Name: 쥐의 전체 두께 피부 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: 배우세요 쥐의 전체 두께 피부 이식술을 통해 동종면역 반응 및 이식편 거부 반응을 연구하는 방법을. BALB/c에서 C57BL/6으로의 이식 모델은 재현성이 높고 직접 관찰로 모니터링이 용이하여 면역학 연구에 필수적인 도구입니다.

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이 작품은 NIH 교부금 R01AI077610에 의해 투자되었다.

모든 절차는 관리 및 국립 보건 연구소 (NIH)의 실험 동물의 사용에 대한 가이드에 따라 실시하고, 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회 (JHUACUC)에 의해 승인되었다. 구체적인 절차는 승인 ACUC 프로토콜 MO13M292 및 MO13M370 하에서 수행 하였다. 1. 기증자 피부 수확 <ol><li> (- 마우스 콘을 통해 2 % 1에서 유지 보수, 4 %에서 유도 기화기) 이소 플루 란과 기증자 마우스를 마취. 마취의 깊이를 모니터하기 위해 발가락 핀치 철수 반사를 사용합니다. </li><li> 전기 면도기를 사용하면 동물의 뒤쪽을 면도하고 (예 Betadine) 10 %, 포비돈 요오드로 소독. </li><li> 유륜 결합 조직의 수준에서 무딘 절개와 멸균 가위, 장갑, 및 무균 기술, 목에 엉덩이에서 수확 기증자 다시 피부를 사용. </li><li> 수확 후 자궁 전위에 의해 동물을 안락사피부 이식. </li><li> 현미경, 미세 건 절단술 가위를 사용하여 다시 피부의 결합 조직, 지방 조직 및 panniculus의 카르노 서스를 구분합니다. panniculus의 카르노 서스 피부 경련의 움직임을 담당하는 얇은 투명 근육이다. </li><li> 멸균 악기의 기술을 사용하여, 15 mm X 15 mm 이식 침대로 10 mm × 10-mm에는 후면 피부에서 15 mm X 15 mm 이식을 잘라. </li><li> 얼음에 페트리 접시에 멸균 인산 완충 생리 식염수 (PBS)로 적신 거즈에 이식을 저장합니다. 참고 : 8-10 이식 한 기증자 마우스에서 얻을 수 있습니다. </li></ol> 2.받는 사람 피부 이식 <ol><li> (- 마우스 콘을 통해 2 % 1에서 유지 보수, 4 %에서 유도 기화기) 이소 플루 란과받는 사람 마우스를 마취. 마취의 깊이를 모니터하기 위해 발가락 핀치 철수 반사를 사용합니다. </li><li> 수술 후 통증 완화를 위해 부 프레 놀핀의 0.02 ㎎ / ㎏ BW를 관리 할 수 ​​있습니다. </li><li> 동물의이면 측 면도 여기서 그래프트 WILL 삽입 될 10 % 포비돈 요오드 소독. </li><li> 가위를 사용하여 피부의 X 15 mm 광장 15 mm에 10 mm × 10-mm를 잘라. 결함 크기보다 그래프트 (10 %) 약간 커야한다. 같은 피상적으로 가능한 한 컷. panniculus의 카르노 서스과 혈관을 유지하기 위해주의하십시오. panniculus의 카르노 서스는 이동성과 그것을 피상적 실행 혈관에 의해 기본 밴드 구별 할 수 있습니다. </li><li> 가장자리를 따라 주름을 방지 그래프트 침대에 이식을 배치합니다. </li><li> 모서리에 각 모서리의 중간에 8 봉합을 배치합니다. 각각의 봉합사를 들어, 주변받는 사람의 피부 아래에 침대 이식의 panniculus의 카르노 서스를 통해 다음 이식을 통해 바늘을 통과. </li><li> 마취 마스크를 제거하고 동물이 접착 붕대를 적용하기 전에 마취에서 부분적으로 복구 할 수 있습니다. </li><li> 이식 접혀 거즈와 접착 붕대에받는 사람 마우스를 감싸. 절단, 두 붕대를 결합하여 붕대를 확인접착제의 하나의 부분과 함께 두 흡수 패드를 배치. </li><li> 붕대는 흉부 여행을 제한하고 호흡을하지 않는 것을 보장하기 위해 복구 중에 밀접하게 마우스를 모니터합니다. 호흡 속도가 감소 또는 동물이 얕게 말하다 또는 숨 시작하면, 붕대를 제거합니다. </li></ol> 3. 수술 후 케어 <ol><li> 감염 예방을위한 수술 후 enrofloxacin 5 ㎎ / ㎏을 관리 할 수 ​​있습니다. </li><li> 완전히 마취에서 회복 될 때까지 전자 레인지 가열 패드를 통해 깨끗한 케이지에 이식 된 마우스를 놓습니다. </li><li> 주택 시설에 반환에 수술 전에 1 시간 동안 마우스를 관찰합니다. </li><li> 세븐 일 수술 후, 단계 2.1에서와 같이 마우스를 마취. 붕대의 복부 측면을 통해 만 절단하여 붕대를 제거합니다. </li><li> 관찰하고 가피, 수축, 또는 경도의 증상에 대해 다음 날에 이식을 만져. 존재하는 경우, 이식은 적절한 vasculariza를 달성하지 않을 수 있습니다기와는 기술적 인 실패로 간주되어야한다. </li><li> 거절의 흔적을 매일 모니터링합니다. 이식 조직의 ≥90 %가 괴사 될 때 거부 이식을 고려한다. </li><li> 거부 된 동물을 안락사 및 분석을 수확. </li></ol>

