Name: 정맥 삽입 위치 모델 : 바이 패스 이식 개통을 연구하기위한 적절한 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: 배우세요 쥐 정맥 삽입 모델을 이용한 바이패스 이식 개통 연구 방법입니다. 이 기술은 혈관 내피 과형성 및 생물학적 과정을 조사하여 새로운 치료제 개발에 활용됩니다.

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저자는 그녀의 기술 지원을 크리스티안 Pahrmann 감사합니다. 본 연구는 독일 재단 FUER Herzforschung에 의해 투자되었다 (F / 14분의 28). DW는 심장 및 폐 이식을위한 국제 사회에서의 여행 수상에 의해 지원되었다. TD는 그렇지-크로네-는 Fresenius 재단 (2012_EKES.04)에서 그렇지 크로네 우수 장학금을 받았다. SS는 독일 연구 협회로부터 연구비를받은 (DFG, DE2133 / 2-1, TD 및 SCHR992 / 3 일, SCHR992 / 4-1, SS).

동물 실험 동물의 원리, 실험 동물 자원 연구소에 의해 제조 및 국립 보건원 (National Institutes of Health)에 의해 출판에 대한 가이드를 준수 인도적인 치료를 받았다. 모든 동물 프로토콜은 책임있는 지방 자치 단체 ( &quot;AMT 사의 대 아퍼 싶게 Verbraucherschutz, Hansestadt (보건 및 소비자 보호를위한 사무실) 함부르크&quot;)에 의해 승인되었다. 1. 동물 관리 <ol><li> 실험 동물 연구소에서 300-350g 무게 루이스 쥐 (LEW / CRL) 쥐와 ROSA / 루시 페라 - LEW 형질 전환 쥐를 얻습니다. </li><li> 통풍 캐비닛에 기존의 조건에서 쥐를 유지하고 그들에게 표준 쥐 차우와 멸균 임의 량의 물을 공급. </li><li> 기증자와받는 사람과 syngenic LEW / CRL 쥐와 ROSA / 루시 페라 - LEW 형질 전환 쥐를 사용하여 이식 이식을 수행합니다. </li></ol> 기증자 쥐 2. 준비 <ol><li> 입회를 사용하여이온 챔버는 이소 플루 란 (2.5-3 %)와 쥐를 마취시키다합니다. </li><li> 그 뒷면에있는 쥐를 놓고 입과 코를 커버하는 안면 마스크로 마취를 유지한다. 뒷다리 다리를 곤란과 반사의 부재를 확인하여 마취의 충분한 깊이를 확인합니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 일부 수의사 연고를 적용합니다. </li><li> 뒷다리를 확산하고 테이프를 사용하여 자신의 위치를 ​​고정. </li><li> 헤어 트리머 사타구니 모발을 면도하고, 80 % 에탄올을 다음 포비돈 요오드를 사용하여 전체 영역을 소독. 두 번 소독 단계를 반복합니다. 참고 : 외과 영역, 거즈, 및 수술 도구를 소독해야한다. 절차를 통해 멸균 필드를 유지하고 단일 사용, 무균 수술 장갑, 마스크와 모자를 착용하십시오. </li><li> 현미경 하에서, 원격 교육의 inguinalis을 따라 수직 절개를 수행합니다. 부드럽게 피하 조직을 분리하는 두 개의 집게를 사용하고 오라에서 표면 상복부 정맥을 노출대퇴 정맥에 진. 