍을 같은 슬라이드 마운트 완전히 유리에 의해 뒷받침 됩니다.  유리의 0.1 M HCl 세척 권장 하지만 실리콘 금형의 설치 하기 전에 필요 하지 않습니다.</li>
	<li>공동 완전히 채우기 (또는 상단에 초승달 모양으로 약간 연극) 실리콘 몰드 정적 믹서를 통해 더블 배럴 주사기 내용을 압출 성형. 참고: 여러 샘플 한 압출 샘플 동안 겔 화 시간 동일한 크기 순서에 또는 여러 금형을 작성 하는 데 필요한 총 시간 보다 더 오래 된 준비 수 있습니다.</li>
	<li>다른 표준 유리 현미경 슬라이드 금형 위에 놓고 완료를 겔 화에 대 한 대기 합니다. 참고: 표준 조리법 내 종합 섹션 젤에 설명 된 < 1 분; 느린 겔 화 시간 (및 더 이상 필요한 대기 시간) 낮은 기능 그룹 밀도, 낮은 폴리머 농도 및 OEGMA475 M(EO)2MA (POEGMA hydrogels) 기준의 더 높은 조각에서 관찰 된다.</li>
	<li>최고의 현미경 슬라이드를 제거 하 고 주걱을 사용 하 여 실리콘 고무 금형에서 하이드로 겔을 밀어.</li>
	<li>추가 테스트를 위해 hydrogels 복구 낮은 현미경 슬라이드에서 형을 들어올립니다.</li>
</ol>4입니다. Hydrazone 가교 화 젤 미의 제조
<ol><li>미세 칩의 제조<ol>
<li>실리콘 웨이퍼를 탈수 (D = 76.2 m m, 380 µ m 두께, P 첨가, < 100 > 방향)가 5 분 동안 200 ° C에서 열판에 열.</li>
		<li>Spin coater 및 외 투의 수 8 ~ 7 mL를 적용 하 여 감광 제 수-8 100 ~ 100 µ m 두꺼운 층 저항에 웨이퍼 중심, 500 rpm/s, 누른 다음 속도 3000 rpm에서 30 초간의 속도로 최대 3000 rpm 속도 스핀 램프.</li>
		<li>미리 구워 10 분 동안 65 ° C에서 코팅과 다음 소프트-빵 30 분 동안 95 ° C에 코팅.</li>
		<li>인쇄는 포토 마스크는 투명성에 그림 2A에 의해 정의 된 미세 패턴으로는 투명 한 섹션은 생산 포토 레지스트 층의 원하는 패턴.</li>
		<li>감광 제 코팅 실리콘 웨이퍼와 포토 마스크는 마스크 동기 기에 넣고 95 365 nm 빛에 웨이퍼를 노출 s (6.5 W 노출 전원).</li>
		<li>65 ° C에서 열판에 그것을 배치 하 고 이후 10 ° C/min에서 95 ° C에 열판을가 열 하 여 95 ° C에서 10 분에 대 한 패턴된 웨이퍼를 먼저 구워.</li>
		<li>열판 및 포함 하는 적어도 10 분 동안 100 mL 수 8 개발자, 비 노출 감광 제를 제거 하려면 전체 솔루션에서 천천히 웨이퍼 소용돌이 500 mL 비 커에 장소에서 웨이퍼를 제거 합니다. 10 분 후 소 프로 파 놀과 패턴된 웨이퍼를 헹 구 고 건조 한 공기. 소프트 리소 그래피 복제 성형에 대 한 사용에 빛에서 차갑고, 건조 환경에서 패턴화 된 웨이퍼를 저장 합니다.</li>
		<li>페 트리 접시에 미세 패턴된 금형을 놓습니다. 후미와 칩의 콘센트에 L/S 13 실리콘 튜브의 위치 ~ 10 m m 길이</li>
		<li>폴 리 (디 메 틸 실록 산)의 ~ 10 mL를 붓고 (PDMS; 10:1 비율에서 실리콘 고무 베이스와 실리콘 탄성 중합체 경화 에이전트를 혼합 하 여 준비), 칩 위에 통합 배치 실리콘 튜브 내에서 어떤 PDMS 피하 신중 하 게.</li>
		<li>~ 10 분 경화 하는 동안에 및 패턴 구조를 유지 하는 기포를 제거 하는 진공 챔버에 페 트리 접시를 놓습니다.</li>
		<li>꽃무늬 형과 2-3 h 85 ° C에서 열판에 uncured PDMS를 포함 하는 배양 접시를 배치 하 여 있는 PDMS를 치료.</li>
		<li>조심 스럽게 노출 미세 금형의 소프트 리소 그래피 패턴된 PDMS 복제 패턴된 실리콘 웨이퍼에서 치료 PDMS를 벗기십시오.</li>
		<li>장소 패턴화 된 PDMS와 유리 슬라이드는 고 전력 플라즈마에 거꾸로 청소기 공기 피드. 200 mTorr에서 플라즈마와 45 W 90 적용 유리 슬라이드에 PDMS 본드와 마지막 미세 칩을 만들 s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>젤 미의 합성<ol>
<li>NIPAM (4.5 g), 아크릴산 (0.5 g-15 몰 % 총 단위체), thioglycolic 산 (TGA, 80 µ L), 및 2, 2-azobisisobutyric 산 디 메 틸 에스테 르 (AIBME, 0.056 g)의 무수 에탄올 20ml에 용 해 하 여 hydrazide 기능성된 PNIPAM (PNIPAM-Hzd)를 준비 하 고 비록 단계 1.5에서에서 56 ° C를 반응 온도 변경 이후 단계 1.4-1.14를 합성, 완료 다음.</li>
		<li>20에 NIPAM (4g), N-(2, 2-dimethoxyethyl) 메타 (DMEMA, 0.95 g-13.4 mol % 총 단위체), thioglycolic 산 (TGA, 80 µ L), 및 2, 2-azobisisobutyric 산 디 메 틸 에스테 르 (AIBME, 0.056 g)을 용 해 하 여 알 데히드 기능성된 PNIPAM (PNIPAM-Ald)를 준비 mL 에탄올과 합성, 완료 단계 2.2.4-2.2.10 이후에 다음의 반응 온도 56 ° C를 변경 하지만에서 단계 2.2.5.</li>
		<li>별도 표준 5 mL 주사기로 PNIPAM Hzd 및 PNIPAM Ald 이온된 수와 부하 6 wt %에서 디졸브.</li>
		<li>1 wt % 비 계면 활성 제 (예: 스팬 80) 무거운 파라핀 기름에 녹이 고 표준 60 mL 주사기에는 솔루션을 로드.</li>
		<li>미세 칩 및 1/32 년 "ID 실리콘 튜브 입구, 당 (~ 30 cm 길이 통해 미세 칩에 오일 주입구로 파라핀 오일 솔루션에 두 개의 별도 폴리머 입구 채널에 두 선구자 폴리머 솔루션 주사기를 개별적으로 연결 하는 방법 ~ 45 cm 길이 콘센트 당)입니다.</li>
		<li>주입 주사기 펌프 (상류 석유에 대 한 하나, 하나 노즐 후 추가 기름)을 분리, 하 프라임 칩 칩 폴리머 흐름을 시작 하지 않고 1.1 mL/h 5.5 mL/h 사이의 유량에 칩에 석유를 제공 하는 것을 2 개를 사용 하 여 결함이 없는 고 운영 (일반적으로 유지 30 분 동안).</li>
		<li>별도 주입 주사기 펌프를 사용 하 여 0.03 mL/h의 유량에 칩을 수성 폴리머 솔루션을 제공 합니다.</li>
		<li>흐름은 equilibrated 하 고 균일 한 입자 (30 분-1 시간), 형성 되는 초기 안정화 기간에 따라 자석으로 촉발된 둥근 바닥 플라스 크에 입자를 수집 합니다.</li>
		<li>모든 기름 소비 (12-55 h, 흐름에 따라) 될 때까지 입자를 수집 합니다. 주사기 펌프를 중지 하 고, 원하는 경우, 즉시 청소 칩을 통해 선구자 폴리머 솔루션 대신 물 펌프.  그러나, 흐름이 중지 되 면 이러한 자료의 신속한 현장에서 겔 화를 감안할 때, 그것이 좋습니다 각 별도 실험에 대 한 새로운 칩을 사용 하 여.</li>
		<li>마그네틱 감동 끄고 정착 젤 미 허용. 피 펫을 사용 하 여 모든 사용 가능한 파라핀 기름에서 가만히 따르다.</li>
		<li>제거 하려면 나머지 파라핀 오일, 젤 미 pentane (microparticle 볼륨의 모든 0.5 ml 10 mL의 볼륨에 적용)와 세척, 적극적으로 대 한 유제를 혼합 ~ 1 분 ~ 1-2 다시 정착 젤 미 허용 시간, 그리고에서 가만히 따르다 잔여 유기 단계는 피 펫을 사용 하 여입니다. 전체 파라핀 기름 제거를 보장 하기 위해 5 번 이상 반복 합니다.</li>
		<li>20 mL 유리 섬광 유리병 안에 10 mL 이온된 물에 젤 미 resuspend 고 하룻밤 사이 모든 잔여 pentane 제거를 질소로 병을 제거.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5입니다. Hydrazone 가교 된 Nanogels의 제조
<ol><li>재고 솔루션 PNIPAM Hzd의 분해 (1 w/v%) 및 PNIPAM Ald (1 w/v%) 이온된 수에. 각각 4.2.1 및 4.2.2, 섹션에 설명 된 대로 PNIPAM Hzd와 PNIPAM Ald를 준비 합니다.</li>
	<li>PNIPAM Hzd 재고 솔루션을 70˚C 20 mL 유리 섬광 유리병 안에 자기 감동 (350 RPM)에서 기름 목욕을 사용 하 여 약 5 mL 수 열. 참고: 솔루션 불투명 될 것 (즉 온도 PNIPAM Hzd의 낮은 중요 한 솔루션 온도 초과), 하지만 아무 표시 침전을 형성 한다.</li>
	<li>PNIPAM Ald의 약 0.25 mL 수 추가 (PNIPAM Hzd의 질량의 5-20 wt % 씨 솔루션에) 5-10 s 동안 온수 PNIPAM Hzd 솔루션으로 drop-wise.</li>
	<li>섬광에 솔루션 리 바이 알에 제거 후 추가 15 분, 기름 목욕에서 샘플 혼합 계속 고 하룻밤 사이 실내 온도에 냉각 제품.</li>
	<li>어떤 비 가교 된 폴리머를 제거 하는 이온된 수에 대 한 결과 nanogels 6 x 6 시간 주기에 (3500 kDa MWCO 투 석 막 사용) dialyze. 원하는 경우 저장을 위해 lyophilize.</li>
</ol>6입니다. Hydrazone 가교 된 Nanofibers의 제조
<ol><li>Hydrazide 기능성된 POEGMA (POEGMA-Hzd) 37 mg 디 메 틸 2,2'-azobis(2-methylpropionate) (AIBMe), 4.0 g oligoethyleneglycol 메타 크 릴 산을 용 해 하 여 준비 (OEGMA475, 475 g/mol, n = 7-8 에틸렌 산화물 반복 단위), 및 0.25 g 아크릴산 (AA) 20 mL dioxane에 단계 1.3-1.14 합성을 완료 하려면 다음.</li>
	<li>50 mg 디 메 틸 2,2'-azobis(2-methylpropionate) (AIBMe), 4.0 g oligoethyleneglycol 메타 크 릴 산을 용 해 하 여 알 데히드 기능성된 POEGMA (POEGMA-Ald) 준비 (OEGMA475, 475 g/mol, n = 7-8 에틸렌 산화물 반복 단위), 그리고 0.60 g N-(2, 2- 20 mL dioxane에 합성을 완료 하려면 다음 단계 2.2.3-2.2.10 dimethoxyethyl) 메타 (DMEMA)</li>
	<li>POEGMA-Hzd 분해 (15 wt %)와 POEGMA-Ald (15 wt %) 별도 이온된 수 솔루션에서.</li>
	<li>폴 리 (에틸렌 산화물) 해산 (PEO, Mw600 x 103 g/mol, 5 wt % =) 이온된 수에.  각 반응 POEGMA 솔루션 단계 6.3에서에서 7.5 wt %POEGMA 전조 폴리머와 2.5 wt %PEO 최종 전조 솔루션을 만들 준비와 PEO 솔루션의 믹스 1 mL.</li>
	<li>섹션 3 (1.5"정적 믹서를 포함 하 여)에 설명 된 동일한 더블 배럴 주사기의 별도 배럴으로 두 가지 솔루션을 로드 하 고 더블 배럴 주사기 주입 주사기 펌프에 탑재.</li>
	<li>더블 배럴 주사기를 정적 믹서와 블런트 팁 18 G 바늘을 첨부 합니다.</li>
	<li>수집기에 접지 블런트 팁 바늘에 높은 전압 전원 공급 장치를 연결 합니다. 참고: 수집 구성 10 m m x 10 m m 알루미늄 호 일의 광장 중 하나 또는 ~ 10 m m 직경 알루미늄 디스크 200 rpm의 속도로 회전, 모두 탑재 수직 10 cm의 거리에서 바늘을 바늘의 끝에서.</li>
	<li>0.48 mL/h의 속도로 주사기 펌프를 시작 하 고, 8.5의 높은 전압에 스위치를 동시에 수행 하는 전기 고 nanofibers 만들 kV.</li>
	<li>계속 입구 솔루션 소진 될 때까지 또는 다른 두께의 건설 기계를 만들기 위해 원하는 대로 뽑아냅니다.</li>
	<li>PEO 전기 원조를 제거 하려면 24 h 이온된 수에 대 한 수집 된 건설 기계를 담근 다.</li>
</ol>