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</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

토끼와 생쥐에서 다음 인간 연구에서 제 메다에 의해 소개 된 이후, 피부 이식은 동종 면역 반응 6,7의 연구를위한 귀중한 모델이되고있다. 이 논문에서는 상하 다시 피부를 이용한 대규모의 비 혈관 전층 피부 이식 모델을 제시한다. 꼬리 피부 또는 이식 조직 공급원으로서 마우스 귀 피부 사용을 포함하는 다양한 다른 방법은, 8,9까지보고되고있다. 이러한 모델은 단순 기술의 뚜렷한 장점을 제공하고 높은 볼륨 처리량을 허용한다. 꼬리 피부 이식의 표피 랑게르한스 세포 및 피부 수상 세포의 상대적인 부족하지만, 특히 작은 MHC 불일치 모델 (10, 11)에서 지연된 거부뿐만 아니라 용이 그래프트 수용에 관해서는 호스트에 의해 리드. 따라서, 전체 두께 트렁크 피부 이식은 T 세포 미디어를 연구하는보다 강력한 모델이 더 적합한 것으로 간주됩니다테드는 거부 (12) 급성. 또한, 우리의 모델은 간단한 기술을...

장기 이식은 말기 장기 부전 환자에 대한 선택의 치료이며, 결과는 수술 절차 및 면역 억제 프로토콜의 발전에 현저하게 향상되었습니다. 그러나, 장기간의 면역 억제는 상당한 부작용과 연관 내성을 증진 새로운 전략의 개발은 현대 이식 연구의 목표로 남아있다. 많은 동물 모델은 이식 거부 반응의 메커니즘을 연구하는 면역 억제가 이식 거부 반응을 방지하기위한 장기 공차 1-3 촉진 접근 테스트 이식에 기초 연구 개발되어왔다. 마우스 모델에 의한 진단 및 치료 항체와 잘 정의 된 근친과 유전자 변형 종자의 독점과 광대 한 가용성 면역 학적 연구의 주류가되었다. 피부 이식은 특수 미세 수술 기술을 필요로 할 수없는 간단한 절차입니다쉽게 수술 후 모니터링 될 수있다. 함께 찍은, 마우스 피부 이식은 이식 거부 4,5 동안 항원 전달 세포 인신 매매, 조직 파괴를 포함하여 동종 응답에 관련된 여러 측면을 연구하는 뛰어난 도구가되고있다. 여기서는 마우스 모델을 이용하여 전체 두께 피부 이식을위한 단계별 과정을 보여, 우리는 이식 된 피부의 성공적인 생착에 필요한 중요한 단계를 설명한다.

<table><tbody><tr><td>스트레이트 마이크로 집게</td><td>시그마</td><td>F4017</td><td></td></tr><tr><td>곡선 마이크로 집게</td><td>Aesculap</td><td>BD333R</td><td></td></tr><tr><td>곡선 스티븐스 테노 토미 가위</td><td>Aesculap</td><td>BC905R</td><td></td></tr><tr><td>Mayo 해부 가위</td><td>시그마</td><td>S3146</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>Aesculap</td><td>BM563R</td><td></td></tr><tr><td>멸균 거즈</td><td>Covidien</td><td></td><td></td>441218</tr><tr><td>6-0 나일론 봉합</td>사 <td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 스트립 밴드&#45; 에이드</td><td>존슨 & 존슨</td>: <td>약국에서 획득</td>, 10cm 페트리 접시, Fisherbrand, FB0875712 PBS 품질, 생물학적 119069131, 부프레노르핀, DEA 번호가 필요합니다.<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> 병원 약국</td></tr><tr><td>Enrofloxacin</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr>에서 획득</tbody></table>

