Name: 알파 - 시누 클레인 브릴의 주변 접종 후 형질 전환 마우스의 신경 염증의 생물 발광 영상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: 배우세요 알파-시누클레인 섬유를 주변 접종한 파킨슨병 마우스 모델에서 생체 발광 영상을 이용해 중추신경계 신경염증을 정량화하는 방법을. 비침습적 모니터링으로 신경 퇴행성 질환의 조기 진단이 가능합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 올가 샤르마, 테레사 헌트 및 기술 지원에 대한 DZNE 현미경과 동물 시설의 직원을 감사드립니다.

동물을 포함한 모든 절차는 노르 트라 인베스트 팔렌 주 환경청 (LANUV)의 동물 보호위원회의 승인을 수행 하였다. 동물을 수용하고, 12 시간 광 / 암주기 및 음식과 물에 자유롭게 접근하는 표준 조건에 따라 든다고 하였다. 1. 동물 모델 <ol><li> Tg가 서로 엇 hemizygous (GFAP의 -luc +/-) hemizygous bigenic의 Tg (M83 +/- : GFAP의 -luc +/-) 생성 hemizygous의 Tg (M83 +/-) 마우스와 마우스 마우스 (15), (16). </li><li> 개똥 벌레 루시퍼 라제 (12), (17)을위한 트랜스 코딩 인간의 α- 시누 클레인의 표준 PCR과 존재를 실시간 PCR과 자손의 유전자형. </li><li> 여섯 - 투 - 8 주 시대에 동물을 접종한다. </li></ol> 2. 접종 제조 <ol><li> 미주리 준비로되어있는 한 20 mM 트리스 - 염산 (pH를 7.2) 150 mM의 NaCl을 함유하는 TBS 버퍼 (TBS) 완충액에 A53T 돌연변이와 nomeric 재조합 인간의 α- 시누 클레인은 앞서 설명한 14. </li><li> 800 rpm에서 5 일간 37 ℃에서 오비탈 진탕 단량체 재조합 인간의 α- 시누 클레인의 3 ㎍ / μL 교반하여 접종을 위해 섬유상의 α- 시누 클레인을 준비한다. </li><li> intraglossal 접종에 대한 복강 내 또는 2 ㎍ / μL 1 개 ㎍ / μL의 최종 농도에 도달하기 위해 인산 완충 용액 (PBS)에 브릴 어셈블리 희석. </li><li> 얼음 (각 펄스와 50 %로 설정된 진폭의 1 초 휴지 기간의 0.5 40 펄스)을 1 분 동안 초음파 처리와로드 알파 시누 클레인 브릴을 조각. 교차 접종에 의한 오염을 방지합니다. 다른 접종을 준비하는 깨끗한 초음파 프로브를 사용합니다. </li></ol> 3. Intraglossal 주사 <ol><li> intrape과 동물을 마취100 ㎎ / ㎏의 케타민과 10 밀리그램 / kg의 자일 라진 ritoneal 주입. 동물의 발가락을 꼬집어하고 적절한 마취을 보장하기 위해 자사의 사지를 철회하지 않는 것을 확인합니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 수의사 연고를 사용합니다. </li><li> 신중 연구자 향 머리와 등쪽 누운 자세에서 가열 플레이트 상에 접착 테이프 narcotized 동물을 고정한다. </li><li> 초음파의 α- 시누 클레인 브릴 또는 PBS 5 μL와 27 G 일회용 피하 주사기를 채우기. </li><li> 동물의 입이 열려 개최 톱니 모양의 팁을 하나의 뭉툭한 코 엄지 손가락 집게를 사용하여 집게의 작은 제 2 쌍은주의 깊게 주입을위한 혀의 바닥면에 액세스 할 수 있도록하기 위해 혀를 당겨. </li><li> 설하 신경 부근의 혀의 오른쪽 또는 왼쪽 하단 측에 주사기 바늘을 주입한다. 천천히 5 초 후 접종을 주입. 천천히 접종 있도록 5 초 후 바늘을 철회조직을 침투하고 바늘을 철회하면서 손실되지 않습니다. </li><li> 그 고정물에서 동물을 해제하고 완전한 복구 될 때까지 지속적인 모니터링에서 가열 플레이트에 둡니다. </li></ol> 4. 복강 내 주사 <ol><li> 복강 내 주사를 위해, 2 L / min의 유량으로 2 %로 설정 증발기를 사용하여 이소 플루 란 / 산소 흡입 마취 챔버 내에 곧 동물을 마취시키다. 동물의 발가락을 꼬집어하고 적절한 마취을 보장하기 위해 자사의 사지를 철회하지 않는 것을 확인합니다. </li><li> 초음파의 α- 시누 클레인 브릴 또는 PBS 50 μL와 27 G 일회용 피하 주사기를 채우기. </li><li> 직접 마우스의 복강에 주사하고, 조사원으로부터 떨어져 대면하는 헤드와 등쪽 위치 동물 잡고 하향으로 대략 45 °로 복부 벽 뒤에있는 소장 또는 맹장 관통 피한다. 그들이 회복 될 때까지 동물을 모니터링마취에서. </li></ol> 5. 생물 발광 영상 <ol><li> 이미지의 Tg (M83 +/- : GFAP의 -luc +/-) 마우스 생물 발광 이미징 시스템을 사용하는 모든 2-4주. </li><li> 곧 묘화 2 L / min의 유량으로 2 %로 기화기로 이소 플루 란 / 산소 챔버에서 쥐를 마취 전에. 동물의 발가락을 꼬집어하고 적절한 마취을 보장하기 위해 자사의 사지를 철회하지 않는 것을 확인합니다. </li><li> 면도와 제모 크림 쥐의 머리를 털을 뽑다. 불특정 생물 발광을 차단하는 비 자극 마커와 블랙의 귀를 색상. </li><li> 30 ㎎ / ㎖의 스톡 용액에 D-PBS 칼륨 염 루시페린, 루시 페라 제의 기판을 희석. -20 ° C에서 1 mL를 씩이 보관하십시오. 노광에서 용해 D-루시페린 보호. </li><li> 주입하기 전에 동물의 무게를. 150 mg / kg (체중)의 주입을위한 D-루시페린의 정확한 양을 계산한다. 복강 주사 D-luciferin 및 마취 챔버에 동물을 반환한다. </li><li> 이미징 소프트웨어를 시작합니다. 