<ol><li>Heskins, M., Guillet, J. E. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/10601326808051910">Solution Properties of Poly(N-isopropylacrylamide).</a> J. Macromol. Sci. A. 2 (8), 1441-1455 (1968).</li>
<li>Lutz, J. -F., Akdemir, Ö, Hoth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Point+by+Point+Comparison+of+Two+Thermosensitive+Polymers+Exhibiting+a+Similar+LCST%3A+Is+the+Age+of+Poly%28NIPAM%29+Over%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Point by Point Comparison of Two Thermosensitive Polymers Exhibiting a Similar LCST: Is the Age of Poly(NIPAM) Over.</a> J. Am. Chem. Soc. 128 (40), 13046-13047 (2006).</li>
<li>Pelton, R. H., Chibante, P. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0166662286802748">Preparation of Aqueous Lattices with N-Isopropylacrylamide.</a> Colloids Surf. 20 (3), 247-256 (1986).</li>
<li>Palasis, M., Gehrke, S. H. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0168365992902056">Permeability of Responsive Poly(N-Isopropylacrylamide) Gel to Solutes.</a> J. Controlled Release. 18 (1), 1-11 (1992).</li>
<li>Kawaguchi, H., Fujimoto, K., Mizuhara, Y. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF00656929">Hydrogel Microspheres .3. Temperature-Dependent Adsorption of Proteins on Poly-N-Isopropylacrylamide Hydrogel Microspheres.</a> Colloid Polym. Sci. 270 (1), 53-57 (1992).</li>
<li>Okuyama, Y., Yoshida, R., Sakai, K., Okano, T., Sakurai, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8241069">Swelling Controlled Zero-Order and Sigmoidal Drug-Release from Thermoresponsive Poly(N-Isopropylacrylamide-Co-Butyl Methacrylate) Hydrogel.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 4 (5), 545-556 (1993).</li>
<li>Snowden, M. J. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/-/content/articlelanding/1992/c3/c39920000803#!divAbstract">The Use of Poly(N-Isopropylacrylamide) Lattices as Novel Release Systems.</a> J. Chem. Soc. - Chem. Comm. (11), 803-804 (1992).</li>
<li>Haraguchi, K., Takehisa, T., Ebato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+cell+cultivation+and+cell+sheet+detachment+on+the+surface+of+polymer%2Fclay+nanocomposite+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Control of cell cultivation and cell sheet detachment on the surface of polymer/clay nanocomposite hydrogels.</a> Biomacromolecules. 7 (11), 3267-3275 (2006).</li>
<li>Lee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiated+chemical+vapor+deposition+of+thermoresponsive+poly%28N-vinylcaprolactam%29+thin+films+for+cell+sheet+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Initiated chemical vapor deposition of thermoresponsive poly(N-vinylcaprolactam) thin films for cell sheet engineering.</a> Acta Biomater. 9 (8), 7691-7698 (2013).</li>
<li>Cole, M. A., Voelcker, N. H., Thissen, H., Griesser, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimuli-responsive+interfaces+and+systems+for+the+control+of+protein-surface+and+cell-surface+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Stimuli-responsive interfaces and systems for the control of protein-surface and cell-surface interactions.</a> Biomaterials. 30 (9), 1827-1850 (2009).</li>
<li>Feil, H., Bae, Y. H., Feijen, J., Kim, S. W. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/037673889180099R">Molecular Separation by Thermosensitive Hydrogel Membranes.</a> J. Membrane Sci. 64 (3), 283-294 (1991).</li>
<li>Kim, J., Park, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10432576">Smart hydrogels for bioseparation.</a> Bioseparation. 7 (4-5), 177-184 (1998).</li>
<li>Yamashita, K., Nishimura, T., Nango, M. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/pat.290/abstract">Preparation of IPN-type stimuli responsive heavy-metal-ion adsorbent gel.</a> Polym. Adv. Tech. 14 (3-5), 189-194 (2003).</li>
<li>Ziolkowski, B., Czugala, M., Diamond, D. <a target="_blank" href="http://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1045389X12459591?journalCode=jima">Integrating stimulus responsive materials and microfluidics: The key to next-generation chemical sensors.</a> J. Intelligent Mater. Syst. Struct. 24 (18), 2221-2238 (2013).</li>
<li>Zhang, Y., Kato, S., Anazawa, T. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0964-1726/16/6/020">A flap-type hydrogel actuator with fast responses to temperature.</a> Smart Mater. Struct. 16 (6), 2175-2182 (2007).</li>
<li>Suzuki, D., Taniguchi, H., Yoshida, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomously+Oscillating+Viscosity+in+Microgel+Dispersions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Autonomously Oscillating Viscosity in Microgel Dispersions.</a> J. Am. Chem. Soc. 131 (34), 12058-12059 (2009).</li>
<li>Schild, H. G. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/007967009290023R">Poly(N-isopropylacrylamide): Experiment, Theory and Application.</a> Prog. Polym. Sci. 17, 163-249 (1992).</li>
<li>Oh, J. K., Min, K., Matyjaszewski, K. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ma060258v">Preparation of poly (oligo (ethylene glycol) monomethyl ether methacrylate) by homogeneous aqueous AGET ATRP.</a> Macromolecules. 39 (9), 3161-3167 (2006).</li>
<li>Vihola, H., Laukkanen, A., Tenhu, H., Hirvonen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+Release+Characteristics+of+Physically+Cross-Linked+Thermosensitive+Poly%28N-vinylcaprolactam%29+Hydrogel+Particles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Drug Release Characteristics of Physically Cross-Linked Thermosensitive Poly(N-vinylcaprolactam) Hydrogel Particles.</a> J. Pharm. Sci. 97 (11), 4783-4793 (2008).</li>
<li>Zhang, L. F., Liang, Y., Meng, L. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/pat.1495/abstract">Thermo-sensitive amphiphilic poly(N-vinylcaprolactam) copolymers: synthesis and solution properties.</a> Polym. Adv. Tech. 21 (10), 720-725 (2010).</li>
<li>Smeets, N. M. B., Bakaic, E., Patenaude, M., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+and+tunable+poly%28ethylene+glycol%29+analogue+hydrogels+based+on+poly%28oligoethylene+glycol+methacrylate%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Comm%22%5BJournal%5D)">Injectable and tunable poly(ethylene glycol) analogue hydrogels based on poly(oligoethylene glycol methacrylate).</a> Chem. Comm. 50 (25), 3306-3309 (2014).</li>
<li>Lutz, J. -F. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/pola.22706/full">Polymerization of oligo (ethylene glycol)(meth) acrylates: toward new generations of smart biocompatible materials.</a> J. Polym. Sci. A. 46 (11), 3459-3470 (2008).</li>
<li>Lutz, J. -F., Hoth, A. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ma0517042">Preparation of Ideal PEG Analogues with a Tunable Thermosensitivity by Controlled Radical Copolymerization of 2-(2-Methoxyethoxy)ethyl Methacrylate and Oligo(ethylene glycol) Methacrylate.</a> Macromolecules. 39 (2), 893-896 (2006).</li>
<li>Patenaude, M., Campbell, S., Kinio, D., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+Gelation+Time+and+Morphology+of+Injectable+Hydrogels+Using+Ketone-Hydrazide+Cross-Linking%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Tuning Gelation Time and Morphology of Injectable Hydrogels Using Ketone-Hydrazide Cross-Linking.</a> Biomacromolecules. 15 (3), 781-790 (2014).</li>
<li>Patenaude, M., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/mz200121k">Injectable, Degradable Thermoresponsive Poly(N-isopropylacrylamide) Hydrogels.</a> ACS Macro Lett. 1 (3), 409-413 (2012).</li>
<li>Patenaude, M., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable%2C+Mixed+Natural-Synthetic+Polymer+Hydrogels+with+Modular+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Injectable, Mixed Natural-Synthetic Polymer Hydrogels with Modular Properties.</a> Biomacromolecules. 13 (2), 369-378 (2012).</li>
<li>Smeets, N. M. B., Bakaic, E., Patenaude, M., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+poly%28oligoethylene+glycol+methacrylate%29-based+hydrogels+with+tunable+phase+transition+behaviours%3A+Physicochemical+and+biological+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Injectable poly(oligoethylene glycol methacrylate)-based hydrogels with tunable phase transition behaviours: Physicochemical and biological responses.</a> Acta Biomater. 10 (10), 4143-4155 (2014).</li>
<li>Sivakumaran, D., Mueller, E., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-Induced+Assembly+of+Monodisperse%2C+Covalently+Cross-Linked%2C+and+Degradable+Poly%28N-isopropylacrylamide%29+Microgels+Based+on+Oligomeric+Precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Temperature-Induced Assembly of Monodisperse, Covalently Cross-Linked, and Degradable Poly(N-isopropylacrylamide) Microgels Based on Oligomeric Precursors.</a> Langmuir. 31, 5767-5778 (2015).</li>
<li>Bakaic, E., Smeets, N. M. B., Dorrington, H., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2015/ra/c5ra00920k?iscitedby=True#!divAbstract">"Off-the-shelf" thermoresponsive hydrogel design: tuning hydrogel properties by mixing precursor polymers with different lower-critical solution temperatures.</a> RSC Adv. 5 (42), 33364-33376 (2015).</li>
<li>Bulpitt, P., Aeschlimann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+strategy+for+chemical+modification+of+hyaluronic+acid%3A+Preparation+of+functionalized+derivatives+and+their+use+in+the+formation+of+novel+biocompatible+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res%22%5BJournal%5D)">New strategy for chemical modification of hyaluronic acid: Preparation of functionalized derivatives and their use in the formation of novel biocompatible hydrogels.</a> J. Biomed. Mater. Res. 47 (2), 152-169 (1999).</li>
<li>Kesselman, L. R. B., Shinwary, S., Selvaganapathy, P. R., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+Monodisperse%2C+Covalently+Cross-Linked%2C+Degradable+%22Smart%22+Microgels+Using+Microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Synthesis of Monodisperse, Covalently Cross-Linked, Degradable "Smart" Microgels Using Microfluidics.</a> Small. 8 (7), 1092-1098 (2012).</li>
<li>Sivakumaran, D., Mueller, E., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2017/sm/c7sm01361b#!divAbstract">Microfluidic production of degradable thermoresponsive microgels based on poly(N-isopropylacrylamide).</a> Soft Matter. , (2016).</li>
<li>Xu, F., Sheardown, H., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+Electrospinning+of+Degradable+Poly%28oligoethylene+glycol+methacrylate%29-Based+Nanofibrous+Hydrogel+Networks%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Comm%22%5BJournal%5D)">Reactive Electrospinning of Degradable Poly(oligoethylene glycol methacrylate)-Based Nanofibrous Hydrogel Networks.</a> Chem. Comm. 52 (7), 1451-1454 (2016).</li>
<li>Troll, K., et al. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00396-008-1871-5">The collapse transition of poly(styrene-b-(N-isopropyl acrylamide)) diblock copolymers in aqueous solution and in thin films.</a> Colloid Polym. Sci. 286 (8), 1079-1092 (2008).</li>
<li>Patenaude, M., Campbell, S., Kinio, D., Hoare, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+Gelation+Time+and+Morphology+of+Injectable+Hydrogels+Using+Ketone-Hydrazide+Cross-Linking%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Tuning Gelation Time and Morphology of Injectable Hydrogels Using Ketone-Hydrazide Cross-Linking.</a> Biomacromolecules. 15 (3), 781-790 (2014).</li>
<li>Kelly, T. A., Felder, M. S., Ollar, R. A. Inducing Apoptosis in a Mammalian Cell by Contacting with Paraffin or Agar. US Patent. , 6,274,377 (2001).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

