Name: 대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 55 s
Description: 배우세요 소매 기법을 이용한 마우스 대동맥 이식술로 혈관 질환 연구를 수행하는 방법을. 이 기법은 유전자 변형 마우스에서 혈관 질환을 연구하는 데 활용될 수 있습니다.

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우리는 로마 Wieczorek에 그들의 우수한 편집, 피터 Kurdybacha 그리고 레온 데커 울 리 Heuter에 그들의 우수한 기술 지원 감사 하 고 싶습니다.

동물 주제와 관련 된 절차는 RWTH 아 헨 대학, AZ 84-02.04.2012.A234에서 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 했다.
 참고: 절차는 CD1 배경을 가진 성인 남성 강포한 유형 쥐를 사용 하 여 보여 줍니다. 음식, 전문된 수의 제어, 그리고 치료에 대 한 적절 한 액세스 보장 수술 전후 특수 실험실 단위에서 생쥐를 유지. 동물에서 구입 하는 경우 밖에 서 수술을 수행 하기 전에 일주일 순응 허용.
 1. 기증자의 준비 <ol><li>불 임 자료와 악기를 사용 하 여 감염을 피하기 위해 수술 하는 동안 멸 균 상태를 유지.</li>
	<li>볼륨 isoflurane와 얼굴 마스크를 통해 100% 산소에 의해 1.5%의 혼합물으로 각 마우스를 anesthetize. 운영 테이블에 모든 다리 부정사 위치에 테이프 플랫폼에 마우스를 하다. 마우스는 충분히 마 취 해야 뒷 발을 곤란 하 게 하 여 그 반사를 확인 합니다. 절차 동안 건조를 방지 하기 위해 눈에 안과 연 고를 배치.</li>
	<li>Depilatory 젤을 사용 하 여 복 부에서 모든 머리카락을 제거 하거나는 면도기를 사용 합니다. 무 균 조건 하에서 작업을 수행 합니다. 수술 용 멸 균 물과 액체의 교류와 함께 복 부를 소독.</li>
	<li>가 위 또는 메스 중간 복 부 절 개를 통해 기증자 대동맥을 제거합니다. 수동으로 오른쪽에 창 자를 철회. 부드럽게 수동으로 파우더 무료 장갑을 사용 하 여 측면 창 반영.
	<ol><li>창 촉촉한 유지 하는 식 염 수와 접촉 하는 거 즈의 조각 장소.</li>
		<li>멀리 핀셋으로 무딘 해 부를 사용 하 여 주변 조직에서 매우 신중 하 게 복 부 대동맥 해 부.</li>
		<li>핀셋으로 신장 동맥과 베 나 정 맥에서의 분기점 사이 대동맥의 세그먼트 분리.</li>
		<li>매우 신중 하 게 11-0 monofilament 하나의 봉합 사를 사용 하 여이 세그먼트의 모든 작은 가지 보안.</li>
		<li>대동맥을 제거 하기 전에 0.5 밀리 리터 (mL) 염 덤플링 50 U를 포함 하는 열 등 한 베 나 정 맥으로 주사.</li>
		<li>Exsanguinate 대동맥의 세그먼트를 제거한 후 기증자 동물 하자.</li>
		<li>린스 식 염 수와 완벽 하 게 이식 하 고 다음 차가운 식 염 수의 컨테이너에 즉시 전송.</li>
	</ol></li></ol> 2. 받는 사람의 준비 <ol><li>볼륨 isoflurane와 얼굴 마스크를 통해 100% 산소에 의해 1.5%의 혼합물으로 받는 사람 동물을 Anesthetize 다음 머리를 제거 하 고 소독 (제 1). 메스와 골반에 있는 칼에서 중순 라인 절 개 하 고 복 부 벽을 철회 합니다. 절차 동안 건조를 방지 하기 위해 눈에 안과 연 고를 배치.</li>
	<li>생리 식 염 수에 장 거 즈를 습 하 게 하 고 동물을 매우 부드럽게 치환 포장 &#39; s 오른쪽.</li>
	<li>Dissect infrarenal 대동맥 proximally 신장 동맥 사이 무료 및 핀셋으로 distally 분기.</li>
	<li>매우 신중 하 게 11-0 monofilament 하나의 봉합 사를 사용 하 여이 세그먼트의 모든 작은 가지 보안.</li>
	<li>단일 실크 봉합에 6-0와 대동맥의 인접 하 고 원심 부분을 클램프.</li>
	<li>는 클램프 사이의 중간에 대동맥을 분할 하 고 관개를 루멘 오픈 heparinized 염 분으로 잘라 끝.</li>
	<li>제대로 기증자와 받는 사람 (정렬 하 여 대동맥의 어떤 비틀림을 방지 하도록 하는 11-0 monofilament와 봉합 뒤 받는 선박에 삽입 먹이 그릇 엔드와 orthotopic 위치에는 이식 장소 그림 1) 10.</li> <li>신중 하 게는 합자는 문 합에의 한 검사를 실시 후 공개. 먼저 원심 클램프를 해제 합니다. 이 인접 고압 측을 풀어 놓기 이전 함께 벽을 잡고 낮은 압력에서 결과.</li>
	<li>Perfuse는 이식 즉시와 보이는 펄스에 대 한 확인. 부드럽게 실크의 잔해를 제거 합니다. 기증자와 받는 사람 대동맥 사이의 최적의 겹침 길이 1-2 m m.</li>
	<li>복 부 구멍에는 복 부 내용을 반환 하 고 전체를 닫습니다 실행 3-0 polyglycolic 산 봉합 된 상처.</li>
	<li>마우스 buprenorphine 줄 (0.05 mg/kg 체중을 피하 (SC)) 마 취 종료 되기 전에.</li>
	<li>두지 마십시오 동물 무인 완전히 식을 때까지. 통증 관리 치료 buprenophine 0.05 mg/kg 체중 관리 SC 작업 후 3 일 동안 하루에 세 번 기관 감독 기관에 의해 승인.</li>
	<li>조직 수확, anesthetize로 받는 사람 마우스 대 위에서 설명한 및 플러시 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)와 선박 4% 포름알데히드/PBS, (pH = 7.4) 심장 빵 꾸 여. 이식 부드럽게 제거 합니다. 4% 포름알데히드/PBS에 야간 고정, 후 프로세스 표본 추가 및 파라핀에 포함.</li>
</ol>

