Name: 가속된 동맥 경화의 토끼 모델: 장 골 동맥 풍선 상해의 방법 론 적 관점 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: 학습하세요 토끼 장골동맥 풍선 상해와 죽상경화성 식이를 이용한 가속 동맥경화 유발 방법. 이 기술은 혈관 형태학 및 혈관조영 평가를 통해 상업적 의료기기의 효능을 검증하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 스위스 국립 과학 재단 부여 150271에 의해 지원 되었다.

이 실험 프로토콜 Cantonal 수의 사무실, Fribourg는 스위스 연방 수의 사무실, 스위스 (FR 2015/58)에 의해 승인 되었습니다.
 참고: 남성 NZW 토끼 2.8 3.2 k g 사이 무게 사용 되었다. 동물 (12 h 빛 및 어두운 주기, ad libitum 물과 식량 제공) 기존의 조건 하에서 보관 되어 있었다. 풍선 노출 전에 동물 1 주 동안 그들은 정상적인 차 다이어트 지 루 했다에 대 한 acclimated 했다. 순응의 1 주 후 토끼 높은 지방 (8.6%)의 구성 하는 atherogenic 다이어트에 전환 했다 하 고 포화 지방산 205 mg/kg (1%) 콜레스테롤 다이어트 전체 연구 기간에 대 한. 왼쪽 장 골 동맥에서 풍선 손상 다이어트 개시 후 1 주 수행 및 동물 풍선 부상 4 주 또는 2 주 후 희생 되었다.
 1. 수술 전 절차 <ol><li>유리 구슬 소독 기 또는 다른 적합 한 악기와 함께 사용 하기 전에 모든 수술 기구를 소독.</li>
	<li>준비 풍선 카 테 터 어셈블리를 확인 하 고.
	<ol><li>첨부 1 mL luer 잠금 주사기 luer 잠금 부분 풍선 카 테 터의 정상적인 염 분으로 가득합니다. 신중 하 게 덫을 놓은 공기의 부재에 대 한 모니터링 합니다. 누수를 확인 하 고 주사기의 플런저를 눌러 적절 한 풍선 인플레이션 확인.</li>
	</ol></li> <li>토끼의 무게 및 37 thermopad 설정 ° c.</li>
	<li>Buprenorphine 솔루션을 사용 하 여 0.3 밀리 그램의 농도에 / ml. 0.01 mg/kg의 복용량을 피하 주사 하.</li>
	<li>Anesthetize 10-15 분에 대 한 유도 실에서 5 L/분 O 2와 5 %isoflurane 토끼</li>
	<li>외과 플랫폼에 계속 생리대에 마 취 토끼를 놓습니다. 패치 및 온도, 호흡, 심전도 모니터링 하는 클립.</li>
	<li>적합 한 마 취 기계에 연결 된 얼굴 마스크를 토끼의 주 둥이 연결 합니다. 마 취와 isoflurane 2.5 L/min O 2 (4.0%)를 유지 합니다. 적절 한 anesthetization (개 그, pinnae 반사의 손실 및 근육의 부족으로 표시)를 확인 하십시오.</li>
	<li>안과 연 고는 각 막 건조 하지 않도록 두 눈에 적용 됩니다. 노출만 더 낮은 사지와 토끼를 메 마른 외과 시트와 함께 드러 워 진.</li>
</ol> 2. 수술 프로토콜 <ol><li>동물 발기를 사용 하 여 무릎 관절 바로 아래 복 부 영역에서 제거.</li>
	<li>적당 한 살 균 제는 피부를 청소 하 고 느슨한 머리를 제거 하는 영역을 면봉.</li>
	<li>Saphenous 동맥을 찾아서 메스를 사용 하 여 길이에 약 1.5 ㎝의 작은 피부 절 개를 하 게.</li>
	<li>대 퇴 정 맥, 대 퇴 신경 손상 없이 작은 곡선된 겸 자도 saphenous 동맥의 작은 부분을 노출.</li>
	<li>Saphenous 동맥 아래 두 개의 느슨한 합자 루프 (5-0 실크) 놓고 한 합자 루프는 동맥의 말 초 끝을 묶어. 장 골 동맥에서 혈액의 흐름을 막으려고 합자 위에 microvascular 클램프 장소.</li>
	<li>Papaverine 동맥 팽창 하 고 vasospasm을 방지 하기 위해 한 방울 몸에 붙이기도 적용.</li>
	<li>묶인된 합자의 도움으로 saphenous 동맥을 올리고 확인 작은 arteriotomy 절 개는 24를 사용 하 여 게이지 바늘.</li>
	<li>미세 집게와 절 개 플랩 상승 하 고 천천히 동맥의 루멘으로 정 맥 선택 또는 지도 바늘을 삽입.</li>
