Name: 전임상 마우스 모델에 대한 수술 절차 및 방법론 드 노보 유방암 전이 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: 배우세요 유방암 전이 연구를 위한 수술적 종양 절제술을 사용하여 마우스 모델을 구축하는 방법입니다. 이 프로토콜은 전임상 보조 요법 효능 평가에 필수적인 도구를 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

저자들은 조직 병리학 지원을 담당 한 Jo Hill, 수술 기술 교육을 담당 한 John Gleysteen 박사, 비디오 촬영 지원을 담당 한 Tessa Diebel, 중요한 통찰력과 토론을위한 Wong and Coussens 연구소의 모든 구성원 및 재정 지원을위한 OHSU 기사 암 연구소에 감사드립니다. 저자는 T32GM071388-10 및 T32CA106195-11에서 CEG, NCI / NIH, 국방부 유방암 연구 프로그램, 수잔 G 코멘 재단, 유방암 연구 재단 및 스탠드 업 암 - 루스 가르겐 재단에 대한 지원을 인정합니다. 췌장암 수렴 팀 드림 팀 번역 연구 보조금 (SU2C-AACR-DT14-14)을 LMC, 여성 건강 단체 인 MHW에게, 그리고 Brenden-Colson 췌장 건강 센터를 MHW 및 LMC에 제공했습니다.

