Name: 지방산의 확인 시험 바실러스 세레 우스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: 학습하세요 지방산 확인 시험을 통해 Bacillus cereus의 메틸 분기 및 이중결합 위치를 식별하는 방법을. 이 기술은 정제 없이 세균 적응 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

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저자는 자신의 기술 지원 토마스 Mison에게 감사하고, 원고를 수정하기위한 레이첼 한전합니다.

1. 세균성 문화 <ol><li> LB 한천 배지의 플레이트의 표면에, LB (루리아 - 베르 타니 배지)에 30 ° C에서 배양 한 균주의 하룻밤 배양 100 μl를 분산시켜 박테리아 (바실러스 세레 우스 균주 ATCC 14579)의 잔디를 준비한다. 30 ℃에서 하룻밤 접시를 품어. </li></ol> 2. ECL : 등가 체인 길이 <ol><li> 다음과 같이 ECL을 계산합니다 : <img alt="방정식" src="/files/ftp_upload/54960/54960eq1.jpg" /> 와: 내가 관심있는 용질; N, 용질 전에 용출 직쇄 포화 지방산 메틸 에스테르의 탄소수 I; N + 1, 용질 후 용출 직쇄 포화 지방산 메틸 에스테르의 탄소수 I; RTI, RTN,있는 걸 (N + 1) 상기 FAME 피크의 유지 시간. 주 : (표준 혼합 주사 B가 직쇄 포화 지방산 메틸 에스테르의 체류 시간을 구하는AME). </li></ol> 3. FAME 준비 및 분석 <ol><li> 한천 플레이트에서 콜로니를 긁어 지질 지방산, 수확물 균체를 얻고 스크류 캡과 PTFE 씰 10 mL 유리 튜브에 박테리아 (109 생세포 등가 신선 중량) 40 mg을 전송하기 위해. </li><li> 아래에 설명 에스테르 링크 방법 14, 15을 통해 에스테르 교환 반응을 수행합니다. <ol><li> 신선한 박테리아 세포에 메탄올 0.2 M KOH의 5 ML을 추가하고 1 시간 동안 37 ° C에서 품어. 이 반응은 지질에 에스테르 연결을 끊고 지방산 메틸 에스테르를 생산하고, 알칼리 메탄 구성된다. </li><li> 7.0 pH를 낮추기 위해 1 M 아세트산 1 ㎖를 추가한다. 산도 테스트 스트립 pH를 확인합니다. </li><li> FAMES를 추출 헥산 3 ㎖를 추가합니다. </li><li> 약 200 μL를 얻는 질소의 연속 흐름하에 실온에서 증발시켜 깨끗한 튜브에 상청 (유기상)을 전송하고 집중추출물. 삽입과 GC 바이알에 샘플을 전송합니다. </li><li> 가스 크로마토 그래피 질량 분석 (GC-MS)로 추출 시스템을 주입한다. </li></ol></li></ol> 4. GC / MS 조건 <ol><li> 모세관 컬럼 ZB-WAX (직경 0.25 mm, 필름 두께 0.25 ㎛의 길이, 30m)를 구비 한 GC-MS 기기 FAME에 샘플을 주입. </li><li> (비분 모드) 주입구 250 ° C까지 온도를 설정합니다. 