<ol><li>Rowinska, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-+invasive+in+vivo+analysis+of+a+murine+aortic+graft+using+high+resolution+ultrasound+microimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Radiol%22%5BJournal%5D)">Non- invasive in vivo analysis of a murine aortic graft using high resolution ultrasound microimaging.</a> Eur J Radiol. 81 (2), 244-249 (2012).</li>
<li>Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse models of atherosclerosis.</a> Am J Med Sci. 323 (1), 3-10 (2002).</li>
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<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+.Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc .Biol. 24 (3), 429-434 (2004).</li>
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<li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice%3A+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J Heart Lung Transplant. 18 (10), 946-951 (1999).</li>
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<li>Charo, I. F., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+many+roles+of+chemokines+and+chemokine+receptors+in+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation.</a> N Engl J Med. 354 (6), 610-621 (2006).</li>
<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18 (6), 368-371 (1998).</li>
<li>Guo, L., Agarwal, A., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice+for+the+study+of+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in mice for the study of vascular disease.</a> J Vis Exp. (69), e4338(2012).</li>
</ol>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

이 연구에 앞서 다양 한 다른 이식 모델 마우스에 철저 하 게 분석된3,6,7,10,,1314했다. 그것은 우리의 조건과 일치 하 고 기존의 엔드-투-엔드 봉합 방법에 비해 슬리브 문 합의 높은 신뢰성 대동맥 이식 하 여 소매 기술 수정 Dambrin 그 외 여러분 의 모델 선정 되었습니다. 1 , 10.
이 기술은 여러 가지에서 유리한 크로스-클램프 시간이 상당히 감소 수술 동안 대동맥에 손상을 최소화 이다. 혈전 증의 발생률이 낮은 그릇 구경 기증자와 받는 사람 사이에서 잠재적인 불일치를 피하고 외에 관찰 되었다. 위의 관찰 확인이 기술은 쥐에서 대동맥 이식 혈관 질병 조사에 매우 적합 합니다.
후속 연구에서 초음파 이식 후 8 주를 수행 했다, 중요 한 변경 감지 했다. 이 확인 대동맥 수술 동안에 손상을 최소한의1될 것 이라고 가정을 했다.
이 문서에서 제공 하는 이식 절차 모두 이식 무결성 및 그것의 기능에 아무런 장애를 보장 합니다. 따라서,이 실험적인 이식 모델 유전자 조작된 생쥐에서 퇴행 성 혈관 질환의 미래 분자 및 약리 수사를 위해 귀중 한 도구로 사용할 수 있습니다 결론 수 있습니다.
우리는 비디오 가이드가 간단한 arterio 동맥 모델의 사용을 설명 하는 교재로 작동할 수 그것은 혈관 병 리에 많은 중요 한 문제에 더 유익한 토론에 기여할 것입니다 믿습니다. 이 매우 빠른 문 합 방법 유전자 조작된 생쥐에서 혈관 질환 연구에 사용할 수 있습니다. 그것은 또한 이식 함께 동맥 모델에 수정으로 사용할 수 있습니다.
절차 동안 한계점이 있다. 봉합 자체의 배치 하는 것은 가장 중요 한 단계입니다. 외과 의사 기증자와 받는 사람의 적절 한 맞춤으로 대동맥의 어떤 비틀림을 방지 하는. 클램프 검사는 문 합 후 신중 하 게 제거 됩니다. 항상 먼저 함께 방출 이전에 인접 고압 측 벽을 잡고 낮은 압력의 결과로 원심 클램프를 공개 합니다. 방출의 순서를 따라 제대로의 결과 출혈 될 것 이다.

