Name: 모세관 공급 분석은 식품 섭취를 측정 노랑 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: 학습하세요 Drosophila melanogaster의 식품 섭취를 측정하는 CAFE 분석법을 통해 대사 연구에서 먹이 행동의 시작과 종료 메커니즘을 탐구하는 방법을. 이 기술은 신경과학 및 행동 연구에 신뢰할 수 있는 플랫폼을 제공합니다.

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토론에 참여한 Scholz 연구소의 전현직 구성원과 탁월한 기술 지원을 제공한 Helga Döring에게 감사드립니다. 우리는 특히 쾰른 대학의 Biocenter 워크숍 회원들의 지원과 창의성에 감사드립니다. 이 작업은 SFB 1340, SysMedAlc 및 DAAD-Siemens의 지원을 받습니다.

1. 카페 분석 참고 : 실험 유리 병, 특정 뚜껑과 마이크로 모세 혈관 : 분석법은 세 가지 구성 요소로 구성되어 있습니다. 커버 플라스틱 상자가 제조 된 튜브를 운반하고보다 효율적으로 습도를 제어하기 위해 사용된다. <ol><li> 분석을위한 튜브로 초파리 melanogaster의 문화 플라스틱 병 (옵션 8cm 높이 3.3 cm 직경)를 사용합니다. </li><li> O 링 (도 1A, 1B)를 포함하는 제조 플렉시 유리 뚜껑 유리 병을 밀봉합니다. 로드 눌러 나 또한 공기 순환 및 물 공급을 가능하게 뚜껑의 중앙 개구 (0.9 cm 직경)를 통해 취관과 파리, 그리고 스폰지 마개로 구멍을 닫습니다. 여섯 작은 원추형 개구 (0.4 cm 상부 직경 0.3 cm의 내경)의 중앙 구멍을 둘러싸 2 피펫 팁 적합 - 대신에 모세관을 유지하도록 20 μL 볼륨. (뚜껑의 기술적 인 세부 사항에 대한 보충 수치를 참조하십시오.) 참고 : 사용대신에 우리의 원고에 사용되는 사용자 정의 만든 뚜껑의 모세 혈관에 대한 개구부 스폰지 스토퍼 가능하다. 우리의 사용자 정의 뚜껑 모세 혈관이 떨어지는 위험을 최소화 제조 된 유리 병의 안전한 취급을 할 수 있습니다. </li><li> 액체 음식을 제공하기 위해, 1 μL 마크 5 μL의 마이크로 캐 필러를 사용합니다. 구멍 (빨간색 가장자리로 표시된 그림 1B)에 팁을 20 μL 피펫 팁과 삽입 - 2의 상단을 차단하여 뚜껑의 원추형 구멍의 모세 혈관을 놓습니다. 같은 구멍에 20 μL 피펫 팁 - 탈출 파리를 방지하기 위해, 포경 (2)를 삽입합니다. </li><li> 안전하게, 여러 준비 튜브를 처리 그리드 화 인레이 (그림 2A)와 플라스틱 상자에 그들을 배치합니다. </li></ol> 파리 2. 준비 <ol><li> 25 ° C, 상대 습도 60 %와 12 시간 / 12 시간 명암주기에 표준 음식에 파리를 유지합니다. </li><li> 사육 조건을 제어 (35) 처녀 여성을 소개하는50 ㎖를 포함하는 플라스틱 배양 병에 각 실험 그룹 D (15) 남성 (9.8 cm 높이 4.8 cm 직경) 음식을 비행. 파리 후 성인이 신선한 음식 튜브 (으)로 운항하는 항공사로 전송하고이 두 개 더 일 동안 알을 낳는하자, 처음 3 일 동안 알을 낳기 할 수 있습니다. 이 후 다시 전송을 반복합니다. 취소 성인 2 일 이상 후 파리. </li><li> 음식 섭취 플라이 크기에 의존하기 때문에, 3 일된 어른 2- 마취 100 파리의 그룹의 중량을 결정하는 공동이 플라이 패드를 사용하고, 1.5 mL의 플라스틱 튜브로 수집하고, 표준 측정 날아 실험실 규모. 성별 (표 1)에 의해 분류 적어도 네 개의 독립 플라이 군의 습윤 중량을 결정하고; 플라이 밀리그램 당 μL 음식 소비를 계산하는 가중치를 사용한다. 단일 플라이는 실험 당 사료 식품의 양을 결정하고, 피드백함으로써 모세관 비우는 않도록 따라서 음식으로 채워진 모세관의 수를 조정하는 값을 사용한다. <ol><li> 3 시간 분석, 사용20 파리와이 가득 모세 혈관. 장기간 실험 (&gt; 3 시간 및면 9 일)의 경우, (신뢰할 수있는 결과를 설명하는 조건으로 8 개 미만의 파리 얻을 수 없다) 네 채워진 모세관 공급 8 개의 파리의 그룹을 사용한다. </li></ol></li><li> CO 2 노출에서 무게를 측정 한 후 그룹 (8 또는 20 파리)에 별도의 파리. 