쥐의 전체 두께 피부 이식

Murine Full-thickness Skin Transplantation

쥐의 전체 두께 피부 이식은 동종 반응과 이식 거부 반응을 연구하는 잘 설립 생체 내 모델입니다. 인간에게 제한된 응용 프로그램에도 불구하고, 마우스의 피부 이식 널리 이식 연구에 이용되고있다. 절차 배우고 수행하는 것이 용이하고, 섬세한 미세 수술 기술도 광범위한 훈련을 필요로하지 않는다. 또한,이 모델의 이식 거부는 매우 재현 면역 반응에서 발생하고 쉽게 직접 검사 및 촉진에 의해 모니터링된다. 또한, 기증자 일치 또는 타사 피부 이식 2 차 피부 이식은 다른 기증자 별 허용 오차를 평가하는 복잡하지 않은 방법으로 더 복잡한 이식 모델에서 수행 할 수 있습니다. 합병증은 낮으며 시술 후 마취 과다 복용 또는 호흡 곤란으로 제한 일반적이다. 이식 실패는 한편, GR의 불량한 제조의 결과로서 통상적으로 발생그래프트 침대에서 후미, 잘못된 위치, 또는 붕대의 부적절한 배치. 이 글에서, 우리는 생쥐에서 전층 피부 이식을위한 프로토콜을 제시하고 성공적인 수속에 필요한 중요한 단계를 설명합니다.

받는 사람 마우스의 붕대의 위치는 절차의 중요한 단계입니다. 피부 이식은 어깨, 고관절, 척추 (그림 1) 사이에,받는 사람 트렁크에 위치한다. 붕대 접혀 거즈와 두 개의 플라스틱 접착 붕대의 조합으로 이루어집니다. 받는 사람 마우스는 붕대의 중심에 거즈를 통해 아래로 이식으로 배치됩니다. 두 곡선의 마이크로 핀셋을 사용하여, 붕대의 하단부는 제 당겨하고 붕대의 상단은 복부 위에 마우스 싸여있다. 완전 불일치 모델에서, 전체 두께 피부 이식은 일반적으로 8 ~ 12 일 거부됩니다. 작은 불일치 모델에서 거부 반응을 더 변수 느리고, 피부 이식 모양 그러한 수축 또는 모발 손실 (도 2)와 같은 덜 뚜렷한 변화 특징으로한다. 급성 이식 거부 장군에서야 베드로는 이식의 부종과 홍반으로 시작된다. 이러한 ...

쥐의 전체 두께 피부 이식은 동종 설정에 거부 반응을 연구하는 잘 확립 된 모델이다. &gt; C57BL / 6 전층 피부 이식 - 여기, 우리는 BALB / C를 수행에 관련된 각 단계의 튜토리얼을 제공합니다.