우리가 성공적으로 PNIPAM 및 POEGMA; 위의 세부 사항에서 설명 하는 방법의 약간의 변화만을 사용 하 여 여러 폴리머 시스템에 이러한 모든 제조 기술 적용 그러나, 이러한 프로토콜의 사용자가이 과정으로 다른 고분자 대체 됩니다 때 발생할 수 있는 잠재적인 문제를 인식 해야 합니다. 특히, 전 구체 고분자의 점도 증가 수 있습니다 부정적인 영향을 두 선구자 고분자의 혼합의 효율성과 (특히 미세 메서드)에서 공정 화에 기인한 둘 다. 또한,는 고분자의 겔 화 시간 흐름을 억제 또는 원하는 형성에 필수적인 반응 사전 폴리머의 interdiffusion를 방지 하는 역할 조 겔 화를 피하기 위하여 표적으로 하는 형태에 따라 속도 제어 해야 합니다. 균질 젤 구조입니다. 우리는 각 제조 길이 규모에서 이러한 제한을 해결 하기 위해 이러한 접근 방식에 맞게 사용 하는 방법 뿐만 아니라 각 전략의 구체적인 제한 아래 설명 되어 있습니다.
더블 배럴 주사기 공동 압출 통해 hydrogels 대량 겔 화 시간 제어 대량 hydrogels 위한 더블 배럴 주사기 기술의 효 험에 핵심 변수 이다. 너무 빨리 접촉 시 젤 고분자 (< 1-2 s) 정적 믹서, 흐름을 완전히 중지 또는 비 화학 량 론 양의 두 선구자 폴리머 주사기에서 돌출 되 고 그 결과 방해할 수 있습니다. 우리는 겔 화 시간 발견 > 5 s는 (비록 선택)는 것이 좋습니다;이 기술의 사용에 대 한 이것은 복제 hydrogels 각 히드로 캐스트 같은 구성이 물리적 또는 기계적인 분석에 대 한 캐스팅 되는 경우에 특히 중요 하다. 겔 화 시간에 반응성 기능 그룹의 밀도 변경 하 여 쉽게 변경할 수 있습니다 또는 전조 폴리머 (기능 그룹 저밀도 느린 겔 화 선도) 또는 전조 고분자의 농도 변경 젤 (형성 하는 데 사용 느린 겔 화를 선도 하는 농도 낮은)21. 또는 결과 하이드로 겔35의 구성을 크게 변경 하지 않고 겔 화 시간을 감소 시킨다 교체 (더 반응) 알데하이드 그룹 (덜 반응) 케 톤 그룹 고 쌍 electrophile로 크게 ; 폴리머 알 데히드의 혼합물으로 준비 하 고 케 톤 단위체 선구자 사용 전 구체 고분자의 농도 (그리고 이렇게 고체 결과 젤 형성에서 대량 비율)을 변경 하지 않고 원하는 대로 겔 화 시간을 조정 하는 데 사용할 수 있습니다.
우리는 첫 번째 히드로 캐스트 항상는 후속 hydrogels 캐스팅, 약간의 차이는 두 개의 배럴의 내용을 실제로 정적 믹서에 도달 하는 속도 관측으로 동일한 속성 유의 것 이다. 결과적으로, 우리가 일반적으로 프라임 더블 배럴 주사기 작은 밀어내어 (< 0.3 mL) 이러한 가변성을 최소화 하기 위해 주조 과정을 시작 하기 전에 젤의 분수. 마지막으로, 일반적으로 oligomeric 합성 사전 폴리머를 사용 하는 경우 문제, 동안 하나 이상의 전조 폴리머 솔루션의 점도 모두 엄지손가락 간단한 우울증을 사용 하 여 흐름을 용이 하 게이 기술의 맥락에서 도전 포즈 수 있습니다. 정적 믹서에서 혼합 하는 효과적인 홍보 뿐만 아니라. 그러나, 다소 의외로 크게 다른 점도와 심지어 전조 폴리머 솔루션 아직도 형성 상대적으로 균질 hydrogels 부품 리스트에서 설명한 정적 믹서 첨부 파일을 사용 하 여 (예를 들어, PNIPAM 높은 분자 무게 탄수화물26), 그 결과로 잘못 일치 점도 비효율적인 혼합에 대 한 우려를 제안 수 없습니다 중요 한 적어도 대량 규모에. 필요한 경우 드라이브 흐름을 (엄지) 대신 주사기 펌프의 사용 및/또는 콘센트에 더 큰 계기 바늘의 사용 수 있습니다 이러한 시스템에서 extrudability와 관련 된 문제를 극복.
반응 마이크로 통해 미 hydrogels 젤 microparticle 제조에 대 한 마이크로 접근와 관련 된 주요 단계 2 반응성 폴리머와 마이크로 칩의 프라이 밍 이다. 중합체는 칩에 다른 압력 또는 다른 속도로 전달 됩니다, 경우 차동 압력 저수지로 한 전조 폴리머 솔루션의 역류를 구동할 수 있다 (또는 적어도 저수지 쪽으로) 다른 전조 폴리머의. 입자 형성, 흐름을 효과적으로 차단 하 고 따라서 칩 처리를 요구에서 상류를 겔 화 발생 합니다. 각 저수지와 믹싱 포인트 사이 각 인 고문 경로 역류;에 상당한 저항을 만듭니다. 그러나, 심지어 훈련된 연산자는 안정적인 흐름 정권을 달성 하기 전에 칩을 젤 때때로 것 이다. 우리의 경험을 바탕으로, 1-2 분 사이 일반적으로 (시간 이상 비교적 polydisperse 젤 미 생산); 방울 형성의 개시 다음 흐름을 안정화 하는 데 필요한 아무런 문제가 작업의 첫 번째 5-10 분 내에서 관찰 된다, 그것 높습니다 몇 시간의 연속 단 분산 입자를 얻을 수 있습니다. 순간 비 겔 화 시간으로 비교적 잘 일치 점도 전조 폴리머를 사용 하 여 (적어도 > 15 s 바람직) 이러한 문제를 방지 하 고 안정적인 흐름의 형성을 촉진에 도움이 크게.
참고 다양 한 흐름 속도 0.01-0.1에서 배열 mL/수성 단계에 있는 h와 1.1-5.5 mL/h 오일 단계에서 테스트 되었습니다 ~ 25-100의 크기 범위에 입자의 제조로 이어지는이 칩 디자인을 사용 하 여 전단에 적용에 따라 µ m는 흐름 초점 접합; 빠른 흐름 속도 높은 전단으로 간주 하 고 따라서 더 작은 입자 형성31,32. 총 수성 흐름 율 낮은 (~0.03 mL/h로 프로토콜에서 인용) monodispersity 또는 소자의 수명 저하 없이 젤 microparticle 크기를 제어 하는 가장 효율적으로 발견 유지 하면서 오일 유량 변화, 둘 다 했다 크게 높은 끝 인용된 총 수성 흐름 율의 감소를 관찰. 더 큰 기름 흐름 율 (> 5.5 mL/h)를 만드는 작은 입자는 가능 하지만 칩 박 (플라즈마 보 세 PDMS 미세 칩 발생 일반적인 제한)의 위험을 증가. 다른 방법을 사용 하 여 칩 본딩 빠른 흐름 속도 및 이렇게 더 작은 젤 microparticle 생산, 우리가 현재 탐험 전략 사용 수 있습니다. 노즐의 크기를 감소 또한 이기는 하지만 위험이 높아 입자 형성 하기 전에 조 겔의 생산 될 수 있는 미의 크기를 줄이기 위해 도움이 됩니다. 불안 따라서 더 높은 polydispersities 및 칩 겔 화;의 증가 위험을 리드 하는 경향이 느린 흐름 율 이 제한 높은 안정성, 높은 해상도이 프로토콜에 사용 되는 표준 주사기 펌프 보다는 멀티 채널 미세 흐름 제어 시스템을 사용 하 여 극복할 수 있습니다.
오일의 선택은 무거운 오일 (컬렉션 후 젤 microparticle 덩어리 방지 측면에서 유리한)로이 프로토콜의 성공에 중요 한 가벼운 실리콘 오일에 보고 보다는 노즐에서 매우 보다 적게 일관 된 입자 형성을 주도 프로토콜입니다. 우리이 감소 가설 재현성은 주사기 더 가변 전단 혼합 지점에서 이어지는 무거운 오일의 펌핑의 낮은 일관성의 결과 이다. 피 젤 microparticle 집계 컬렉션 플라스 크에 도전, 특히 즉시 미세 장치 어느 시점에서 제자리에서 겔 화는 완전 하 고 큰 수의 사용할 수 있는 반응에서 출구에는 또한 기능 그룹은 컬렉션 목욕에 있는 충돌 입자 사이의 양식 브리지를 사용할 수 없었습니다. 이 문제는으로 해결: 미세 칩 자체에 출구로 길이 증가, 더 완전 한 겔 화;를 홍보 하는 시간이 더 긴 기간에 대 한 층 류에서 젤 미 유지 피드 더 많은 석유 칩 그리고 따라서 더 분리로이 후 혼합 채널에서 젤 미 자체 노즐 또는 입자 생산 속도; 전단 필드를 영향을 주지 않고 노즐 측면 채널 추가 고을 피하기 위해 컬렉션 플라스 크에 자석 믹서를 추가 젤 microparticle 침전 인접 한 입자 사이 더 큰 평균 분리를 유지. 매우 느린 고 고분자 가능성이 장치 안정성 향상을 못쓰게 문제가 최소화, 하는 동안 이러한 시스템 또한 관찰 되었다 반응 기능 그룹의 더 큰 수로 젤 microparticle 집계의 위험을 크게 증가 하 남아 unreacted (따라서 양식 간 입자 교량 수) 시간이 더 긴 기간. 따라서, 15-60 s 순서 겔 화 시간 표시이 기술에 대 한 최적의: 느리게 못쓰게 하지만 빠른 만큼 가장 반응성 기능 그룹을 보장 하기 위해 수 있도록 충분히 젤 미에 층 류 채널 종료 전에 소비 하는 컬렉션 플라스 크입니다.
마지막으로, 템플릿 오일의 제거 결과 입자 스마트 속성 추가 사전 폴리머의 구성에 따라 예상 유지 및 생물 의학 컨텍스트에서 이러한 입자의 사용 활성화에 필수적 이다. 설명 된 절차를 세척 pentane이 점에서 일반 젤 microparticle 생산에 대 한 매우 효과적 이었습니다. 그러나, 컨텍스트에서 직접 생물 (예를 들어, 온-칩 셀 캡슐화)이 기술의 응용이이 프로토콜의 재평가 요구할 것입니다. 우리는 또한 문의의 맥락에서 더 불활성 석유36, 분산 제는 세포 수를 제안 하는 올리브 오일의 사용을 탐험. 입자 형성 가능한 동안, 젤 microparticle 인구 훨씬 더 polydisperse 보다 적어도 현재 칩 설계와 미네랄 오일, 달성 될 수 있었다. 따라서, 칩 합성 고분자와 천연 고분자 젤 microparticle 형성31에 나타납니다, 수정된 디자인 모든 가능한 소재 조합에서이 기술을 더 광범위 하 게 악용 하는 데 필요한 수 있습니다.
반응성을 통해 나노 hydrogels 자기 조립 Nanogels 씨 폴리머의 다른 농도 포함 하 여 조건을 처리의 매우 넓은 범위를 사용 하 여 형성 된 (0.5-2 wt %), crosslinking:seed 폴리머 (0.05-0.2), 다른 온도 (40-80 ° C), 다른 혼합 속도 (다른 비율 200-800 rpm), 그리고 crosslinker 폴리머 (2-60 분)28의 추가 다음 번 다른 난방. 농도, 측면 관찰 동향은 일반적으로 씨앗 폴리머의 높은 농도 더 큰 nanogels 이어질 crosslinker:seed 폴리머의 높은 비율 높은 crosslink 밀도와 nanogels를 리드 하 고 따라서 낮은 예측 될 것 이다 thermoresponsivities입니다. 씨 폴리머 증가 너무 높은 농도 궁극적으로 nanoaggregation, 무엇을 위한 기존의 자유 래 디 칼 강 수 과정에서 관찰과 일치 반대 집계 대량 강조 한다 thermoresponsive nanogels3. 짧은 열 시간 또한 작은 형성 하 고 더 많은 단 분산 입자에 대 한 유리한 것을 발견 했다. 우리는 그는 nanoaggregate에 들고 긴 시간 선구자 고분자 중 하나 또는 모두 상대적으로 hydrazone 채권의 증가 hydrophobicity nanogel 충돌 시 집계의 확률 증가 LCST 이상의 온도에서 가설 중 하나는 전조 알데하이드 또는 hydrazide 기능 그룹이이 집계를 달성 하는 가교 정도 증가 가능성이 더 만들기. 궁극적으로, 짧은 난방 시간은 프로세스 관점에서 유리한 단 분산 nanogel 인구는 crosslinker 폴리머 추가; 후 2 분 만큼 적게 형성 될 수 있다 10 분도 더 높은 가교 된 nanogels의 생산을 위해 허용 하는 동안 단 분산 nanogels를 생산할 수 있는 일관 되 게 긴 시간이 될 발견 됐다. 흥미롭게도, 방법은 현저 하 게 혼합, 거의 동일한 입자 크기와 입자 크기 분포는 다른 속도로 혼합 또는 심지어 더 큰 볼륨을 프로세스를 크기 조정에서 결과를 구분 하지 않습니다. 처음이 결과 의해 놀 래, 하는 동안 그것은 가능성이 nanogel 생산을 규제에서 열역학의 기본 역할을 말한다.
낮은 polydispersities를 위해 콜 로이드 안정성과 정도 nanoaggregate의 수 분의 주요 변수를 것 처럼. 예를 들어 덜 친수성 알데하이드 기능성된 폴리머 반대 시드로 더 친수성 hydrazide 기능성된 고분자를 사용 하 여 준비 nanoaggregates 상당히 낮은 polydispersities와 nanogels로 이어질. 실험적인 집합 온도 씨앗 폴리머의 LCST이 또한 중요 합니다. 그냥 씨 폴리머 LCST 이상의 온도에서 작동 ((T-LCST) < 5 ° C)의 단 분산 nanogel; 가장 높은 확률을 제공 합니다 LCST 넘어서는 운영 만듭니다 더 많은 가능성이 더 축소 되어 소수 nanoaggregates 집계 하 고 덜 가능성이 crosslink, 효과적으로 될 수 없는 상대적으로 소형 씨 폴리머에서 LCST 결과 아래 운영 하는 동안 또는 reproducibly 가교 화입니다. 입자 monodispersity의 최고의 예측에 대 한 좋습니다 처음 발병 씨앗 폴리머의 LCST를 측정 하는 UV/vis 스캔을 수행 하 고 이후 1-2 ° C 온도에서 자기 집합 프로세스 수행 그 LCST 위에.
이 메서드를 사용 하 여 생산 하는 nanogels 수 수 동결 건조 된을 콜 로이드 안정성, 종종 불가능 자기 조립된 구조에 대 한 그리고 우리의 가교 안정화 방법에 기인 우리가 보기에 어떤 변화 없이 redispersed note. 우리는 또한 그 씨앗 폴리머만 필요 thermoresponsive 일;이 방법에 대 한 예상 cross-linking 무응답 또는 다른 자극에 반응 하는 고분자의 사용은이 기술의 궁극적인 적용을 확대 추가 수 있습니다. 마지막으로, 두 반응 전조 고분자의 혼합은 경우에 활성, 겔 화 시간 반대로 패시브 이므로 설명 다른 제조 전략에 상대적으로 공정 제어 측면에서 훨씬 덜 중요 한. 그러나,이 기술에도 총 가교 시간을 유지 < 30 분은 입자 집단의 위험을 최소화 하는 것이 좋습니다.
Nanofibrous hydrogels 반응 전기를 통해 반응 전 고분자의 겔 화 시간 제어 다시 젤 nanofiber 생산의 성공에 필수적 이다. 특히, 대량 겔 화와에 약 정적 믹서 (더블 배럴 주사기로 길이 정적 믹서의 tortuosity에서 솔루션의 흐름 속도 변경 하 여 제어 됨)에 전 구체 고분자의 체류 시간을 일치 하 전 구체 고분자의 시간 뿐만 아니라 바늘와 컬렉터 사이 방적된 섬유의 효과적인 가교를 보장으로 spinnability를 유지 모두에 필수적입니다. 빨리 겔 화 효과가 테일러 콘 개발 하 고 따라서 박막의 궁극적인 형성과 확산에 따른 수집기 타격 젤 대신 용액에 느린 겔 화 결과 동안 가난한 spinnability 대신 젤 nanofibers입니다. 거주 시간 약간 아래에 대량 겔 화 시간 근무는 또한 발견 되었습니다 효과적인 (그리고 실제로 바늘 막힘의 위험을 줄이기 위해 바람직) 이후 물이 증발으로 솔루션은 효과적으로 냈 지 집중에서 전 구체 고분자는 스트림 및 따라서 회전 과정에서 겔 화 속도 가속 한다. 이 같은 맥락에서 더 높은 바늘-컬렉터 거리에서 운영 (> 10 cm)는 일반적으로이 프로세스에 유리한 짧은 거리 물 증발에 대 한 사용할 수 있는 시간을 감소 하 고 따라서 관계 더 엄격한 제어를 해야 체류 시간 및 겔 화 시간 nanofibrous 제품을 보존 하기 위하여.
PEO의 사용 (또는 다른 높은 분자량 및 쉽게 electrospun 폴리머) 짧고 높은 분기 POEGMA 올리고 혼자 유도 녹 채의 적절 한 학위를 도달할 수 없습니다이 프로토콜 nanofiber 형성 촉진에 필수적 이다 전기; 대신, 분무 결과 전혀 (비록이 또한이 동일한 화학을 사용 하 여 분해 젤 입자를 만들기 위한 응용 프로그램을 할 수 있습니다) POEGMA 전용 공식에 대 한 테스트 조건을 처리 합니다. 1 wt % (1 MDa 분자량)의 최소 PEO 농도 완전히 nanofibrous 형태를 유지 하기 위해 필요 합니다. Note는 PEO; nanofibrous 네트워크의 무결성을 중단 하지 않고 (이온된 수, 24 h) 간단한 적시 절차에 따라 섬유에서 제거할 수 있습니다 이 방법에서는, PEO 행위로 더 최종 nanofibrous 제품의 필수적인 구성 요소 보다는 일시적인 전기 보조. 또한 다양 한 유형의 수집, 간단한 알루미늄 호 일 (몸을 담글 시 수집기에서 delaminate 수 있는 얇은 층 hydrogels 만들기) (두꺼운 건설 기계를 만들려고) 회전 알루미늄 디스크 등이 같은와 함께에서 사용할 수 있습니다 note 겔 화 속도, 전기, 속도 및 전기 중 물 증발 속도 다른 공정 변수를 제공 하는 기술 변경 되지 않은 남아 있습니다.
흥미롭게도, 다른 형태학을 준비 하는 데 사용 하는 방법에 따라 큰 차이가 hydrogels 같은 히드로 선구자에서 준비의 저하에서 관찰 되었습니다. 예를 들어 POEGMA nanofibrous hydrogels 그들의 상당히 높은 표면적과 따라서 hydrazone 채권은 물에 대 한 액세스에도 불구 하 고 같은 성분과 대량 POEGMA hydrogels 보다 느리게 저하. 우리 내부 젤 homogeneities로 이어질 수 있는 전 구체 고분자 및 크게 다른 형태학 및에 혼합의 기하학의 점에서 설명된 프로토콜 사이 고유한 대조에 이러한 차이 관계 원래의 겔 화, 특히 동시 물 증발 및이 과정에서 관찰 하는 가교 전기에 관련 된 같은 시간 규모에 중합체 선구자의 농도. 동안이 될 수 있습니다 다소 복잡 하 게 전조 고분자의 한 폴리머는 각 프로토콜에 사용 하기 위해 표적으로 하는 경우, 그것은 또한 hydrogels 한 화학 성분 하지만 매우 다른 물성을 만들기의 점에서 기술 기회를 제공할 수 있습니다.
전반적으로, 설명 하는 방법 thermoresponsive 폴리머 내부 구조의 여러 종류와 여러 길이 비늘 (대량, 마이크로 및 나노)에 해 성 (또는 적어도 renally clearable) 아날로그 날조를 위한 전략을 제공 (입자 또는 섬유)입니다. 이러한 프로토콜 생물 의학 분야에 전통적으로 준비 된 합성 thermoresponsive 자료의 성공적인 번역 키 장벽 주소: injectability 및 분해성. 우리는 계속 약물 전달 및 조직 공학의 암, 물리적 대상에서 혈액-뇌 장벽에서 단백질의 치료 배달에 걸쳐 약물의 전송에서 그러한 자료의 응용 프로그램을 탐색 하 눈, 조직의 방향 성장 그리고 thermoreversible 접착 및 셀 다른 응용 프로그램의 다시.