진정 CO 2에서 48 시간 동안 이전 실험을 복구 할 수 있도록 (15 mL를 표준 식품을 포함한) 새로운 식품 바이알 그룹 전송. 카페 분석을 위해 4 ~ 6 일 된 파리를 사용합니다. </li><li> 비 - 고갈 야생형 파리 그나마 피드로 19, 21, 프리 굶주 리기 3 시간 공급 실험 날아간다. 식품 소비가 며칠 동안 모니터링 할 때 어떤 금식이 필요하지 않습니다. 금식의 경우, 전송은 부드럽게 ~ 0.5 mL의 DDH 적신 만 45 mm 직경 접힌 종이 필터를 포함하는 유리 병에 그들을 활용하여 시험을하기 전에 16 ~ 20 시간을 날아2 O (증류수를 두 번)와 연결 CAFE 분석 뚜껑을 닫습니다. </li></ol> 액체 식품의 3. 준비 <ol><li> 100 mL의 DDH 2 O. 피펫 3 μL, 33 μL, 333 μL, 3.3 mL의 6.6 mL로 102.6 g 자당 (C 12 H 22 O 11)을 작성하여 (w / v를 10 %) 크로스 원액을 3 M 준비 15 mL의 플라스틱 튜브에 원액; 2 mL의 음식 색상의 추가 (적색 : 코치 닐 [E124] 청색 : 인디고 카민 [E132]) 및 DDH 2 O. 10 mL를 채우기 결과 농도는 0.001, 0.01, 0.1, 1, 2 M 자당 있습니다 . 주 : 식품 색소는 쉽게 메 니스 커스를 시각화 허용한다. 그러나, 염료는 음식물 섭취에 영향을 미칠 수있다. 염료에 음식 염료를 분배 또는 실험 및 그룹 중 음식 샘플에 염료의 사용을 무작위로 인한 바이어스를 방지합니다. </li><li> 알코올 환경 피펫을 위해 15 ML의 플라스틱 튜브에 3 M 자당 원액 333 μL를 테스트합니다.100 %의 EtOH (에탄올) 1.5 ㎖ (2.3 ml)에 추가 15 % (0.25 밀리미터) 및 23 % (0.39 mM)을 작동하는 솔루션 발생하는 10 ㎖까지 DDH 2 O를 추가합니다. </li><li> 4 ° C에서 스톡 -20 ° C에서 솔루션과 작업 솔루션을 계속; 일주일 내 사용합니다. </li><li> 모세관 력에 의해, 착색 음식물 용액과 동시에 열 모세관까지 채운다. 자당 용액 (용액에 45 ° 각도로 모세 혈관을 들고)로 모세 혈관의 끝을 삽입합니다. 액체가 최고 모세관 (5 μL) 마크에 도달하면 중지하고 휴지와 외부와 내부를 초과 솔루션을 제거합니다. </li></ol> 4. 조립 및 모세관 공급 분석을 수행 <ol><li> 금식이 필요하지 않은 경우, 눌러 또는 블로우 파이프에 의해 분석에 대한 실험 파리를 전송합니다. 증발을 정량화 파리없이 세 가지 제어 튜브를 포함해야합니다. </li><li> 외부 오프닝의 하나를 닫는 - (20 μL 볼륨 2) 조심스럽게 피펫 팁을 제거GS, 먼저 채워진 유리 모세관, 하단 끝을 삽입합니다. 다시 옆에있는 모세관에 피펫 팁을 배치하여 모세관을 고정합니다. 몇몇 식품 용액이 테스트되는 경우, 따라서,이 절차를 반복한다. </li><li> 장소 모세관 음식 소스가 서로 다른 높이에 위치 된 경우 발생할 수있는 바이어스 방지하기 위해 동일한 수준의 모든 유리 병 안에 종료 (3 - 뚜껑 4 센티미터); 실수 필터 종이 식품 소스 상이한 점도를 터치하여 누설 모세관 않도록 여과지까지의 거리를 유지한다. </li><li> 마커 펜 (시작 마크)를 사용하여 착색 된 액체의 상단부 라벨. 그들 개별적 색 스트라이프 또는 코드를 사용하여 라벨, 상이한 모세관 식별 할 수 있도록한다. </li><li> 그리드 화 속지와 플라스틱 상자 안에 여러 준비 CAFE 분석을 놓고 실험실 조건에서 또는 온도 -, 라이트 - 습도 조절 CLIM에서 안전한 위치로 (그림 2A) 상자를 전송실험 기간 (예 : 3 시간 또는 일)에 대한 : 챔버 (25 ° C, 상대 습도 60 %, 12 시간 / 12 시간 명암주기 매개 변수)를 먹었다. </li><li> 분석은 몇 일 동안 수행되는 경우 아래 필터 종이 밖으로 건조 된 바와 같이, 스폰지 마개 (100 μL)를 통해 매일 24 시간이 분석의 내부 습도를 일정하게 유지하기 위해 신선한 물을 적용합니다. 