마우스 내부 귀를 대상으로 약물 전달 방법의 비교 연구 : Bullostomy 대 Transtympanic 주입

이 연구의 전반적인 목표는 청력 매개변수와 달팽이관 세포 구조 마커에 미치는 영향 측면에서 내이에 국소 약물 전달을 위한 두 가지 미세 수술 접근 방식을 설명하고 비교하는 것입니다. 이러한 절차는 청각 분야, 특히 동물 친화학 연구의 개발에서 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이러한 기술의 주요 장점은 최소 침습적이라는 것입니다.

그리고 이것은 물질이 교훈적으로 내이에 도달 할 수있게합니다. 이러한 기술의 적용은 청력 상실 치료로 확장되는데, 이는 미세 수술 절차가 중이의 건조 분만에 적합하기 때문입니다. 수포루와 경고막 주사는 배우기 어렵고 해부학적 지식과 수술 훈련이 필요하기 때문에 이 방법을 평화적으로 시연하는 것이 중요합니다.

시작하려면 마취된 마우스의 반대쪽 귀에 귀마개를 삽입하여 주로 단일 귀 반응을 얻습니다. 그런 다음 마우스를 소리 감쇠실 내의 가열 패드에 엎드린 자세로 놓습니다. 양극 스테인리스강 피하 바늘 전극을 두개골의 꼭짓점 위의 귀 사이의 두피에 놓습니다.

귓바퀴 아래의 이하선 영역에 기준 전극을 놓습니다. 그런 다음 접지 전극을 등, 꼬리 또는 뒷다리 부위에 놓습니다. 양극과 음극의 전기 임피던스를 확인하십시오.

임피던스가 3킬로옴 미만인지 확인하십시오. 미리 채워진 스피커를 선택한 귀를 향하는 고정된 거리에 놓고 스피커의 중심이 외이도와 정렬되도록 합니다. 스피커와 귀 사이에 장애물이 없는지, 귓바퀴가 완전히 열려 있는지 확인하십시오.

디지털-아날로그 워크스테이션 출력을 선택한 스피커에 연결합니다. 여기에는 자유 필드 스피커가 사용됩니다. 연결 amp노이즈가 적고 신호 대 잡음비가 좋은 liifier를 아날로그-디지털 입력에 연결합니다.

그런 다음 사전 설정된 자극 또는 적절한 소프트웨어로 설계된 새로운 신호를 사용하여 외부 청이도로 음향 자극을 전달하는 프로세스를 시작합니다. 높은 강도로 시작하여 강도를 5-10 데시벨 음압 레벨 단계로 줄입니다. 자극 후 처음 10밀리초 동안의 전기적 반응을 기록하며, 유발된 ABR 반응은 6-8밀리초로 나타납니다.

소프트웨어를 사용하여 프로토콜의 서면 부분에 설명된 대로 ABR 임계값을 확인합니다. 승인된 프로토콜에 따라 마취를 투여한 후, 발가락 꼬집음에 대한 반응이 없고 규칙적인 호흡이 나타나 수술 마취 평면에 도달했는지 확인합니다. 이발기를 사용하여 목 복부 표면의 털을 제거하고 하이드록시-프로필-메틸-셀룰로오스 기반 젤로 각막 각막염으로부터 눈을 보호하십시오.

무균 수술 부위에 마우스를 두부 누운 자세로 놓습니다. 포비돈 요오드 기반 소독액으로 피부를 청소하고 멸균 드레이프로 덮습니다. 메스를 사용하여 하악골에서 쇄골까지 2cm 길이의 절개를 만든 후 수술용 현미경을 통해 턱밑샘을 확인합니다.

겸자로 양쪽 턱밑샘을 분리하고 후퇴시킨 다음 안면 신경에서 이위근의 기원을 국소화합니다. 다음으로, 가위로 이위근의 근원을 절개하고 복부로 집어넣어 고막수포의 기저에 있는 하내측을 노출시킵니다. 그런 다음 27게이지 바늘을 사용하여 수포를 뚫고 구멍을 만듭니다.

흡수성 젤라틴 스폰지로 뚫린 부위의 혈액을 청소합니다. 등골 동맥을 고리 모양의 둥근 창문 막에서 찾으십시오. 34게이지 카테터와 유리 마이크로 주사기를 사용하여 수포루를 통해 3-5마이크로리터의 차량 용액을 천천히 주입하고 둥근 창 틈새에 직접 주입하여 채웁니다.

조직 접착제 1-2방울로 수포루를 밀봉합니다. 턱밑샘을 원래 위치로 되돌리고 5-0 실크 수술 봉합사로 피부 절개 부위를 닫습니다. 상처 감염을 방지하기 위해 절개 부위 주위에 포비돈 요오드 또는 클로르헥시딘 기반 소독제를 바르십시오.

흉골 누운 자세를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 마우스를 가열 패드에 올려 놓습니다. 동물이 완전히 회복된 후에만 동물을 가정용 케이지로 되돌려 놓으십시오. 마우스를 측면 욕창 위치에 놓고 앞서 보여진 것처럼 외이도 고기 아래의 정화조 수술 영역에서 준비합니다.

외이도의 수직 부분을 0.5cm 세로 절개 한 후 수술 현미경을 사용하여 고막을 찾습니다. 하부 pars tensa에서 상부 pars flaccida를 식별하며, 이는 malleus의 손잡이에 의해 전방 및 후방 섹션으로 나뉩니다. 그런 다음 pars flaccida의 꼬리 부분에 작은 myringostomy를 만들고 고막의 pars tensa를 추가로 절개하여 주사 중 공기를 배출할 수 있도록 합니다.

34게이지 카테터에 연결된 유리 마이크로 주사기를 사용하여 중이가 명확하게 가득 찰 때까지 둥근 창 틈새에 가까운 pars flaccida를 통해 10-15마이크로리터의 차량을 부드럽게 주입합니다. 5-0 실크 수술용 봉합사로 절개 부위를 봉합하고 앞서 설명한 대로 세척합니다. 이 그래프는 수술 전 클릭 자극에 대한 반응과 미세 수술 후 7일, 14일, 28일 후 수컷 C57BL/6J 마우스의 ABR 역치를 보여줍니다.

수포루(bullostomy) 데이터는 주황색으로, 트랜스팀패닉 주사 데이터는 파란색으로, 비수술 동물의 데이터는 회색으로 표시됩니다. 이 그래프는 미세 수술 후 같은 기간 동안 8-40kHz 범위의 톤 버스트 자극에 대한 반응의 ABR 임계값을 보여줍니다. 다시 말하지만, 수포루와 트랜스 고막 접근법 사이에 유의미한 차이는 관찰되지 않았다.

형태학적 연구는 스칼라 배지가 수포루술이나 고막패닉 주사에 의한 차량 분만 후 변화를 보이지 않는다는 것을 보여주며, 이는 두 절차 중 어느 것도 손상을 초래하지 않음을 나타냅니다. 수포루(bullostomy) 시술을 시도하는 동안, 설치류의 중이와 내이를 둘러싼 중요하고 해부학적인 구조를 검토하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이러한 절차에 따라 다른 기술을 수행할 수 있습니다.

예를 들어, 약물 동역학 연구를 위한 베를린 샘플링 개발 후 이러한 기술은 청각 신경 과학 분야의 연구자들이 주로 설치류를 대상으로 한 동물 모델에서 잠재적인 국소 치료법을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 중이에 약물을 투여하는 방법과 설치류의 청력을 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.