37cm / sec의 속도로 선형, 캐리어 가스로서 헬륨을 사용한다. 20 ° C / 분의 속도로 190 ℃로 증가시키고, 2 ℃ / 분의 속도로 230 ℃의 최종 온도로 점진적 증가, 1 분 동안 50 ° C의 오븐 온도를 잡아. </li><li> 상기 MS를 들어 70 eV로에서 전자 이온화 (EI)에 의하여 질량 스펙트럼을 기록하고, 50 내지 400 원자 질량 단위 (AMU) (2 스캔 / 초) 사이에 총 이온 전류의 인수를 설정한다. </li><li> 필요한 경우, 동일한 조건 excep에서 DMOX 및 picolinyl 파생 상품을 주입다음과 같이 온도 프로그램 오븐 T : DMOX : 50 ° C (1 분), 20 ° C 210 ° C까지 / 분, 2 ° C / 분 240 ° C (5 분)까지; Picolinyl : 6 ° C (1 분), 220 ° C까지 20 ° C / 분, 250 ° C (20 분)까지 2 ° C / 분. </li></ol> FAME (16) 5. Picolinyl 에스테르 준비 <ol><li> 질소의 흐름 (적어도 10 mg의 건조 물질)와 함께 제 3 항 중 FAME 추출액을 증발 건조 디클로로 메탄 1 ㎖에 용해. </li><li> 테트라 히드로 푸란 칼륨 터 t- 부톡 사이드의 1.0 M 용액을 준비합니다. </li><li> 명성 추출물 단계 5.2에서 만든 용액 0.2 ml의 3 피리딘 메탄올 0.1 ML을 추가합니다. </li><li> 밀폐 된 바이알에서 30 분 동안 40 ° C에서 상기 용액을 가열한다. </li><li> 실온으로 냉각시킨 후, (재료 표 참조, 2 ㎖)와 헥산 (4 mL) 중 정제 된 탈 이온수를 추가한다. 와류 혼합 상을 분리 할 수 ​​있도록하고, 유기상을 수집한다. </li><li> 박사유기상까지 무수 황산나트륨을 첨가하여 Y 완벽하게 알 수있다. 깨끗한 튜브로 전송합니다. 그런 다음 200 μl를 증발. 삽입과 GC 바이알에 샘플을 전송합니다. </li></ol> FAME (17) 6. DMOX 준비 <ol><li> 질소 (최소 10 mg의 건조 물질)의 흐름을 제 3의 FAME 추출물을 증발. </li><li> 명성 건조 추출물에 2- 아미노 -2- 메틸 -1- 프로판올 250 ㎎을 추가. 질소 용기를 세척하는 스토퍼를 추가하고, 190 ℃에서 하룻밤 가열 블록에 넣습니다. </li><li> 실온으로 냉각 한 후, 튜브를 3 ml의 디클로로 메탄을 추가하고, 5 ml의 탈 이온수 (재료 표 참조) 정제 하였다. </li><li> 상 분리 흔들어 후, 수성 상을 제거합니다. </li><li> 5 ㎖의 물, 유기 상을 세척한다. 상 분리 흔들어 후, 수성 상을 제거합니다. </li><li> 유기상까지 무수 황산나트륨을 첨가하여 건조 완벽하고 명확한깨끗한 튜브로 전송할 수 있습니다. 200 μL의 부피에 도달 할 때까지 질소 기류 하에서 증발시켰다. 삽입과 GC 바이알에 샘플을 전송합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