습도 장치로 30 ㎖ DDH 2 O 가득 네 개의 분리 된 유리 병 (8 cm 높이 3.3 cm 직경)를 사용하고 플라스틱 상자에 CAFE 분석 옆에 배치합니다. 실험 (그림 2A) 중에 습도 제어 환경을 만들기 위해 플라스틱 상자 커버를 사용합니다. 참고 : 넓은 다양성은 실험실 조건에서 발생; 그러나, (a 교실 예.)을 실온에서 카페 분석을 수행 가능하다. (플라스틱 상자 물 튜브와 커버를 충전 또는 젖은 스폰지 마개없이 여과지) 가습 장치의 사용은 고도의 (증발을 감소 권장 <st룽&gt; 그림 2B). </li><li> 장기 실험을 매 24 시간 동안 갓 채워진 사람과 모세 혈관을 교체합니다. 각 24 시간 간격 전에 죽은 파리의 메모를 확인하고 다음 기간 동안 비행 당 소비를 계산하는 라이브 파리의 수를 사용합니다. 메 니스 커스의 감소 (5.1 참조) 측정 후 이전의 모세 혈관을 폐기하십시오. 참고 : 우리는 거의 죽은 파리를 볼 수없는 3 시간의 실험이 진행되는 동안. 3 죽은 파리 - 4 일 연구 기간 동안 우리는 일반적으로 하나를 찾을 수 있습니다. </li><li> 카페 분석이 직립 위치에있는 동안 분석 또는 모세관을 교체하기 전에 끝에서, 마커 펜으로 모세관 (마크 끝)의 하부 메 니스 커스 (meniscus)를 표시합니다. 마크 단부 (개시 마크) 초기 마크 아래가 아닌 경우 데이터를 버린다. 이 메 니스 커스 변경 될 수 있습니다로, 뚜껑을 제거하지 마십시오. </li><li> 조심스럽게 분석에서 모세 혈관을 제거하고 데이터 수집을 위해 저장합니다. discar 않을 경우 모세관 내의 액체가 하부 끝에 도달하는지 확인D 데이터, 음식이 파리에 액세스 할 수 없습니다 있다는 사실. 그룹으로 바이알 당 모든 모세 혈관을 수집합니다. 탈출 파리를 방지하기 위해 모든 입구에 포경 피펫 팁을 삽입합니다. 설치를 해체하고 더 사용하기 위해 실온에서 비누 목욕 및 건조 하룻밤에 유리 병, 뚜껑 및 스폰지 마개를 씻는다. 주 : 파리 더 분석 한 후 분석 될 수있다. 눈으로 또는 해부 현미경으로 음식 섭취를 확인합니다. </li><li> 적어도 세 가지 다른 일에 동일한 유전자형과 반복 실험. </li></ol> 5. 데이터 수집 및 분석 <ol><li> 캘리퍼스 또는 통치자를 사용하여 모세관에 마크 시작과 마크 끝 사이의 거리를 측정한다. 스프레드 시트에 직접 데이터를 전송하는, 디지털 캘리퍼스 (도 1E)에 접속 된 USB (범용 직렬 버스)를 사용한다. 측정 후 모세 혈관을 폐기하십시오. </li><li> 모세관 크기에 대한 계정 음식 섭취 또는 증발을 계산합니다. 예를 들면, 캡을 고려길이 73mm 인 음식 솔루션의 5 μL를 포함 illary. 메 니스 커스에서 14.6 mm의 감소는 1 μL 솔루션의 흡수를 반영한다. 다음 식을 사용하여 음식물 섭취량을 계산한다 : 식품 섭취 (μL) = 측정 거리 (mm) / 14.6 mm </li><li> 음식 섭취에 증발의 효과를 제외하려면, 파리없이 세 (최소) 제어 튜브의 증발을 의미 계산합니다. 파리에 의해 식품 소비에 대해 얻은 값에서이 평균 값을 뺍니다. </li><li> 비행 당 총 소비량을 확인하려면 다음 수식을 사용하여 식품 소비 (μL) = (식품 섭취 [μL] - 증발 손실 [μL]) / 유리 병에 파리의 총 수입니다. 장기적 실험은 24 시간주기의 시작 전에 살아있는 파리의 수를 사용한다. </li><li> 이러한 암수 파리와 같은 신체 크기의 차이를 설명하기 위해, 체중 먹이 섭취량 (식품 μL / mg의 플라이)을 정상화. </li><li> 데이터 분석을위한 통계 소프트웨어를 사용합니다. 규범에 대한동맹 분산 된 데이터를 사용 학생의 T의 -tests 두 비행 그룹 간의 차이를 결정하고, 두 개 이상의 그룹에 대한 사후 Tukey에 크레이머 테스트와 ANOVA (분산 분석)를 사용합니다. 선택의 상황에서, 비모수 하나의 샘플 기호 테스트를 사용하여 임의의 선택이 차이점을 분석한다. </li></ol>