	<li>Saphenous 동맥에 2 프랑스어 Fogarty 동맥 embolectomy 카 테 터를 삽입합니다. 정 맥 선택 및 microvascular 클램프 제거.</li>
	<li>6 마크 (20-25 cm)에 해당 하는 위치 약까지 카 테 터를 미리 장 골 분기점 위에 2-5 cm.</li>
	<li>1 mL 주사기를 사용 하 여 0.1 mL 정상적인 염 분 또는 6의 공칭 압력에서 풍선을 부 풀 려 16 , 22에 설명 된 대로 규제 수동 공기 펌프를 사용 하 여 atm.</li>
	<li>집게와 풍선 카 테 터를 누른 테 회전 하는 동안 삽입 지점 장 골 arterytoward 통해 6 cm에 의해 다시 끕니다.</li>
	<li>주사기의 플런저를 후퇴 하 여 풍선을 수축.</li>
	<li>완료 내 피 노출 되도록 단계 2.10 2.13 세 번 반복.</li>
	<li>카 테 터를 제거 하 고 출혈을 멈추게 하는 arteriotomy 사이트의 바로 위에 합자 루프를 즉시 넥타이.</li>
	<li>상처 주위 적합 한 살 균 모두를 적용 하 고 혈 병을 떨어져 면봉. 5-0 봉합, 피부 절 개를 닫고 povidone-요오드 솔루션 수술 사이트 소독.</li>
	<li>2.1에 2.16는 contralateral에 장 골 새로운 카 테 터를 사용 하 여 단계를 반복 하십시오.</li>
	<li>눈에서 안과 연 고를 면봉.</li>
</ol> 3. 수술 치료 <ol><li>sulfadoxine 관리 40 mg/kg 및 trimethoprim 8 mg/kg 또는 다른 적합 한 항생제는 수술 직후.</li>
	<li>마 취 회복 기간 동안 깨끗 한 압력가 감 금 소에 열 패드를 통해 토끼를 유지.</li>
	<li>모니터링 패치 및 클립 제거.</li>
	<li>복구 후 자신의 집 새를 토끼를 반환. 주사 피하 buprenorphine 0.05-0.1 mg/kg 게시물-operatively 48 헤 또 다른 2 주 또는 4 주에 대 한 계속 atherogenic 다이어트에 대 한 모든 6-12 h.</li>
</ol> 4. 조직 수확 및 분석의 패 구성 <ol><li>2 주 (초기 얇은 패)에 대 한 풍선 상해의 3 주 후, 위에서 설명한 대로 isoflurane 비슷한 방식으로 사용 하 여 토끼 anesthetize.</li>
	<li>흉 강 열고 intracardial exsanguination에 의해 토끼를 안락사.</li>
	<li> 23에 설명 된 대로 장 골 동맥을 분리.
	<ol><li>짧게, 복 부를 열고는 retroperitoneum 노출. 장 골 분기점 쪽으로 대동맥을 추적 하 고 분기점 위에 그것을 넥타이. 조심 스럽게 노출 하 고 격리 두 장 골 동맥 주위 조직을 제거.</li>
	</ol></li> <li>Dissect 두 장 골 동맥과 버퍼링 차가운 인산 염에 그들을 담가. 집게의 도움으로 혈전을 제거 합니다. 각 장 골 동맥 characterise 걸쳐 동맥 플 라크의 두께를 4-6 세그먼트로 분할.</li>
	<li>즉시 형 최적의 절삭 온도 화합물, 포함 된 스냅-동결 액체 질소를 사용 하 여 동맥 세그먼트를 포함 하 고-70 ° C. 준비 5 µ m 24에 설명 된 대로 cryostat를 사용 하 여 두꺼운 섹션에서 그것을 유지.</li>
	<li>수행 조직학, 면역 형광 검사 또는 10 , 25에 설명 된 대로 morphometry, 플 라크 지질 및 세포질 내용에 대 한 얼룩 immunohistochemical. 
	참고: 짧게, 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)와 동맥 섹션 린스 하 고 0.2%를 사용 하 여 permeabilize 트리톤. PBS 가진 섹션 린스를 안티 α-SM 걸 (1: 200) 또는 RAM11 항 체 (1: 200) 37 ° C에서 1 시간에 대 한 섹션 2% 소 혈 청 알 부 민 30 분 품에 대 한 비 특정 사이트를 차단 합니다. PBS 가진 섹션 린스 하 고 PBS 37 ° C. 씻어 다시 30 분에 대 한 적절 한 이차 항 체와 그들을 품 어 Hoechst 추가 (5 µ g/mL) 10 분 핵 감지.</li>
</ol>

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저자 아무 경쟁 금융 관심사를 선언합니다.