다음 프로토콜에 사용 된 동물은 동물 복지 법 규정 및 보건 서비스 (PHS) 정책을 준수하도록 고안된 오리건 건강 과학 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 적용을받습니다. 멸균 조건의 유지 관리 : 멸균 된 도구를 마우스 사이에서 사용해야하며 멸균 거즈로 깨끗이 닦고 PBS로 헹구어 낸 다음 소독제 70 % 에탄올로 최소 15 분 동안 멸균해야합니다. 생존 수술을 위해서는 수술 용 모자, 안면 마스크, 가운 및 장갑을 착용해야합니다. 생존 수술을위한 동물의 수술 전 준비는 다음 프로토콜에 포함되어 있습니다. 시약 및 장비 목록은 표 1을 참조하십시오. 원발성 유방 종양으로부터 단일 세포 현탁액의 분리 및 제조 <ol><li> Donative female 100 일 된 트랜스 제닉 MMTV-PyMT (FVB / n) 마우스를 마취시키고 c마취 마스크를 통해 2 % isoflurane을 투여하여 지속적인 진정 작용. 발 핀치 반사가 없으면 마우스가 올바르게 마취되었는지 확인하십시오. </li><li> 멸균 설정에서 멸균 가위를 사용하여 피부와 주변 지방 조직 및 / 또는 림프절에서 유방 종양을 분리하여 100 일 된 트랜스 제닉 암 MMTV-PyMT (FVB / n) 생쥐의 원발성 유방 종양을 절제하십시오. 자궁 경관 탈구로 마취 쥐를 안락사. </li><li> 멸균 가위 또는 메스를 사용하여 원발 종양을 수작업으로 작은 조각 (~ 1.0 mm 3 )으로 채 웁니다. 종양 조각을 3.0 mg / mL collagenase A 및 4.0 U / mL DNase I에 DMEM에 용해시킨다. 직경 1.0 cm의 종양 당 ~ 10 mL의 위의 소화 배지를 사용하십시오. <ol><li> ~ 125 RPM 및 37 ° C에서 40 분 동안 멸균 교반 막대를 사용하여 멸균 25 mL 병에서 소화를 수행하십시오. </li></ol></li><li> 태아 소 혈청 (FBS)을 최종 희석액 10 %에 첨가하여 소화를 중지하고 전체 혼합물을 w얼음이 유지됩니다. </li><li> 0.7 ML 나일론 여과기를 통해 소화 종양 현탁액을 50 ML 원뿔 튜브로 필터링하고 여과기에 남아있는 종양을 폐기하십시오. 4 ℃에서 300xg로 뜨는 원심 분리기. </li><li> 1.0 cm 종양 당 10 ML DMEM에 펠렛을 Resuspend하고 0.7 μm의 나일론 여과기를 통해 다시 필터링. 셀 농도를 세고 4 x 300xg로 원심 분리한다. </li><li> 2 × 10 7 살아있는 세포 / ML의 농도 90 % FBS와 10 % dimethyl sulfoxide에 Resuspend 펠렛. -80 ° C에서 전체 원발 종양의 단일 세포 현탁액을 저장하십시오. </li></ol> 2. 유방 종양의 정위 주사 <ol><li> 냉동 펠렛이 극저온 튜브에서 20 mL DMEM으로 방출되어 세포 수를 계산할 때까지 37 ° C에서 1 차 종양 현탁액을 부분적으로 해동합니다. 4 X 300 XG에서 원심 분리기와 1 : 1 DMEM에 resuspend 세포 : 성장 요소 - 감소 solubilized 지하 막 준비 전자1 × 107 세포의 농도 Engelbreth-Holm이 - 스웜 (EHS) 마우스 육종에서 xtracted / ㎖는 (재료의 도표 참조). </li><li> 마취 된 마스크를 통해 2 % isoflurane을 투여하여 마취 된 여성 동종 마우스의 복부 측면을 위로 놓고 계속 진정 작용을 유지하십시오. </li><li> 에어로졸 70 % 에탄올을 사용하여 오른쪽 제 4 유선 선 주사 부위를 살균하고 무균 면봉으로 폴리 (비닐 피 롤리 돈) - 요오드를 적용합니다. </li><li> 29 G 0.3 ML 인슐린 주사기를 사용하여 6 ~ 10 주 된 여성 FVB / n 마우스의 깨끗한 오른쪽 4 번째 유선에 100 μL (냉동 원발 종양 현탁액에서 1 x 10 6 살아있는 세포) 베벨 사이드를 주사. </li></ol> 3. 정위 유방 종양의 외과 적 절제술 <ol><li> 종양 세포 주입 다음 38-60일는 쥐 부피 3mm 450-172 사이 [길이 x 징 동소 종양 부피를 나타내지 않는 안락사 (폭 2 </2) (주입 된 마우스의 약 75 %). </li><li> 마취 마스크를 통해 2 % isoflurane을 투여하여 지속적인 진정하에 적절한 종양 크기 복부 측면을 표시 마취 마우스를 배치하고 마우스가 결석 발 핀치 반사와 함께 적절하게 마취되었는지 확인합니다. 진정 작용이있는 동안 건조 방지를 위해 수의사에게 눈물을 채우십시오. </li><li> 원발 종양을 둘러싼 수술 부위를 멸균하기 위해 70 % 에탄올을 스프레이 한 다음 멸균 된 면봉으로 폴리 (비닐 피 롤리 돈) -Iodine을 바르십시오. 