Name: 질량 조직학은에 신경 퇴행을 정량화하기 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-15T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: 학습하세요 Drosophila 뇌에서 신경 퇴행을 정량화하는 질량 조직학 방법을. 특수 염색 없이 공포 형성을 분석하며, 대조군과 실험군을 하나의 샘플로 처리하여 계통 오류를 최소화합니다. 이 기법은 노화 및 유전적 요인 연구에 유용합니다.

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이 연구는 오레곤 의학 연구 재단(Medical Research Foundation of Oregon)과 NIH/NINDS(NS047663)의 보조금으로 지원되었습니다. E.S.는 NIH(T32AG023477)의 교육 보조금으로 지원되었습니다.

1. 칼라의 머리를 고정하고 파라핀에 임베드 주 : 정착 프로세스의 모든 단계는 흄 후드에서 수행되어야한다. 건강 위험 포즈를하지 않으면 서 메틸 벤조 에이트는, 흄 후드에서 처리되지 않는 경우에 압도 될 수있는 매우 독특한 냄새를 가지고있다. <ol><li> 파리를 마취 전에 클로로포름 15 ㎖의 99 % 에탄올 30 ㎖에 빙초산을 5 ㎖ (클로로포름 및 아세트산을 혼합하지 않음)에 추가하여 Carnoy 용액 50 ㎖를 구성한다. 칼라 평면 놓을 수 완전히 솔루션이 적용되는 것을 보장하기 위해, 이러한 crystalizing 접시 같은 평평한 바닥과 유리 용기에 붓는다. </li><li> CO 2 또는 에테르와 함께 파리를 마취. </li><li> 집게를 사용하여 칼라로 목에 의한 스레드 파리 (최대 대부분의 칼라와 20). 그림 1A에서와 같이, 같은 방향으로 머리를 모두 맞춘 손상 머리 나 눈에 발생하지 않도록 부드럽게해야합니다. </li><li> 파리의 순서가 쉽게 부분에서 식별 될 수 있도록 임의의 위치에서 사인 oculis 파리 (화살표,도 1a)를 포함한다. 실험 파리는 빛 또는 흰색 눈 색깔이있는 경우 또한, 같은 야생형 같은 일부 빨간색 파리, 스레드 그들 사이에 충분한 안료 슬라이드를 염색하는 존재 확인 할 수 있습니다. 하나 이상의 칼라를 사용하는 경우, 칼라 번호와 함께 프로토콜 시트 파리의 순서를 기록한다. </li><li> 4 시간 - 칼라가 완료되면, 3.5에 대한 준비 Carnoy 용액에 넣습니다. </li><li> 적절한 폐기 용기에 Carnoy 솔루션을 덤프 및 에탄올 세척을 시작합니다. 컨테이너 칼라의 배치를 방해하지 않도록 천천히 부어해야합니다. </li><li> 두 번 99 % 에탄올에 30 분 동안 칼라를 씻으십시오. </li><li> 1 시간 동안 100 % 에탄올 칼라를 씻으십시오. overdehydration을 방지하기 위해 시간에 세척을 변경해야합니다. </li><li> 메틸 벤조 에이트의 칼라를 넣어O / RT에서 N. 메틸 벤조 에이트의 증발을 방지하기 위해 파라 필름으로 밀봉 용기. </li><li> 흄 후드의 적절한 일회용 용기에 methylbenozate을 따르십시오. (- 57 °의 C 56) 파라핀 왁스 및 메틸 벤조 에이트 (1) 저 융점 : 1의 이전에 제조 된 혼합물을 추가합니다. 이 시점에서, 칼라는 파라핀이 경화되지 않는 것을 확인하기 위해 65 ° C에서 인큐베이터에 보관해야합니다. </li><li> 적절한 일회용 용기에 methylbenozate과 파라핀 혼합물을 붓고, 용융 순수 파라핀 왁스를 부어 칼라에, 65 ° C로 유지. </li><li> 30 분 후 파라핀을 변경하고이 적어도 5 번 반복한다. 적어도 6-8 세척을 수행해야합니다. </li><li> 세척이 완료되면, 약 슬롯 칼라의 크기의 고무 아이스 큐브 트레이에 칼라를 배치합니다. 완전히 덮여 때까지 그들을 녹은 파라핀을 붓고는 O를 강화 할 수 있도록 / N은 (공기 방울을 피하려고). </li><li> 파라핀 블록 contai를 제거닝 아이스 큐브 트레이에서 목걸이. 부드럽게 칼라를 깨고, 면도날을 사용하여 칼라에서 파라핀 블록을 분리합니다. 