스마트 재료는 외부 또는 환경 신호 가역 "요청 시" 응답에 대 한 그들의 잠재력 때문에 상당한 관심을 받고 있다. 온도 응답성 재료 온도 T에서 강 수 온도 제어의 결과로 그들의 더 낮은 중요 한 솔루션 온도 (LCST) 동작으로 특정 관심을 받고 있다 &gt; LCST1,2. Thermoresponsive hydrogels의 맥락에서이 낮은 중요 한 솔루션 온도 문제는 가역 붓기/de swelling 이벤트 온도 가변 대량 크기에 의해 각 성 (t 큰 &lt; LCST)3, 기 공 크기 (큰 t &lt; LCST)4, 그리고 계면 특성 (더 t 친수성 &lt; LCST)5. 이러한 전환 약물 전달에 널리 적용 된 (외부 또는 환경 피해가 약4,,67릴리스), 조직 공학 및 세포 배양 (thermoreversible 세포 접착에 대 한 / 박8,,910), (전환 막 porosities 및 permeabilities 또는 열 재활용 진단 지원11,12, 대 한 분판 13) 미세 처리 (온-오프 밸브 규제 흐름14,15), 그리고 (온도 가변 점도16)에 대 한 유 변 학적 한정자. 중요 한 (및 증가) 작업 또한 폴 리 (oligoethylene 글리콜 메타 크 릴 산)에 실시 되었습니다 있지만 가장 일반적으로 thermoresponsive hydrogels poly(N-isopropylacrylamide) (PNIPAM)17, 기반 조사 (POEGMA)2 ,18 및 poly(vinylcaprolactam) (PVCL)19,20. POEGMA의 예상된 향상 된 생체 적합성21,22와 손쉬운 조정 LCST 동작의 서로 다른 숫자와 단위체의 어떤 선형 예측 가능한 혼합물에 주어진 특정 최근 관심을 모으고 있다 그들의 측면 사슬에 에틸렌 산화물 반복 단위 ~ 20 ° C에서 LCST를 변경할 수 있습니다 &gt; 90 ° C2,23. 그러나, 이러한 고분자의 각각 자유 래 디 칼 중 합에 의해 준비 되 고 따라서 크게 제한 잠재적인 유틸리티와 translatability는 생물 의학 응용 프로그램의 맥락에서 같은 고분자의 탄소-탄소 등뼈를 포함 저하 (또는 적어도 신장 여과 통해 정리를 위한 용량)은 일반적으로 요구 사항.
이 제한에 대 한 응답, 우리는 최근 보고 광범위 하 게 hydrazone 화학의 응용 프로그램에 (즉,., hydrazide 그리고 알데하이드 기능성된 사전 고분자 사이의 반응) thermoresponsive의 분해성 아날로그를 준비 하 hydrogels24,25,,2627,,2829. 기능성된 전조 폴리머30 의 혼합에 따라 hydrazide 및 알데하이드 그룹 간의 빠르고 가역 반응 수 모두 제자리에 겔 (활성화 필요 없이이 자료의 손쉬운 주입 수술 주입 또는 UV 방사선 또는 화학 개시 등 외부 합 자극의 종류) 화학 가교 사이트의 밀도 의해 제어 되는 속도로 네트워크의 가수분해 저하 뿐만 아니라. 또한, 신장 여과 제한 아래 hydrogels 준비 하는 데 사용 하는 사전 고분자의 분자량을 유지 하 여이 접근을 사용 하 여 만든 hydrogels 저하 몸25에서에서 지울 수 있습니다 oligomeric 전조 폴리머로 다시 ,,2728. 낮은 세포 독성 및 낮은 염증 성 조직 응답 이러한 자료25,,2627에 의해 유도 된와 결합,이 접근은 thermoresponsive의 사용에 대 한 잠재적으로 번역 방법을 제공합니다 스마트 hydrogels 의학, 특히 모든 길이에 같은 hydrogels의 잘 제어 분해성 아날로그 저울 (대량, 마이크로 및 나노) 하는 경우에 날조 될 수 있다.
이 프로토콜에서 설명 하는 제어 번호 hydrazide 및 알데하이드 그룹으로 방법이이 폴리머를 적용 하에 잘 정의 된 크기와 hydrogels 만들려고 기능성된 합성 thermoresponsive 사전 고분자를 만들기 위한 방법 다양 한 길이 가늠 자. 특히,이 원고 4 가지 접근 우리 반응 hydrazide 그리고 알데하이드 기능성된 사전 고분자의 혼합 제어를 개발 하 고 따라서 잘 정의 된 형상의 thermoresponsive 하이드로 겔 네트워크 만들 설명 하 고 형태학:
분해성 대량 hydrogels 정의 된 크기를 만들려면 템플릿 전략 설명는 반응성 사전 폴리머 정적 믹서는 콘센트에 장착 하 고 연속적으로 압출 더블 배럴 주사기의 별도 배럴으로 로드 되는 실리콘 몰드는 원하는 히드로 모양과 크기21,27 (그림 1)와 함께.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig1.jpg"> 그림 1 : 대량 하이드로 겔 형성의 도식. Hydrazide 및 알데하이드 기능성된 폴리머 솔루션 (물 또는 수성 버퍼) 더블 배럴 주사기의 별도 배럴으로 로드 되 고 압출 정적 믹서를 통해 원통형 실리콘 금형. 신속한 현장에서 겔 화 혼합 형태 hydrazone 가교 된 하이드로 겔은 무료 서 (일단 금형 제거 됩니다) 전 구체 고분자의 농도 및 기능 그룹 밀도 따라 분 초 이내에. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54502/54502fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
미크론 단위로 분해 젤 입자를 만들려면, 반응성 마이크로 메서드 설명 어떤 전조에 폴리머 솔루션은 동시에 혼합 하 고 유화 소프트 리소 그래피 템플릿 미세 칩 디자인을 사용 하 여, 활성화는 혼합된 반응 중합체 방울의 형성 그 이후 유제 (그림 2),3132에 의해 제자리에 템플릿 크기와 폼 젤 미 젤.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig2.jpg"> 그림 2 : 반응 마이크로 통해 젤 microparticle 형성의 도식. (A, B) Hydrazide 및 알데하이드 기능성된 폴리머 솔루션 (물 또는 수성 버퍼)는 역류를 방지 하는 압력 기울기를 생성 하도록 설계 된 채널의 지그재그 시리즈에 걸쳐 다운스트림 연결 된 별도 저수지로 주사기 펌프에 의해 먹인 다. 고분자 다음 (또한 주사기 펌프에 의해 구동) 양쪽에서 흐르는 파라핀 오일에 의해 전단 되 고 직전 혼합 하 고 수성 생산 흐름 초점을 맞추고 결과 노즐을 통해 강제 연속 파라핀 오일 단계 작은 물방울 (폴리머 솔루션) (노즐 영역 및 물방울 형성 과정의 그림 (B) 참조). 추가 2 파라핀 오일 후미 후 결과 microparticulate 젤 층 류 흐름에서 입자 제거 하기 전에 완전 한 겔 화에 대 한 허용 하도록 컬렉션 채널에서 물방울은 더 별도의 노즐 뒤에 배치 됩니다. 자석으로 흔들된 비 커;에서 수집 노즐에서 물방울 생성 프로세스의 (C) 그림 (참고 그 hydrazide 폴리머 혼합을 설명 하기 위해 파란색으로 표시 됩니다)
자기 조립 방법을 설명 하는 반응성 전 구체 고분자 ("씨" 폴리머) 중 하나의 솔루션은 안정적인 nanoaggregate를 형성 하는 LCST 위에 열 반응 분해성 젤 입자는 열 구동 nanoscale에 만들려면 그 후 보완 반응 전조 폴리머 ("가교" 폴리머);의 추가 의해 가교 된 결과 hydrazone 가교 화 nanogel nanoaggregate (그림 3)28에 의해 직접 템플릿 크기를 있다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig3v2.jpg"> 그림 3 : Nanogel 대형 열 구동을 통해 반응의 도식 자기 조립. (Thermoresponsive) hydrazide-기능성된 고분자를 포함 하는 용액은 안정 uncrosslinked nanoaggregate를 만드는 그것의 더 낮은 중요 한 솔루션 온도 이상가 열. 다음, 알데하이드 기능성된 폴리머 hydrazone 유대 형성을 통해 nanoaggregate crosslink에 추가 되 고 따라서는 LCST 아래의 냉각 nanogel 입자를 안정화. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54502/54502fig3v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
분해성 nanofibers 만들려고 반응 전기 기술 설명 (hydrogels 대량을 만들기 위해 사용)로 출구에서 정적 믹서를 갖춘 더블 배럴 주사기 표준 전기 플랫폼 (그림 4에 연결 )33.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig4.jpg"> 그림 4 : 반응 전기 통해 히드로 nanofiber 형성의 도식. 정적 믹서 (대량 hydrogels에 설명 된 대로 로드 하지만 또한 전기 지원으로 높은 분자량 poly(ethylene oxide)의 일부를 포함 하 여)와 함께 더블 배럴 주사기는 연결 주사기 끝에 바늘 주사기 펌프 탑재 하는 고전압 전원 장치. Hydrazone 가교 섬유 nanofibrous 형태 유지 때 스트림의 안타 (알루미늄 호 일 또는 회전 알루미늄 디스크) 수집기 프로세스를 회전 발생 합니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54502/54502fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
분해성 스마트 하이드로 겔 네트워크를 만들기 위한 이러한 방법의 응용 프로그램 관심;의 폴리머로 PNIPAM 또는 POEGMA를 사용 하 여이 프로토콜에서 설명 된다 그러나 양측 검정 이기는 하지만 적당 한 조정으로 점도 대 한 모든 수용 성 폴리머를 설명 하는 기본적인 방법을 번역 하는, 및 (의 경우에 자기 조립 nanogel 제조 방법) 씨앗을 형성 사전 폴리머의 안정성 nanoaggregate입니다.