참고 : 외과 수술 부위의 제모는 ~ 5 % 마우스의 피부 탈출 및 / 또는 감염을 유발 했으므로이 단계에서 제외되었습니다 (데이터는 표시되지 않음). </li><li> 그림 1C에 나타난 것처럼, 종양의 중앙 - 꼬리 부분에 무딘 가위를 사용하여 초기 피부 절개를하십시오. </li><li> 다음으로, 종양의 중간에있는 피부 ( 그림 1C )의 우수한 절제를하십시오. 모든 혈관계를 소작 할 필요성에주의하십시오.절개를 연장하기 전에 피부에있는 종양을 eding. </li><li> 옆으로 (종양의 후방) 피부 절개를 계속 한 다음 탁월한 피부 절제 (종양 측면)와 내과 적 절제 (종양보다 우수) ( 그림 1C )를하십시오. </li><li> 피부가 종양 주위로 절제 된 후 ( 그림 1C ) 종양을 복부 벽 근육에서 멀리 해부하고 유선을 손상시키지 않으면 서 겸자를 사용하여 종양에 붙어있는 피부를 들어 올립니다. </li><li> 4 번째 와 5 번째 유방 땀샘을 관통하는 대형 혈관을 (무딘 절개로) 확인하고 소작하십시오. </li><li> 소작 부위에서 4 번째 및 5 번째 유방 땀샘의 약 절반을 잘라내어 종양, 피부, 그리고 유선의 일부분을 제거합니다 ( 그림 1C ). </li><li> 출혈이있을 경우, 출혈을 적극적으로 식별하십시오.즉시 그들을 소작하십시오. 혈액 250 μL 이상이 손실되면 마우스를 연구에서 제외하고 안락사시킵니다. </li><li> 상처 클립 applier ( 그림 1C )를 사용하여 상처 클립과 excision 사이트를 닫습니다. 참고 : 상처 클립 제거제로 수술 10 일 후 상처 클립을 제거하십시오. </li><li> 피하 (동물의 체중의 4 %) 따뜻한 멸균 식염수를 관리하고 열 램프로 동물을 따뜻하게 유지. 마취에서 회복되는 동안 매 5 ~ 10 분마다 동물을 확인하십시오. 주 : bupivacaine 또는 lidocaine 투여는 수술 후 사망률을 증가시켰다 (데이터는 나타내지 않음). 수술 후 1 시간 동안 통증의 징후를 보인 마우스 (사냥감, 움직이지 않으려 고 함, 손질에 실패 함)를 안락사시켰다. <ol><li> 마우스가 완전히 회복되면 다른 마우스 회사에 반환하십시오. </li></ol></li></ol> 4. 유동 세포 계측법 및 조직학을위한 혈액 및 폐의 분리 및 처리 &lt;ol&gt; <li> 연구 종점에서 원하는 경우 다양한 조직 병리학 적 평가를 위해 마우스를 준비하십시오. 안락사하기 90 분 전에 각 마우스에게 bromodeoxyuridine (BrdU, 50 μg / g 마우스 체중)을 1 x PBS에 6.25 μg / μL 농도로 복강 내 주사한다. 참고 : 용해 된 bromodeoxyuridine의 냉동 보관은 준비 후 1 개월 이내에 사용됩니다. </li><li> 마취 된 마우스로 안락사하기 10 분 전에 헤파린 처리 된 모세관을 사용하여 후각 유혈 (&gt; 500 μL)을 수집 한 후 얼음에 낀 EDT로 코팅 된 튜브로 옮긴다. </li><li> 폐와 남아있는 유방 조직을 제거하기 위해 가슴 아래와 복강을 드러내 기 위해 하복부에서 입으로 가위로 정중선 절개를하고 ( 그림 2A ) 피부를 옆으로 떼어 내고 나머지 4 번째 와 5 번째 유방을 노출시킵니다 땀샘. </li><li> 나머지 유선 조직을 잘라 내고hematoxylin과 eosin (H &amp; E) 염색에 의한 연속 절편 포르말린 고정 파라핀 임베디드 (FFPE) 조직을 평가하여 원발 종양의 재성장을 배제 하였다 ( 보충 그림 1 ). </li><li> 폐를 제거하려면 가위로 횡격막에 복벽을 열고 복부 대동맥을 절단하여 폐를 관류시키기 전에 혈액을 배출하여 동물을 안락사시킵니다 ( 그림 2B -2C ). </li><li> 복부 접근법에서 흉곽을 따라 횡경막을 잘라 폐와 심장을 피하십시오. 그런 다음, 흉곽의 측면을 절단하여 흉부를 노출시킵니다 ( 그림 2D ). </li><li> 20 ML 주사기에 23 게이지 바늘을 사용하여 폐가 완전히 흰색 ( 그림 2E -2F )로 변할 때까지 심장의 오른쪽 심실을 통해 ~ 5.0 ML DPBS (~ 10 ML / 분)와 폐를 perfuse. 즉시 주요 배에서 심장을 자른다.그래서 피가 폐로 다시 퍼지지 않습니다. </li><li> 폐 조직을 고정하고 조직 병리학 적 평가를 위해 4-C에서 ~ 1.0 mL의 10 % 포르말린을 23 게이지 바늘 ( 그림 2G - 2H )을 사용하여 폐쪽으로 노출 된 호흡 경사 측면으로 주사합니다. 일단 폐가 완전히 팽창되고 정착액으로 채워지면 주입을 중단하십시오 ( 그림 2I ). </li><li> 기관에서 폐엽을 제거하고 표준 조직 병리학 적 절차에 따라 중성 완충 포르말린에서 폐 조직을 고정하여 후속 파라핀 매입 또는 OCT 동결 매질을 만듭니다. </li><li> FFPE 폐 조직의 연속 절편을 통해 폐의 전이성 부하를 정량적으로 평가하고 H &amp; E 염색 ( 그림 1B )을 통해 마이크로톰 섹션 (100 μm, 13 개 섹션)을 평가합니다. </li></ol>