조심스럽게 주위 조직에서 피상적 인 상복부 정맥을 격리 할 것. </li><li> 이 마이크로 클램프를 사용하여 표면 상복부의 정맥에서 혈액의 흐름을 중지합니다. </li><li> 조심스럽게 집게로 분리 된 정맥을 올리고 microscissors과 용기를 절단하여 정맥의 약 0.5 ~ 1 cm 세그먼트를 수확. 혈액의 손실을 방지하기 위해 용기 밑둥 마이크로 클램프를 떠난다. 멸균 거즈에 정맥의 제거 조각을 놓습니다. 조심스럽게 수확 정맥의 일단 내부에 30 G 바늘을 배치하고 헤파린과 용기 (50 단위 / ml)로 세척하십시오. 참고 :주의 정맥을 처리 및 리프팅, 절단 및 세척시 손상을 방지. 헤파린의 적절한 양의 이식을 세척해야합니다. </li><li> 받는 사람 쥐에 이식 혈관 경련을 방지하기 위해 때까지 얼음에 1 % 리도카인에서 선박 세그먼트를 유지합니다. </li><li> 5 % 이소 플루 란으로 마취를 증가시킴으로써 도너 래트를 안락사. 2 ~ 3 분, 연산 후원격 교육 알바 따라 복부 욕실, 다이어프램을 극복하고, 혈액 순환을 중지 마음을 제거합니다. </li></ol> 받는 사람 쥐 3. 준비 <ol><li> 마취 및 공여 쥐와 같은 방법으로 수신자 쥐를 고정한다. </li><li> 헤어 트리머 다리의 내측부를 면도 포비돈 요오드 및 80 % 에탄올을 3 회 소독. </li><li> 마취 깊이를 모니터링하고 뒷다리 곤란 때 반사의 유무를 확인하여 충분하다는 것을 보장한다. </li><li> 사타구니 배에 무릎에서 평균 대퇴부 절개를 수행합니다. 현미경으로, 그 주변에서 대퇴 동맥을 분리하는 2 집게를 사용합니다. </li><li> 혈액의 흐름을 중지 마이크로 클램프를 사용합니다. 말초 클램프 다음 먼저 근위 클램프를 놓습니다. </li><li> microscissors와 클램프 대퇴 동맥의 짧은 세그먼트를 잘라 그것을 폐기합니다. 인 차이를 만들어 microscissors와 나머지 동맥 루터 단축정맥 이식편보다 큰 1-2mm. 30 G 바늘을 사용하여 헤파린과 동맥 그루터기를 플래시합니다. 참고 : 외막 약간 용기 밑둥을 넘어 돌출하는 경우, 용기의 말을 통해 살짝 당겨 조각을 제거하기 위해 집게를 사용합니다. </li><li> 동맥 젊고 아름다운 여자 사이의 단계 2.8에서 수확 정맥을 놓고는 간극에 적절하게 맞도록 길이를 조정합니다. 정맥의 방향을합니다. </li><li> 먼저 10-0 prolene의 봉합을 사용하여 근위 문합을 수행합니다. (그림 1D) 표시된 순서대로 하나의 스티치를 실시한다. 복부 측면에 3 개의 봉합을 추가하기 전에 각 측면에 봉합 시작합니다. 그 후, 문합을 완료하기 위해 용기의 지느러미 편에서 3 바늘을 배치합니다. </li><li> 단계 3.8에 기재된 근위 문합과 동일한 기술을 사용하여 그래프트 원위 혈관을 연결한다. 또, 각 측면에 봉합사로 시작하고 복부 SID 세 봉합 배치전자와 지느러미 쪽. </li><li> 피브린 접착제 성분 1, 2와 부하이 1 ML의 주사기를 조심스럽게 집게로 이식을 들어 올려 구성 요소 (2) 다음, 이식에서 피브린 접착제 성분 1의 약 100 μl를 놓습니다. 