간단한 기계 절차 마우스에서 윤부 줄기 세포 결핍을 만드는 방법

이 절차의 전반적인 목표는 윤부 줄기 세포 결핍에 대한 재현 가능하고 지속 가능하며 지속적인 마우스 모델을 만드는 것입니다. 이 간단한 기술은 표준 화학적 손상 모델로는 달성하기 어려운 원치 않는 눈 손상을 유발하지 않고 윤부 줄기 세포 결핍에 대한 일관된 동물 모델을 제공합니다. 이 모델은 세포 및 분자 수준에서 장기적으로 질병 과정을 연구하는 데 유용합니다.

그리고 새로운 치료법의 효능을 테스트하거나 비교합니다. 마우스를 마취한 후 발가락을 꼬집어 적절한 마취 깊이를 확보합니다. 슬릿 램프 아래에서 눈을 검사하여 이전에 각막 손상이 없는지 확인합니다.

1%테트라카인 염산염을 눈에 한 방울 떨어뜨리고 60초 동안 기다립니다. 다음으로, 5%포비돈 요오드를 눈과 그 주변 모발에 부드럽게 바릅니다. 1분 후 한 방울을 닦아내거나 눈 주위 모발에 펴 발라 모발이 도구 끝을 방해하지 않도록 합니다.

멸균 회전 버와 멸균 구부러진 핀셋 한 쌍을 준비하고 시술 중에는 멸균 시트에 보관하십시오. 이제 구부러진 핀셋을 사용하여 코 쪽의 눈꺼풀을 잡고 눈을 부드럽게 프로토징하여 눈을 안정시킵니다. 너무 많은 압력을 가하지 않도록 주의하십시오.

수술용 현미경으로 멸균 회전 버를 사용하여 윤부 주변을 두 번 면도합니다. 회전하는 버를 사용하여 회전하는 버를 사용하여 각막 상피를 윤부에서 변연으로 전체 제거하고 끝의 측면으로 작업합니다. 기질 부상을 방지하려면 상피가 제거된 각막 부분을 다시 닦지 마십시오.

눈에 압력을 가하지 마십시오. 필요에 따라 브러시 끝을 청소하십시오. 멸균 PBS 한 방울을 각막에 바르고 분리된 상피 시트를 부드러운 세척 티슈로 닦아냅니다.

그런 다음 남아 있는 상피(있는 경우)를 면도합니다. 수술 중 적절한 마취 깊이를 보장하기 위해 마우스 꼬리에 주의하십시오. 플루어레세인 나트륨 한 방울을 각막에 바릅니다.

30초 후에 각막을 세척하고 코발트 블루 필터가 있는 현미경으로 검사하여 상피가 완전히 제거되었는지 확인합니다. 절차가 끝나면 동물을 우리에 넣고 난방 담요를 깔고 마취에서 완전히 회복 될 때까지 30-45 분 동안 관찰하십시오. 그동안 1%에리스로마이신 안연고를 눈에 바르고 일주일 동안 매일 항생제를 계속 바르십시오.

또한 0.1mg/kg의 부프레노르핀을 즉시 피하주사하고 시술 후 12시간 후에 2일 동안 1일 2회 주사를 계속합니다. 이것은 시술 1개월 후 각막 표현형입니다. 광범위한 신생혈관형성을 볼 수 있는데, 이는 윤부 줄기세포 결핍의 특징입니다.

정상적인 각막은 사이토케라틴 12를 발현하지만 사이토케라틴 8 또는 배상세포는 없습니다. 윤부 줄기 세포 결핍에서는 사이토케라틴 8과 배상 세포가 각막에 나타나지만 사이토케라틴 12는 소실됩니다. 이 기술을 숙달하면 1개월 안에 거의 모든 쥐 각막 표면을 덮고 최대 3개월까지 안정적인 각막 신생혈관을 만들 수 있습니다.

이미 제거된 각막 부분을 다시 칫솔질하지 않는 것이 중요합니다. 이것은 원치 않는 기질 염증과 혼탁을 유발할 수 있습니다. 윤부 줄기 세포 결핍이 발생하면 실험적 치료 방법을 테스트하고 비교할 수 있습니다.

또는 부상 직후 치료를 시작할 수 있습니다. 이 비디오는 쥐의 윤부 줄기 세포 결핍을 유도하기 위해 윤부 및 각막 상피를 효과적으로 제거하는 방법을 보여주었습니다. 약간의 수정을 통해 다른 동물에게도 수행 할 수 있습니다.