<ol><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Res. 8, 212(2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22SEER+Cancer+Statistics+Review+1975-2008%22">SEER Cancer Statistics Review 1975-2008</a>. Howlader, N. N. A., Krapcho, M. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. based on November 2010 SEER data submission, posted to the SEER web site. 
 <a target="_blank" href="http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/">http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/</a> (2011).</li>
<li>National Comprehensive Cancer Network. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Breast+Cancer+%28Version+3.2014%29%22">Breast Cancer (Version 3.2014)</a>. , Accessed November 25.
 <a target="_blank" href="http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf">http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf</a> (2016).</li>
<li>Kataja, V., Castiglione, M., Group, E. G. W. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/annonc/article/23/suppl_7/vii11/144433/Locally-recurrent-or-metastatic-breast-cancer-ESMO">Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Ann Oncol. 19 Suppl 2, 11-13 (2008).</li>
<li>Margolese, R. G., Hortobagyi, G. N., Buchholz, T. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK13196/">Management of Metastatic Breast Cancer. Holland-Frei Cancer Medicine</a>. Kufe, D. W., Pollock, R. E., Weichselbaum, R. R., et al. , 6th, BC Decker. Hamilton (ON). (2003).</li>
<li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene%3A+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).</li>
<li>Kouros-Mehr, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GATA-3+links+tumor+differentiation+and+dissemination+in+a+luminal+breast+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">GATA-3 links tumor differentiation and dissemination in a luminal breast cancer model.</a> Cancer Cell. 13, 141-152 (2008).</li>
<li>Minn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to the lung.</a> Nature. 436, 518-524 (2005).</li>
<li>Qian, B. Z., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4548055/">FLT1 signalling in metastasis-associated macrophages activates an inflammatory signature that promotes breast cancer metastasis.</a> J Exp Med. 212 (9), 1433-1448 (2015).</li>
<li>Verkooijen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patients%27+refusal+of+surgery+strongly+impairs+cancer+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Patients' refusal of surgery strongly impairs cancer survival.</a> Ann Surg. 242 (2), 276-280 (2005).</li>
<li>Peinado, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28303905">Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).</li>
</ol>