표 1에 나타낸 FA를 크로마토 프로필 한천 플레이트 표면에 성장 B. 세레 우스 ATCC 14579에 대응한다. 세균을 동일 온도에서 8 통기 액체 배지에서 성장했을 때 유사한 프로파일을 얻었다. 액체 배지에서 성장 세균의 경우 세균 미생물이 성장 배지를 원심 분리에 의해 회수하고, 성장 조건에 따라 8,19 전술 한 프로토콜에 따라 세척 될 수있다. B. 세레 우스에 의해 생성 된 각종의 FA 식별 저온 7,9의 성장에 필요한 몇 가지 유전자 돌연변이 균주에서 검출 될의 FA 비율에 미세한 변화를 허용. 보통, ECL은 고정 된 온도에서 결정된 조정 된 체류 시간의 로그 값을 사용하여 계산된다 (20) (등온 온도 제어 오븐을 사용하여). 여기서 때문에 P에 비등 레인지의 사용관심 FAME 최적화 된 분리 ermit, 계산 방법은 이...

지방산 메틸 에스테르 (FAME) 기체 크로마토 그래피 (GC)의 지질 특성에 필수적인 메소드이다. 이는 신속 분리 짧은 추출 공정 후의 시료의 각종 지방산 (FA들)을 정량화한다. 메틸 에스테르의 유도체는 크로마토 그래피 컬럼을 향해 매우 휘발성 안정하고 불활성시켜 미행 피크를 회피. 크로마토 그래피 프로파일 중 하나를 게시 또는 기준에 비교하기 때문에 샘플이 잘 알려진 FA를 구성 할 때 그들의 인식은 오히려 간단합니다. 또한, 각종의 FA 정량 검정 표준의 반복 분사 불꽃 이온화 검출 (FID) 한 그들의 거의 일정한 응답 주어진 요구되지 않는다. FID에 더하여, 질량 분광 (MS) 검출 FAMES를 확인하는 내용의 상보 세트를 제공한다. FAMES가 전자 이온화 (EI)를 이용하여 충전하는 경우에는, 결과적인 스펙트럼은 항상 일을 허용하지FA 미세 구조의 전자 식별. 진단 이온 하나를 감지하기 어렵고 대상 이온 풍부 특성 변화가 질량 스펙트럼 라이브러리 (2)의 사용을 방지하는 시스템에 의존하기 때문에 예를 들어, 위치를 분기 (즉, 측쇄 메틸기)을 예측하는 것은 곤란하다. 또 다른 문제는 EI는 이중 결합의 이동을 야기하기 때문에 이중 결합의 위치를 ​​식별에있다. 따라서, 이중 결합의 위치를 ​​변화와 FA 이성질체들은 질량 스펙트럼에 의해 구별 될 수 없다. 다행히도 다른 도구 FA 식별을 위해 개발되었다. 예를 들어, 존재 및 준하여 이중 결합 또는 분지의 위치는 해당 체인 길이 (ECL) (3)을 계산함으로써 추측 할 수있다. 기타 유도체 화 방법은 이중 결합 또는 측쇄 메틸기의 위치에 따라 서로 다른 질량 스펙트럼 결과. 4,4- 디메틸 옥사 졸린 유도체 (DMOX) 4 EAS 허용불포화 지방산의 이중 결합의 위치의 Y 식별. 에스터 (picolinyl 에스테르) 메틸 유도체의 위치의 명확한 식별이 가능 -3- pyridylcarbinyl는 FA를 5 분지. 핵 자기 공명 (NMR) 스펙트럼 구조 특성 1의 uncontestable 방법에 필요한 정제의 복잡한 방법을 사용하지 않고도 크로마토 유지율 (ECL) 질량 스펙트럼 (DMOX 및 picolinyl) 정보는 대부분의 FA의 식별을 가능하게 결합 . 일부 인간과 동물의 병원체를 포함 바실러스의 박테리아는 매우 다양한 틈새 시장에 정착 할 수 있으므로 널리 환경 (6)에 배포됩니다. 바실러스 속 중에서, FA 조성물 (환경 변화의 넓은 범위에 적응 FA 패턴의 변조와 종의 생태적 틈새에 의해 영향을 받는다 예를 들어, 성장 배지, 온도,산도 등) 7-9. 이 때문에 표준 조건에서 성장 동안 바실러스 종의 FA에 걸쳐 패턴의 상대적 균질성에, FA 조성물의 결정은 바실러스 종을 정의하는 데 사용되는 중요한 조건 중 하나이다. 바실러스 속의 독특한 특성은 12-17 탄소 ISO 및 환경 조건에 대한 적응의 주요 결정 인 안테 이소 이성체의 비율로 10-12 분지 쇄의 FA 풍부하다. 바실러스 종은 불포화 지방산의 비율을 변경함으로써, 환경의 변동에 적응. 이러한 바실러스 세레 우스와 같은 일부 종에서는,이 지방산 desaturases 적응 9 다른 역할로 알킬 체인 (13)의 다른 위치에 이중 결합을 만들 수 있습니다. 바실러스 속의 예 정확하게 이중 결합의 위치를 식별하고 FA 분지의 중요성을 나타낸다. 수집ively, 바실러스 FA 패턴의 식별은 몇 가지 유용한 응용 프로그램이 있습니다. 여기서, 우리는 고전 GC-MS 분석의 고유 한 한계를 극복 바실러스 FA 패턴을 식별하기위한 신규 GC-MS 방법을 제안한다. 이 혁신적인 접근 방식은 원시 생물학적 물질에 직접 사용하고, 기존 기술의 조합으로 구성 할 수 있습니다 체류 시간 (ECL) 및 다른 FA들 유도체 (FAME, DMOX 및 picolinyl 에스테르)의 질량 스펙트럼에 대한 정보를 제공합니다. 우리는 다음과 FA 명칭을 사용합니다. a 및 n은 ISO를 나타낸다 난, 안테 이소 메틸 각각 분지 및 직쇄 지방산. 불포화의 FA는 C로 명명 하였다 : C는 탄소 지방산 원자 및 (D)의 수이고, D는 이중 결합의 수이다. Δ의 X는 이중 결합이 카르 복실 말단으로부터 계수, x 번째의 탄소 - 탄소 결합에있는 이중 결합의 위치를 나타낸다.