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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

이 보고서는 기술 설치 및 실험실에서의 성공적인 성능에 초점을 맞추고, 단계별 방식으로 CAFE 분석에 대해 설명합니다. 단순하기 때문에,이 분석은 학교 교육적 실험으로 사용될 수있다. 예제는 분석이 짧고 긴 기간 (일 시간)을 통해 초파리 melanogaster의 음식 감지, 환경 및 소비의 조사를 할 수 있음을 보여준다. 카페 분석은 식품 의약품 소비 중독 에너지 항상성 및 공급 (16)의 연결을 제어, 18, 24, 25을 포함한 환자를 조사 분야에서 널리 사용되고있다. 카페 분석에서 실험 파리는 성공적으로 구하고, 감지 및 운동과 같은 음식을 얻기 위해 여러 가지 작업을 수행해야합니다; 이러한 작업을 수행 할 수없는이 감소 소...

식사는 필수적이다; 그러나, 폭식증, 거식증 또는을 강요을 과식하는 일반적인 경향과 같은 섭식 장애의 결과로 음식 섭취의 규제 완화는 개인과 사회 1, 2, 3의 요금으로 제공됩니다. 본 연구의 목적은 음식 섭취의 조절 메커니즘을 밝히기 위해서 무질서 형성을 회피하기위한 전략을 제공하는 것이다. 포유 동물 유기체 모델을 사용하여 많은 연구 장애 4,5,6 먹는 회로 및 신호 시스템의 역할에 새로운 통찰력을 제공했다. 그럼에도 불구하고, 이러한 질환의 기초가되는 신경 세포 및 분자 기지에 대한 우리의 지식은 완전한에서 멀리 남아있다. 최근 몇 년 동안, 과일 초파리 melanogaster의이 metabolis의 규제에 기본 기계적인 통찰력을 탈피하기위한 가치있는 모델 시스템이되었다 비행m 7, 8, 9. 노랑 초파리의 모세관 공급 장치 (CAFE) 분석은 검정 파리 10, 11 Dethier에 의해 이전 작품에서 영감을 2007 년 모어 Benzer의 실험실에서 설립되었다. 카페 분석은 가능한 직접 초파리에서 음식 섭취를 측정하기 위해 만든. 이 행동 테스트 시스템에서, 파리는 유리 병 내부에 배치 그레이드 유리 모세관에서 제공하는 액체 음식을 먹고. 모세관 메 니스 커스의 감소는 증발 및 음식 소비를 통해 음식 용액의 손실을 나타낸다. 파리없이 튜브에 의해 증착 속도를 결정하는 것은 음식 섭취의 정확한 정량을 허용한다. 카페 분석은 초파리에서 먹이를 측정하는 데 사용되는 여러 행동 패러다임 중 하나이며 연구자들은 특정에 가장 적합한 하나를 선택해야문제. 다음과 같은 점을 고려해야 특정 분석법을 사용하도록 결정 : 제공된 식품의 성질; 공급 조건; 섭취 또는 영양소의 흡수 및 조사 식품 소비 식품에 대한 응답의 측정. 이 보고서에 설명 된대로 CAFE 분석은 직립 공급 조건에서 액체 음식 소스의 음식 섭취를 다음에 이상적이다. 