저자는 여기에 제시된 데이터와의 충돌에 대해 공개하지 않습니다.

수정 및 문제 해결 : 복부 벽에서 종양을 절제 할 때 종양이 복부 벽에 부착 된 채로 남아있을 수 있습니다. 이것은 종양이 주입 된 마우스의 5 % 미만에서 관찰되었다 (데이터는 나타내지 않음). 복벽에 부착 된 종양이있는 마우스의 경우 원발 종양 재성장 없이는 절제가 어렵 기 때문에 마우스를 안락사해야합니다. 모델 / 기술의 한계 : 다른 연구자들은 폐를 제외하고 MMTV-PyMT 마우스 7 에서 유래 한 유방 말단 봉우리를 재 주입 한 후 폐뿐만 아니라 간, 신장, 비장 및 뇌에 확산 된 형광 표지 단일 전이 세포의 존재를보고했지만, 간에서 전이 병소가있는 마우스. 이의 침투는 아직 결정되지 않았다. 림프절과 같은 잠재적 인 전이성 부하의 다른 부위비장, 뼈 및 뇌는...

북미의 여성은 유방암이 개발의 ~ 12 %의 평생 위험이; 이 환자의 대다수는 수술을 통해 제거 된 원발 종양을 가지게되며, 암 부속 유형에 따라 보조제 세팅 3 에서 표적, 내분비, 화학 요법 및 / 또는 방사선 치료를 받게됩니다. 예를 들어, 항 - 에스트로겐 요법을받는 호르몬 수용체 양성 암 및 방사선 / 화학 요법으로 HER2 타겟 요법을받는 HER2 양성 종양이있는 여성으로 진단 된 여성은 삼중 음성 종양 3에 대한 표적 치료법이 아직 없습니다. 치료는 원격 장기에 전이 된 질병 퇴치에 크게 효과가 같은 수술 적 절제를 보완 방사선, 화학 요법, 개인 및 호르몬 기반 치료의 발전에도 불구하고, 질병을 포함, 단계 II 또는 III 질환 4 진단을 여성의 30~70%에 재발 폐, 뼈, b비 및 / 또는 간 5 . 이는 원발성 종양 재성장이없는 상태에서 전이성 질환이 발생했을 때 확진 된 수술 당시 파종 된 악성 세포가 이차 기관에 이미 존재했을 가능성이 높다는 것을 감안할 때 특히 중요합니다. 따라서 전이성 종양을 박멸하거나 성장을 지연시킬 수있는 치료법이 시급히 필요합니다. 유방 발암의 드 노보 마우스 모델, 종양 진행 한 조절 메커니즘을 드러내는 현저 정보되었지만 기존 모델은 몇 가지 제한이있다. 이들 중 하나는 de novo 형질 전환 모델이 일반적으로 원발성 종양 부담이 연구 기간을 제한하는 다중 유방 ​​땀 샘에서 원발 종양을 발병한다는 사실입니다. 일차 종양 세포 탈출과 전이성 파종이이 모델에서 종양 진행의 초기에 일어날 가능성이 있지만, 전이성 종양의 솔직한 발달은 늦게 발생하며,n 마우스 모델 및 변형 배경은 종종 부분적으로 침투합니다 1 . 이것은 이차 장기에서의 전이를 조절하는 분자 발견을위한 de novo 모델의 유용성을 제한하고, 보조제 환경에서 치료제의 전임상 효능을 평가하기위한 것이다. 이러한 한계를 피하기 위해 우리는 폐에 유방암 종양 전이의 자동 신생 모델을 개발했습니다. 부모의 형질 전환 여성 (즉, MMTV-PyMT은 여기에 기술 연구에 대한 FVB / N 변형 배경에) 말기 베어링 드 노보 유방암이되는 자신의 차 종양은 외과 적 절제 및 효소로 분해되어 가리 ~ 백일 6 세되는 단일 세포 현탁액. 일시 정지 (1 x 10 6 세포)는 차례로 동종 이형 유방 종양이 38-60 일의 기간 동안 발병하는 6-7 주령의 수혜자 동족 ​​암컷 생쥐 ( 3 )에서 수혜자 마우스를 마취시키고 원발 종양을 수술 부위에서 종양 재성장이 최소화되도록 외과 적으로 절제하여 여성의 수술과 일치시킵니다 ( 보충 그림 1 ). FVB / n 균주 배경에서 마우스는 수술 후 ~ 115 일까지 45 %의 침투율을 보이는 폐에서 조직 학적으로 검출 가능한 전이 초점을 발달시킵니다 ( 그림 1B ). 이 전이성 종양 성장 지연으로이 모델은 보조 요법 전달, 원발성 종양의 외과 적 제거 후 전이성 진행에 영향을 미치는 기초 생물학을 밝히고 평가하기위한 고유 한 위치에 있습니다.