<table><tbody><tr><td>GC/MS</td><td>Shimadzu</td><td>QP2010</td><td></td></tr><tr><td>모세관 컬럼 ZB WAX</td><td>Phenomenex</td><td>7HG-G007-11</td><td>30 m x 0.25 mm x 0.25&nbsp; &마이크로; m</td></tr><tr><td>메탄올 Lichrosolv</td><td>VWR</td><td>1.06018.2500</td><td></td></tr><tr><td>수산화칼</td>륨 <td>Aldrich</td><td>P1767</td><td></td></tr><tr><td>THF</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>28559.320</td><td></td></tr><tr><td>디클로로 메</td>탄 <td>Hipersolv Chromanorm</td><td>23373.320</td><td></td></tr><tr><td>헥산</td><td>Hipersolv Chromanorm</td><td>24575.320</td><td></td></tr><tr><td>3- 피리딘 메탄올</td><td>Aldrich</td><td>P6-680-7</td><td></td></tr><tr><td>칼륨 tertiobutoxide</td><td>Aldrich</td><td>156671</td><td></td></tr><tr><td>2-amino-2-methyl-1-propanol</td><td></td><td>A-9879</td><td></td></tr><tr><td>MilliQ Academic</td><td>Millipore</td><td>ZMQS50001</td><td></td></tr><tr><td>세균산 메틸 에스테르(BAME) 믹스</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47080-U Supelco</td><td></td></tr></tbody></table>

지방산의 확인 시험<em&gt; 바실러스 세레 우스</em

Identification of Fatty Acids in Bacillus cereus

바실러스 종 메틸 분기의 다양한 위치 체인 및 불포화 지방산 (FA들)을 포함 분지 (ISO 또는 안테 이소) 및 이중 결합. FA 조성물의 변화는 환경에 박테리아의 적응에 중요한 역할을한다. 이러한 수정은 안테 이소 FA들에 비해 분지 ISO의 비율의 변화를 수반하고, 특정 위치에 생성 된 이중 결합을 갖는 불포화 포화 FA를 FA에 대하여, 비율이다. 각 FA 프로파일의 정확한 식별은 바실러스 종의 적응 메카니즘을 이해하는 것이 필요하다. 바실러스에서의 FA의 대부분은 상업적으로 사용할 수 없습니다. 지방산 메틸 에스테르 (FAMES), 4,4- 디메틸 옥사 졸린 : 본 명세서에서 제안 된 전략은 세 FA 유도체의 종류의 질량 스펙트럼과 (등가 체인 길이 (ECL)의 연산에 의해) 보유 시간에 대한 정보를 조합하여 FA를 식별 파생 상품 (DMOX), 및3 pyridylcarbinyl 에스터 (picolinyl). 이 방법은 미지의 FA를 정제 할 필요없이 FA를 식별 할 수있다. 표준 상용 혼합물 바실러스 세레 우스로부터 제조 FAME의 크로마토 그래피 프로파일을 비교하는 다른 FA들 중 신원의 FA의 ECL의 계산 및 가설 포화 직쇄의 식별을 허용한다. FAMES의 탄소수가 동일한 수의 선형 포화 FA들에 비해 FA들, 또는 ISO 안테 이소에서, ECL에 일정한 마이너스 시프트를 표시 포화 분지. 불포화의 FA FAMES는 분자 이온의 질량을 감지하고 대응하는 포화 FA들에 비해 ECL의 양의 변화가 발생할 수있다. FA들의 분기 위치의 FA 불포화 이중 결합의 위치는 각각 picolinyl 및 DMOX 유도체의 전자 이온화 질량 스펙트럼에 의해 확인 될 수있다. 이 접근법은 모든 미지의 포화 지점을 식별ED의 FA 불포화 직쇄 FA들 및 B. 세레 우스 추출물의 불포화 측쇄의 FA.

박테리아 세포에서 FA 식별의 전략은 그림 1에 제시되어있다. 각 단계는 상호 보완적인 스펙트럼 정보 또는 크로마토 그래피 보존에 대한 정보를 제공합니다. 1 단계는 표준 용액을 사용하여 예비 FA 식별 구성된다. 단계 2 임시 제품을 식별하기 위해, FAME EI 스펙트럼 및 ECL의 해석을 허용한다. 3 단계는 분지 쇄-의 FA의 정확한 분기 위치를 식별합니다. 마지막으로, 4 단계는 불포화의 FA에 이중 결합의 정확한 위치를 식별합니다. FAME 및 ECL BAME 혼합물은 우리가 직쇄 포화 지방산의 시리즈 (N17에서 N12)를 식별하도록 허용 일부 메틸 지방산 (I15, A15, I16, I17)를 분지. 그러나, <...