토끼 장 골 동맥 경화 모델은 아 테 롬 연구에서 널리 이용 된다. 이 프로토콜은 토끼 빠르게 자발적인 병 변만 콜레스테롤 다이어트와 함께 개발에 비해 더 심각 하 고 고급 패 개발. 중요 한 것은, 동물 수술에서 신속 하 게 복구합니다.
Atherogenesis 위한 주요 자극은 endothelium 부상 하 고 혈관 벽26distends 풍선 카 테 터로 인 한 기계적 손상 이다. 이 이렇게 대 식 세포 신규 모집 및 지질 축적 때 hypercholestorolemic 다이어트, 혈관 평활 근 세포 이동과 확산, 향상 된 매트릭스와 관련 된 염증으로 특징 개장 응답 유도 합성, 고 시간 종속 패션15,16에 침략 neointima의 설립. 풍선 카 테 터 삽입 절차의 가장 중요 한 부분입니다. 강제로 삽입 풍선 피하기 위해 주의 ...

취약 한 동맥 경 화성 플 라크의 파열1선진국 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 지난 수 십년 동안 연구 패 진행에 관련 된 여러 분자 및 세포 메커니즘을 펼쳐는, 뿐만 아니라 질병 진행의 복잡 한 메커니즘을 해명 뿐만 아니라 새로운 테스트 노력 필요 아직도 계속 치료 접근 한다. 여러 동물 모델 연구는 동맥 경화를 제안 되었습니다. 유전자 조작, 콜레스테롤 먹이 또는 기계적 피 상해는 쥐, 토끼 또는 minipigs를 포함 하 여 동맥 경화의 가장 동물 모델에서 공유 하는 표준 전략. 이러한 가운데, NZW 토끼에 민감합니다 콜레스테롤 다이어트 동안 정상적인 쥐와 생쥐 마음이 크게 식이 콜레스테롤2,,34를 흡수 하지 않습니다. 토끼는 저절로 대동맥 병 변 세포 콜레스테롤 풍부한 다이어트5,6먹 일 때 일부 섬유 구성 요소와 함께 풍부한 개발. 그러나, 동맥 경 화성 plaquesby 콜레스테롤 다이어트 혼자6,7 먹이 유도 하기 위해 4-8 개월의 긴 준비 시간 실험 설정의 대부분을 위한 주요 결점은. 상대적으로 짧은 시간에 병 변을 유발에 대 한 추구, 높은 콜레스테롤 다이어트와 풍선 상해의 조합 Baumgarter 및 Studer8에 의해 개발 되었습니다. 이 기술은의 전반적인 목표는 2 주 이내에 콜레스테롤 토끼에 거품 세포 (인간에서 지방 조 흔과 유사)의 구성 된 동맥 경 화성 플 라크를 유도 하는 것입니다. 현재 기술 NZW 노인 토끼의 장 골 동맥으로 고급 풍선 카 테 터를 사용 하 여 Baumgarter의 방법에 따라 동맥 벽 상해의 절차를 설명 합니다.
콜레스테롤 풍부한 음식과 함께 부상 풍선 유도 드 endothelialization에서 동맥 경화 이어질 것입니다. 풍선 부상 동맥 경 화성 병 변 형성을 촉진 하 고 균일 한 크기와 분포의 플 라크를 생성 합니다. 내 두껍게 상해 다음 몇 일 이내에 시간과 내 세포 침투 시작의 기간 동안 증가 합니다. 상당한 대 식 세포와 지방 줄무늬 풍선 상해의 7-10 일 후에 나타나기 시작 하 고 미국 심장 협회에서 분류에 따라 병 변의 유형 II로 표시 됩니다. 토끼 풍선 부상은 종종 플 라크 구성 공부 대동맥에서 수행 됩니다. Neointimal 내 피 세포 접착 분자의 높은 수준의 표현. 플 라크 중간 절 개 및 adventitial 변화에 연관 됩니다. 동맥 경 화성 병 변 지질, 확산 부드러운 근육 세포 (SMCs), 교원 질 섬유 및 재생성된 endothelium 아래에 축적 하 고 자연에서 주로 유형 II는 염증 세포의 구성 됩니다. 토끼 플 라크의 토폴로지 배포 원칙에 인간 aortas 9,10 에 보고 유사 했다, 대동맥 장 골 동맥에 비해 크기가 큰 큰 길이에서 플 라크를 생산할 것 이라고. 그러나, 토끼에 있는 아 테 롬의 사이트로 장 골 동맥을 사용 하 여의 주요 장점은 접근, 인간 관상 동맥11, 균일 한 병 변 개발12, 높은 조직 요소 근육 콘텐츠에서 유사성은 활동13 그리고 형태학 및 angiographic 끝점을 상업적으로 제조 된 소자의 평가 허용 하는 인간의 관상 동맥에 비해 일관 된 배 차원. 침략과 비-침략 적 방법 살아있는 동물에서 토끼 장 골 동맥에 플 라크를 분석 조사 있다. 이전 보고서 자기 공명 또한 2.35 테슬라 미스터 시스템 14 의 도움으로 (MRI를) 영상 사용 설명, 혈관 내 초음파 (IVUS) 또는 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) 카 적당 수 이미지에 적용 토끼 장 골 동맥에 동맥 경 화성 플 라크입니다. 장 골 동맥은 초음파 이미징 고해상도 진단법을 사용 하는 경우 그리고 대동맥이 기술 또한 탐험 수 있습니다.
지난 10 년간에서이 토끼 모델 풍선 부상의 더욱 패 진행15, 플 라크 회귀16의 메커니즘을 이해 하 있었습니다. 새로운 치료제 스타 틴, 표준 antiplatelet 에이전트, 항 산화 제17,18 everolimus 같은 약물 방출 스 텐트 등의 영향을 연구 하는 모델 사용 되었습니다 또한, 또는 zotarolimus 방출 스텐19,20 neointimal 두껍게. 이 모델은 또한 혈관 내 영상 카 테 터21이미징 근 적외선 형광의 조사에 사용 되었습니다.