<table><tbody><tr><td>이소플루오란</td><td>Piramal 헬스케어</td><td>N/A</td><td>처방전 주문</td></tr><tr><td>콜라겐나제 A</td><td>로슈</td><td>11088793001</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>로슈</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>25 mL Pyrex 병</td><td>시그마-알드리치</td><td>CLS139525</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 세럼</td><td>애틀랜타 바이오;</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0.7 &마이크로; M 나일론 스트레이너&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원뿔형 튜브&nbsp;</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>성장 인자 감소 Matrigel&nbsp;</td><td>BD</td><td>354230</td><td>Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 마우스 육종 Poly(vinylpyrrolidone)&ndash에서 추출한 성장 인자 감소 용해 기저막 준비</td></tr><tr><td>; 요오드 복합체</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PVP1</td><td></td></tr><tr><td>29 게이지 0.3 mL 인슐린 주사기</td><td>BD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>소형 용기 소동 키트</td><td>FST</td><td>18000-00</td><td></td></tr><tr><td>상처 클립</td><td>텍사스 과학</td><td>205016</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip 상처 클립 적용자&nbsp;</td><td>BD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip 상처 클립 제거제&nbsp;</td><td>BD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>Bromodeoxyuridine</td><td>Roche</td><td>10280879</td><td></td></tr><tr><td>Heparinized capillary tubes&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>22362566</td><td></td></tr><tr><td>디포타슘 EDTA가 있는 마이크로테이너 튜브;</td><td>BD</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>20 mL 주사기&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo-Fisher</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>OCT-냉동 매체&nbsp;</td><td>VWR</td><td>25608930</td><td></td></tr><tr><td>포르말린, 완충형, 10% (인산염 완충액)</td><td>Fisher</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>23g 니들</td><td>Fisher</td><td>14-826-6B</td><td></td></tr><tr><td>FVB/n 마우스</td><td>Jackson Laboratories</td><td>001800</td><td></td></tr></tbody></table>

전임상 마우스 모델에 대한 수술 절차 및 방법론 드 노보 유방암 전이

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

유선암의 형질전환 마우스 모델의 속도 제한 측면은 유방 조직의 원발성 종양 부담이 일반적으로 연구 종료점을 정의한다는 것입니다. 따라서, 말기 de novo 전이의 기전을 규명하는 데 초점을 맞춘 연구는 보조제 환경에서 전이의 매개체를 표적으로 하는 항암 요법의 효능을 조사하는 연구와 마찬가지로 손상이 있습니다. 유방 상피 세포에 대한 우성 종양 단백질의 표적 발현을 통해 수많은 쥐 유방암 모델이 개발되었으며, 여성에서 흔히 볼 수 있는 조직병리학 및 전사체 정의 유방암 아형을 다양하게 모방한 모델을 산출합니다1. 이러한 모델을 통해 유선암의 생물학에 대해 많은 것이 밝혀졌지만, 마우스는 일반적으로 상당한 원발성 종양 부담으로 인해 더 이른 시점에 안락사되기 때문에 후기 전이의 성장을 조절하는 분자를 식별하는 데 유용성이 손상되었습니다. 더욱이, 유방암 진단을 받은 여성의 상당수가 원발성 종양의 외과적 절제 후 검출 가능한 전이성 질환이 발생하기 전에 보조 요법을 받기 때문에 전이성 병소를 표적으로 하는 새로운 치료법을 평가하기 위한 플랫폼으로서 새로운 전이의 전임상 모델이 시급히 필요합니다. 이러한 결함을 해결하기 위해 우리는 원발성 유선종양을 수술로 절제하고 수술 후 115일 동안 전이성 병소가 발생하는 새로운 유선암 전이의 쥐 모델을 개발했습니다. 이 긴 잠복기는 원발성 종양이 없는 마우스에서 전이 진행의 기능적으로 유의미한 조절자를 식별하기 위한 다루기 쉬운 모델뿐만 아니라 전이성 종양의 생존 및 성장을 돕는 기능적으로 중요한 분자를 차단하는 것을 목표로 하는 제제의 전임상 치료 효능을 평가하기 위한 모델을 제공합니다.

그레이터 MMTV-PyMT 마우스 유래의 기본 유방암에서 1 × 106 세포를 수신받는 마우스의 75 % 이상, 172에서 450mm 3 38-60 일 이내의 크기에 이르는 단일 유방 선암 개발 (데이터는 보이지 않음). 무작위 추출에 적합한 마우스는 그림 과 같이 원발 종양의 외과 적 절제 후 연구 그룹에 등록됩니다 ( 그림 1C ). 원발 종양의 외과 적 절제술을받은 생쥐의 2 % 미만에서만 원발성 종양 재성장이 확인되었다 ( 보충 그림 1 ). 이 프로토콜에 의해 평가받는 쥐의 45 %는 종양 절제 후 115 일까지 조직 학적으로 검출 가능한 전이성 초점을 개발했다 ( 그림 1B )....