이미징 시스템이 도달하면 작동 온도 제어판에서 &#39;초기화&#39;버튼을 클릭하여 시스템을 초기화합니다. </li><li> 버튼 &#39;발광&#39;과 &#39;사진&#39;을 선택합니다. 60 초, &#39;보통&#39;의 F / 정지 &#39;1&#39;로 비닝 (binning)과 &#39;끄기&#39;로 EM 이득에 노출 시간을 설정합니다. </li><li> 여기 필터 &#39;열기&#39;을 &#39;차단&#39;하고, 발광 필터로 설정되어 있는지 확인하고, 1.50 cm 피사체 높이를 설정. </li><li> 텐 분 D-루시페린과 주사 후, 촬상 챔버 내의 가열 플레이트 상에 동물을 배치하고 그 총구 올바르게 마취 출구에 배치되도록. 흡입 챔버로부터 이소 플루 란 / 산소 유량을 닫고 0.25 L / min의 유량으로 2 %의 증착과 촬상 챔버에 대한 흐름을 연다. 이미징 챔버 홍보의 문을 닫습니다operly. </li><li> 60 초 걸리는 생물 발광을 측정하기 위해 &#39;획득&#39;버튼을 클릭합니다. 이소 플루 란의 흐름을 중지하고 완전히 자신의 새장에 다시 반환 후 회복 될 때까지 동물을 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 생물 발광을 정량화하기 위해 이미징 소프트웨어를 사용합니다. &#39;도구 팔레트&#39;내에서의 투자 수익 (ROI) 도구 &#39;를 선택합니다. 의 투자 수익 (ROI) 도구 &#39;에서&#39;유형 &#39;에서&#39;측정 투자 수익 (ROI) &#39;를 선택합니다. </li><li> 의 투자 수익 (ROI) 도구 &#39;내에서 &quot;원&quot;도구를 클릭하고 풀다운 메뉴에서 그릴 로아의 수를 선택 - 이상적으로&#39;3 &#39;세 마우스에 대해. </li><li> 이미지에서 각 ROI와 아래는 &#39;속성&#39;1.25 cm에 폭과 높이를 조정 마우스 오른쪽 단추로 클릭합니다. 정량화 뇌 영역에 걸쳐 각각의 투자 수익 (ROI)을 배치합니다. </li><li> 화상의 상부 좌측에, &quot;빛 (광자) &#39;단위로 패널을 설정. </li><li> &#39;도구 팔레트&#39;내 선택 &#39;이미지 보정&#39;최소를 조정하고0.20e6에서 1.00e6에 인스턴스의 &#39;색 눈금&#39;의 최대. </li><li> &#39;파일&#39;에서 &#39;저장&#39;을 사용하여 데이터를 저장합니다. </li></ol> 6. 생화학 분석 <ol><li> 설립 프로토콜 (18), (19)에 따라 뇌와 척수를 분리합니다. </li><li> 조직 균질 기에서 6,000 rpm으로 30 초 두 사이클로 (PBS에 1 배 희석), 프로테아제 및 포스파타제 억제제의 존재하에 별도로 PBS에서 전체 뇌와 척수 전체 샘플 균질화. 뇌와 척수 시료를 20 % (중량 / 부피)의 최종 농도로 균질화되었는지 확인. </li><li> 10 s의 일정한 펄스와 50 %로 설정된 진폭 얼음들을 유지하면서 두 샘플을 초음파 처리. </li><li> PBS 중 1.5 M NaCl로 1 : 1 그들 희석 PBS 750 mM의 NaCl을 10 %의 균질을 조정한다. </li><li> 세포 파편을 분리하기 위해 5 분으로 1,000 XG에서 균질 원심 분리4 ° C. 다음 단계의 상층 액을 유지하고 알약을 폐기합니다. </li><li> 제조업체의 지시에 따라 bicinchoninic 산 (BCA) 분석을 사용하여 균질의 단백질 농도를 측정한다. 얼음 위에서 15 분 동안 10 % (중량 / 부피)의 최종 농도에서 N-laurylsarcosyl 척수 균질의 뇌 균질 물에서 총 단백질 1.0 mg을 0.8 mg의 인큐베이션. </li><li> 증류수 10 % (중량 / 부피)의 3 mL의 슈 크로즈 쿠션 상에 균질 오버레이, 4 ° C에서 1 시간 동안 465,000 XG 그들을 초 원심 분리기. </li><li> 4 % 도데 실 황산나트륨 (SDS), 2 % β 메르 캅토 에탄올, 192 mM의 글리신, 25 개 mM 트리스, 5 % (중량 / 부피) 수 크로스를 함유하는 완충액에 재현 탁 펠릿. </li><li> 5 분 동안 100 ℃에서 샘플을 비등하고 morpholineethanesulfonic 술폰산 (MES) 버퍼 시스템에 대한 전기 SDS 폴리 아크릴 아미드 겔 상에 로딩들을. </li><li> 주사 전자 현미경 (SEM)으로 분리 된 폴리 비닐 리덴 디 플루오로 단백질 (PVDF) 멤브레인 전송시스템을 모래 바닥 idry. </li><li> 가교 35 RPM으로 로터에 실온에서 30 분 동안 PBS에서 (부피 / 부피) 포르말린 용액 멤브레인 단백질 0.4 %의 막을 인큐베이션. </li><li> 0.05 % (부피 / 부피의)을 포함하는 TBS 버퍼 트윈 20, 실온에서 1 시간 동안 5 % (중량 / 부피) 우유에서 막을 차단. </li><li> 4 ℃에서 밤새 블로킹 완충액에 일차 항체로 블롯을 인큐베이션. </li><li> TBS 버퍼 막 세 번 세척하고, 실온에서 1 시간 동안 TBS에서 페 록시 또는 형광 접합 된 이차 항체로 부화. </li><li> 확립 된 프로토콜 20에 따라 화학 발광 또는 형광으로 결합 이차 항체를 시각화. </li></ol> 7. 