<table><tbody><tr><td><강>화학</강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,2 - 아소비시이소부트리산 디메틸 에스테르</td><td>Wako Chemicals</td><td>101138</td><td></td></tr><tr><td>Di(ethylene glycol) methyl ether methacrylate (M(EO)2MA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>447927</td><td>188.2 g/mol, n=2 ethylene oxide repeat units</td></tr><tr><td>Oligo(ethylene glycol) methyl ether methacrylate (OEGMA475)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>447943</td><td>475g/mol, n=8-9 에틸렌옥사이드 반복 단위</td></tr><tr><td>아크릴산(AA), 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>147230</td><td></td></tr><tr><td>티오글리콜산(TGA), 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T3758</td><td></td></tr><tr><td>디옥산, 99%</td><td>Caledon Labs</td><td>360481</td><td></td></tr><tr><td>질소, UHP 등급</td><td>Air Liquide</td><td>Alphagaz1 765A-44</td><td></td></tr><tr><td>Adipic acid Dihydrazide(ADH), 98%</td><td>Alfa Aesar</td><td>A15119</td><td></td></tr><tr><td>N'-에틸-N-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드(EDC, x%)</td><td>FD05800</td><td></td><td></td></tr><tr><td>염산(HCl), 37%</td><td>시그마 알드리치</td><td>320331</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨(NaOH), 97%</td><td>시그마 알드리치</td><td>221465</td><td></td></tr><tr><td>아미노아세틸 알데히드 디메틸 아세탈, 99%</td> <td>시그마 알드리치</td><td>121967</td><td></td></tr><tr><td>4-하이드록시-템포, 97%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>176141</td><td></td></tr><tr><td>메타크릴로일 클로라이드,97xSigma</td> <td>Aldrich</td><td>523216</td><td></td></tr><tr><td>석유 에테르, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>32047</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 설페이트, 99.5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>tert-부틸 메틸 에테르, >99.0%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>443808</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>BioShop</td><td>PBS405.1</td><td>1x, pH 7.3-7.5</td></tr><tr><td>N-이소프로필아크릴아미드, 99%</td><td>J& K Scientific</td><td>258717</td><td>60% 헥산/40% 톨루엔</td></tr><tr><td>에탄올, 무수</td><td>Commerical Alchols</td><td>P016EAAN</td><td></td></tr><tr><td>Span 80</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6760</td><td></td></tr><tr><td>Heavy paraffin oil</td><td>Caledon Labs</td><td>1326197</td><td></td></tr><tr><td>Pentane, 시약 등급</td><td>Caledon Labs</td><td>1/10/7800</td><td></td></tr><tr><td>폴리(에틸렌옥사이드) 평균 Mv 600,000</td><td>Sigma Aldrich</td><td>182028</td><td></td></tr><tr><td>합성 및 하이드로겔 제조에 필수적인 공급품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rotary evaporator</td><td>Heidolph</td><td>G3</td><td></td></tr><tr><td>Dialysis tubing (3500 Da molecular weight cut-off)Spectrum</td> <td>Labs</td><td>28170-166</td><td>Vol/length= 6.4mL/cm</td></tr><tr><td>더블 배럴 주사기</td><td>Medmix</td><td>L series</td><td>L 시리즈, 2.5 mL, 1:1 부피 비율</td></tr><tr><td>정적 믹서</td><td>Medmix</td><td>L</td><td>시리즈 L 시리즈, 2.5 mL, 1:1 부피 비율, 1.5" 길이</td></tr><tr><td>실리콘 고무 시트, 1/16" 두께</td><td>McMaster-Carr</td><td>9010K12, 30A 경도계(Super Soft)</td><td></td></tr><tr><td>실린지 펌프</td><td>KD Scientific</td><td>KDS Legato 200</td><td>Infuse Only 이중 주사기 펌프</td></tr><tr><td>고전압 전원 공급 장치</td><td>Spellman</td><td>230-20R</td><td>0-20 kV</td></tr> <tr><td>< 강> 미세 유체 칩 제조 < / 강></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>실리콘 웨이퍼</td><td>대학 웨이퍼</td><td>2080</td><td>D = 76.2 mm; 380 & 마이크로; m 두께; P- 도핑; < 100> 방향&nbsp;</td></tr><tr><td>SU-8 100</td><td>MicroChem</td><td>Y131273</td><td></td></tr><tr><td>SU-8 개발자</td><td>MicroChem</td><td>Y020100</td><td></td></tr><tr><td>맞춤형 2.5" 스핀코터</td><td>내장</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>마스크 얼라인너</td><td>KARL SUSS</td><td>MJB3 UV400 (276W 램프 포함)</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S 13 실리콘 튜빙</td><td>Cole Parmer</td><td>OF-96400-13</td><td>과산화물 경화</td></tr><tr><td>Dow Corning Sygard 184 실리콘 엘라스토머 베이스&nbsp;</td><td>Ellsworth 접착제</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning Sygard 184 실리콘 엘라스토머 경화제&nbsp;</td><td>Ellsworth 접착제</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>고출력 플라즈마 클리너&nbsp;</td><td>Harrick</td><td>PDC-002-HP</td><td></td></tr><tr><td>Characterization Instruments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mach 1 micromechanical tester</td><td>Biomomentum</td><td>LB007-EN</td><td></td></tr><tr><td>Cellstar tissue culture 12 well plate</td><td>Greiner Bio-one</td><td>665 180</td><td></td></tr><tr><td>12 well plate</td><td>Corning</td><td>08-771-12</td><td>8 &micro용 세포 배양 인서트; m 기공 크기</td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td>Olympus BX51 광학 현미경</td><td>BX51</td><td></td></tr><tr><td>온도 제어 현미경 스테이지</td><td>Linkam Scientific</td><td>THMS600</td><td></td></tr><tr><td>겔 투과 크로마토그래프(GPC)</td><td>Waters</td><td>590 HPLC 펌프</td><td>Waters Styragel 컬럼(HR2, HR3, HR4; 30cm x 7.8mm(ID); 5mm 입자), Waters 410 굴절률 검출기</td></tr><tr><td>동적 광 산란(DLS)</td><td>Brookhaven</td><td>90Plus 입자 크기 분석기</td><td></td></tr><tr><td>투과 전자 현미경(TEM)</td><td>TEMSCAN</td><td>JEOL 1200EX</td><td>가속 전압 100kV</td></tr><tr><td>주사 전자 현미경(SEM)</td><td>Tescan</td><td>Vega II LSU</td><td>가속 전압 10kV</td></tr><tr><td>Microsquisher</td><td>CellScale 생체 재료 테스트</td><td>MS-50M-01</td><td></td></tr></tbody></table>