또는 음식 섭취는 유리 병이나 접시에 색깔의 음식 소스에 비행 그룹에 대해 측정 할 수있다. 파리 정상적으로 죽거나 마취 먹이 섭취 후 염료의 양은 분석법 또는 염색 복부 육안으로 판정한다. 파리는 30 분 섭취 후 섭취 한 음식을 배설하기 시작, 따라서이 방법은 지속적으로 더 이상 공급의 분석을 위해 사용하기 어려운 13, 12 행동들. 반면 파리는 때 흡수 염료 그대로 유지된다방사성 트레이서들과 사용되며 동위 원소들의 소비 섬광 계수기 (14), (15)에서 획득된다. 플라이 소화 시스템에 의해 방사성 표지의 흡수는 장기적으로 음식 섭취 측정이 가능하게하지만, 때문에 비 흡수 및 배설 추적 분자의 소비의 과소 평가로 이어질 수 있습니다. 또 다른 방법은 melanogaster의 일반적으로 음식 섭취 (16)에 대해 발생하는 코 확장 응답 (PER)이며, 초파리의 음식에 대한 반응을 측정합니다. 이 우아한 방법은 음식의 자극에 대한 초기 반응을 측정하지만, 섭취의 양을 기록하지 않습니다. 음식 섭취를 동적으로 공급 (17) (18)의 조절에 중요한 여러 포스트 소화 피드백 신호를 이용하여 공급 중에 조절된다. 몇 번의 시도는 PER 분석에서 반 자동화 데이터 수집에 최근되었습니다 <s클래스 = &quot;외부 참조&quot;&gt; 19, 20입니다. 당은 전기 패드 또는 전극의 조합에 의해 감지되고 컴퓨터를 통해 계산됩니다. 방사성 동위 원소의 흡수와 PER 분석을 결합하면이 분석은 양 먹이의 차이 (18)를 검출하는 낮은 감도에 의해 제한되는 것으로 나타났습니다. 비행은 유리 모세관을 사용하여 수동으로 공급하는 수동 급지 분석 (MAFE) (21)는, 최근에 고정화 한 즉석 식품 섭취량을 측정하기 위해 개발되었다. MAFE 분석은 개시 꼴 및 공급의 간섭을 제거하고, PER의 시간 (초)의 해상도 및 개시가 있고 음식 소비 분석 독립적으로 모니터링 할 수있다. 그러나 상기 방법은 상기 플라이 고정화 (예 운동 동기)이 아직 조사해야 급전 동작의 특정 측면에 영향을 미친다. 초파리 나 음식 소비를 측정하기위한 다른 분석의 우수한 비교 후기lanogaster은하고, 가장 적합한 하나를 찾는 연구에 도움 데쉬와 마르크스하여 보고서를 볼 수 있습니다 13, 22. 카페 분석은 위에서 설명한 다른 분석의 단점 중 일부를 방지하고 음식 섭취의 신뢰성있는 측정과 사용의 단순성을 결합한다. 여기서, 카페 분석의 상세한 설명을 제공하고, 우리는 증발을 감소시키기 위해 간단한 설정 변경을 보여준다. 두 음식 선택 분석 (단기 및 장기)과 파리의 설탕 섭취를 포함하는 대표적인 결과가 증명된다. 토론에서 우리는 CAFE 분석을 수행하고 잠재적 인 한계를 강조하기 위해 다른 방법으로 우리의 기술 방법을 비교한다.

