쥐의 전체 두께 피부 이식

본 비디오 논문의 전반적인 목표는 전층 피부 이식을 수행하고, 성공적인 시술에 필요한 주요 단계들을 설명하는 것입니다. 마우스 전층 피부 이식은 동종면역 반응과 이식편 거부 반응을 연구하기 위해 잘 확립된 모델입니다. 이 시술은 수행하기 쉽고, 정교한 미세수술 기법이 필요하지 않습니다.

이 모델에서 이식 거부는 매우 재현 가능한 면역 반응으로 발생하며, 직접적인 관찰과 촉진을 통해 쉽게 모니터링할 수 있습니다. 또한, 공여자와 일치하거나 제3자의 피부 이식편을 이용한 2차 피부 이식을 수행하여 더 복잡한 이식 모델을 구축할 수 있으며, 이는 공여자 특이적 내성을 평가하는 대안적이고 간편한 방법이 됩니다. 텍스트 프로토콜에 따라 공여자 마우스를 마취시킨 후, 전기 면도기를 사용하여 동물의 등 부위를 제모하십시오.

그런 다음, 10% povidone-iodine으로 피부를 소독합니다. 가위와 둔성 박리법을 사용하여, 유포결합조직 수준에서 엉덩이부터 목까지 공여자 등의 피부를 채취합니다. 등 피부를 현미경 아래에 두고, 미세 건절단 가위를 사용하여 결합조직과 피하근막을 피부에서 분리합니다.

10 by 10에서 15 by 15 millimeter 크기의 이식 부위를 위해 등 피부에서 15 by 15 millimeter 크기의 이식편을 절제합니다. 이식편을 PBS에 적신 거즈와 함께 페트리 접시에 담아 얼음 위에 보관합니다. 본문 프로토콜에 따라 수혜 마우스를 마취합니다.

이식편이 삽입될 동물의 등 쪽 측면을 삭모한 후, 수술 후 통증 완화를 위해 buprenorphine을 kg당 0.02 mg 투여합니다. 10% povidone-iodine을 사용하여 해당 부위를 소독합니다. 가위를 사용하여 가능한 한 표면적으로 10 by 10에서 15 by 15 mm 크기의 정사각형 피부를 절개합니다.

panniculus carnosus와 그 표면을 따라 흐르는 혈관이 손상되지 않도록 주의하십시오. 다음으로, 가장자리를 따라 접히는 부분이 없도록 이식편을 이식 부위에 배치합니다. 그 후, 바늘을 이식편과 이식 부위의 panniculus carnosus(주변 수용측 피부 아래쪽)에 차례로 통과시켜 이식편의 네 모서리와 각 가장자리의 중간 지점에 총 8개의 봉합사를 배치합니다.

접은 거즈를 두 겹으로 겹친 붕대 위에 올린 다음, 동물을 붕대 위에 이식 부위가 아래로 향하도록 배치하고 마취 마스크를 제거하여 동물이 부분적으로 회복되도록 합니다. 그런 다음 붕대로 동물을 감쌉니다. 생착 과정에서 가장 중요한 요인은 호스트 혈관이 이식편으로 자라 들어오는 이식 조직의 재혈관화입니다.

panniculus carnosus의 박리 및 붕대의 정확한 배치가 가장 중요한 단계입니다. 수술 직후, 감염 예방을 위해 kg당 5 mg의 enrofloxacin을 투여하십시오. 이식된 마우스가 마취에서 완전히 회복될 때까지 깨끗한 케이지에 넣으십시오.

마우스를 사육 시설로 돌려보내기 전, 수술 후 1시간 동안 관찰하십시오. 회복 과정 중에 마우스를 면밀히 모니터링하여 붕대가 흉곽의 움직임과 호흡을 제한하지 않는지 확인하십시오. 8일 후, 이식편에 가피 형성, 수축 또는 경화 징후가 있는지 관찰하고 촉진하십시오.

이러한 징후 중 어느 하나라도 나타나면 이식편의 혈관 형성이 적절하게 이루어지지 않은 것일 수 있으며, 이는 기술적 실패로 간주해야 합니다. 거부 반응 징후가 있는지 매일 이식편을 관찰하십시오. 이식편 조직의 90% 이상이 괴사되면 이식편이 거부된 것으로 간주합니다.

완전 불일치 모델에서 전층 피부 이식편은 보통 8~12일 이내에 거부됩니다. 부분 불일치 모델에서는 거부 반응이 더 느리고 가변적이며, 피부 이식편의 외형은 수축이나 탈모와 같이 덜 뚜렷한 변화가 특징입니다. 급성 이식 거부는 일반적으로 이식편의 부종과 홍반으로 시작됩니다.

이후 여기에서 보는 바와 같이 이식편의 건조, 가피 형성 및 수축이 일어납니다. MHC 불일치 정도와 면역 억제 프로토콜에 따라, 탈모, 색소 침착, 피부 융기 및 이식편 부피의 감소와 같은 미세한 변화로 특징지어지는 아급성 과정에 의해 거부 반응이 발생할 수 있습니다. 이러한 경우, 거부 반응이 일어난 이식편은 가장자리가 고르지 않으며 윤기가 나고 하얗고 털이 없는 상태로 보입니다.

BALB/c를 공여자, C57 black 6를 수혜자로 사용하여 관찰한 결과, 당분해와 산화적 인산화, 또는 글루타민 대사만을 단독으로 억제했을 때 피부 이식 생존 기간이 연장되었습니다. 그러나 세 가지 경로를 동시에 차단했을 때 이식 생존율이 유의미하게 증가했습니다. 또한, 삼중 대사 요법은 기존의 cyclosporine 또는 rapamycin보다 더 효과적이었습니다.

또한, 대사 요법 군의 피부 이식 조직학적 분석 결과, 처리되지 않은 조직과 비교하여 조직 배열이 더 온전하게 유지되었으며 림프구 염증성 침윤이 더 적게 나타났습니다. 장기 이식의 결과는 수술 절차와 면역 억제 프로토콜의 발전으로 인해 현저히 개선되었습니다. 하지만 장기적인 면역 억제는 심각한 부작용을 수반하므로, 면역 관용을 촉진하는 새로운 전략이 현대 이식 연구의 목표로 남아 있습니다.

T 세포 조절에 있어 대사의 중요성은 잘 알려져 있습니다. 당분해, 산화적 인산화 및 글루타민 대사를 억제함으로써 동종이식편의 생존율을 유의미하게 높일 수 있었습니다. 이러한 새로운 접근 방식은 기존 치료법보다 더 효과적이었으며, 면역 조절 및 이식에 대한 잠재적 접근 방식의 패러다임 전환을 의미합니다.