주 : 1의 비율 : 구성 요소 1과 2는 1에 적용되어 있는지 확인합니다. </li><li> 다시 위치에 이식을 놓고 이식의 상단에 구성 요소 1과 2의 추가 100 μl를 놓습니다. 접착제는 이식 및 문합 부전과 정맥 이식편의 과도한 팽창을 방지하기 위해 문합을 모두 다루고 있는지 확인하십시오. </li><li> 조심스럽게 근위 다음에 말초 클램프를 엽니 다. </li><li> 이식 된 정맥 이식편의 말초 동맥에서 볼 수 펄스를 확인하여 성공적인 수술을 확인합니다. </li><li> 피부 폐쇄를 방해하는 과도한 접착제를 제거합니다. 경화 접착제를 들어 올려 microscissors와 과잉을 제거하기 위해 집게를 사용합니다. 5-0 prolene의 봉합으로 피부 층을 닫습니다. </li><li> 4-5m를 주입g / kg 카프로 펜 피하 쥐가 일어나 허용하기 전에. 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오. 완전히 복구 될 때까지 하나의 새장에 동물을 유지합니다. </li><li> 다음 3 일간 진통제로 마시는 물 (100 ㎖ 당 50 mg의 설피 린)에 설피 린을 추가하고 매일 동물을 모니터링 할 수 있습니다. </li></ol> 4. 이중 초음파 검사 참고 : 사용 duxplex 초음파 쥐 (14)에 비 침습적 혈액의 흐름을 시각화합니다. <ol><li> 유도 챔버 (이소 플루 란 2 %)에서 쥐를 마취. 그 뒷면에있는 쥐를 놓고 코를 덮는 보호구로 마취를 유지한다. </li><li> 허벅지의 지역 주위에 머리를 제거하기 위해 헤어 가위 헤어 제거 크림을 사용합니다. </li><li> 허벅지에 초음파 젤을 적용합니다. 기포가 없는지 확인합니다. 석사 400 변환기를 사용하여 이중 초음파 영상을 획득 (중심 주파수 : 30 M/ 초 230-400 프레임의 프레임 레이트와 Hz에서). </li></ol> 5. 조직 병리학 참고 : 수확이 형태 계측 학적 분석 15 메이슨의 트리 크롬 염색과 용기를 얼룩합니다. <ol><li> 하룻밤 동안 4 % 파라 포름 알데히드에서 수거 용기를 고정하고 에탄올 농도 증가에 탈수. 파라핀의 샘플을 포함하고 마이크로톰을 사용하여 5 μm의 두께 조각으로 잘라. 참고 : 파라 포름 알데히드는 독성이 특별한주의하여 취급해야합니다. </li><li> 트리 크롬 염색 용액을 염색하기 전에 슬라이드 Deparaffinize. , 스테인드 슬라이드를 탈수 자일 렌 그들을 취소 한 매체를 장착 그들을 탑재합니다. 슬라이드를 건조시킨 후, 현미경으로 샘플을 볼 수 있습니다. </li></ol> 6. 생물 발광 영상 (BLI) 참고 : 수술 후 이식은 생물 발광 신호 1을 측정하여 생체 내에서 시간이 지남에 따라 추적했다6. <ol><li> PBS 22 ㎖에 D-루시페린 칼륨 염 1 g을 용해시키고 복강 래트 (375 ㎎ / ㎏ 체중)에 주입. 루시페린이 동물에서 순환하는 15 분을 기다립니다. </li><li> 실시간 생물 발광 정량화 시스템으로 쥐를 놓고 생물 발광 신호를 액세스 할 수 있습니다. </li></ol>