<table><tbody><tr><td>바이알(육종)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>960177</td><td></td></tr><tr><td>www.greinerbioone.com 바이알(CAFE 분석)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>217101</td><td>www.greinerbioone.com</td></tr><tr><td>Lid-CAFE 분석</td><td>워크샵</td><td>&ndash;</td><td>&ndash;</td></tr><tr><td>플라스틱 상자, 낮은 벽</td><td>Plastime</td><td>353</td><td>www.plastime.it</td></tr><tr><td>플라스틱 상자 워크샵 용 커버</td><td></td><td>;</td><td>&ndash;</td></tr><tr><td>모세혈관</td><td>BLAUBRAND&nbsp;</td><td>REF 7087 07</td><td>www.brand.de</td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td>Greiner Bio-One</td><td>771290</td><td>www.greinerbioone.com</td></tr><tr><td>여과지 서클</td><td>Whatman</td><td>10 311 804</td><td>www.sigmaaldrich.com</td></tr><tr><td>D(+)-Sucrose</td><td>AppliChem</td><td>57-50-1</td><td>www.applichem.com</td></tr><tr><td>에탄올 절대</td><td>VWR 화학 물질</td><td>20,821,330</td><td>www.vwr.com</td></tr><tr><td>식용 색소(빨간색, E124)</td><td>Backfun</td><td>10027</td><td></td></tr><tr><td>www.backfun.de 식품 색소 (파란색, E133)</td><td>Backfun</td><td>10030</td><td>www.backfun.de</td></tr><tr><td>비누 용액 (CVK 8)</td><td>CVH</td><td>103220</td><td>www.cvh.de</td></tr><tr><td>디지털 캘리퍼스</td><td>GARANT</td><td>412,616</td><td>www.hoffmann-group.com</td></tr><tr><td>바이알 (번식용)</td><td></td><td></td><td>높이 9.8 cm, 지름 4.8 cm&nbsp;</td></tr><tr><td>바이알(CAFE 분석)</td><td></td><td></td><td>높이 8cm, 지름 3.3cm</td></tr><tr><td>Lid-CAFE 분석</td><td></td><td></td><td>대학 작업장에서 제작, 기술 도면 제공 
<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/55024/Diegelmann-Cafe-Lid-technical-drawing.pdf" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a></td></tr><tr><td>플라스틱 상자, 낮은 벽</td><td></td><td></td><td>플라스틱 그리드 인레이는 8 x 10 바이알 위치에 맞게 맞춤 제작되었습니다&nbsp;</td></tr><tr><td>플라스틱 상자</td><td></td><td></td> 덮개 <td>크기 (37 x 29 x 18 cm)</td></tr><tr><td>Capillaries</td><td></td><td></td><td>DIN ISO 7550 규범,&nbsp; IVD-가이드라인 98/79 EG, 끝 광택</td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td></td><td></td><td>외부 원용 피펫은 뚜껑에 따라 절단됩니다.</td></tr><tr><td>여과지 원</td><td></td><td></td><td>직경 45mm는 사용된 바이알을 접으면 잘 작동합니다.</td></tr><tr><td>D(+)-수크로스:</td><td></td><td></td><td>유해하지 않음</td></tr><tr><td>에탄올 절대</td><td></td><td></td><td>고인화성 액체 및 증기</td></tr><tr><td>식용 색소(빨간색, E124)</td><td></td><td></td><td>명시되지 않음</td></tr><tr><td>식용 색소 (파란색, E133)</td><td></td><td></td><td>명시되지 않음</td></tr><tr><td>비누 용액 (CVK 8)</td><td></td><td></td><td>냄새 중성 비누</td></tr><tr><td>디지털 캘리퍼스</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>표준 플라이 식품</td><td></td><td></td> <td>(20L 용)</td></tr><tr><td>한천</td><td></td><td></td><td>160g</td></tr><tr><td>맥주 효모</td><td></td><td></td><td>299.33g</td></tr><tr><td>옥수수 가루</td><td></td><td></td> : 당밀 <td>1,200g</td></tr>, <tr><td></td><td></td>프로피온산 1.6L, 프로피온산 <td></td><td></td> 57.3mL</tr>, <tr><td>니파진 30%</td><td></td><td></td><td>160mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

모세관 공급 분석은 식품 섭취를 측정<em&gt; 노랑 초파리</em

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

대부분의 동물에게 먹이는 것은 생존을 확보하는 데 필수적인 행동이며 발달, 운동, 건강 및 번식에 영향을 미칩니다. 따라서 올바른 종류와 양의 음식을 섭취하는 것은 삶의 질에 큰 영향을 미칩니다. 섭식 행동에 대한 연구는 실제 섭식을 보장하는 기본 과정에 초점을 맞추고 내부 에너지 항상성을 조절하는 요인의 역할과 의사 결정의 뉴런 기반을 밝힙니다. 모델 유기체인 Drosophila melanogaster는 단일 뉴런을 라벨링하고 조작하기 위한 유전적으로 추적 가능한 다양한 도구를 사용하여 뉴런 네트워크를 매핑하고 음식 섭취 조절과 관련된 분자 신호 캐스케이드를 식별할 수 있습니다. 이 보고서는 CApillary FEeder 분석법(CAFE)을 시연하고 몇 시간에서 며칠에 이르는 기간 동안 파리 그룹의 음식 섭취량을 측정하는 방법을 보여줍니다. 이 사용하기 쉬운 분석은 파리가 자유롭게 접근하고 먹을 수 있는 액체 음식으로 채워진 유리 모세관으로 구성되어 있습니다. 분석에서 식품 소비량은 간단한 측정 도구를 사용하여 정확하게 측정됩니다. 여기에서는 CAFE 분석의 설정부터 성공적인 실행까지의 방법을 단계별로 설명하고 통제된 조건에서 파리 그룹의 먹이 섭취량을 분석하기 위한 실용적인 예를 제공합니다. 독자는 분석의 가능한 제한 사항을 안내받고 D. melanogaster의 다른 공급 분석과 비교하여 이 방법의 장점과 단점을 평가합니다.