몸이 칼라에 남아있을 것입니다 동안 머리는 파라핀 블록에있을 것입니다. 블록이 실온에서 유지 될 수있다. </li><li> 칼라를 청소하려면, 빛 세정 깨끗한 파라핀을 제거하고 재사용하기 전에 에탄올 세척 65 ° C에서 deparafinization 에이전트에서 그들을 흡수. </li></ol> 2. 단면 및 설치 <ol><li> 50 ° C까지 가열 플레이트를 따뜻하게. 접시에 개체 소유자 (또는 금속 장착 블록) 및 면도날을 놓고 그들을 따뜻하게 할 수 있습니다. </li><li> 절편의 원하는 방향에 따라 파라핀 (수평 섹션에 대한) 측을 향해 머리와 두 블록 또는 (간단히 접촉 측의 블록을 용융) 가열 장착 블록 (정면 부분에 대한) 위쪽으로 향하도록 연결합니다. 가열 플레이트에서 블록을 제거하고 적어도 10 마일을 위해 냉각 할 수 있도록n은 파라핀이 장착 블록 상에 적절한 시일 충분히 경화되어 있는지 확인합니다. 단차를 방지 할 수만큼 블럭의 표면과 평행하게 정렬 헤드의 열을 유지한다. </li><li> 면도날을 가지고 포함 된 머리와 단지 작은 행이 유지되도록 멀리 비행 헤드에서 과잉 파라핀 트림 (면도날은 쉽게 다듬을 워밍업 할 수있다). 파라핀은 (절편 동안 수행 할 수 있습니다 더 트리밍) 절편 동안 중단되지 않도록 너무 많이 잘라 내지 않도록주의하십시오. </li><li> 마이크로톰의 물체 홀더에 장착 블록을두고 머리의 행의 배향 블레이드의 에지에 가능한 한 평행하도록 보장한다. </li><li> 폴리 -L- 리신 (PLL) 솔루션의 얇은 층을 덮어 현미경 슬라이드를 준비하고 5 분 동안 그들을 건조 할 수 있습니다. 직전에 사용하는 물을 커버. </li><li> 7 μm의 섹션을 잘라 물에 떠있는 슬라이드에 부분의 리본을 전송합니다. &lt;BR /&gt; 참고 : 수평 섹션에 대한 전체 뇌를 얻으려면, 우리는 머리가 완전히 절단 될 때까지 (뇌에 코에서 절단) 눈으로 절단하기 시작할 때부터 리본을 수집합니다. 하나 이상의 슬라이드 전체 머리 필요할 수있다. </li><li> 37 ° C에서 열판에 슬라이드를 놓고 리본이 약 1 분 동안 확장 할 수 있습니다. </li><li> (그것을 떨어져 쏟아져 또는 조직을 사용하여) 과잉의 물을 제거하고 슬라이드 O / N을 건조. </li><li> deparafinization 에이전트 (완전히 섹션을 포함)으로 가득 높이, 수직 슬라이드 염색 항아리에 슬라이드를 배치하여 슬라이드에서 파라핀 왁스를 제거합니다. 60 분 각각 - 30 분의 3 세척을 수행합니다. </li><li> 최종 세척에서 슬라이드를 제거합니다. 슬라이드에 삽입 미디어 2 방울을 놓고 큰 커버 슬립으로 커버. </li></ol> 3. 섹션을 사진 촬영 및 분석 <ol><li> 2 일 - 준비된 슬라이드 1 건조하도록 허용합니다. 그리고, 형광 microsc 그들을 검토푸른 빛 아래 OPE. </li><li> 파리의 방향을 결정하고, 특정 영역에 집중하는 경우 관심 영역을 찾는 저배율를 사용한다. 참고 : SWS 파리 (그림 2 참조)의 경우, 우리는 큰 접합면이 들어있는 부분을 찾아 (일반적으로 40 배 배율) 이미지를 촬영합니다. (그림 3에서와 같이) 전체 뇌를 분석 할 때, 우리는 머리에서 모든 섹션을 스크롤하여 가장 심각한 표현형 또는 공포를 보여 모든 섹션과 섹션을 촬영 중. </li><li> 이중 맹검 분석을 위해 취하고 번호 이미지 유전자형 모르게 이상을 식별하는 행에있는 칼라 수와 헤드의 위치를 ​​기록한다. </li><li> 화상이 촬영 된 후에 촬상 소프트웨어를 사용하여 분석한다. </li><li> 섹션 별 또는 머리 당 공포의 수를 계산합니다. , 액포의 크기를 측정하는 소프트웨어 프로그램에서 이미지를 열고도 선택과 액포를 선택하려면엘. 선택된 액포 화소의 크기를 결정한다. </li><li> 2 μm의 변환을 위해, 포토 취득에 사용되는 확대 한 스테이지 마이크로 미터 교정 슬라이드의 사진을 촬영. 변환 계수를 계산하기 위해 100 ㎛의 2 픽셀의 양을 결정한다. </li><li> 상기 단계에서 계산 된 변환 계수가 픽셀 수를 분할하여 2 ㎛로 총 화소 수를 변환한다. </li></ol>