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이 동영상은 정맥 이식편 손실을 조사 및 기본 병리학 적 과정의 탐사 및 새로운 약물이나 치료 옵션의 테스트를 위해 허용하는 쥐의 정맥 개재 모델을 보여줍니다. 마취는 수술 절차의 중요한 측면이다. 이것은 특히 장시간 작업 중에, 안전하고 쉬운 방법으로 연속 inhalative 마취 시스템은 좋습니다. 이 동작은 이상 1 시간 소요 트레이닝 단계 동안 매우 중요 할 수있다. 수술에 관하여, 수확 주입 17 일 동안 정맥 이식편을 손상하지 중요하다. 용기의 외막을 파지하여 정맥 이식편에 대한 손상을 방지하고 후속 혈전 형성 및 이식 실패를 피할 수있다. 이식편 개통 정맥 이식편 또는 dista 혈류 관찰을 통해 맥동 그래프트 구조 정맥 직후 결정될 수있다리터 동맥뿐만 아니라 이중 초음파 검사를 통해. 절차의 또 다른 중요한 측면은 정맥 이식편의 과도한 팽창...

관상 동맥 질환과 그 합병증은 전세계 사망의 주요 원인 중입니다. 현재 치료 전략을 재 확립 혈류에 어느 좁아진 혈관을 확장시키고 또는 바이 패스를 작성하여 초점. 정맥자가 이식을 이용하여 관상 동맥 우회술 (CABG) 먼저 1968 년에 설명하고, 수년에 걸쳐 정제하고있다. 외에도 왼쪽 전방의 재관류는 관상 동맥을 내림차순에서, 복재 정맥 도관은 가장 일반적으로 1을 사용합니다. 그러나, 이식 개통은 복재 정맥 이식 (SVG)의 약점 남아있다. 한 해 수술 후 이식 개통은 십년 2,3 후 61 %로 떨어지고, 85 %이다. SVG 개통 손실의 병태 생리 학적 기전과 원인을 공개하는 것은 그러므로 중요한 작업입니다. 이 동영상은 정맥 이식편 손실을 조사하기 위해 쥐의 정맥 개재 모델을 보여줍니다. 이 방법의 전반적인 목표는 기본 병인 학적 탐구한다및 질병의 진행 동안 -physiological 과정은 약물이나 치료 옵션 테스트에 적합한 모델을 개발한다. 동맥 시스템으로 표면 상복부 정맥 이식함으로써,이 모델은 밀접하게 관상 동맥 우회술의 임상을 모방. 외과 외상, 허혈, 벽 스트레스는 병적 인 혈관 변화의 중요한 트리거하고 설명하는 모델을 모방하고 있습니다. 다른 모델과 종은 정맥 이식편 개통 손실을 조사 할 수 있습니다. 이러한 돼지 4, 양 5 개 (6), 원숭이 (7)과 같은 대형 동물 모델은 인간의 용기와 해부학 적 구조와 유사하므로 팔을 테스트 할 이러한 바이 패스 스텐트 삽입하거나 새로운 수술 기법과 같은 복잡한 치료 전략을, 수 있습니다. 그러나, 특수 하우징, 장비 및 인력이 필요합니다. 또한, 고비용 및 수술 중에 마취 추가의 필요성은 광범위한 응용을 방해. SM래트를 포함한 모든 동물은 특수 하우징을 필요로하지 않으며, 취급이 용이하며, 관리 비용을 갖는다. 마우스 모델 9,10-에 비해 래트 모델 결과의 더 조작성을 이용하므로 적은 변동을 가지고있다. 쥐 생리 학적 및 유전 마우스 (11, 12)보다 인체에 더 유사하다. 또한 대부분의 야생형 마우스는 II 에러를 입력하는 경향이 마우스 모델을 한정 myointima 13 개발한다. 예 하대 정맥 등 주요 마우스 정맥의 조직학은 단지 몇 세포 층으로 구성되어 있으며, 초기 평가 어려운 (13)를 렌더링합니다. 다른 단점은 그래프트 복구 후 후속 분석 가능한 조직의 작은 양이다. 동영상에서 설명한 모델 수행 재현성 저렴하고, 용이하고, 신속하고 확실하게 설정할 수있다. 이 같은 바이러스 벡터와 같은 고가의 실험 치료제를 평가에 특히 적합경제적 인 방식으로 유전자 치료를위한.