이전 연구에서 지적, 큰 관심 murine 대동맥 이식 모델 자체 이식으로 인 한 특정 혈관 응답 및 arteriogenic 환경 연결 특정 조직 요인 사이 차별을 허용 하는 지급 되었습니다. 1 , 2 , 3. 여기에 중요 한 역할을 담당 하는 주요 요인은 녹아웃, 유전자 변형 마우스의 가용성 이다. 식별 하 고 퇴행 성 혈관 질환, 동맥 경화, 동맥 류 형성4, 등의 개발과 관련 된 새로운 pathophysiological 경로 결정의 가능성을 제공 하는 이러한 모델 들의 참여 5.
그것은 내장 국 소 빈 혈 또는 reperfusion를 접목 하는 동안 부상을 위한 이식 혈관에 나타날 수 있습니다 지적 가치가 있다. 따라서, 특정 문제 이식 무결성 또는 수술 기간 동안 예기치 않은 염증 반응의 발생 제외할 수 없습니다 가능성이 제외 퇴행 성 혈관 질환3 에에서 병 태 생리 변화 ,45,,67. 소매 문 합 미만 1 밀리미터의 직경을 가진 혈관의 동맥 문 합에 대 한 대체 끝에 방법 이며 대동맥에 연속적으로 적응 시켰다는 쥐에 있는 신장과 심장 이식에 성공적으로 적용 된는 Dambrin 그 외 여러분 에 의해 쥐에 이식 8 , 9 , 10 , 11.
대동맥 손상 슬리브 이식 기법을 사용 하는 매우 낮은 기술 고장율, 평균 20 분 지속 그것 때문으로 최소화 됩니다. 우리의 이전 결과 소매 기술1을 사용 하 여 이식 후 isograft에는 vivo에서 의 우수한 기능 및 구조적 특성을 증명 하고있다. Dambrin 그 외 여러분 설명 후 짧은 학습 곡선 성공률은 78% 이상10. 혈전 증 등의 합병증은 드물다, 예 Engelbrecht 외. 쥐8신장 이식에서 소매 기술을 사용 하 여 혈전 증을 관찰 하지 않았다.
소매 anastomoses와 murine 대동맥 이식 모델 이식 선박에서 iso/이식 반응 연구를 신속 하 고 쉬운 도구입니다. 이 비디오에서는 우리의 실험실에서 실시 하는 대동맥 이식 절차를 보여 줍니다. 이 이식 모델 혈관 퇴행 성 질환의 기본 병 적인 메커니즘을 정의 하는 데 유용할 수 있습니다 그리고 분자 약리학 내정간섭12의 추가 평가에 기여할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Halsey 바늘 홀더</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 펜치 -</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Lexer-Baby Scissors</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo 마이크로 니들 홀더</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 가위</td><td>Aesculap, 독일</td><td>Typ OC498R</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo 봉합 겸</td>자 <td>Geuder, 독일</td><td>19015</td><td></td></tr><tr><td>6-0 실크 블랙 (실크)</td><td>Deknatel, Research Triangle Park NC, 미국</td><td>18020-60- FST</td><td></td></tr><tr><td>11-0 모노필라멘트 (에틸론)</td><td>Ethicon, Norderstedt, Germany</td><td>EH7438G</td><td></td></tr><tr><td>3-0 polyglycolic acid suture (Serafit)</td><td>Serag-Wiessner, Naila, Germany</td><td>60203214</td><td></td></tr><tr><td>Isofluorane</td><td>어떤 genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>어떤 genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.9% 소금기</td><td>어떤 genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>buprenorphine</td><td>어떤 genericon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bepanthene 눈과 코 크림</td><td>바이엘, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscop</td><td>Zeiss</td><td>Opmi MDO/S5</td><td></td></tr><tr><td>Vaporiser</td><td>Eickemeyer</td><td>TEC3</td><td></td></tr><tr><td>Vevo</td><td>, 초음파</td><td>770,2100</td><td></td></tr></tbody></table>