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저자는 공개 아무것도 없어.

설명 된 방법은 초파리의 뇌 퇴행을 정량하는 방법을 제공한다. 특정 세포 유형을 계산하는 등의 다른 방법이, 신경 퇴행을 식별하는 데 사용될 수 있지만,이 방법의 장점은,보다 일반적으로 적용 할 수 있다는 것이다. 세포를 계수하는 것은 이들 세포를 확실하게 특정 항체 또는 항상 가능하지 않은 세포 특이 마커의 발현을 사용하여 식별 될 수있는 것을 요구한다. 또한,이 극적으로 다른 결과 아마도 의한 라벨링 및 검출에 사용되는 조건을, 그 방법 (24)을 얻을 수있다 나타났다. 퇴화 세포를 검출하는 또 다른 방법은 그러나 반대로 활성 카스파 제 3과 같이, 이것은 적극적 세포 사멸을 겪는 세포를 식별하지 않고 세포가 사망하면 더 이상 검출하고, 세포 죽음 마커의 사용이다. 여기에서 제안 된 방법의 다른 장점은 오염 인해 autoflu에 필요하지 않다는 것이다시간을 절약하고 오염 조건의 변화에 ​​의한 아티팩트를 최소화 눈 안료 의한 orescence. 또한이 방법을 사용하는 경우, 파리의 눈 슬...

기대 수명의 증가와 함께, 알츠하이머 나 파킨슨 병 같은 신경 퇴행성 질환은 일반 인구 증가 건강에 위협이되고있다. 국립 보건원에 따르면 115 만명 전세계 기본 상당한 진전이 많은 분야에서 이들 질환의 적어도 일부에 관여하는 유전자와 위험 요인을 식별 하였지만 2050 치매에 의해 영향을받을 것으로 예상되는 분자 메커니즘은 여전히 ​​알 수없는 여부를 잘 이해한다. 예쁜 꼬마 선충과 초파리 melanogaster의 같은 간단한 무척추 동물 모델 생물은 짧은 라이프 사이클, 자손의 많은 수의, 잘 설립 때로는 독특한 유전 및 분자 방법 1의 가용성을 포함한 신경 퇴행성 질환의 메커니즘을 연구하는 실험 다양한 장점을 제공합니다 -12. 또한, 이러한 유기체는 편견 의무가 있습니다신경 퇴행성 표현형에 자신의 악화 또는 의한 개선 효과에 의해 이러한 질병에 기여하는 요인을 식별 할 수있는 상호 작용 화면. 이러한 유전자의 상호 작용을 분석하고 노화 효과를 평가하는 신경 퇴행을 검출하고 그 심각도를 측정하는 정량적 프로토콜을 필요로한다. 숫자 성능 값 13-21을 제공하는 등 후각 학습, 부정적인 geotaxis, 또는 빠른 phototaxis으로 초파리의 행동 측면을 측정 할 때이 평가는 비교적 쉽게 수행 할 수 있습니다. 이는 뉴런을 카운트함으로써 신경 세포의 생존에 대한 효과를 결정하는 것도 가능하다. PD의 영향, 그리고 심지어 그 후, 결과는 22-24 논란 한 도파민 뉴런 같이 명확하게 식별되는 특정 인구 집중 그러나이 경우에만 가능하다. 여기에 설명 된 프로토콜 파라핀 직렬 섹션을 수행 칼라 방법을 사용하는 방법즉 원래 초파리 25 해부학 뇌 돌연변이를 분리하여 사용하고 Böhl 하이젠 베르크에 의해 개발되었다. 칼라 방법의 사용은 다음에 저온부, vibratome 부, 비닐 부 26-28에 포함하도록 구성되었다. 여기서,이 방법은 퇴행성 신경 표현형 16,21,29-32에 파리 발전 액포를 측정하는 데 사용할 수있는 전체 플라이 헤드의 직렬 부분을 얻기 위해 사용된다. 이러한 측정들은 특정 뇌 영역에서 수행 될 수 있거나 뇌 전체를 커버 할 수있다; 후자의 방법은 노화 동안 관찰 한도 약한 퇴행성 표현형을 식별 할 수 있습니다. 칼라를 사용하는 경우 마지막으로, 20 파리에는 하나 준비로 처리 할 수 ​​있습니다뿐만 아니라 적은 시간이 소요되지만 인해 약간의 변화에 ​​아티팩트를 최소화 제어와 같은 준비 실험 파리의 분석 가능 준비.