<table><tbody><tr><td>뉴질랜드 흰 토끼</td><td>찰스 리버 연구소, 프랑스</td><td>Cre:KBL(NZW)</td><td></td></tr><tr><td>콜레스테롤이 풍부한 다이어트</td><td>Ssniff spezialdi&auml; ten</td><td>Ssniff EF K 고지방 및 콜레스테롤</td><td></td></tr><tr><td>유리 구슬 살균기-Germinator 500</td><td>VWR, Leicestershire, UK</td><td>101326-488</td><td></td></tr><tr><td>Fogarty 풍선 색전절제술 카테터, 2 French</td><td>Edwards Lifesciences, Switzerland</td><td>120602F</td><td>일회용</td></tr><tr><td>전용 Luer Lock Syringe</td><td>Becton, Dickinson and Company, USA</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Thermopad Type 226</td><td>Solis, Swiss AG</td><td>397387</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine- Temgesic</td><td>Reckitt Benckiser AG, Switzerland</td><td>7.68042E+12</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017</td><td>2667-46-7</td><td></td></tr><tr><td>마취 machine-combi-vet Base 마취 시스템</td><td>Rothacher Medical GmbH, 스위스</td><td>CV 30-301-A</td><td></td></tr><tr><td>Cardell touch 수의학 바이탈 사인 모니터</td><td>Midmark, Ohio, USA</td><td>8013-001</td><td></td></tr><tr><td>안과 연고-Humigel</td><td>Virbac, France</td><td></td><td></td></tr><tr><td>동물 이발기</td><td>Aesculap AG, Germany</td><td>GT420</td><td></td></tr><tr><td>소독제-베타딘 용액</td><td>MundipharmaMedicalCompany, Switzerland</td><td>14671-1203</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>FST Germany</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>중소형 마이크로가위</td>: <td>Medline International, 스위스, S&agrave; rl</td><td>UC4337</td><td></td></tr><tr><td>미세혈관 클램프</td><td>FST, 독일</td><td>18051-28</td><td></td></tr><tr><td>파파베린</td><td>ESCA 화학, 스위스</td><td>RE 356 803</td><td></td></tr><tr><td>Vein Pick</td><td>Harvard Apparatus, Cambridge, UK</td><td>72-4169</td><td>일회용</td></tr>염수 <tr><td></td><td>Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, 스위스</td><td>1330055</td><td></td></tr><tr><td>Polysorb 5-0 봉합사</td><td>Covidien AG, 스위스</td><td>UL 202</td><td>모노필라멘트</td></tr><tr><td>Sulfadoxine 및 Trimethoprim-Trimetazol</td><td>Werner Stricker AG, 스위스</td><td>Swissmedic Nr. 50'361</td><td></td></tr><tr><td>방부제-octenisept</td><td>Sch&uuml; LKE & Mayr AG, 스위스</td><td>GTIN: 4032651214068</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Roth</td><td>1058.1</td><td></td></tr><tr><td>이소부탄올-2-메틸부탄</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>M32631-1L</td><td></td></tr><tr><td>최적 절삭 온도 화합물-Tissue-Tek</td><td>VWR Chemicals, 벨기에</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>저온 유지 장치</td><td>Leica, Glattbrugg, 스위스</td><td>Leica CM1860 UV</td><td></td></tr><tr><td>유리 슬라이드- Superfrost Plus</td><td>Thermo Scientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td><td>MHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>Eosin 0.5% aq.</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>HT110232-1L</td><td></td></tr><tr><td>오일 레드 O</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>O0625-25G</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-평활근 액틴 항체</td><td>Abcam, UK.</td><td>ab7817</td><td></td></tr><tr><td>대식세포 클론 RAM11 항체</td><td>DAKO, 스위스</td><td>M063301</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Abcam, 영국.</td><td>ab145596</td><td></td></tr><tr><td>Goat polyclonal Secondary 항체 (Chromeo 546)</td><td>Abcam, UK.</td><td>ab60316</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488/547</td><td>Abcam, 영국.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>글리세르겔 장착 매체, 수성</td><td>DAKO, 스위스</td><td>C056330</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타크롬 염색용 헤마톡실린</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>H3136-25G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타크롬 염색용 염화철</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>157740-100G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 염색용 요오드</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>207772-100G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타크롬 염색용 요오드화 칼륨</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>60400-100G-F</td><td></td></tr><tr><td>Movat 염색용 알시안 블루</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>A5268-10G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타크롬 염색용 강암</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>320145-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타크롬 염색용 브릴리언트 크로세인 MOO</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>210757-50G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타크롬 염색 용 산 Fuchsin</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>F8129-50G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타크롬 염색 용 티오 황산</td><td>나트륨 Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>72049-250G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 펜타 크롬 염색 용 포스 포 텅스텐 산</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>79690-100G</td><td></td></tr><tr><td>Crocin Movat 펜타 크롬 용 크로신 염색</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>17304-5G</td><td></td></tr><tr><td>EUKITT for Movat 펜타크롬 염색</td><td>Sigma-Aldrich, 스위스</td><td>03989-100ML</td><td></td></tr></tbody></table>