유방암 전이를 목표로하는 보조 요법을 평가하는 전임상 모델이 부족합니다. 이를 해결하기 위해, 우리는 de novo 폐 유방 선암 전이의 마우스 모델을 개발했는데, adjuvant setting (원발 종양의 수술 후 절제술)에서 투여 된 치료법은 이전에 파종 된 폐 전이에 영향을 미치는 효능을 평가할 수 있습니다.

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

당사는 인간 유방암의 경과를 밀접하게 모방하는 새로운 유선암 전이의 새로운 쥐 모델을 개발하여 생물학, 질병의 근본적인 전이성 진행 및 보조 환경에서 제공되는 치료법의 효능을 평가하기 위한 전임상 플랫폼을 제공합니다. 동물을 대상으로 하는 절차는 오리건 보건과학대학교(Oregon Health and Science University)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 당사의 쥐 모델은 형질전환 100일 된 마우스 유방 종양 바이러스 폴리오마 중간 T 또는 MMTV-PyMT 마우스에서 효소로 해리된 원발성 종양을 수확하여 확립되었습니다.1회 10에서 6번째 종양 세포를 신유전자 수용자 암컷 마우스에 종양 세포를 항소적으로 주입하고 원발성 종양은 38일에서 60일 동안 발생합니다. 170 - 450mm 세제곱의 종양을 가진 마우스는 원발성 종양의 외과적 절제를 위해 등록됩니다. 수술 후 115일 시점의 분석 결과, 폐에서 조직학적으로 검출 가능한 전이성 병소가 45%의 침투율로 검출된 마우스가 나타났습니다.이 비디오는 전임상 쥐 모델의 중요한 구성 요소인 원발성 유방 종양의 외과적 절제를 묘사합니다. 마우스에는 2%의 이소플루란을 투여하고 발 꼬집음 반사가 사라지면 수술을 시작할 수 있습니다. 원발성 종양 위에 있는 피부에 70% 에탄올을 분사합니다.그런 다음 베타딘을 멸균 면봉을 사용하여 종양 위의 피부에서 시작하여 원발성 종양 주변 부위에 적용합니다. 뭉툭한 가위를 사용하여 원발성 종양의 피부 내측 꼬리를 처음 절개합니다. 절개 부위는 원발성 종양의 내측 상부 방향으로 확장됩니다.위에 있는 피부에서 종양에 영양을 공급하는 잠재적인 혈관을 식별하고 소작합니다. 출혈이 발생하면 추가 소작을 수행해야 합니다. 원발성 종양보다 아래쪽 측면 피부 절개를 할 때는 혈관이 있을 수 있으므로 아래에 있는 유선을 절단하지 않도록 하십시오.그런 다음 피부 절개 부위를 원발성 종양 주위로 원주 방향으로 확장합니다. 그런 다음 종양의 내측에 있는 유선의 얇은 유착을 조심스럽게 절개하여 종양을 복벽에서 분리합니다. 이러한 유착 내에 혈관이 존재할 수 있습니다.절단하기 전에 접착 내에서 확인된 모든 혈관을 소작하십시오. 화살표는 종양의 위와 아래에 표시된 네 번째와 다섯 번째 오른쪽 유선을 나타냅니다. 그런 다음 다섯 번째 유선은 시각

surgical-procedures-methodology-for-preclinical-murine-model-de-novo

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

시간 경과 영상은 특정 행동 매개 변수 독특한 유전 적 병변 사이에 상관 관계가 있는지 확인하기 위해 유방암 위험 유전자 변형 마우스 모델에서 파생 된 기본 preneoplastic 유방 상피 세포의 행동을 평가하는 데 사용됩니다.

기본 Preneoplastic 유방 상피 세포의 시간 경과 영상은 유방암의 유전자 변형 마우스 모델에서 파생

유방암 뇌 전이의 마우스 모델은 MDA-MB231/Br-GFP 세포의 초음파 영상 유도 심장 내 주입으로 설정됩니다. 다 초점 두개 내 전이의 개발은 고해상도 9.4 T MRI를 사용하여 세로 방향으로 모니터링하고있다.