<table><tbody><tr><td>시약/장비</td><td>회사</td> 이름 <td>카탈로그 번호</td><td></td></tr><tr><td>칼라</td><td>Genesee Scientific</td><td>TS 48-100</td><td>우리는 Genesee의 것과 같은 레이어 대신 한 조각의 금속으로 만든 맞춤형 칼라를 사용하고 있습니다. 목걸이를 만드는 방법에 대한 설명은 http://flybrain.neurobio.arizona.edu/Flybrain/html/atlas/fluorescent/index.html&nbsp 에서 찾을 수 있습니다.</td></tr><tr><td>가정용 상점</td><td></td> <td>임베딩용 고무 아이스 큐브 트레이</td><td>크기는 추가 벽에 접착제로 붙여서 맞춤 제작할 수 있습니다&nbsp;</td></tr><tr><td>결정화 접시</td><td>피셔 사이언티픽 컴퍼</td>니 <td>08-762-3</td><td></td></tr><tr><td>에테르</td><td>피셔 사이언티픽 컴퍼니</td><td>E138-1</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Decon Laboratories Inc.</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>Choloroform</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>C298-500</td><td></td></tr><tr><td>빙하 아세트산</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>메틸 벤조 에이</td><td>트 Fisher Scientific Company</td><td>M205-500</td><td>뚜렷한 냄새 - 흄 후드에 사용!</td></tr><tr><td>낮은 융점 파라핀 왁스</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>T565</td><td>65°C에서 추가로 녹은 상태로 유지하십시오. C waterbath</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica Biosystems</td><td>Reichert Jung 2040 자동 절단</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>12-550D</td><td></td></tr><tr><td>현미경 커버 유리</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>12-545-M</td><td></td></tr><tr><td>SafeClear</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>314-629</td><td>세척을 위한 세 가지 다른 용기</td></tr><tr><td>수직 염색 항아리 표지</td><td>: Ted Pella Inc.&nbsp;</td><td>432-1</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>폴리-L-라이신 솔루션(PLL)</td><td>시그마 생명 과학</td><td>P8290-500</td><td></td></tr></tbody></table>

질량 조직학은에 신경 퇴행을 정량화하기<em&gt; 초파리</em

Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila

알츠하이머 병 (AD) 또는 파킨슨 병 (PD)와 같은 진보적 인 신경 퇴행성 질환은 전 세계적으로 사람의 건강에 위협이 증가한다. 포유 동물 모델은 병원성의 기전에 중요한 통찰력을 제공하고 있지만, 함께 높은 비용 포유류 시스템의 복잡성은 자신의 사용을 제한하고 있습니다. 따라서, 간단하지만 잘 확립 된 초파리 모델 시스템은 이러한 질병에 영향을 분자 경로를 조사하기위한 대안을 제공합니다. 행동 적자 외에도, 신경 퇴행성 질환 등 신경 죽음과 axonopathy 등의 조직 학적 표현형을 특징으로한다. 신경 세포의 변성을 정량화하고는 유전 적, 환경 적 요인에 의해 영향을받는 방법을 결정하기 위해, 우리는 성인 플라이 뇌에서 공포 측정을 기반으로하는 조직 학적 접근 방법을 사용합니다. 계통 오차의 영향을 최소화하기 위해 직접적으로 제어 및 경험치의 섹션을 비교하나 준비 erimental 파리, 우리는 파라핀 섹션의 &#39;칼라&#39;방법을 사용합니다. 신경 퇴행은 플라이 뇌 개발 액포의 크기 및 / 또는 개수를 측정하여 평가한다. 이것은 하나의 관심의 특정 영역에 집중하거나 완전한 헤드 걸쳐 직렬 부분을 취득하여 전체 뇌를 분석함으로써 수행 될 수있다. 정상적인 노화 중에 발생 따라서,이 방법은, 하나는 심한 변성뿐만 아니라 몇 부분 만 감지 상대적으로 약한 표현형뿐만 아니라 측정 할 수 있습니다.

