1D 박막 크로마토그래피 수행

1. TLC 플레이트

1. TLC의 일반적인 흡착제는 실리카겔, 알루미나 및 셀룰로오스입니다. TLC 플레이트는 다양한 특성으로 상업적으로 이용 가능합니다. TLC 플레이트를 선택하고 적절한 크기로 자릅니다(대부분의 응용 프로그램에는 약 5cm x 5cm로 충분). 유리로 된 TLC 플레이트의 경우 자와 유리 커터를 사용하여 유리에 점수를 낸 다음 선을 따라 조심스럽게 부수십시오.

2. 스포팅

1. 샘플을 적절한 용매에 용해시켜 약 1%의 용액을 만듭니다. 가능하면 용매는 무극성이어야 합니다. 컬럼 크로마토그래피 분획 및 기타 희석 용액은 용질이 0.2%에서 2.0% 사이의 농도로 존재하는 경우 희석 없이 사용할 수 있습니다.
2. 접시 바닥에서 약 1.0cm 떨어진 곳에 연필로 기준선을 표시합니다. 접시 가장자리에서 최소 1.0cm 떨어진 곳에 반점을 배치하고 적절하게 레이블을 지정합니다.
3. 반점은 유리 모세관을 사용하여 적용할 수 있습니다. TLC 플레이트를 찾으려면 모세관을 용액에 담그고 소량의 액체를 끌어들입니다. 팁을 TLC 플레이트의 원하는 위치에 부드럽게 터치하고 즉시 제거하십시오.
4. 또는 마이크로리터 주사기로 각 응용 분야에 대해 약 1μL의 용액을 전달하여 스팟을 도포할 수 있습니다.
5. 스팟은 각 위치에 연속적으로 적용될 수 있으며, 스포터로 흡착제 표면을 방해하지 않도록 주의합니다. 응용 프로그램 사이에 용매가 건조되도록 합니다.

3. 현상 용매 선택

1. 양호한 분리를 위해 가능한 최소 극성 용매를 사용하는 것이 바람직합니다. TLC의 일반적인 용매에는 헥산, 에틸 아세테이트, 디클로로메탄 및 메탄올이 포함됩니다(표 1).
2. 적절한 이동상을 찾는 편리한 방법은 샘플로 TLC 플레이트를 찾는 것입니다. 직경 1-2cm의 용매 원을 형성하기 위해 충분한 용매를 해당 지점에 직접 도포합니다. 원의 둘레를 표시합니다. 시각화 시 적절한 용매는 잘 분리된 고리를 표시하며, 가장 바깥쪽 고리는 중심에서 용매 선단까지의 거리의 약 50%에 있습니다.
3. 두 개의 혼화성 용매를 선택하고 다양한 비율로 테스트하여 이동상의 극성을 조정해야 할 수도 있습니다. 일반적인 혼합물의 예로는 에틸 아세테이트와 헥산, 메탄올과 디클로로 메탄이 있습니다.

4. 개발

1. 더럽혀진 TLC 플레이트를 적절한 현상 용매가 포함된 현상 챔버에 놓습니다. 용매 라인은 TLC 플레이트에 표시된 기준선 아래에 있어야 합니다.
2. 현상 챔버는 뚜껑이 있는 병 또는 알루미늄 호일 또는 플라스틱 필름으로 덮인 비커일 수 있습니다. TLC 플레이트를 수용할 수 있는 가장 작은 용기를 사용하십시오.
3. 솔벤트가 플레이트의 상단 가장자리에 닿지 않도록 하십시오. 용매 선단(흡착제의 젖은 부분이 끝나는 경계)이 플레이트 상단에서 5-10mm 떨어져 있을 때 현상 챔버에서 TLC 플레이트를 제거하고 용매가 건조되기 전에 연필로 용매 전면을 표시합니다.

5. 시각화

1. 색깔이 있는 반점은 즉시 시각화하고 연필로 표시할 수 있습니다. 종종 반점은 보이지 않으므로 다른 방법으로 시각화해야 합니다.
2. 종종 TLC 흡착제에는 형광 지시자가 포함되어 있습니다. 반점은 휴대용 자외선(UV) 램프를 사용하여 시각화할 수 있습니다. 형광을 끄는 화합물은 플레이트에 단파(254nm) UV 광선을 조사할 때 어두운 반점으로 나타납니다. 형광 화합물은 적절한 파장의 자외선을 조사할 때 밝은 점을 생성합니다. 연필로 각 지점의 중심을 표시하십시오.
3. TLC 플레이트에 시각화 시약 또는 염색을 적용하여 반점을 시각화할 수도 있습니다. 시각화 시약은 플레이트를 시약에 담그거나 비부식성 시약으로 적신 면봉으로 플레이트를 닦아서 적용할 수 있습니다.
4. 에탄올에 함유된 포스포몰리브딕산 20% 용액은 대부분의 유기 화합물을 시각화하는 데 유용합니다. 반점은 히트 건으로 접시를 가열하거나 오븐에서 가열할 때 나타납니다.
5. 다른 시약은 특정 종류의 화합물을 시각화하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 닌히드린 시약은 아미노산 시각화에 사용되며 2,4-디니트로페닐히드라진은 알데히드 및 케톤에 사용됩니다.

6. 분석

1. 지연 계수(R_f)는 화합물이 TLC 플레이트 위로 이동하는 거리와 용매가 이동하는 거리의 비율입니다. 이는 기준선에서 스폿 중심까지의 거리를 측정하고 값을 기준선에서 용매 선방까지의 거리로 나누어 결정할 수 있습니다.
   위치
2. 화합물의 R_f는 물리적 특성의 특징이며 온도, 샘플 크기, 흡착제의 두께 및 활성, 온도 및 샘플 크기와 같은 요인에 따라 달라집니다.
3. 미지 물질이 알려진 화합물과 동일한지 확인하려면 동일한 TLC 플레이트에 표준물질을 발견해야 합니다. 동일한 물질은 R_f와 동일한 특성을 갖습니다.