<table><tbody><tr><td>Rat LEW/Crl</td><td>Charles River</td><td>재고 번호 004</td><td></td></tr><tr><td>Rat LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 luc)11Jmsk</td><td>Institute of laboratory animals, Kyoto University, Japan</td><td>NBPR 쥐 번호 0299</td><td></td></tr> <tr><td>http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/ PFA 4</td><td>%Electron Microscopy Sciences</td><td>#157135S</td><td>20%</td></tr><tr><td>hair clipper</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>AbbVie</td><td>PZN 10182054 Art.Nr : B506</td><td>Isoflurane</td></tr><tr><td>미세 수술 클램프</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine - 4mm</td></tr><tr><td>클램프 애플리케이터</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td></td></tr><tr><td>제모 크림</td><td>Rufin 화장품</td><td>27618</td><td></td></tr><tr><td>포비돈-요오드</td><td>베타딘 Purdue Pharma</td><td>NDC : 67618-152</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Ethilon 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>2814G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 prolene 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>Rimadyl</td><td>Pfizer</td><td>400684.00.00</td><td>Carprofen</td></tr><tr><td>Novaminsulfon</td><td>Ratiopharm</td><td>PZN 03530402</td><td>Metamizole</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Rotexmedica</td><td>PZN : 3862340</td><td>25.000 IE / ml</td></tr><tr><td>Xylocain 1 %</td><td>아스트라제네카</td><td>PZN: 1137907</td><td>리도카인</td></tr><tr><td>EVICEL</td><td>J& J Med.Ethicon Biosur</td><td>PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE</td><td>피브린 접착제</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>B.Braun</td><td>PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 770 고해상도 in vivo 마이크로 이미징 시스템</td><td>VisualSonics</td><td></td><td>듀플렉스 초음파 검사</td></tr><tr><td>Ecogel 100 초음파 젤</td><td>Eco-med</td><td>30GB</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin 반딧불이, 칼륨 염</td><td>Biosynth</td><td>L-8220</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Ivis 200</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>생물 발광 이미징</td></tr><tr><td>Weigerts 철 hematoxylin Kit</td><td>Merck</td><td>1.15973.0002</td><td>트리크롬 염색</td></tr><tr><td>Resorcine-Fuchsine Weigert</td><td>Waldeck</td><td>2.00E-30</td><td>Trichrome 염색</td></tr><tr><td>Acid Fuchsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8129-25G</td><td>트리크롬 염색</td></tr><tr><td>Ponceau S 용액</td><td>Serva 전기영</td>동 <td>33427</td><td>삼색 염색</td></tr><tr><td>아조플록신</td><td>Waldeck</td><td>1B-103</td><td>트리크롬 염색</td></tr><tr><td>몰리브다토인산 수화물</td><td>Merck</td><td>1.00532.0100</td><td>트리크롬 염색</td></tr><tr><td>오렌지 G</td><td>Waldeck</td><td>1B-221</td><td>트리크롬 염색</td></tr><tr><td>라이트 그린 SF</td><td>Waldeck</td><td>1B-211</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Vitro-Clud</td><td>Langenbrinck</td><td>04-0001</td><td></td></tr><tr><td>빙하 아세트산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Th. Geyer</td><td>3410</td><td></td></tr><tr><td>파라핀</td><td>Leica biosystems</td><td>REF 39602004</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 절대</td><td>Th. Geyer</td><td>2246</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 96%</td> <td>Th. Geyer</td><td>2295</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 70%</td> <td>Th. Geyer</td><td>2270</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드 랙</td><td>Ted Pella</td><td>21057</td><td></td></tr><tr><td>염색 접시</td><td>Ted Pella</td><td>21075</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen Eye and Nose 연고</td><td>Bayer</td><td>1578675</td><td>Eye 연고</td></tr></tbody></table>

정맥 삽입 위치 모델 : 바이 패스 이식 개통을 연구하기위한 적절한 모델

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

우회술은 관상동맥질환에 대한 확립된 치료법입니다. 이식편 개통은 계속해서 복재 정맥 이식편의 아킬레스건입니다. 우회 이식 실패에 대한 연구 모델은 이식편 개통 손실 중 병리생물학적, 병태생리학적 과정을 더 잘 이해하는 데 필수적입니다. 돼지나 양과 같은 대형 동물 모형은 인간의 해부학적 구조와 비슷하지만 특별한 시설과 장비가 필요합니다. 이 비디오는 정맥 이식편 개통 손실을 조사하기 위한 쥐 정맥 삽입 모델에 대해 설명합니다. 쥐는 저렴하고 다루기 쉽습니다. 마우스 모델과 비교했을 때, 편리한 크기의 쥐는 더 나은 조작성을 허용하고 보다 다양한 분석을 위해 충분한 양의 물질을 얻을 수 있습니다. 간단히 말해서, 기증자 쥐의 하복부 정맥을 적출하여 대퇴 동맥의 분절을 대체하는 데 사용합니다. 문합은 단일 스티치를 통해 수행되며 피브린 접착제로 밀봉됩니다. 이식편 개통은 이중 초음파 검사를 사용하여 비침습적으로 모니터링할 수 있습니다. 이식편 개통 손실의 주요 원인인 근육 증식증은 시간이 지남에 따라 점진적으로 발생하며 조직학적 단면에서 계산할 수 있습니다.