자기 조립, 분해 thermoresponsive hydrogels 반응 압출, 마이크로, 통해 여러 길이 가늠 자에를 조작 하 고 전기

Fabricating Degradable Thermoresponsive Hydrogels on Multiple Length Scales via Reactive Extrusion, Microfluidics, Self-assembly, and Electrospinning

그들의 궁극적인 임상 사용 생물학으로 관련의 부족에 의해 방해 되어 다양 한 스마트 재료 다양 한 생물 의학 응용 프로그램 (예를 들어, 약물 전달, 조직 공학, bioimaging, 등)에 대 한 탐험 되어, 하는 동안 저하 가장 스마트 재료에 대 한 관찰입니다. 이 특히 온도 응답 hydrogels는 기능적으로 비 분해성 고분자를 기반으로 거의 균일 하 게 (예를 들어, poly(N-isopropylacrylamide) (PNIPAM) 또는 폴 리 (oligoethylene 글리콜 메타 크 릴 산) (POEGMA) ). 따라서, 원격 제어 또는 물질 대사 통제 약물 전달의도 전에 thermoresponsive hydrogels의 잠재력을 효과적으로 번역을 셀 투어 상호 조정할 수 있는 셀 소재, 잠재력을 가진 theranostic 자료 이미징, 약물 전달와 같은 다른 응용 프로그램에 대 한 메서드는 hydrogels (해당 되는 경우 완전히 분해) 재료의 요구 수명에 따라 신 정리의 적어도 수로 렌더링 하는 데 필요한입니다. 이 위해,이 프로토콜에 설명 합니다 가수분해로 분해 hydrazone 가교 된 hydrogels 준비를 hydrazide와 분자와 알데하이드 기능성된 PNIPAM 또는 POEGMA 올리고 사이의 반응에 따라 여러 길이 비늘 신장 여과 제한 무게입니다. 특히, 분해성 thermoresponsive 대량 hydrogels (더블 배럴 주사기 기술을 사용 하 여), 조작 방법 하이드로 겔 입자 (마이크로 플랫폼 동시 혼합을 촉진에 사용 하는 둘 다 미에와 전조 고분자와는 열 구동을 통해 나노 크기의 유화 자기 조립 방법 cross-linking 그리고), 히드로 nanofibers (를 사용 하 여 반응 전기 전략) 설명. 각각의 경우에 기존의 자유 래 디 칼 cross-linking 프로세스를 통해 달성 된 것과 유사한 온도 응답 속성 hydrogels 달성 될 수 있다, 하지만 hydrazone 상호 연결 된 네트워크를 다시는 oligomeric 형성 시간이 지남에 저하 될 수 있습니다. 선구자 중합체 및 사용 허가 따라서, 우리는 이러한 방법 (수 있습니다 어떤 합성에 일반적으로 적용 된 수용 성 고분자, 재료 뿐 아니라 스마트) 임상 응용 프로그램에 합성 스마트 재료의 쉽게 번역 하면 예상.