승 1118 유전자형의 파리는 분석이 수행되는 방법을 설명하는 데 사용됩니다. 승 1118 돌연변이는 일반적으로 트랜스 제닉 라인들을 생성하고, 도입 유전자의 유전 적 배경에 흰색 유전자 표시 제어하기 위해 사용된다. 일반적으로, 행동 실험을 위해, 모든 유전자 변형 라인은 실험 대조군으로 사용되는 것과 동일한 w 1,118 재고에 다섯 세대에 backcrossed된다. 우리는 여러 실험을 보여 변형 된 셋업 증발 손실 비교 단기 음식 선택 실험 장기적인 음식 섭취 실험 다른 자당에 희석 실험. 증발 카페 분석의 성능에 중요한 역할을한다. 우리는 증발 감소 우리의 분석에 추가 방법을 포함 : ⅰ) 중앙 스폰지 마개가 물 24 시간마다 리필...

CApillary FEeder (CAFE) 분석은 음식 섭취의 기저에 있는 메커니즘을 조사하기 위한 간단하고 예산 친화적이며 매우 신뢰할 수 있는 방법입니다. 다재다능한 유전자 모델 유기체인 Drosophila melanogaster와 함께 사용되는 이 제품은 음식 섭취의 조절 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있는 강력한 수단을 제공합니다.

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

CApillary FEeder 분석의 전반적인 목표는 성충 파리의 액체 음식 섭취를 관찰하고 측정하는 것입니다. 이 방법은 실제 섭식 행동이 어떻게 시작되고 음식 섭취가 어떻게 종료되는지와 같은 대사 연구의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 사용하기 쉽고 신뢰성이 높다는 것입니다.일관된 결과를 위해 몇 가지 준비 단계를 신중하게 실행해야 하므로 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다. 실험을 시작하려면 초파리 멜라노가스터 배양 플라스틱 바이알을 구하고 O-링이 포함된 제조된 플렉시글라스 뚜껑으로 밀봉합니다. 1마이크로리터 표시가 있는 5마이크로리터 마이크로 모세관을 사용하여 액체 식품을 제시합니다.2-20 마이크로 리터 피펫 팁의 상단을 잘라 내고 팁을 뚜껑 전체에 삽입하여 원뿔형 구멍에 모세관을 배치합니다. 절단되지 않은 2-20 마이크로리터 피펫 팁을 동일한 구멍에 삽입하여 파리가 탈출하는 것을 방지합니다. 뚜껑의 중앙 구멍을 통해 트랩 또는 블로우 파이프로 8마리 또는 20마리의 파리를 적재하고 스폰지 마개로 구멍을 닫습니다.다음으로, 준비된 여러 바이알을 격자 무늬 상감이 있는 플라스틱 상자에 넣어 안전하게 취급합니다. 번식 조건을 제어하기 위해 각 실험 그룹당 35마리의 처녀 암컷과 15마리의 수컷을 50ml의 파리 먹이가 들어 있는 플라스틱 배양 바이알에 넣습니다. 파리가 처음 3일 동안 알을 낳도록 한 다음 성충을 신선한 식품 유리병으로 옮기고 이틀 더 알을 낳게 합니다.2일 후 전송을 반복합니다. 7일째에는 성파리를 버립니다. 다음으로, CO2 패드를 사용하여 2-3일 된 성충 파리를 마취하고 1.5ml 플라스틱 튜브에 성별별로 분류된 100마리의 파리를 수집합니다.표준 실험실 저울로 무게를 측정하십시오. 성별로 정렬된 최소 4개의 독립적인 파리 그룹의 습식 무게를 결정하고 이 무게를 사용하여 밀리그램 파리당 마이크로리터 음식 소비량을 계산합니다. 3시간 분석을 위해 2개의 채워진 모세혈관에 20마리의 파리를 사용합니다.장기 실험의 경우, 4개의 모세혈관이 채워진 8마리의 파리 그룹을 사용합니다. 최대 10개의 모세관을 미리 준비된 유색 식품 용액으로 동시에 채웁니다. 모세혈관을 식품 용액에 삽입한 다음 45도 각도로 기울여 충전을 가속화합니다.액체가 모세관의 상단 5마이크로리터 표시에 도달하면 중지합니다. 티슈 페이퍼로 모세관 외부와 내부의 과도한 용액을

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 착색된 사료를 사용하여 먹이를 모니터링하고 첨가된 화합물이 먹이 활동에 미칠 수 있는 영향을 모니터링하는 초파리에 대한 먹이 분석을 설명합니다. 예시 프로토콜은 여러 내분비 교란 화학물질(EDC)의 효과를 테스트합니다.