가속된 동맥 경화의 토끼 모델: 장 골 동맥 풍선 상해의 방법 론 적 관점

The Rabbit Model of Accelerated Atherosclerosis: A Methodological Perspective of the Iliac Artery Balloon Injury

급성 관상 동맥 증후군 관상동맥 폐색 동맥 경 화성 플 라크 개발 및 파열에서에서 유래한 공업화 한 세계에서 사망의 주요 원인입니다. 뉴질랜드 화이트 (NZW) 토끼는 동맥 경화 증의 연구를 위한 동물 모델로 서 널리 사용 됩니다. 그들은 개발 atherogenic 다이어트; 먹 일 때 자연 스러운 병 변 그러나,이 4-8 개월의 긴 시간이 필요합니다. 더욱 강화 하 고 가속 atherogenesis, atherogenic 다이어트와 기계적 내 피 상해는 종종 사용 됩니다. 유도 하는 토끼의 동맥 경 화성 플 라크에 대 한 제시 절차 atherogenic 다이어트 먹이 NZW 토끼의 왼쪽된 장 골 동맥에 피를 방해 하는 풍선 카 테 터를 사용 합니다. 풍선 카 테 터로 인 한 이러한 기계적 손상 시간 종속 방식에서 neointimal 지질 축적을 시작 하는 염증 성 반응의 사슬을 유도 합니다. 동맥 경 화성 플 라크 풍선 부상 쇼 neointimal 두껍게 광범위 한 지질 침투와 높은 평활 근 셀 내용, 대 식 세포의 존재에 따라 거품 세포 파생. 이 기술은 간단 하 고, 재현 고 제어 길이 장 골 동맥 내 플 라크를 생성 한다. 모든 절차는 20-30 분 이내 완료 됩니다. 절차는 낮은 사망률과 안전 하며 또한 상당한 내 병 변 취득에 높은 성공. 풍선 카 테 터의 절차 2 주 이내에 동맥 경화 동맥 상해 결과 유도 한다. 질병 병리학을 조사를 위해이 모델을 사용할 수 있습니다 진단 이미징 새로운 치료 전략을 평가 하 고.

장 골 동맥의 풍선 부상 합병증 (그림 1) 없이 성공적으로 수행 되었다. 총 수술 시간 30 분 부상에 대 한 20에서 배열 했다 수행 하나의 장 골 동맥, 및 두 동맥에 대 한 35 ~ 45 분. 토끼 풍선 부상 후 1 시간 이내 복구. 모든 동물 상당한 체중 감소 없이 건강 한 나타났다. 아니 감염, 부 종 또는 동맥 혈전 증 발생 했습니다. 상처 영역 봉합 사이트에서 몇 가지 가벼운 섬유 증 외 정상적 이었다. Atherogenic 다이어트 먹이의 4 주, 다음 토끼 전시 콜레스테롤 혈 증 44 ±의 18 m m/l.
그림 2A, 그림 2E, 그리고 그림 2I 표시 오른쪽 손상 되지 않은 장 골 동맥 (풍선 부상 ...

동맥 경화 증의 동물 모델 메커니즘을 이해 하 고 패 개발 또는 파열, 산업화 된 세계에서 죽음의 주요 원인이 방지 하기 위해 새로운 접근을 조사 하기 위해 필수적입니다. 이 프로토콜 풍선 부상과 콜레스테롤 풍부한 다이어트의 조합을 사용 하 여 토끼 장 골 동맥에 동맥 경 화성 플 라크를 유도.