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

본 비디오 논문의 전반적인 목표는 전층 피부 이식을 수행하고, 성공적인 시술에 필요한 주요 단계들을 설명하는 것입니다. 마우스 전층 피부 이식은 동종면역 반응과 이식편 거부 반응을 연구하기 위해 잘 확립된 모델입니다. 이 시술은 수행하기 쉽고, 정교한 미세수술 기법이 필요하지 않습니다.이 모델에서 이식 거부는 매우 재현 가능한 면역 반응으로 발생하며, 직접적인 관찰과 촉진을 통해 쉽게 모니터링할 수 있습니다. 또한, 공여자와 일치하거나 제3자의 피부 이식편을 이용한 2차 피부 이식을 수행하여 더 복잡한 이식 모델을 구축할 수 있으며, 이는 공여자 특이적 내성을 평가하는 대안적이고 간편한 방법이 됩니다. 텍스트 프로토콜에 따라 공여자 마우스를 마취시킨 후, 전기 면도기를 사용하여 동물의 등 부위를 제모하십시오.그런 다음, 10% povidone-iodine으로 피부를 소독합니다. 가위와 둔성 박리법을 사용하여, 유포결합조직 수준에서 엉덩이부터 목까지 공여자 등의 피부를 채취합니다. 등 피부를 현미경 아래에 두고, 미세 건절단 가위를 사용하여 결합조직과 피하근막을 피부에서 분리합니다.10 by 10에서 15 by 15 millimeter 크기의 이식 부위를 위해 등 피부에서 15 by 15 millimeter 크기의 이식편을 절제합니다. 이식편을 PBS에 적신 거즈와 함께 페트리 접시에 담아 얼음 위에 보관합니다. 본문 프로토콜에 따라 수혜 마우스를 마취합니다.이식편이 삽입될 동물의 등 쪽 측면을 삭모한 후, 수술 후 통증 완화를 위해 buprenorphine을 kg당 0.02 mg 투여합니다. 10% povidone-iodine을 사용하여 해당 부위를 소독합니다. 가위를 사용하여 가능한 한 표면적으로 10 by 10에서 15 by 15 mm 크기의 정사각형 피부를 절개합니다.panniculus carnosus와 그 표면을 따라 흐르는 혈관이 손상되지 않도록 주의하십시오. 다음으로, 가장자리를 따라 접히는 부분이 없도록 이식편을 이식 부위에 배치합니다. 그 후, 바늘을 이식편과 이식 부위의 panniculus carnosus(주변 수용측 피부 아래쪽)에 차례로 통과시켜 이식편의 네 모서리와 각 가장자리의 중간 지점에 총 8개의 봉합사를 배치합니다.접은 거즈를 두 겹으로 겹친 붕대 위에 올린 다음, 동물을 붕대 위에 이식 부위가 아래로 향하도록 배치하고 마취 마스크를 제거하여 동물이 부분적으로 회복되도록 합니다. 그런 다음 붕대로 동물을 감쌉니다. 생착 과정에서 가장 중요한 요인은 호스트 혈관이 이식편으로 자라 들어오는 이식 조직의 재혈관화입니다.panniculus carnosus의 박리 및 붕대의 정확한 배치가 가장 중요한 단계입니다. 수술 직후, 감염 예방을 위해 kg당 5 mg의 enrofloxacin을 투여하십시오. 이식된 마우스가 마취에서 완전히 회복될 때까지 깨끗한 케이지에 넣으십시오.마우스를 사육 시설로 돌려보내기 전, 수술 후 1시간 동안 관찰하십시오. 회복 과정 중에 마우스를 면밀히 모니터링하여 붕대가 흉곽의 움직임과 호흡을 제한하지 않는지 확인하십시오. 8일 후, 이식편에 가피 형성, 수축 또는 경화 징후가 있는지 관찰하고 촉진하십시오.이러한 징후 중 어느 하나라도 나타나면 이식편의 혈관 형성이 적절하게 이루어지지 않은 것일 수 있으며, 이는 기술적 실패로 간주해야 합니다. 거부 반응 징후가 있는지 매일 이식편을 관찰하십시오. 이식편 조직의 90% 이상이 괴사되면 이식편이 거부된 것으로 간주합니다.완전 불일치 모델에서 전층 피부 이식편은 보통 8~12일 이내에 거부됩니다. 부분 불일치 모델에서는 거부 반응이 더 느리고 가변적이며, 피부 이식편의 외형은 수축이나 탈모와 같이 덜 뚜렷한 변화가 특징입니다. 급성 이식 거부는 일반적으로 이식편의 부종과 홍반으로 시작됩니다.이후 여기에서 보는 바와 같이 이식편의 건조, 가피 형성 및 수축이 일어납니다. MHC 불일치 정도와 면역 억제 프로토콜에 따라, 탈모, 색소 침착, 피부 융기 및 이식편 부피의 감소와 같은 미세한 변화로 특징지어지는 아급성 과정에 의해 거부 반응이 발생할 수 있습니다. 이러한 경우, 거부 반응이 일어난 이식편은 가장자리가 고르지 않으며 윤기가 나고 하얗고 털이 없는 상태로 보입니다.BALB/c를 공여자, C57 black 6를 수혜자로 사용하여 관찰한 결과, 당분해와 산화적 인산화, 또는 글루타민 대사만을 단독으로 억제했을 때 피부 이식 생존 기간이 연장되었습니다. 그러나 세 가지 경로를 동시에 차단했을 때 이식 생존율이 유의미하게 증가했습니다. 또한, 삼중 대사 요법은 기존의 cyclosporine 또는 rapamycin보다 더 효과적이었습니다.또한, 대사 요법 군의 피부 이식 조직학적 분석 결과, 처리되지 않은 조직과 비교하여 조직 배열이 더 온전하게 유지되었으며 림프구 염증성 침윤이 더 적게 나타났습니다. 장기 이식의 결과는 수술 절차와 면역 억제 프로토콜의 발전으로 인해 현저히 개선되었습니다. 하지만 장기적인 면역 억제는 심각한 부작용을 수반하므로, 면역 관용을 촉진하는 새로운 전략이 현대 이식 연구의 목표로 남아 있습니다.T 세포 조절에 있어 대사의 중요성은 잘 알려져 있습니다. 당분해, 산화적 인산화 및 글루타민 대사를 억제함으로써 동종이식편의 생존율을 유의미하게 높일 수 있었습니다. 이러한 새로운 접근 방식은 기존 치료법보다 더 효과적이었으며, 면역 조절 및 이식에 대한 잠재적 접근 방식의 패러다임 전환을 의미합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

Allogeneic 피부 이식은 MHC - 서로 다른 기증자 항원을 분석 호스트 T 세포 응답에 대한 표준 모델입니다. 이 비디오 문서 BALB/c--&gt; C57BL / 6 피부 이식을 수행에 관련된 각 단계의 영상 자습서를 제공합니다.