우리는 지방산을 정제할 필요 없이 지방산을 식별할 수 있는 프로토콜을 제안합니다. 머무름 시간에 대한 정보와 지방산 유도체의 세 가지 유형, 즉 지방산 메틸 에스테르(FAME), 4,4-디메틸 옥사졸린 유도체(DMOX) 및 3-피리딜카르비닐 에스테르(피콜리닐)의 질량 스펙트럼을 결합합니다.

The Bacillus species contain branched chain and unsaturated fatty acids (FAs) with diverse positions of the methyl branch (iso or anteiso) and of the ...

이 프로토콜의 전반적인 목적은 박테리아로부터 지방산을 확인하고 메틸 분지 및 이중 결합의 위치를 식별하는 것입니다. 이 방법은 박테리아가 환경에 적응하는 방식에서 지방산의 역할과 같이 세균학 분야의 핵심적인 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 지방산의 증식이 필요하지 않다는 점입니다.박테리아 분류학에서 지방산 조성의 중요성 때문에, 이 기술의 영향은 박테리아 식별 분야까지 확장됩니다. 이 방법은 Bacillus cereus 박테리아를 대상으로 개발되었으나, 분지쇄 지방산을 포함하는 다른 종들을 연구하는 데에도 매우 유용합니다. 일반적으로, 이 방법을 개발하는 과정에서 많은 어려움이 있었습니다.현재의 지방산 식별 방법으로는 이중 결합 위치의 메틸 분지를 식별할 수 없습니다. 이 절차를 시작하려면, LB 배지 한천판 표면에 30 °C에서 LB 배지로 하룻밤 동안 배양한 균주 배양액 100 µL를 도말하여 박테리아 층을 준비합니다. 플레이트를 30 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다.지질 지방산을 얻기 위해, 한천 배지에서 콜로니를 긁어내어 박테리아 세포를 수확합니다. 그리고 약 40 milligrams를 스크류 캡과 PTFE 씰이 있는 10 milliliter 유리 튜브로 옮깁니다. 에스테르 교환 반응을 수행하려면, 신선한 박테리아 세포에 0.2 molar 메탄올성 수산화칼륨 5 milliliters를 첨가합니다.볼텍싱 후 37 °C에서 1시간 동안 배양합니다. 그 후, pH를 7로 낮추기 위해 1 M 아세트산을 1 mL 첨가합니다. 이제 헥산 3 mL를 첨가하고 1분 동안 볼텍싱하여 지방산 메틸 에스테르(FAMEs)를 추출합니다.상층액을 깨끗한 튜브로 옮기고, 질소 기류를 지속적으로 흘려보내며 실온에서 증발 농축하여 약 200 µL의 FAME 추출물을 얻습니다. 그다음, 추출물을 인서트가 포함된 GC 바이알로 옮깁니다. 추출물을 모세관 칼럼이 장착된 가스크로마토그래피 질량분석법 또는 GC-MS 시스템에 주입합니다.주입구 온도를 250 °C로 설정합니다. 오븐 온도를 50 °C에서 1분간 유지합니다. 분당 20 °C의 속도로 190 °C까지 승온하고, 분당 2 °C의 속도로 최종 온도인 230 °C까지 승온합니다.MS 분석을 위해 70 electron volts의 전자 이온화(electron ionization, EI) 방식으로 질량 분석 스펙트럼을 기록하고, 총 이온 전류(total ion current)의 수집 범위를 50에서 400 atomic mass units(AMU) 사이로 설정하십시오. 건조된 FAME 추출물 샘플을 1 mL의 건조한 dichloromethane에 용해합니다. 