Acute coronary syndrome resulting from coronary occlusion following atherosclerotic plaque development and rupture is the leading cause of death in the ...

이 실험 절차의 전체적인 목표는 토끼의 왼쪽 장골동맥 내피를 외과적으로 손상시키고 죽상경화성 식단을 제공함으로써 죽상경화성 플라그 형성을 유도하는 것입니다. 토끼에서의 단독 손상은 플라그 조성을 연구하기 위해 주로 대동맥에서 수행됩니다. 하지만 장골동맥은 인간의 관상동맥과 매우 유사하여 죽상경화성 플라그 모델링을 위한 매력적인 부위입니다.토끼 장골동맥의 근육 함량 균일 병변, 안구 조직 인자 활성 및 일관된 혈관 크기는 모두 인간의 관상동맥과 유사합니다. 결과적으로, 이는 상업적으로 제조된 장치들을 형태측정학적 및 혈관조영술적 종점과 비교하여 평가할 수 있게 합니다. 해당 절차의 시연은 저희 실험실의 협력자인 Aurelien Frobert가 진행하겠습니다.유리 구슬 멸균기 등을 사용하여 모든 수술 도구를 반드시 멸균하십시오. 다음으로, 두 개의 풍선 카테터 어셈블리를 준비하고 점검합니다. 각 어셈블리에 생리식염수를 채운 1 mL Luer lock 주사기를 연결한 후, 풍선 팽창 기전을 사용하여 내부에 이물질이 끼어 있는지 확인하십시오.다음으로, 수술 플랫폼의 온도 조절 패드를 37 °C로 설정합니다. 그런 다음 토끼의 체중을 측정합니다. 이어서 buprenorphine을 투여하고, 5% isofluorane을 분당 5 L의 속도로 10~15분 동안 투여하여 토끼를 마취합니다.이제 마취된 토끼를 수술대 위의 가열 패드 위에 놓습니다. 토끼의 체온과 호흡을 모니터링하고 심전도를 수집하기 위해 센서를 부착합니다. 다음으로, 4% isofluorane을 분당 2.5 liters로 공급하기 위해 페이스 마스크를 착용시킵니다.그런 다음 구역 반사와 각막 반사 소실 여부를 테스트하여 적절한 마취 수준을 확인합니다. 전신적인 근육 긴장도 완화 또한 깊은 마취의 지표가 됩니다. 다음으로, 양쪽 눈에 아토닉 연고를 도포합니다.다음으로, 동물용 털 깎이 기구를 사용하여 무릎 관절 바로 아래의 복측 부위 털을 제거합니다. 그다음, 떨어진 털을 제거하고 70% ethanol과 betadine을 번갈아 가며 세 번 문질러 노출된 피부를 세척한 뒤, 하지가 노출되도록 제외하고 동물에게 드레이프를 씌웁니다. 수술을 시작하기 위해 saphenous artery의 위치를 확인하고 1.5 centimeter 절개합니다.그 다음, 작은 곡선 핀셋을 사용하여 복제정맥동맥(saphenous artery)의 일부를 조심스럽게 노출시킵니다. 이때 대퇴정맥이나 대퇴신경이 손상되지 않도록 주의하십시오. 이 노출 과정 동안 동맥을 철저하게 세척하는 것이 매우 중요합니다.다음으로, 복제정맥 동맥 아래에 두 개의 느슨한 결찰 루프를 배치하고 동맥의 원위단 근처에서 한 개의 결찰 루프를 묶습니다. 그런 다음 결찰 부위 위쪽의 동맥을 따라 미세 혈관 클램프를 배치하고 클램프를 닫아 혈류를 차단합니다. 즉시 파파베린 한 방울을 도포하여 동맥을 확장하고 혈관 경련을 방지합니다.다음으로, 결찰사를 사용하여 복재정맥동맥을 들어 올리고 24게이지 바늘을 이용해 작은 동맥 절개창을 만듭니다. 그런 다음 절개된 플랩을 들어 올리고 정맥 픽(vein pick) 또는 가이드 바늘을 동맥의 내강 안으로 천천히 삽입합니다. 이제 동맥 색전 제거 카테터를 복재정맥동맥 내로 조심스럽게 삽입합니다.파열이 발생하지 않도록 조심스럽게 다루십시오. 그런 다음 정맥 픽을 제거하고 동맥의 미세 혈관 클램프를 해제합니다. 손상을 유발하기 위해, 먼저 풍선 카테터를 세 번째 표시까지 전진시킵니다.