Murine 피부 이식

이 보고서에서는, 우리는 3 차원의 피부 구조와 구성에 인간의 피부를 모방 모델을 재구성 설명합니다. Melanocyte 생리, 흑색증의 진행 및 피부 줄기 세포의 운명은 피부 모델을 재구성 사용하여 조사되었습니다. 모델은 또한 약물 평가를위한 잠복기 도구로 유용합니다.

3 차원의 인간 피부 모델을 재구성 : 도구는 일반 피부와 흑색증의 진행을 공부하기

이 비디오는 호중구 반응이 억제된 면역 결핍 마우스에 인간 피부를 이식하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 인간의 분할 두께 피부를 마우스의 이식 침대에 적용하고 밀봉한 다음 복구를 위해 덮는 것입니다. 결국 인간의 피부가 쥐의 피부에 달라붙어 혈관 형성과 순환을 확립하여 성공적인 피부 이종 이식을 가능하게 합니다.

마우스 모델에서 인간 피부 이식을 위한 기술

혈관은 성공적인 조직 공학의 접근 방법의 핵심입니다. 따라서, 신뢰성있는 기술은 조직 구조에서의 혈관 망의 발달을 평가하기 위해 필요하다. 여기서 우리는 시각화 및 생체 내에서 혈관 생성을 정량화하기 위해 간단하고 비용 효율적인 방법을 제시한다.

전체 피부 결함 모델은 생체의 혈관 신생을 평가하기<em&gt; 생체</em

꼬리 피부 이식은 생쥐의 동종 면역 반응 중 T 세포 의존적 거부 및 내성 유도를 연구하기 위한 강력한 모델입니다. 이 프로토콜의 장점은 경미한 침습적 수술과 수용 마우스를 희생할 필요 없이 모니터링이 용이하다는 것입니다.

마우스에 동종 CD4 T 세포 반응을 연구하기 위해 테일 피부 이식

포유류가 발달하는 동안, 임신 초기의 피부 상처는 흉터 없이 아물다. 여기에서는 E16.5(흉터가 없는) 및 E18.5(흉터가 있는) 마우스 배아의 피부 등쪽에서 흉터가 없는 태아의 상처 치유에 대한 신뢰할 수 있고 재현 가능한 모델에 대해 자세히 설명합니다.

흉터 상처 수리의 마우스 태아의 피부 모델

이 연구의 목적은 화상 상처 치유의 뮤린 모델을 개발하는 것이었습니다. 예열된 황동 템플릿을 사용하여 마우스의 등불 피부에 열 화상이 유도되었다. 연소된 조직은 유전적으로 유사한 기증자 마우스의 꼬리에서 수확한 피부 이식으로 파괴되고 겹쳐졌습니다.

동종 유전자 이식편으로 재구성된 화상 상처의 뮤린 모델

본 프로토콜은 비비만 당뇨병(NOD)-scid 인터루킨-2 감마사슬 수용체(NSG) 마우스에 인간 피부를 이식하는 방법을 설명합니다. 이식을 위한 인간 피부의 준비, 이식을 위한 마우스의 준비, 분할 두께의 인간 피부의 이식 및 이식 후 회복 절차에 대한 자세한 설명이 보고서에 포함되어 있습니다.

생체 내에서 인간 면역 반응을 조작하기 위한 이종이식 피부 모델

본 논문은 업데이트된 무균 기술, 진통 및 마취를 사용하여 이종 혈관 심장 이식을 위한 수정된 기술을 설명합니다.

무균 기술, 마취 및 진통의 현대 표준과 일치하는 수정된 쥐 이종 심장 이식 프로토콜

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

배우세요 쥐의 전체 두께 피부 이식술을 통해 동종면역 반응 및 이식편 거부 반응을 연구하는 방법을. BALB/c에서 C57BL/6으로의 이식 모델은 재현성이 높고 직접 관찰로 모니터링이 용이하여 면역학 연구에 필수적인 도구입니다.

쥐의 전체 두께 피부 이식

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