대량 hydrogels 실리콘 몰드로 더블 배럴 주사기에서 압출 금형의 치수를 준수 하 고 무료 서 곰 팡이 제거; 시 겔 화는 일반적으로 중합체 선구자 따라 다음 공동 압출 사용 분 초를 발생 합니다. 일반적인 특성 (gravimetrically 쉽게는 히드로 붓기 솔루션에서 제거 하려면 셀 문화 삽입을 사용 하 여 측정), 붓기를 통해 thermoresponsivity (동일한 기술을 사용 하 여 하지만 위의 부 화 온도 사이클링 측정 및 위상 전이 온도), 아래 (측정을 사용 하 여 동일한 기술을 하지만 이상 더 긴 기간), 저하 고 전단 또는 압축 계수 (2 mm 두께 7 m m 직경 성형 샘플을 사용 하 여 측정)는 히드로의 tunability를 보여줍니다. (특히,에 대 한 POEGMA, 긴 사슬 OEGMA 단위체는 하이드로 겔을 준비 하는 데 사용 하는 짧은의 비율), 전조 고분자의 화학 작용에 따라 응답 전조 중합체 및 이들의 농도에 기능적인 그룹의 첩 자 분수 전 구체 고분자 (그림 5)27
마이크로 크기 제어 기름 및 결합 된 수성 폴리머 단계 (그림 6A)31의 흐름 율에 따라 25-100 µ m의 크기 규모에 잘 정의 된 젤 미의 형성에 지도 한다. 젤 미 가역 온도 따른 팽창-deswelling만 약간의 히스테리시스 사이클 1에 보여주는 (기인 대량 hydrogels의 thermoresponsive 특성 유지를 확인 하는 뜨거운 무대 광학 현미경 축소 상태34이웃 아 미드 그룹 간의 돌이킬 수 없는 수소 결합 형성) 대량 PNIPAM hydrogels (그림 6B)32에서 관찰과 일치. 또한, 젤 미 저하 그들의 oligomeric 선구자에 다시 시간이 지남에, 신장 클리어런스 (그림 6 c)32을 사용.
자기 집합 알데하이드 기능성된 PNIPAM으로 가교를 이어서 온수 솔루션에서 hydrazide 기능성된 PNIPAM 폴리머의 nanoaggregation에 의해 구동 높은 단 분산 nanogels 귀착되는 폴리머 (증가할수록 &lt; 0.1)에 프로세스 상태에 따라 180-300 nm의 크기 범위 사용 (그림 7A)28. nanogels 열 deswelling 더 가교 폴리머 (그림 7B) 추가 된 관찰의 낮은 정도 가진 기존의 무료 급진적인 가교 된 PNIPAM nanogels의 일반적인 thermoresponsive 동작을 유지 합니다. nanogels 동결 건조 된 고 수 입자 크기 (그림 7C) 변화 없이 redispersed 다시 nanogels (그림 7D) 공식화 하는 데 사용 oligomeric 전조 폴리머를 형성 하는 가수분해를 통해 시간이 지남에 저하.
반응 전기 만듭니다는 nanofibrous ~ 300 순서 nanofiber 직경 하이드로 겔 구조 (그림 8A), 달성 없이 보이는 electrosprayed 입자 현재33nm. POEGMA 기반 nanofibers 물에 몸을 담글 빠른 수 분 (대략 2 개의 크기 순서 같은 구성, 그림 8B의 대량 젤 달성 보다 빠른) 되지만 유지 nanofibrous 형태 이전에 8-10 주 이상 생리 적인 조건;에서 가수분해 저하 산 촉매 hydrazone 유대 저하 (그림 8C)에 대 한 잠재력 예상 대로 빠른 저하 산 촉매 환경에서 관찰 됩니다. nanofibrous 구조는 또한 기계적으로 강력한 건조 및 부 어 상태에서 여러 주기에, 쉬운 취급 및 반복적인 긴장 (그림 8D).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig5v2.jpg"> 그림 5 : 현장-고의 속성 대량 분해성 thermoresponsive hydrogels. (A) 대표 POEGMA 젤 네트워크 마이크로 구조와 대량 히드로 이미지 전조 폴리머;에서 OEGMA475 의 두더지 % 법인의 기능으로 해당 겔 화 시간 (B-C) 다양 한 (B) 전조 폴리머 농도와 전조 폴리머; 당 (C) 두더지 % 기능 그룹 법인 포100 hydrogels 탄성 계수 저장 (D-F) OEGMA475 두더지 % 법인의 기능으로 POEGMA hydrogels의 Physiochemical 속성: (D) 저장 모듈러스 (E) 저하 프로필 1에서 M HCl, 그리고 (F) 볼륨 단계 전이 온도 온도에 대 한 응답 변경 범위 20-60 ° c. 모든 오차 막대를 나타내는 n의 표준 편차 = 4 복제 측정. Elsevier 허가 기준27 에서 적응. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54502/54502fig5v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig6.jpg"> 그림 6 : 반응 마이크로에서 분해 젤 미의 속성. (A) 물; (순화) 젤 microparticle 크기에 파라핀 오일 유량의 영향 (B) 위와 아래 볼륨 단계 전이 온도; 단일 열 사이클에 따라 물에 정화 젤 미 Thermoresponsivity (C) Visual 평가 (사진)와 젤 투과 크로마토그래피 트레이스 (그래프) 젤 미의 저하를 확인 다시 그들의 선구자 폴리머 구성 요소 (여기, 영상의 시간 규모에 가속된 저하를 촉진 하기 위하여 1 M HCl에); 눈금 막대 = 100 µ m. 적응 참조32에서. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54502/54502fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig7v2.jpg"> 그림 7 : 분해성 nanogels 반응에서 자기 조립. (A) 입자 크기 분포의 nanogels 다른 알데하이드: hydrazide 폴리머 대량 비율 동적 산란에서 준비 (삽입: 전송 전자 현미경 사진 확인 하는 nanogels의 구형 자연); (B) Thermosensitivity nanogels (에서 동적 산란)을 준비 하는 데 사용 하는 알데하이드: hydrazide 폴리머 사이 대량 비율의 기능으로 자기 조립된 입자의 n의 표준 편차를 나타내는 오차 막대 = 4 복제; (C) 시각 확인 nanogel 집계의 부족의 사전 및 사후 동결은; (Nanogels의 산 촉매 저하의 D) 시각적 확인 (여기 위의 다른 연구와 일관성에 대 한 1 M HCl에); (E) 젤 투과 크로마 토 그래프 자취 hydrazide 그리고 알데하이드 기능성된 전조 고분자에 그들의 유사성을 나타내는 nanogel 저하 제품의. 참조28허가 적응. 저작권 2015 년 미국 화학 학회 <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54502/54502fig7v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54502/54502fig8v2.jpg"> 그림 8 : 반응 전기에서 분해성 nanofibers의 속성. (A) 스캐닝 전자 현미경 검사 법 건조에서 nanofibers의 이미지 (왼쪽), 물 (중간, 얇은 필름)에 반 고 완전히 (오른쪽, 두꺼운 비 계);에 하룻밤 물에 담가 (B)는 동일한 구성의 대량 하이드로 겔 (파란색)를 기준으로 nanofibrous 하이드로 겔 (빨간색)의 붓기, n의 표준 편차를 나타내는 오차 막대 = 4 복제; (C) 스캐닝 전자 현미경 검사 법 그리고 (삽입 된) 시각적 이미지 1 M HCl;에 nanofibers의 산 촉매 저하를 추적 (드라이 (80 주기, 20% 신장/사이클)의 D) 인장 사이클링과 부 (325 주기, 10 mM PBS에에서 10% 신장/사이클) electrospun nanofibrous hydrogels. 그림 참조33 에서 수정 하 고 화학의 왕 사회에서 허가로 복제. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54502/54502fig8v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

프로토콜 분해성 thermoresponsive hydrogels hydrazone 대량 규모, 미, 그리고 나노, 젤 나노 입자 및 nanofibers의 준비에 대 한 후자에 고분자 올리고의 cross-linking에 따라 제작에 대 한 설명 합니다.