수유 테스트: Drosophila melanogaster의 수유 선호도 평가

이 비디오는 선호 물질을 섭취한 후 파리의 복부 착색을 평가하여 맛이 다른 착색 용액에 대한 매력 또는 회피를 측정하는 데 사용되는 행동 방법인 미각 선호도 분석에 대해 설명합니다. 주요 프로토콜은 다양한 자당 농도의 용액에 대한 파리의 선호도를 측정하는 데 사용되는 절차를 보여줍니다.

Taste Preference Assay: 초파리의 섭식 행동을 측정하는 방법

이 동영상은 제한되지 않은 초파리의 먹이 섭취와 선호도를 측정하는 행동 방법인 CApillary FEeder 또는 CAFE 분석에 대해 설명합니다. 주요 프로토콜은 음식을 전달하고 섭취량을 추적하는 데 사용되는 액체로 채워진 모세혈관에서 증발을 최소화하면서 분석을 수행하는 방법을 보여줍니다.

CApillary FEeder (CAFE) 분석: 초파리의 식품 소비 및 선호도를 추적하는 방법

이 비디오 문서에서는, 우리는 초파리 비행 성인 과일의 후각에 의존 식품 검색 행동에 대한 배고픔이나 포만감의 효과를 측정 할 수있는 자동화 된 분석을 설명합니다.

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에 초파리

미각은 유익한 물질에 대한 끌림과 독성 물질의 회피를 용이하게 하는 중요한 감각 과정입니다.  이 프로토콜은 주어진 화합물에 대한 초파리 미각 선호도를 결정하기 위한 간단한 섭취 분석을 설명합니다.

성인을위한 맛의 기본 설정 분석<em&gt; 초파리</em

염색 음식 양이 많은 음식 섭취 량 분석 제공 하는 강력한 고 높은 처리량 먹이 동기 평가를 의미 합니다. 결합 식품 소비 분석 결과 thermogenetic 및 optogenetic 스크린은 성인에서 식욕을 기본 신경 회로 조사 하는 강력한 접근 방식을 초파리 melanogaster.

양이 많은 음식 섭취 량 분석을 결합 하 고 강제로 초파리 에서 식욕을 공부 하는 뉴런을 활성화

여기에 설명된 프로토콜은 다른 다량 영양소 품질의 식단에 노출된 Drosophila 멜라노가스터 애벌레에 의해 정의된 시간 간격 내에 섭취되는 음식의 양을 정량화할 수 있도록 하는 프로토콜이다. 이 소는 신경 열유전학 스크린의 맥락에서 행해질 것입니다.

드로소필라 애벌레를 사용하여 열유전학 신경 화면에서 다량 영양소 섭취의 정량화

우리는 파리에 대한 두 선택 먹이 분석에 대한 프로토콜을 제시한다. 이 수유 분석은 빠르고 실행하기 쉬우며 소규모 실험실 연구뿐만 아니라 파리의 고처리량 행동 스크린에도 적합합니다.

드로소필라의 신속한 식품 선호 분석

마이크로 플레이트 피더 분석법은 Drosophila에서액체 음식 소비를 정량화하기 위한 경제적이고 높은 처리량 방법을 제공합니다. 3D 프린팅 장치는 파리가 트레이서 염료로 공급 용액을 소비하는 1536웰 마이크로 플레이트에 파리가 보관되는 96웰 마이크로 플레이트를 연결합니다. 용액 량 감소는 분광계로 측정됩니다.

드로소필라에서 소비의 정량화를 위한 높은 처리량 마이크로 플레이트 피더 분석

이 프로토콜은 전통적인 포유류 모델에 대한 대안으로 운동 기능 장애의 정량화를 통해 초파리의 신경 독성을 평가하기 위한 고처리량, 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 민감하고 재현 가능하며 윤리적으로 유리한 모델을 사용하여 제약 화합물, 환경 제제 또는 유전자 변형의 신경독성 영향을 평가하는 것을 목표로 합니다.

신경독성에 대한 판독으로서의 Drosophila melanogaster 의 운동 기능 장애에 대한 행동 분석

학습하세요 Drosophila melanogaster의 식품 섭취를 측정하는 CAFE 분석법을 통해 대사 연구에서 먹이 행동의 시작과 종료 메커니즘을 탐구하는 방법을. 이 기술은 신경과학 및 행동 연구에 신뢰할 수 있는 플랫폼을 제공합니다.

모세관 공급 분석은 식품 섭취를 측정

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