쥐의 정맥 개재 모델은 myointima 증식 및 혈관 이식 실패의 개발을 연구하기에 적합합니다. 동물 수술에서 잘 회복하고 우수한 신체 조건 포스트 동작을 보여줍니다. 그림 1은 키 수술 단계를 보여줍니다. 원격 교육의 inguinalis을 따라 피부를 절개 한 후, 상복부 표면 정맥과 대퇴 동맥 (그림 1A)를 식별된다. 이 초기 이식 실패 및 개통 손실을 초래할 수있는 이식의 수확은 이식 (그림 1B)를 손상시키지 않고, 신중하게 수행해야합니다. 받는 동물 (도 1C)에 그래프트 위치 후에 봉합 스티치가도 1d에 도시 된 순서로 수행된다. 완성 된 정맥 개재 이식은 창백 (그림 1E)를 표시하고 빨간색이되고 재관류 (그림 1 층) 후 맥동을 표시해야합니다. 성공...

이 비디오는 쥐의 정맥 삽입 수술 후 근육 내막 증식증의 발달을 연구하는 모델을 보여줍니다.

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

이 절차의 전반적인 목표는 쥐 정맥 삽입 모델에서 우회 이식 개통을 연구하는 것입니다. 이 방법은 우회 폐색 중 생물학적 및 생리학적 과정의 기본 경로와 같은 우회 수술 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 수술 절차가 쉽고 빠르며 생체 내에서 새로운 치료법 및 요관을 연구하는 데 사용할 수 있다는 것입니다.이 기술을 시연하는 것은 우리 실험실의 미세 외과 의사인 Grigol Tediashvili가 될 것입니다. 수술 전에 쥐의 뒷발을 꼬집어 반사 신경이 없는지 확인하여 충분한 마취 깊이를 확인하십시오. 그런 다음 마취 상태에서 건조함을 방지하기 위해 수의사 연고를 눈에 바르십시오.다음으로 뒷다리를 벌리고 테이프를 사용하여 위치를 고정합니다. 그런 다음 트리머로 서혜부 모발을 면도한 다음 포비돈 요오드를 사용하여 해당 부위를 광범위하게 소독한 다음 80% 알코올을 사용합니다. 이 스크럽을 총 세 번 번갈아 반복하십시오.이제 현미경으로 서혜부 선을 따라 수직 절개를 수행합니다. 그런 다음 두 개의 집게를 사용하여 피하 조직을 부드럽게 분리하고 표재성 상복부 정맥을 대퇴 정맥의 원점까지 노출시킵니다. 정맥은 연약하므로 매우 조심스럽게 수행하십시오.다음으로, 두 개의 클램프를 사용하여 표재성 상복부 정맥을 통한 혈류를 멈춥니다. 이제 정맥의 일부를 수확합니다. 고립된 정맥을 조심스럽게 들어 올리고 마이크로 가위를 사용하여 혈관을 자릅니다.그런 다음 정맥 세그먼트를 멸균 거즈에 놓습니다. 거기에서 30게이지 바늘을 한쪽 끝으로 조심스럽게 밀어 넣고 헤파린으로 정맥을 씻어냅니다. 그런 다음 정맥을 1% 리도카인으로 옮기고 경련을 방지하기 위해 얼음 위에 보관하십시오.이제 마취를 5%이소플루란으로 증가시켜 기증자 쥐를 안락사시킵니다. 다음으로, anastamoses를 준비하기 위해 면도 단계까지 기증자 쥐와 같은 방식으로 수혜자 쥐를 준비합니다. 5%이소플루란을 2-3분 동안 투여한 후, 기증자 쥐의 복부를 알바 선(linea alba)을 따라 열고 횡격막을 절단한 다음 심장을 제거하여 혈액 순환을 멈춥니다.수혜자 쥐의 수술 준비를 계속합니다. 헤어 트리머로 다리의 안쪽을 면도하고 포비돈-요오드와 80% 에탄올을 번갈아 가며 3회 스크럽하여 피부를 소독합니다. 계속 진행하기 전에 마취를 모니터링하기 위해 한 번 더 발가락 꼬집기를 수행합니다.이제 무릎에서 서혜부 주름까지 대퇴 정중 절개를 수행합니다. 현미경으로 두 개의 집게를 사용하여 대퇴 동맥을 주변과 분리합니다. 그런 다음 두 개의 마이크로 클램프를 사용하여 혈류를 멈추고 근위 클램프를 먼저 놓습니다.