이렇게 하면 장골 분지(iliac bifurcation) 상단 약 2~5cm 지점에 위치하게 됩니다. 다음으로, 0.1 milliliters의 생리식염수로 풍선을 팽창시키십시오. 이제 카테터를 클립으로 고정하고, 조직에 손상을 주기 위해 회전시키면서 6 centimeters 뒤로 당기십시오.풍선을 후퇴시킨 후, 공기를 뺍니다. 내피세포가 완전히 확장되도록 이 과정을 두 번 더 반복합니다. 그런 다음 카테터를 제거하고, 출혈을 막기 위해 동맥 절개 부위 바로 윗부분의 결찰 루프를 즉시 묶습니다.다음으로, 상처의 천공 부위 주변에 적절한 소독제를 도포하고 혈전들을 닦아냅니다. 마지막으로 피부 절개 부위를 봉합하고 포비돈-요오드 용액으로 수술 부위를 소독합니다. 그런 다음 두 번째 카테터를 사용하여 반대쪽 장골 동맥에 동일한 수술 절차를 반복합니다.수술 후, 먼저 토끼의 옆면에 묻은 복부 연고를 닦아냅니다. 그다음 sulfadoxine과 trimethoprim을 투여합니다. 이후 헤딩 패드를 착용한 토끼를 깨끗한 회복 케이지로 옮기고 모니터링 패치와 클립을 부착합니다.동물이 다시 스스로 일어서서 보행할 수 있게 되면 홈 케이지로 돌려보냅니다. 통증 관리를 위해 buprenorphine을 투여합니다. 이제 필요한 기간 동안 동물에게 atherogenic diet를 급여하기 시작합니다.수술 후 2주 또는 4주가 지난 시점에서 초기 박막 아마(thin flax)를 수확하려면, 먼저 토끼를 마취한 후 심장 내 절개를 통해 안락사시킵니다. 다음으로 복부를 열어 후복막을 노출시킵니다. 그런 다음 대동맥을 따라 장골 분지점(iliac bifurcation)까지 추적하여 분지점 윗부분을 묶습니다.주변 조직을 조심스럽게 제거하고 양측 장골동맥을 분리합니다. 이제 두 동맥을 모두 적출하여 얼음처럼 차가운 PBS에 담급니다. 그 상태에서 핀셋을 사용하여 혈전들을 제거하고 각 동맥을 46개의 분절로 나눕니다.그 후 즉시 OCT 화합물이 포함된 몰드에 분절을 매몰시키고 액체 질소에서 조직을 급속 냉동시킨다. 조직을 -80 °C에서 보관하고, 이후 표준 방법론을 사용하여 5 µm 두께의 절편을 염색한다. 장골 동맥의 풍선 손상은 1시간 이내에 합병증 없이 성공적으로 수행되었다.토끼들은 1시간 이내에 회복되었으며, 유의미한 체중 감소 없이 건강한 상태를 보였다. 수술 후 합병증은 발생하지 않았다. 또한, 4주간의 죽상경화성 식단 급여 후, 모든 토끼에서 고콜레스테롤혈증이 나타났다.풍선 손상과 콜레스테롤 식단의 조합은 혈관벽의 구조적 변화를 유발하여 2주 만에 죽상경화성 플라크를 형성하게 했습니다. 동일한 동물에서 손상되지 않은 장골동맥과 풍선 손상된 장골동맥을 분리하여 비교하였습니다. 플라크는 지질 침윤뿐만 아니라 평활근 세포의 이동 및 증식으로 특징지어집니다.손상된 혈관 내에서 플라크는 계속 성장하는 반면, 내강 크기는 계속해서 줄어듭니다. 이러한 결과적 변화는 4주 차에 매우 뚜렷하게 나타났습니다. 2주 및 4주 후 형태학적 정량 분석 결과, 내막-중막 두께의 증가, 플라크 면적의 증가, 내강 면적의 감소, 그리고 최종적으로 지질 축적의 증가가 확인되었습니다.alpha smooth muscle actin 항체를 이용한 염색은 근육 액틴과 반응하여 혈관 평활근 세포를 식별합니다. 반면, more 11 단클론 항체 염색은 대식세포의 세포질을 나타냅니다. 이 두 염색을 통해 손상된 혈관의 죽상경화성 플라크 내로 평활근 세포와 대식세포가 어느 정도까지 증식했는지 확인할 수 있습니다.이 영상을 시청하신 후에는 자동차 안전에 대해 충분히 이해하고, 토끼의 장골동맥에 인위적인 손상을 용이하게 유발할 수 있게 될 것입니다. 죽상경화성 식이요법과 함께 수행하는 이러한 손상은 장골동맥 내에 균일한 시간 경과에 따른 플라크 형성을 유도합니다.