대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic 대동맥 이식 슬리브 기술을 사용 하 여 단지 10-20%의 고장율과 대동맥에 부상을 줄일 수 있습니다. 시간 anastomose 슬리브 메서드를 사용 하 여 마우스에 대동맥을 짧고 쉽게 iso/여 보세요 이식의 연구를 허용 하는 20 분을 평균 했다. 다음 문서는 우리의 실험실에서 사용 하는 대동맥 이식 절차를 설명 합니다. 생쥐는 1.5% 볼륨 isoflurane와 얼굴 마스크를 통해 100% 산소의 혼합물으로 취 했다. 이 시점에서, 신장 동맥 및 그것의 분기 사이 대동맥의 세그먼트는 베 나 정 맥, 자유롭게 준비 및 clampedat에서 분리 된 단일 실크 봉합과 인접 하 고 원심 세그먼트. 대동맥의 제거, 이전 염 헤 파 린을 포함 하는 열 등 한 베 나 정 맥에 주입 됩니다. 대동맥은 클램프 사이 렸 그리고 염 분 덤플링을 솔루션 루멘 이용 되었다. Monofilament 봉합 소매 기술 orthotopic 위치에서 복 부 대동맥을 이식 하기 위해 사용 되었다.

혈전 증의 높은 위험 했지만 쥐 없이 관찰된 물리적 장애가 있는 15-30 분 이내 마 취에서 회복. 초음파 분석 수술 후 수행 하는 동안 사용 되었다. 연구에 사용 하는 야생 타입 마우스 전시 그들의 루멘의 크기 변경. 따라서, stenoses도 aneurysmal 형성 관찰 되었다. 이식 동물 전시 배 벽 (그림 2)의 패 개발 하지 못했습니다.
Immunohistology 등 기존의 얼룩 절차 상 패, 패턴의 부드러운 근육 세포 및 대 식 세포의 축적을 결정 하기 위해 사용할 수 있습니다. 우리의 연구는 조직학 immunohistochemical 얼룩이 지는 이식의 무결성을 테스트 하려면 접목 후 6 주를 수행 했다. 조직학 얼룩 (Hematoxylin와 (그가) 오신 immunohistochemical 얼룩 (부드러운 근육 걸 (SMA)와 대 식 세포 (MAC2)) (그림 3) 우리에 게 보여준 없고 안 감 그대로 내 피 세포, 평활 근 세포의 분포 패턴을 그대로 셀은 intima에 축적 이러한 결과 아무 중요 한 병 변 또는 셀 활성화 이식할된 선박 (그림 3)에서 검색 되었습니다 나타냅니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54915/54915fig1.jpg"> 
그림 1 : 기술 슬리브. 복 부 대동맥 슬리브 기술을 사용 하 여 이식 했다. 이 절차에서는 기증자의 대동맥 표면에 물린 먹이 그릇에 함께 orthotopic 위치에 배치 했다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54915/54915fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54915/54915fig2.jpg"> 
그림 2 : 자가 초음파 이미지. 이식 후 이식 (A), 그것의 3 차원 초음파 (B), B 모드 보기 (C) 6 주의 자가 (검 시) 보기의 예. 수술 후 후속 초음파를 사용 하 여 실시 했다. 그림 루멘 크기에서 변화 없이 이식의 patency를 보여준다. 또한, stenoses 또는 aneurysmal 형성 관찰 되었다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54915/54915fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54915/54915fig3.jpg"> 
그림 3 : 조직학 및 immunohistochemistry 이미지. 이식 후 6 주에 이식된 동물의 조직학 및 immunohistochemistry 대표 이미지. 아니 중요 한 병 변 조직학으로 이식된 aortas에서 관찰 되었다 (Hematoxylin 및 오신, 그는, 100 배 확대, 눈금 막대 = 50 µ m), immunohistochemical (부드러운 근육 걸 SMA (빨강), 또는 대 식 세포 MAC2 (녹색), 200 배 확대, 스케일 바 = 얼룩 25 µ m)입니다. 핵은 카운터 스테인드 DAPI에서 (파란색). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54915/54915fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