종 MRI에 이어 유방암 뇌 전이 마우스 모델을 개발하기 위해 초음파 영상 유도 심장 내 주입

임상 적으로 전이성 유방암에서 유방 유관 시스템 결과에 아데노 바이러스 크레와 잠재 돌연변이의 활성화. YFP 발기인의 설립은 말초 전이성 종양 세포의 추적을 할 수 있습니다. 이 모델은 잠재 전이, 항 종양 면역, 유방암을 치료하는 새로운 면역 요법을 디자인을 공부하는 데 유용합니다.

유방암의 소설 형질 전환 마우스 모델 : 아데노 바이러스 크레와 유관 상피의 대상으로 전이성 유방암의 개시

간 전이 전임상, 뮤린 모델 hemispleen 주입 기법을 통해 수행 하였다.

간 전이의 전임상 쥐과 모델

이 프로토콜의 목표는 유방 종양 형성을 연구하는 것입니다. 이 기술을 사용하면 마우스 유방 종양을 제거하고 종양에서 일차 세포를 준비할 수 있습니다. 폐 전이를 연구하기 위해 폐 추출 프로토콜이 포함되어 있습니다. 또한, 마우스 배아로부터 마우스 배아 섬유아세포를 분석하기 위한 또 다른 프로토콜이 포함되어 있습니다.

차 종양과 폐 전이을 연구하기 위해 MEF 세포 격리

난소 암의 복막 보급의 다단계 과정을 명확히하기 위해, 본 연구는 이러한 종양 세포와 동 소성 접종을 통해 원래의 종양 개발 및 복막 전이의 쥐 실험 모델을 제시한다.

원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이<em&gt;를 통해</em난소 암 세포에&gt; 동소 이식 접종

Murine orthotopic 유 방 암 모델 및 과격 한 유 방 절제술 모델 인간의 유방암 암 진행을 모방 하기 위해 종양 부담 척도를 생물 발광 기술을 소개 합니다.

Murine Orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 Murine 과격 한 유 방 절제술

이 프로토콜에서, 우리는 테스트 (네오) 보조 요법을위한 연조직 육종의 불완전한 수술 절제술의 마우스 모델을 설명합니다.

시험을 위해 불완전하게 절제술된 연조직 육종의 마우스 모델(Neo) 보조 요법

환자 유래 제노이식(PDX) 모델과 이식 가능한 유전자 조작 마우스 모델은 인체 질환을 충실히 재구성하고 기본 및 번역 형 유방암 연구를 위한 선호 모델입니다. 여기서, 종양 생물학을 연구하고 약물 반응을 평가하기 위해 유방 지방 패드로 유방 종양 단편을 정형전으로 이식하는 방법이 설명된다.

유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

두개 내 뇌 전이 모델링은 정확하고 시기 좋은 방법으로 치료에 종양 크기와 반응을 모니터링할 수 없다는 것에 의해 복잡합니다. 제시된 방법론은 자기 공명 화상 진찰 분석과 두개 내 종양 주입을 결합할 때, 정확하고 일관된 주사, 향상된 동물 감시 및 정확한 종양 부피 측정을 육성합니다.

두개 내 주입 및 자기 공명 이미징을 통해 뇌 전이를 모델링

이 원고는 전이성 캐스케이드의 모든 단계에서 개입할 수 있는 orthotopically 주입된 유방 종양의 자발적 폐 전이의 확립 및 종단 성장 모니터링을 위한 방법론을 설명합니다.

생체 내 Orthotopically injected breast tumor cells의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 이미징

배우세요 유방암 전이 연구를 위한 수술적 종양 절제술을 사용하여 마우스 모델을 구축하는 방법입니다. 이 프로토콜은 전임상 보조 요법 효능 평가에 필수적인 도구를 제공합니다.

전임상 마우스 모델에 대한 수술 절차 및 방법론 드 노보 유방암 전이

더 많은 동영상 탐색