다음으로, 고정된 대퇴 동맥의 짧은 부분을 잘라내어 버립니다. 나머지 동맥 그루터기를 줄여 정맥 이식편보다 1-2mm 더 큰 간격을 남겨둡니다. 그런 다음 30게이지 바늘로 동맥 그루터기를 헤파린으로 씻어냅니다.외막이 혈관 그루터기 너머로 약간 돌출되어 있으면 집게를 사용하여 배의 끝 부분 위로 외막을 약간 당긴 다음 외막을 제거합니다. 이제 채취한 정맥 세그먼트를 동맥 그루터기 사이에 올바른 방향으로 배치하고 잘 맞도록 간격 크기를 조정합니다. 이제 먼저 10-0 프롤렌 봉합사를 사용하여 근위 문합을 수행합니다.각 측면을 봉합하는 것으로 시작한 다음 복부 쪽에 세 개의 봉합사를 더 추가합니다. 등쪽을 세 바늘 꿰매어 마무리합니다. 다음으로, 동일한 기술을 사용하여 각 측면에 봉합사를 연결한 다음 복부 쪽에 3개의 봉합사를 연결한 다음 등쪽에서 마무리합니다.문합을 완료한 후 1밀리리터 주사기 2개에 피브린 접착제 성분을 로드합니다. 그런 다음 겸자로 이식편을 조심스럽게 들어 올리고 이식편 아래에 약 100마이크로리터의 성분 1을 적용한 다음 성분 2를 100마이크로리터로 적용합니다. 두 구성 요소는 항상 동일한 볼륨에 추가되어야 합니다.이제 이식편을 제자리로 되돌려 놓고 이식편에 각 구성 요소를 100마이크로리터씩 적용하여 이식편과 문합을 완전히 덮습니다. 이것은 문합 기능 부전과 정맥 이식편의 과도한 팽창을 방지합니다. 이제 원위 클램프부터 시작하여 클램프를 조심스럽게 엽니다.그런 다음 이식된 정맥과 이식편의 원위 동맥에서 눈에 보이는 맥박을 확인하여 성공적인 수술을 확인합니다. 피부를 닫기 전에 닫는 데 방해가 될 수 있는 과도한 접착제를 제거하십시오. 그런 다음 5-0 프롤렌 봉합사를 사용하여 피부층을 닫습니다.쥐가 깨어나기 전에 킬로그램 당 4-5mg의 카프로펜을 피하로 주사한다. 흉골 누운 자세를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 동물을 주시하십시오. 그런 다음 쥐에게 다른 동물이 없는 집 새장을 준다.다음 3일 동안 식수에 메타미졸을 투여하고 매일 쥐의 회복 상태를 확인하십시오. 완전히 회복되면 쥐는 다른 쥐와 함께 지낼 수 있습니다. 동물들은 수술 후 잘 회복하고 수술 후 우수한 신체 상태를 보였습니다.이식 후 정맥을 대퇴동맥에 성공적으로 통합하고 이식편을 개통하는 것은 이중 초음파를 사용하여 비침습적으로 확인되었습니다. 미결 양성 쥐의 정맥을 미결 음성 쥐에 이식함으로써 생물 발광 이미징을 사용하여 이식편의 존재를 모니터링했습니다. myointimal hyperplasia는 시간이 지남에 따라 이식편에서 점진적으로 발생하는 것으로 밝혀졌습니다.Masson의 삼색(trichrome)을 사용한 조직학적 염색은 내부 탄성 얇은 판 내부의 근내막 형성을 보여줍니다. 모델이 근내막 증식증의 역학을 재현하는지 확인하기 위해 내강 소멸을 측정했습니다. 이식편 개통의 점진적인 손실은 수술 후 7일에서 28일까지 관찰되었는데, 이는 모델에 잘 들어맞는다.이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 20분 안에 완료할 수 있습니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 여러분의 실험에 행운을 빕니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Neointimal 증식이 arterialized 정맥의 협착의 주요 원인입니다. 우리는 오른쪽 바깥목 정맥은 Sprague Dawley 쥐 온목 동맥에 커프 기술을 사용하여 이식되어 상기 새로운 프로토콜을 제안합니다. 생존 속도는 희생의 시점에서 100 %이다.