우리는 orthotopic 대동맥 이식 모델 마우스에 슬리브 기술을 사용 하 여 현재. 혈관 질환의 연구에 사용할 수 있는 매우 빠른 문 합 방법 이다.

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

이 절차에서 기증자의 대동맥은 정형외과 위치에 놓이고 수유 용기에서 표재성 교합을 취합니다. 안면 마스크를 통해 1.5 부피 퍼센트의 이소플루란과 100% 산소의 혼합물로 마우스를 마취합니다. 누운 자세로 플랫폼에 마우스를 놓고 모든 다리를 수술대에 테이프로 붙입니다.시술 중 건조를 방지하기 위해 눈에 안과 연고를 바르십시오. 반사 신경을 확인하고 뒷발을 꼬집어 마우스가 충분히 마취되었는지 확인합니다. 복부의 모든 털을 제거하십시오.제모 크림을 바르거나 면도기를 사용하십시오. 멸균 상태에서 작업을 수행하십시오. 복부를 소독하십시오.공여자의 대동맥을 제거하려면 복부 정중선을 절개하고 장을 수동으로 오른쪽으로 후퇴시킵니다. 파우더가 없는 장갑을 사용하여 장을 옆으로 부드럽게 수동으로 반사합니다. 식염수를 적신 거즈 조각에 장을 올려 촉촉하게 유지한다.핀셋으로 둔기를 해부하여 주변 조직으로부터 복부 대동맥을 매우 조심스럽게 절개합니다. 핀셋으로 신장 동맥과 대정맥에서 분기점 사이의 대동맥 분절을 절개합니다. 11-0 모노필라멘트 단일 봉합사를 사용하여 이 세그먼트의 모든 작은 가지를 고정합니다.대동맥을 제거하기 전에 헤파린 50단위가 함유된 식염수 0.5ml를 하대정맥에 주입합니다. 대동맥 분절이 제거되기 전에 기증 동물이 출혈하도록 합니다. 이식편을 식염수로 완전히 헹구고 그 후 즉시 얼음 차가운 식염수 용기에 넣으십시오.수혜자를 준비하기 위해 안면 마스크를 통해 동물을 마취하고 털을 제거하고 위와 같이 소독한 후 메스로 xipoid에서 골반까지의 정중선을 절개합니다. 견인기로 복벽을 집어넣습니다. 식염수에 적신 거즈로 장을 싸서 동물의 오른쪽으로 아주 부드럽게 옮깁니다.핀셋으로 신장 동맥 근위와 원위부 분기 사이의 대동맥을 자유롭게 절개합니다. 11-0 모노필라멘트 단일 봉합사를 사용하여 이 세그먼트의 모든 작은 가지를 고정합니다. 대동맥의 근위부와 원위부를 6-0 단일 실크 봉합사를 통해 고정합니다.클램프 사이의 중간에 있는 대동맥을 나누고 절단된 끝 부분에 헤파린 식염수로 관개하여 내강을 플러시합니다. 이식편을 직교 위치에 놓습니다. 11-0 모노필라멘트를 사용하여 봉합사와 함께 슬리브 기술을 사용하여 문합을 수행합니다.이 방법을 사용하면 공급 용기의 끝단이 수용 용기에 배치됩니다. infrarenal recipient 대동맥의 끝을 공여자 대동맥의 근위부 말단 내에 놓습니다. 같은 방법으로 원위 문합을 수행합니다.기증자 대동맥의 원위부 끝을 수용자 대동맥의 원위부 말단 내에 놓습니다. 기증자와 수혜자 대동맥의 완벽한 정렬을 보장하여 대동맥의 비틀림을 피하도록 주의하십시오. 클램프가 해제되는 순간은 절차에서 매우 중요한 단계이며 매우 신중하게 수행해야 합니다.문합이 정상인지 확인한 후 클램프를 해제합니다. 먼저 말단 클램프를 부드럽게 풀고 그 다음에 근위 클램프를 놓습니다. 이런 식으로 고압 측이 해제되기 전에 벽을 함께 고정하는 낮은 압력이 있습니다.이식편은 즉시 관류되고 맥박이 보입니다. 실크의 잔여물을 부드럽게 제거합니다. 복부 내용물을 복강에 다시 넣고 3-0 폴리글리콜산 봉합사를 사용하여 상처를 봉합합니다.마취를 종료하기 전에 마우스에 kg당 0.05mg의 부프레노르핀을 투여합니다. 이식 후 6주 후의 이식편과 초음파, 3차원 및 B 모드 뷰의 부검 사진을 제시합니다. 그림은 이식편의 개통을 보여줍니다.이식편에 의해 표시되는 루멘 치수에는 변화가 없습니다. 또한, 협착증이나 동맥류 형성은 발견되지 않았습니다. 이식된 대동맥에서 조직학적 및 면역조직화학적 염색에 의한 유의미한 병변은 관찰되지 않았다.핵은 DAPI에 의해 역염색되었습니다. 결론적으로, 이 매우 빠른 문합 방법은 유전자 조작 마우스의 혈관 질환을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.

혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

우리는 우리의 마우스 이식 arteriosclerois (GA) 같은 근친 교배 균주의받는 사람에 마우스 선박 세그먼트의 개재를 포함 모델에 대한 프로토콜을 설명합니다. 용기 기증자에 추가 유전자 변화를 교잡에 의해, 모델은 GA에 특정 유전자의 효과를 평가할 수 있습니다.

이식 동맥 경화에 대한 마우스 모델

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

우리는 마우스의 대동맥 삽입 이식을 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜의 목표는 동맥의 동종면역 반응 및 그에 따른 장기 이식 실패에 기여하는 동맥 변화와 관련된 병리학적 과정 및 치료 전략을 연구할 수 있는 모델을 제공하는 것입니다.

동종 유도 혈관 거부 및 이식 동맥 경화 마우스 모델

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 최소 침 습 가로 대동맥 수축 (TAC) 생쥐에서의 기술. 삽 관 법 그리고 일반적으로 사용 되는 표준 절차 필수는 환기의 제거, 최소 침 습 전술 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다.

왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술

여기서, 우리는 자궁 경부 뮤린 모델에서 비 봉합술 커프 기술을 사용하여 마우스에서 이종성 대동맥 이식의 프로토콜을 제시한다. 이 모형은 만성 동종 이식 혈관병증 (CAV)의 근본적인 병리를 공부하기 위하여 이용될 수 있고 그것의 대형을 방지하기 위하여 새로운 치료에이전트를 평가하는 것을 도울 수 있습니다.

수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델

마우스 자궁 경부 이성애 심장 이식을 위한 커프 기술에 대한 내부 튜브 접근법을 도입하여 커프스 위에 혈관을 상회합니다. 우리는 두 경험이 풍부한 외과 의사 사이의 협력이 수술 시간을 현저하게 단축한다는 것을 발견했습니다.

뮤린 심장 이식을 위한 커프 기술의 최적화

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

배우세요 소매 기법을 이용한 마우스 대동맥 이식술로 혈관 질환 연구를 수행하는 방법을. 이 기법은 유전자 변형 마우스에서 혈관 질환을 연구하는 데 활용될 수 있습니다.

대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여

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