자기 조립, 분해 Thermoresponsive Hydrogels 반응 압출, 마이크로, 통해 여러 길이 가늠 자에를 조작 하 고 전기

While various smart materials have been explored for a variety of biomedical applications (e.g., drug delivery, tissue engineering, bioimaging, etc.), ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 길이 스케일과 형상이 제어된 thermoresponsive hydrogel의 분해 가능한 버전을 제작하는 것입니다. 이 방법은 장기적이고 최소 침습적인 국소 약물 전달을 촉진하거나, 조직 공학을 위한 반응형 골격을 만들거나, 표적 핵 요법을 설계하는 것과 같은 생체 의학 재료 시나리오의 주요 문제를 해결하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우리 기술의 주요 장점은 고분자 전구체 혼합 형상을 변경하여 분해 가능한 하이드로겔의 크기와 모양을 제어할 수 있는 빠른 역바이오히드라존 화학입니다.이러한 유연성을 통해 엽산 겔, 마이크로겔, 나노겔 및 나노섬유를 모두 동일한 출발 물질로 제조할 수 있습니다. 먼저, 5 중량 %에서 40 % 사이의 농도와 10 밀리몰 인산염 완충 식염수를 가진 히드라지드 및 알데히드 기능성 열반응성 전구체 중합체 용액을 각각 약 2 밀리리터씩 준비합니다. 단일 배럴 주사기를 사용하여 전구체 폴리머 용액을 2.5ml, 1:1 이중 배럴 주사기의 별도 배럴에 로드합니다.그런 다음 1.5인치 스태틱 믹서를 2.5밀리리터 1:1 더블 배럴 주사기에 연결합니다. 원하는 경우 18 게이지 또는 20 게이지 1.5인치 바늘을 고정식 믹서에 부착합니다. 그런 다음 원하는 두께의 부드러운 실리콘 고무 시트에서 자릅니다.표준 현미경 슬라이드 정도의 크기입니다. 펀치 세트를 사용하여 실리콘 고무 시트에 원하는 모양의 구멍을 하나 이상 펀칭합니다. 실리콘 고무 몰드를 깨끗한 유리 슬라이드에 놓고 모든 구멍이 유리로 뒷받침되도록 합니다.금형을 슬라이드에 부드럽게 눌러 제자리에 고정합니다. 실리콘 고무 시트는 우수한 기판 접착력을 보장하기 위해 지지대로 사용할 수도 있습니다. 히드라지드 및 알데히드 기능성 고분자 용액을 정적 혼합기를 통해 웰이 완전히 채워질 때까지 금형 웰로 공동 압출합니다.두 번째 깨끗한 유리 슬라이드로 금형을 덮고 겔화가 완료될 때까지 기다립니다. 그런 다음 상단 슬라이드를 제거하고 주걱을 사용하여 실리콘 고무 몰드에서 하이드로겔을 분리합니다. 슬라이드에서 금형을 들어 올려 하이드로겔을 회수합니다.절차에 앞서, 미세입자 생성을 위한 미세유체 칩을 제작합니다. 히드라지드와 알데히드 기능성 폴리 NIPAM을 합성합니다. 시작하려면 탈이온수에 히드라지드와 알데히드 기능성 폴리 NIPAM의 6중량% 용액을 각각 2밀리리터씩 준비합니다.폴리머 전구체 용액을 별도의 5ml 주사기에 로드합니다. 다음으로, 중질 파라핀 오일에 1중량 단위의 소르비탄 모노올레이트 용액 150ml를 준비합니다. 이 용액을 두 개의 표준 60ml 주사기에 넣으십시오.4개의 주사기를 별도의 주입 주사기 펌프에 장착합니다. 다음으로, 45cm 길이의 실리콘 튜브를 미세유체 칩 배출구에 연결합니다. 배출 튜브의 끝을 쓰레기통에 넣습니다.폴리머 용액 주사기를 30cm 길이의 실리콘 튜브가 있는 미세유체 칩의 폴리머 입구 채널에 연결합니다. 파라핀 오일 용액 주사기 1개를 실리콘 튜브를 사용하여 업스트림 오일 주입구 채널에 연결합니다. 다른 오일 주사기를 실리콘 튜브와 U자형 주사기 조인트를 사용하여 두 다운스트림 오일 주입구 채널에 연결합니다.오일 주사기가 장착된 펌프의 유량을 시간당 1.1밀리리터에서 5.5밀리리터 사이로 설정합니다. 최소 30분 동안 미세유체 칩을 통해 오일을 흐르게 하여 칩을 프라이밍하고 칩에 결함이 없는지 확인합니다. 그런 다음 두 폴리머 용액을 동시에 시간당 03mL로 프라이밍된 칩에 공급합니다.폴리머와 오일의 흐름이 30분에서 1시간 동안 평형을 이루도록 합니다. 미세유체 노즐에서 전구체 중합체의 조기 겔화를 방지하기 위해서는 튜브를 조심스럽게 프라이밍하고 동시에 중합체의 흐름을 시작하여 두 중합체 저장소로의 역류를 방지하는 것이 중요합니다. 미세유체 칩의 노즐에서 균일한 겔 미세입자가 형성되면 활성 자기 교반 막대가 있는 플라스틱 원심분리기 튜브에 입자를 수집합니다.오일이 소모되면 실린지 펌프와 교반 모터를 정지하십시오. 겔 미세입자가 튜브에 가라앉으면 피펫으로 파라핀 오일을 디캔팅합니다. 플라스크에 미립자 5mL당 10mL의 펜탄을 추가합니다.약 1분 동안 에볼루션을 세게 섞습니다. 피펫으로 펜탄을 디캔팅하기 전에 입자가 1-2시간 동안 가라앉도록 합니다. 이 펜탄 세척을 최소 5회 반복하십시오.세척된 겔 미립자를 작은 유리 섬광 바이알로 옮깁니다. 1-2 밀리리터의 탈 이온수에 입자를 재현 탁시킵니다. 이 절차를 시작하려면 탈이온수에 1%의 히드라지드 용액과 알데히드 기능성 폴리 NIPAM을 각각 5ml씩 준비합니다.교반하면서 히드라지드 기능성 폴리 NIPAM 용액 5ml를 섭씨 70도까지 가열합니다. 용액이 불투명해질 때 모니터링하고 눈에 보이는 침전물이 형성되지 않는지 확인합니다. 그런 다음 5-10초 동안 가열된 히드라지드 기능화 폴리 NIPAM 용액에 0.25ml의 알데히드 기능화 폴리 NIPAM 용액을 적하 방향으로 추가합니다.혼합물을 섭씨 70도에서 15분 동안 저어줍니다. 그런 다음 오일 배스에서 혼합물을 제거하고 밤새 실온으로 냉각시켜 정제를 위한 나노겔을 얻습니다. 나노 겔 혼합물을 3500 킬로달톤 분자량 절단 투석막에 놓습니다.비가교 폴리머를 제거하기 위해 6시간 주기로 6회 디이온화된 물에 대해 나노겔을 투석합니다. 원하는 경우, 정제된 나노겔을 동결건조하여 보관합니다. 겔 나노섬유 제조 절차를 시작하려면 탈이온수에 히드라지드와 알데히드 기능성 POEGMA의 15중량% 용액을 각각 1ml씩 준비합니다.그런 다음 탈이온수에 몰리큘러량이 높은 폴리에틸렌 옥사이드의 5% 중량 용액 2ml를 준비합니다. 각 POEGMA 전구체 용액을 1ml의 폴리에틸렌 산화물 용액과 결합합니다. 전구체 용액을 이중 배럴 주사기의 별도 배럴에 로드합니다.그런 다음 1.5인치 정적 믹서와 뭉툭한 팁 18게이지 바늘을 2.5밀리리터, 1:1 이중 배럴 주사기에 연결합니다. 주입 주사기 펌프에 이중 배럴 주사기를 장착합니다. 그런 다음 바늘 끝에서 10cm 떨어진 알루미늄 디스크 전기 방사 수집기를 장착합니다.콜렉터에 고전압 전원 공급 장치를 접지하고 전원 공급 장치를 바늘에 연결합니다. 주사기 펌프를 시간당 0.48밀리리터로 설정하고 전원 공급 장치를 10킬로볼트로 설정합니다. 주사기 펌프와 전원 공급 장치를 동시에 시작하여 전기 방사를 시작합니다.원하는 두께에 도달하거나 전구체가 소진 될 때까지 계속하십시오. 나노 섬유 생산이 완료되면 전기 방사 어셈블리를 끄고 분리하십시오. 수집된 겔 나노섬유를 탈이온수에 24시간 동안 담가 폴리에틸렌 옥사이드를 제거합니다.이중 배럴 주사기 전달은 전구체 폴리머 농도, 반응성 작용기 밀도 및 단량체의 에틸렌 옥사이드 반복 단위 수에 따라 다양한 역학, 겔화 시간 및 투명도를 가진 히드라존 가교 결합 POEGMA 벌크 히드라 겔을 생산했습니다. 파라핀 오일과 폴리머 전구체 용액의 유속은 미세유체 장치로 제작된 하이드로존 가교 폴리 NIPAM 겔 미세입자의 크기에 영향을 미쳤습니다. 가역적 온도 의존적 팽창은 고온 스테이지 광학 현미경으로 관찰되었습니다.겔 마이크로 입자는 시간이 지남에 따라 올리고머 전구체로 분해되었습니다. 자체 조립 히드라존 가교 폴리 NIPAM 나노 겔의 크기는 알데히드 대 히드라지드 기능화 된 고분자 전구체-질량 비율에 따라 다양했지만 높은 모노 분산을 유지했습니다. 질량 비율이 증가함에 따라 더 적은 열 팽창이 관찰되었습니다.겔 미립자와 마찬가지로 나노겔은 시간이 지남에 따라 올리고머 전구체로 분해되었습니다. 직경이 300나노미터 정도인 Hydrazone 가교 POEGMA 하이드로겔 나노섬유는 반응성 전기방사에 의해 생산되었습니다. 나노 섬유 수화는 동일한 폴리머 조성을 가진 벌크 겔의 수화보다 약 2 배 더 빨랐습니다.나노 섬유는 생리학적 조건에서 분해되기 전에 8주 이상 나노 섬유질 형태를 유지했습니다. 산성 환경에서 더 빠른 분해가 발생했습니다. 나노 섬유는 건조 상태와 부풀어 오른 상태 모두에서 기계적으로 견고했습니다.이 비디오를 시청한 후, 겔 전구체 폴리머가 만들어지는 기하학적 구조를 제어하여 분해 가능한 열 반응성 하이드로겔을 만드는 방법을 잘 이해하셨기를 바랍니다. 폴리머 전구체의 겔화 시간이 각 입자의 요구 사항과 일치하는지 확인하는 것을 잊지 마십시오. 너무 빠른 겔화는 마이크로겔과 나노섬유 제조를 억제합니다.너무 느린 겔화는 완전히 굳어진 형태학을 초래합니다. 이러한 기술은 약물 전달 및 조직 공학 분야의 연구자들을 위한 길을 열어줍니다. 약물 방출의 속도 또는 위치를 제어하거나 조직 재생을 자극하기 위해 잘 정의된 하이드로겔 골격을 설계합니다.

fabricating-degradable-thermoresponsive-hydrogels-on-multiple-length

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

간단한 기법은 일반적인 세​​포 배양 기판에 동적 마스크 프로젝션 리소그래피를위한 디지털 micromirror 장치를 사용하여 microfabricated 신경 문화 시스템의 급속한 생산 설명되어 있습니다. 이러한 문화 시스템은 천연 생물 학적 구조가 더 대표 수 있으며, 설명된 기술은 다양한 어플 리케이션에 맞게 수 있습니다.

동적 마스크 프로젝션 석판술를 사용하여 신경 문화 시스템의 Micropatterned Hydrogels의 제작

bioprinter는 희생 형에 따라 패턴 하이드로 겔을 만드는 데 사용되었다. 폴록 사머 형은 두 번째 히드로 겔로 채워질 그리고 세 번째 하이드로 겔로 채워졌다 빈 공간을 남겨 용출되었다. 이 방법은 생체 고분자의 복잡한 구조를 생성하는 빠른 용출과 폴록 사머의 좋은 인쇄 적성을 사용합니다.

모방의 창조 3D 세포 배양을위한 두 구성 요소 히드로 겔에 대한 Thermoresponsive 역 금형 인쇄

홈마이크로유체 채널을 통과하는 2개의 인접한 유체는 사전 중합체 코어 주위의 칼집을 형성하도록 지시될 수 있다; 따라서 모양과 단면을 모두 결정합니다. 티올 클릭 화학과 같은 광숙련 중합화는 코어 유체를 소정의 크기와 모양으로 미세화로 빠르게 고화시키는 데 적합합니다.

미리 설계된 크기와 모양의 중합체 및 바이오 하이브리드 섬유의 미세 유체 제조

우리는 과포화 NIPAAm 단량체 용액의 상 분리에 대해 명확하게 구획화된 구조 기반을 가진 동일한 기본 물질인 폴리(N-이소프로필아크릴아미드)(PNIPAAm)로 완전히 구성된 Janus 마이크로하이드로겔을 합성하는 프로토콜을 제시합니다. 합성된 Janus 마이크로하이드로겔은 이방성 열 반응성 및 유기친성/친수성 로딩 능력과 같은 고유한 특성을 보여줍니다.

폴리의 합성 (<em&gt; N</em&gt; 이소 프로필 아크릴 아미드) 이방성 열 응답 성 및 유기화 / 친수성로드 기능에 대한 야누스 Microhydrogels

우리는 독립형 형태로 조립 및 조작할 수 있는 간단한 프로세스를 사용하여 미세 패턴화된 하이드로겔 시트의 제작을 설명합니다. 이러한 모듈식 하이드로겔 시트를 사용하면 제어된 세포 미세환경으로 간단한 매크로 스케일 3D 세포 배양 시스템을 생성할 수 있습니다.

미세 패턴 매크로 스케일 3D 셀룰러 아키텍처 모듈 형 하이드로 겔 시트의 건설

이 프로토콜은 폴리(에틸렌 글리콜) 디아크릴레이트(PEGDA) 하이드로겔에 내장된 혈관 유래 생체 모방 미세유체 네트워크를 제조하기 위해 이미지 유도 레이저 기반 하이드로겔 분해를 구현하는 방법을 설명합니다. 이러한 생체 모방 미세유체 시스템은 조직 공학 응용 분야, 체외 질환 모델 생성 및 고급 "온칩" 장치 제작에 유용할 수 있습니다.

혈관 유래 미세 유체 네트워크의 이미지 유도, 레이저 기반의 제조

UV crosslinkable hydrogels 처리 첨가제 제조 전략 개발 되었습니다. 이 전략 ﹙ 하이드로 겔 구조의 레이어, 레이어 조립 뿐만 아니라 저조한 자석 회전에 반응 하는 움직이는 구성 요소를 포함 하는 통합된 장치 독립적인 구성 요소, 어셈블리 허용 한다.

첨가제 제조 기술은 자석으로 응답 구성 요소와 히드로 기반 Micromachines의 손쉬운 고 빠른 제작을 위해

이 작업은 압출 단편화로 마이크로 젤을 제조하고, 마이크로 젤을 주사용 과립 하이드로 젤로 처리하고, 과립 하이드로젤을 생물 의학 응용 분야를위한 압출 인쇄 잉크로 적용하는 간단하고 적응력이 뛰어나며 저렴한 방법을 설명합니다.

대량 하이드로젤을 단편화하고 생물 의학 응용 분야를 위한 입상 하이드로젤로 처리

이 기사에서는 미세유체 장치를 사용한 고처리량 젤라틴 메타크릴로일 마이크로겔 제조, 마이크로젤을 부유 가능한 분말(마이크로 에어로젤)로 변환, 마이크로겔의 화학적 조립을 위한 입상 하이드로겔 스캐폴드, 3D 바이오프린팅을 위한 미세 다공성이 보존된 입상 하이드로겔 바이오잉크 개발에 대해 설명합니다.

젤라틴 메타크릴로일 과립형 하이드로겔 스캐폴드: 고처리량 마이크로겔 제조, 동결건조, 화학 조립 및 3D 바이오프린팅

이 기사에서는 세포외 기질 경화 및 섬유아세포 활성화를 연구하기 위해 광조정 가능 하이드로겔을 3D 바이오프린팅하는 방법을 설명합니다.

섬유아세포 활성화를 연구하기 위한 3D 바이오프린팅 광조정 가능 하이드로겔

배우세요 온도 반응성 하이드로겔 제조 방법을 hydrazone 가교화학을 이용하여 다양한 크기와 형태를 제어하는 기술입니다. 이 프로토콜은 약물 전달 및 조직 공학 응용을 위한 분해성 소재 개발에 활용됩니다.

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