쥐 온목 동맥에 개재 외부 경정맥 정맥 이식의 : 정교한 Microsurgical 기술을 교육

이 비디오는 토끼 경동맥과 경정맥의 삽입을 보여주며, 정맥에 동맥 압력을 가하여 정맥 내막 증식을 유도합니다. 이 모델은 혈관재생술 후 내막 증식증의 진행을 약화시키기 위한 분자 및 유전적 중재를 조사하는 데 도움이 될 것입니다.

경동맥 및 경정맥 삽입: 토끼 모델에서 정맥 내부 증식을 유도하는 기술

혈관 복합 Allotransplantations (VCA)는 임상 현실이되었다. 그러나, VCA의 다양한 임상 적 적용은 만성 다중 약물의 면역 억제로 제한됩니다. 저자는 최소화하거나 잠재적 VCA에서 면역 억제의 필요성을 제거 할 수 신규 면역 전략을 번역하는 신뢰성 있고 재현 가능한 대형 동물 모델을 제시한다.

번역 상 혈관을 조성한 복합 동종 이식 (VCA) 연구를위한 수정 된 이소성 돼지 뒷다리 이식 모델

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

내막 증식증 (IH) 및 정맥 이식 실패의 개발로 이어지는 메커니즘은 아직 제대로 이해하고 있습니다. 이 연구는 제어 흐름과 압력 하에서 인간의 혈관을 관류하는 생체 시스템을 설명합니다. 또한 외부 메쉬 보강 효율 IH의 개발 평가 하였다 제한한다.

인간 복재 정맥 절차 전의 VIVO 관류 및 외부 보강

이 방법은 토끼에 개재 정 맥 이식의 배치, 이식, 변환 및 내구성 transgene 식의 성과 설명합니다. 이로써 transgenes 이식할된 혈관에 단백질 제품의 생리 및 병 적인 역할 및 정 맥 이식 질병에 대 한 유전자 치료의 테스트의 조사.

일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 Transgene 식의 토끼 모델

본 프로토콜은 정맥 이식편을 사용하여 정맥 혈관 화 수술 후 정맥 심상 증식을 감쇠하는 전략을 개발하기 위한 동맥 혈압에 정맥을 복종시킴으로써 정맥 친혈증을 실험적으로 만드는 것을 목표로 합니다.

정맥 이식편을 사용하여 동맥 혈압하에서 인티맥 증식을 평가하는 재혈관 외과를 모방한 토끼 정맥 중개 모델

이 프로토콜에서는 심폐 우회술 없이 왼쪽 흉벽의 작은 절개를 통해 새로운 돼지 정맥 우회술을 시행했습니다. 수술 후 병리학 연구가 수행되어 내막이 두꺼워지는 것으로 나타났습니다.

돼지 정맥 이식 질환 모델의 수립 및 평가

이 프로토콜은 카테터 삽입 및 3D 혈관 조영술을 생존 절차로 사용하여 정맥 순응도 및 팽창성의 생체 내 정량화를 가능하게 하여 다양한 잠재적 응용 분야를 가능하게 합니다.

3D 혈관 조영술을 사용한 In vivo Ovine 모델에서 열대정맥 Cava 순응도 및 팽창성 정량화

이 연구는 대퇴 동맥의 소구경 이식편을 평가하기 위한 돼지 모델을 제시합니다. 이 모델은 인간의 혈관 역학을 모방하고 이식편 개통성, 혈류역학 및 혈관 리모델링을 종합적으로 평가합니다. 혈관 이식편을 검사하고 도플러 초음파 및 혈관 조영술로 모니터링할 수 있는 유용한 플랫폼을 제공합니다.

소구경 혈관 이식편을 테스트하기 위한 돼지 모델에 대퇴 혈관 이식편 이식

배우세요 쥐 정맥 삽입 모델을 이용한 바이패스 이식 개통 연구 방법입니다. 이 기술은 혈관 내피 과형성 및 생물학적 과정을 조사하여 새로운 치료제 개발에 활용됩니다.

정맥 삽입 위치 모델 : 바이 패스 이식 개통을 연구하기위한 적절한 모델

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