그 후, 추출물 용액과 0.2 mL의 3-pyridinemethanol을 0.1 M potassium tert-butoxide의 tetrahydrofuran 용액 0.1 mL에 첨가하십시오.밀폐된 바이알에 넣고 40 °C에서 30분 동안 용액을 가열합니다. 용액을 실온으로 냉각시킨 후, 정제된 탈이온수 2 mL와 헥산 4 mL를 추가합니다. 볼텍스 믹서를 사용하여 용액을 1분 동안 혼합합니다.층이 분리될 때까지 기다린 후, 상층의 유기층을 수집합니다. 다음으로, 유기층이 투명해질 때까지 무수 황산나트륨을 첨가합니다. 유기층을 깨끗한 튜브로 옮긴 다음, 부피가 약 200 microliters가 될 때까지 질소 기류 하에서 유기층을 증발시킵니다.건조된 FAME 추출물 샘플에 250 milligrams의 2-amino-2-methyl-1-propanol을 첨가합니다. 튜브 내부를 질소로 퍼지한 후 스토퍼로 밀폐합니다. 그 다음, 용액을 190 degrees Celsius에서 하룻밤 동안 가열합니다.용액을 실온으로 냉각시킨 후, 3 mL의 dichloromethane과 5 mL의 정제된 탈이온수를 첨가합니다. 혼합물을 Vortexing하고 층이 분리될 때까지 기다립니다. 그런 다음, 수성층을 제거합니다.그 후, 유기층을 5 mL의 물로 세척합니다. 유기층이 투명해질 때까지 무수 황산나트륨을 첨가합니다. 유기층을 새로운 시험관으로 옮긴 후, 질소 기류 하에서 약 200 µL의 부피가 될 때까지 증발시킵니다.I16 picolinal 유도체의 질량 분석 스펙트럼은 메틸 분지 구조를 확인해 줍니다. 304와 332 이온 사이의 28 AMU 간격은 분지된 탄소를 기준으로 생성된 단편들에 해당합니다. DMOX 유도체의 특징인 진단 이온 113과 126이 여기에 표시되어 있습니다.분자 이온 307은 16:1 이성질체의 특징이며, 196과 208 사이의 12 AMU 간격은 탄소 위치의 이중 결합을 나타냅니다. 이중 결합이 7번 탄소 앞에 있을 때는 12 AMU의 간격이 더 이상 관찰되지 않습니다. 5번 탄소의 이중 결합 특징인 강한 153 이온과 DMOX 유도체 질량 분석 스펙트럼의 307 분자 이온을 통해 이 화합물을 n16 one delta five로 식별하였습니다.DMOX 유도체의 307 이온과 피콜리날 유도체의 345 이온은 16:1 지방산 이성질체를 나타냅니다. 28 AMU의 간격은 분지 위치를 나타내며, DMOX의 경우 12 AMU, 피콜리날 에스테르의 경우 26 AMU의 간격은 이중 결합의 위치를 식별합니다. Bacillus cereus에서 확인된 지방산과 그에 해당하는 진단 이온이 여기에 나열되어 있습니다.진단 이온은 DMOX 및 picolinal ester 유도체의 탄소 사슬에서 메틸 분지 및 이중 결합 위치를 식별합니다. 이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 이틀 만에 완료할 수 있습니다. 이 절차에 따라 GC-MS로 지방산을 정량화하고 FAME 유도체를 방출시킬 수 있습니다.이 기술의 개발 이후, 세균학 분야의 연구자들은 세균의 다양성과 세균 적응 기전을 탐구할 수 있는 길을 열게 되었습니다. 이 영상을 시청한 후에는 메틸 분지형 및 불포화 지방산을 포함하여 세균의 지방산을 연구하는 방법에 대해 충분히 이해하시게 될 것입니다. 시약을 다루는 작업은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 실험실 흄 후드를 사용하고 장갑을 착용하는 등의 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