전체 플라이 헤드를 포함 눈 안료 (33)에 의해 스테인드 시리얼 섹션에 설명 된 방법의 결과를 사용. 이것의 일부는 각각의 헤드의 부분이 위로부터 아래로 도시되어도 1b에 도시된다. 다른 파리에서 섹션이 예에서 왼쪽에서 오른쪽으로 볼 수 있습니다. 방향과 파리의 식별을 용이하게하기 위해, 눈이없는 비행 (사인 oculis)의 위치 3 (화살표, 그림 1B)에서 마커로 삽입됩니다. 신경 퇴행을 정량화하기 위해,이 부분에서 검출 할 수 액포의 형성을 측정한다. 액포가 라운드로 정의된다, 녹색 형광 neuropil 내에서 (그림 2의 화살촉 3) 또는 피질과 어두운 반점은 즉시 뇌의 이상이 연속 섹션에서 볼 ...

초파리 널리 신경 퇴행을 연구하기위한 모델 시스템으로 사용된다. 이 프로토콜은, 뇌의 공포 형성에 의해 결정된 바와 같이, 정량 할 수있는 변성하는 방법을 설명한다. 또한 인해 하나의 샘플로 처리 및 절편 제어 및 실험 파리에 의해 실험 절차에 효과를 최소화 할 수 있습니다.

Progressive neurodegenerative diseases like Alzheimer&#39;s disease (AD) or Parkinson&#39;s disease (PD) are an increasing threat to human health ...

본 절차의 전반적인 목표는 특정 염색 과정 없이 연령, 유전자 변형 또는 환경적 영향 등 다양한 요인으로 인해 발생하는 초파리 뇌의 신경 퇴행을 정량화하는 것입니다. 이 방법은 어떤 유전자나 환경적 요인이 이러한 질병을 유발하거나 기여하는가와 같은 신경 퇴행성 질환 분야의 핵심 질문을 분석하는 데 매우 유용합니다.이 방법의 주요 장점은 대조군 초파리와 실험군 초파리를 하나의 샘플로 취급함으로써 계통 오차를 피하거나 최소화할 수 있다는 점입니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 연구자는 뇌의 정확한 영역이 슬라이드 위에 놓이도록 하고 절단 과정에서 발생할 수 있는 손상을 방지하는 데 숙련이 필요하므로 초기에는 어려움을 겪을 수 있습니다. 우선, 핀셋을 사용하여 대상 초파리의 목 부분을 칼라(collar)에 끼웁니다.모든 머리를 동일한 방향으로 정렬하고 머리나 눈에 손상이 가지 않도록 주의하십시오. 섹션에서 파리의 순서를 쉽게 식별할 수 있도록, 알려진 위치에 Eyeless Senoculus 파리를 무작위로 포함시키십시오. 또한, 관심 있는 파리 계통의 눈이 밝은 색이거나 흰색인 경우, 슬라이드를 염색하기에 충분한 색소가 존재하도록 스트립을 따라 일정 간격으로 붉은 눈 파리를 끼워 넣으십시오.파리의 순서와 함께, 여러 개를 사용한 경우 칼라 번호를 기록합니다. 칼라 작업이 완료되면 이를 Carnoy's solution에 3.5~4시간 동안 담가 둡니다. 파리 조직을 포매하기 위해 Ethanol, Methyl Benzoate, Paraffin 세척 과정을 연속적으로 수행합니다.다음으로, 각 섹션당 하나씩 칼라를 고무 얼음 트레이에 배치합니다. 기포가 생기지 않도록 주의하며 녹은 파라핀을 칼라 위에 천천히 붓고, 하룻밤 동안 굳힙니다. 트레이에서 칼라가 포함된 파라핀 블록을 꺼냅니다.면도날을 사용하여 파라핀 블록을 칼라에서 분리합니다. 칼라를 조심스럽게 부러뜨립니다. 몸통은 칼라에 남고, 머리 부분은 파라핀 블록에 유지됩니다.조직을 절편으로 만들기 위해, 먼저 가열판을 50 °C로 가열합니다. 면도날이나 금속 마운팅 블록과 같이 왁스에 닿을 모든 도구를 가열판 위에 올려 따뜻하게 데웁니다. 원하는 절편 방향을 결정한 후, 파라핀 분절의 접촉면을 살짝 녹여 마운팅 블록에 부착합니다.면도날을 사용하여 파리 머리가 포함된 작은 열만 남도록 주변의 과잉 파라핀을 제거합니다. 마이크로톰(Microtome)의 시료 홀더에 마

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

, 전위의 기능을 측정하는 학습을위한 행동 assays, 및 메모리...