면역 형광 분석 <ol><li> 휴지 프로세싱 스테이션에서 해부 뇌 및 척수 탈수 및 파라핀 스테이션을 사용하여 파라핀에 그들을 삽입. </li><li> 파라핀 포매 TIS 컷8 개 μm의 두께 코로나 섹션 마이크로톰으로 고소와 유리 슬라이드에 섹션을 탑재합니다. </li><li> 10 분에서 5 개의 분리 크 실롤 조에이를 배양하여 조직 절편을 Deparaffinize 및 등급 에탄올 욕 (100 %, 90 %, 70 %, 50 %)의 시리즈를 통해 최종적으로 H 2 O로 재수 </li><li> 실온에서 5 분간 0.01 M 시트 레이트 완충액 (pH 6.0)의 섹션을 인큐베이션 추가적으로 마이크로파 오븐에서 10 분 동안 삶아. </li><li> 섹션을 실온까지 냉각하고, 내인성 퍼 옥시 다제를 억제하는 30 분 동안 3 % 과산화수소로 부화하자. </li><li> 20 % (부피 / 권) 정상 염소 혈청, 1 % (부피 / 부피) 소 혈청 알부민 (BSA), 0.5 % 트리톤 X-100을 실온에서 1 시간 동안 PBS에 함께 배양하여 조직 절편을 차단. </li><li> 1 % (부피 / 부피) 정상 염소 혈청, 1 % (부피 / 부피) BSA, 0.25 % 트리톤 X-PBS에서 밤새 100에서 4 ℃로 희석 차 항체와 함께 인큐베이션 섹션. </li> &lt;리&gt; 0.25 % (부피 / 부피의) 트리톤 X-100의 PBS 일단 PBS로 두 번 씻어 섹션. </li><li> 해당 형광 접합 된 이차 항체를 실온에서 1 시간 동안 1 % 희석 핵 염색 DAPI (용적 / 권) 정상 염소 혈청, 1 % (부피 / 부피) BSA 및 PBS와 섹션 얼룩. </li><li> 0.25 % (부피 / 부피의) 트리톤 X-100의 PBS 일단 PBS로 두 번 세척 한 후, 내장 미디어 슬라이드를 커버 슬립 및 공 초점 레이저 주사 현미경에 의한 염색을 시각화. </li></ol>

<ol><li>Aguzzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+biology%3A+Beyond+the+prion+principle%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cell biology: Beyond the prion principle.</a> Nature. 459 (7249), 924-925 (2009).</li>
<li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body-like+pathology+in+long-term+embryonic+nigral+transplants+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease.</a> Nat Med. Olanow, C. W. 14 (5), 504-506 (2008).</li>
<li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson%27s+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li>
<li>Hansen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((alpha-Synuclein+propagates+from+mouse+brain+to+grafted+dopaminergic+neurons+and+seeds+aggregation+in+cultured+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">alpha-Synuclein propagates from mouse brain to grafted dopaminergic neurons and seeds aggregation in cultured human cells.</a> J Clin Invest. 121 (2), 715-725 (2011).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+alpha-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Holmqvist, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+of+Parkinson+pathology+spread+from+the+gastrointestinal+tract+to+the+brain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Direct evidence of Parkinson pathology spread from the gastrointestinal tract to the brain in rats.</a> Acta Neuropathol. 128 (6), 805-820 (2014).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+alpha-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338 (6109), 949-953 (2012).</li>
<li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+CNS+alpha-synuclein+pathology+by+fibrillar+and+non-amyloidogenic+recombinant+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 1, 38(2013).</li>
<li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+injection+of+alpha-synuclein+induces+CNS+alpha-synuclein+pathology+and+a+rapid-onset+motor+phenotype+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Intramuscular injection of alpha-synuclein induces CNS alpha-synuclein pathology and a rapid-onset motor phenotype in transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10732-10737 (2014).</li>