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Google은 최근은 간단 세균 검출을위한 형광 분석 "을 믹스 앤 읽기"를 설정하는 데 적용할 수있는 형광 DNAzyme 프로브를 생성하기위한 새로운 접근 방식을보고했습니다. 이러한 특별한 유전자 프로브는이를 형광 신호 생성에 세균 검출을 번역 특정 세균에 의해 생산되는 원유 세포외 혼합물 (CEM)의 앞에서 발색단 - 수정의 DNA-RNA 키메라 기판의 절단을 catalyze. 이 보고서에서 우리는 "RFD-EC1"표시된 특정 DNAzyme 프로브는 모델 박테리아의 탐지를 위해 고용되는 핵심 실험 절차를...

형광 DNAzymes을 사용하여 박테리아의 탐지

출처: Ginies, C., et al. Bacillus cereus의 지방산 식별. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 바이오매스를 알칼리성 용액으로 처리한 후 다운스트림 분석을 위해 상 분리 및 용매 증발을 수행하여 박테리아 샘플에서 지방산 메틸 에스테르(FAME)를 제조하는 과정을 보여줍니다.

박테리아 바이오매스에서 지방산 메틸 에스테르(FAME)의 제조

그람 음성 박테리아 지질 다당류 (LPS)의 지질 도메인의 분리 및 특성은 세포 표면 항생제 내성의 기반 메커니즘, 세균의 생존과 건강, 어떻게 화학적으로 다양한 지질 분자 종은 차등 호스트 타고난 면역 반응을 조절에 대한 통찰력을 제공합니다.

그람 음성 박테리아에서 분리 및 지질의 화학 특성

기계적 세포 파괴, 용매 기반 지질 추출, 에스테르 교환 반응 및 정량 가스 크로마토 그래피를 사용하여 지방산의 식별에 기초하여 미세 조류의 지방산 함량 및 조성의 결정을위한 방법을 설명한다. tripentadecanoin 내부 표준 물질은 추출과 불완전 에스테르 교환시 가능한 손실을 보상하기 위해 사용된다.

미세 조류의 지방산 콘텐츠 및 조성 분석

&lt;em&gt; 사용 Caenorhabditis의의 우 •은 &lt;/ EM은&gt; 개발 및 생리학에 고도 불포화 지방산의 기능을 탐구 할 수있는 유용한 모델입니다. 이 프로토콜의 &lt;em&gt; C.의 보충의 효율적인 방법을 개시 엘레 &lt;/ EM&gt; 고도 불포화 지방산 다이어트.

에있는 고도 불포화 지방산의식이 보충제<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

지방산 영양 마커 접근, 즉, 전체 분자와 소비자 조직으로 전송으로 지방산의 동화 없이 또는 사소한 수정, 작은 토양 무척 추 동물의 지방 산 성 대사에 지식 격차에 의해 방해 된다. Isotopologue 프로 파일링 풀 영양 상호 작용 하는 귀중 한 도구로 제공 됩니다.

영양 탄소 전송 및 무척 추 동물 소비자의 지질 대사에 대 한 통찰력을 제공 합니다 지방산 13C Isotopologue 프로 파일링

이 방법은 복잡한 숙주 공급원에서 세균막, 특히 황색포도상구균에외인성 지방산의 통합을 연구하기위한 프레임 워크를 제공합니다. 이를 달성하기 위해, 닭 계란 노른자및 질량 분석법을 활용하는 세균성 인지질의 후속 지방산 프로파일링에서 지단백질 입자의 농축을위한 프로토콜이 설명된다.

세균성 병원체 지방산 을 막 인지질로 통합하는 연구를 위해 닭 계란 노른자에서 지단백질 입자의 분리

프로토콜은 광범위한 진균의 세포벽의 총 지질 함량을 추출하기 위해 제시된다. 더욱이, 진동산의 상이한 모형의 추출 및 분석 프로토콜이 도시된다. 이러한 진균 화합물을 모니터링하는 얇은 층 크로마토그래피 프로토콜도 제공됩니다.

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여기서 우리는 MALDI-TOF-TOF 탠덤 질량 분광법 및 하향식 프로테오믹 분석을 사용하여 사내에서 개발된 단백질을 신속히 서열화한 병원성 박테리아에 의해 생성되는 단백질의 신속한 식별을 위한 프로토콜을 제시합니다. 메타안정 단백질 이온 단편 때문에 아파르트산 효과 및 이러한 특이성은 단백질 식별을 위해 이용된다.

MALDI-TOF-TOF-MS/MS 및 하향식 프로테오믹 분석을 사용하여 대장균에 있는 항균 면역 단백질의 식별

여기에서는 생체 내 갈색 지방 조직의 총 지방산 de novo 지방 형성 분석을 위해 산화중수소 및 가스 크로마토그래피 질량분석법(GCMS)을 활용하는 저렴한 정량 분석법을 제시합니다.

산화중수소를 사용한 갈색 지방 조직에서 de novo 지방산 합성의 정량적 측정

학습하세요 지방산 확인 시험을 통해 Bacillus cereus의 메틸 분기 및 이중결합 위치를 식별하는 방법을. 이 기술은 정제 없이 세균 적응 메커니즘을 연구하는 데 활용됩니다.

지방산의 확인 시험

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