에 시금 운동력이있는 사람, 학습, 및 메모리 적자 Drosophila</emNeurodegeneration의> 모델

단일 Drosophila Ommatidium의 해부 및 이미징

여기에 우리가있는 도파민 (DA) 신경 세포의 연령에 따라 신경 변성을 연구하기 위해 설립 된 두 가지 분석을...

에 신약 표현형을 평가<em&gt; 초파리</em&gt; 등산 분석 실험에 의한 도파민 뉴런과 뇌 전체의 면역 염색

여기에 우리는 세 번째 instar 애벌레의 neuromuscular 접합 (NMJ)에서 모터 뉴런의 신경 퇴화를 시각화하고 계량하기 위해 초파리 유충의 분절 신경을 손상시키는 간단하고 널리 액세스 할 수있는 방법을 설명합니다.

학습 할 간단한 신경계 상해 방법론<em&gt; Drosophila</em&gt; 모터 뉴런 변성

이 프로토콜 설명 해 부와 성인 초파리 melanogaster 의 immunostaining 뇌 조직. 특히,이 프로토콜은 신경 개발의 많은 측면을 기본 일반적인 원리를 밝히기 위해 정확 하 게 사용할 수 있는 예제 신경 하위 집합으로 초파리 버섯 몸과 포토 리셉터 뉴런의 사용을 강조 표시 합니다.

해 부 및 Immunofluorescent 얼룩의 버섯 몸과 성인 초파리 melanogaster 두뇌 신경 세포 포토 리셉터

단백질 집계 및 autophagic 플럭스의 초파리 모델의 중앙 신 경계에서의 형광 이미징-기반 세포 생물학 연구에서 양적 데이터를 추출 하는 간단 하 고 융통성 있는 워크플로 개발 했습니다. neurodegeneration입니다.

ImageJ를 사용 하 여 붙일 태그가 단백질의 편견된 분석 통해 초파리 에서 Neurodegeneration의 양적 세포 생물학

우리는 Drosophila melanogaster에있는 신경 변성을 전시하는 돌연변이를 위한 스크린에 전방 유전 접근을 사용하여 프로토콜을 제시합니다. 그것은 궁극적으로 신경 보호의 프로세스와 관련있는 새로운 유전자를 확인하기 위하여 등반 분석, 기관학 분석, 유전자 매핑 및 DNA 순서를 통합합니다.

소독멜라노가스터에서 새로운 신경보호 유전자를 식별하기 위한 생체 전방 유전자 스크린

여기에서, 우리는 절단된 축색및 그들의 시냅스의 형태학적 그리고 기능적인 보존을 평가하기 위하여 Drosophila melanogaster에 있는 3개의 간단한 상해 유도한 축사 변성 (축세포 죽음) 분석사를 능력을 발휘하는 프로토콜을 제공합니다.

드로소필라 멜라노가스터에서 축사 사망 시축과 시냅스의 형태학적 및 기능적 평가

이 절차의 목표는 Drosophila melanogaster를사용하여 신경 퇴행성 질환 모델에서 DLM 신경 근육 접합 (NMJs)의 구조적 무결성을 평가하기 위해 등쪽 세로 근육 (DLM) 조직을 해부하는 것입니다.

신경변성과 관련하여 성인 Drosophila에서 시냅스 퇴성을 시각화

이 연구는 참수, 고정, 동결 절제, 형광 염색, 면역 염색 및 이미징을 포함하는 조직 처리를 위한 단순화된 프로토콜을 제시하며, 이는 공초점 및 다광자 이미징으로 확장될 수 있습니다. 이 방법은 복잡한 해부에 필적하는 효능을 유지하며 고급 운동 기술의 필요성을 우회합니다. 정량적 이미지 분석은 광범위한 조사 잠재력을 제공합니다.

향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 초파리 머리의 직접 동결 절편

학습하세요 Drosophila 뇌에서 신경 퇴행을 정량화하는 질량 조직학 방법을. 특수 염색 없이 공포 형성을 분석하며, 대조군과 실험군을 하나의 샘플로 처리하여 계통 오류를 최소화합니다. 이 기법은 노화 및 유전적 요인 연구에 유용합니다.

질량 조직학은에 신경 퇴행을 정량화하기

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