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연구

JoVE Journal

Medicine

의학

상패 생물학의 2 차원 분자 이미징을위한 intravascular 우리는 세부 새로운 가까운 적외선 형광 (NIRF)...

염증성 플라크의 적외선 형광 (NIRF) Intravascular 분자 이미징, Multimodal 접근 가까운 생체내에서 죽상 경화증의 영상을

이 동영상은 쥐의 동맥 내막 플라크 개발의 두 가지 모델을 보여주고 myointimal 증식과 죽상 경화증의 차이를 강조한다.

쥐에서 동맥 경화 수스 Myointimal 증식을 유도 : 두 개의 유효한 모델의 소개

이 프로토콜은 쥐의 경동맥에 관내 부상의 원인이 이제부터는 신생 내막의 증식을 유도하는 풍선 카테터를 사용합니다. 이 부상에 대한 응답으로 혈관 재 형성의 메커니즘을 연구하는 잘 확립 된 모델입니다. 또한 널리 잠재적 인 치료 방법의 유효성을 결정하는데 사용된다.

쥐 경동맥의 혈관 풍선 부상과 관내 관리

아래에 설명된 쥐 경동맥 풍선 손상 모델을 통해 연구자들은 손상으로 인한 동맥 증식을 무효화하는 약물 또는 치료법을 평가할 수 있습니다. 동물의 상세한 수술 전 준비, 수술 절차 및 수술 후 관리에 대해 설명합니다.

생쥐 경동맥 풍선 손상 모델은 반대로 혈관 리모델링의 치료를 테스트하는

이 연구는 마우스에 있는 가속된 죽상 경화증의 유도를 위한 침략적인 절차를 기술합니다. 전기 또는 극저온 유도 된 상해를 사용하는 다른 방법에 비해, 기계적 으로 인한 상해는 재변 치료 후 restenosis의 인간의 상태를 모방하고 관련된 분자 메커니즘의 연구에 이상적입니다.

마우스에서 가속 죽상 경화증의 유도: "와이어 부상" 모델

이 문서에서는 대동맥 풍선 부상 후 murine 모델 myointimal 증식 (수소)의 개발 연구를 보여줍니다.

풍선-기반 부상 마우스 복 부 대동맥에서 Myointimal 증식을 유도 하

우리는 고 지 혈 증 및 당뇨병을 가진 토끼에 있는 말 초 허 혈을 유도 하기 위하여 이용 된 외과 절차를 기술 합니다. 이 수술은 환자의 말 초 동맥 질환에서 경험 하는 조건에 대 한 전 임상 모델 역할. 혈관 조 영 법은 또한 관류의 도입 된 허 혈 및 회수의 정도를 측정 하는 수단으로 서 기술 된다.

당뇨병 토끼에서의 뒷 사지의 전 임상 모델

쥐 경동맥 풍선 부상은 죽상 경화성 혈관에서 혈류를 복원하기 위해 수행 된 임상 혈관 성형술 절차를 모방합니다. 이 모델은 동맥 벽을 손상시키고 내피 세포의 친밀감 층을 비명하여 동맥 손상 반응을 유도하여 궁극적으로 리모델링 및 친밀한 과플라스틱 반응을 일으킵니다.

쥐 경동맥 압력 제어 세그먼트 풍선 부상 과식 치료 응용 프로그램

두개내 동맥류 치료를 위한 혈관 내 장치를 개발하고 테스트하는 것은 여전히 매우 중요합니다. 오늘날 사용되는 대부분의 동맥류 모델은 동맥 퇴화 벽의 중요한 특성이나 진정한 분기의 혈역학을 놓치고 있습니다. 따라서 우리는 토끼에서 새로운 동맥 파우치 분기 모델을 설계하는 것을 목표로했습니다.

토끼의 동맥 파우치 미세 외과 분기 동맥류 모델

지속적인 동맥 혈압 기록을 통해 다양한 혈역학 적 매개 변수의 영향을 조사 할 수 있습니다. 이 보고서는 뇌졸중 병태생리학, 다양한 혈역학적 요인의 영향 및 새로운 치료 접근법의 평가를 결정하기 위해 허혈성 뇌졸중의 대규모 동물 모델에서 지속적인 동맥 혈압 모니터링의 적용을 보여줍니다.

허혈성 뇌졸중의 토끼 모델에서 혈압의 실시간 모니터링 및 조절

대동맥판막협착증(AVS)의 기저에 있는 병리학적 기전을 이해하고 치료적 개입의 효능을 평가하기 위해서는 적절한 동물 모델이 필요하다. 본 프로토콜은 생체 내에서 직접 풍선 손상을 통해 AVS 토끼 모델을 개발하기 위한 새로운 절차를 설명합니다.

직접적인 풍선 손상으로 인한 토끼 대동맥 판막 협착증 모델

학습하세요 토끼 장골동맥 풍선 상해와 죽상경화성 식이를 이용한 가속 동맥경화 유발 방법. 이 기술은 혈관 형태학 및 혈관조영 평가를 통해 상업적 의료기기의 효능을 검증하는 데 활용됩니다.

가속된 동맥 경화의 토끼 모델: 장 골 동맥 풍선 상해의 방법 론 적 관점

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