<li>Mougenot, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+acceleration+of+a+synucleinopathy+in+a+transgenic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model.</a> Neurobiol Aging. 33 (9), 2225-2228 (2012).</li>
<li>Bartz, J. C., Kincaid, A. E., Bessen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+prion+neuroinvasion+following+tongue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Rapid prion neuroinvasion following tongue infection.</a> J Virol. 77 (1), 583-591 (2003).</li>
<li>Tamgüney, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+prions+by+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Measuring prions by bioluminescence imaging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (35), 15002-15006 (2009).</li>
<li>Watts, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+multiple+system+atrophy+prions+to+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transmission of multiple system atrophy prions to transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (48), 19555-19560 (2013).</li>
<li>Breid, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinvasion+of+alpha-Synuclein+Prionoids+after+Intraperitoneal+and+Intraglossal+Inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Neuroinvasion of alpha-Synuclein Prionoids after Intraperitoneal and Intraglossal Inoculation.</a> J Virol. 90 (20), 9182-9193 (2016).</li>
<li>Giasson, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+alpha-synucleinopathy+with+severe+movement+disorder+in+mice+expressing+A53T+human+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein.</a> Neuron. 34 (4), 521-533 (2002).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+imaging+of+GFAP+expression+after+neuronal+damage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice.</a> Neurosci Lett. 367 (2), 210-212 (2004).</li>
<li>Bernis, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+propagation+of+human+brain-derived+alpha-synuclein+in+transgenic+mice+expressing+human+wild-type+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Prion-like propagation of human brain-derived alpha-synuclein in transgenic mice expressing human wild-type alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 3 (1), 75(2015).</li>
<li>Gunther, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+testing+and+spinal+cord+removal+in+a+mouse+model+for+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Clinical testing and spinal cord removal in a mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).</li>
<li>Mathews, S. T., Plaisance, E. P., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+systems+for+westerns%3A+chemiluminescence+vs.+infrared+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging systems for westerns: chemiluminescence vs. infrared detection.</a> Methods Mol Biol. 536, 499-513 (2009).</li>
<li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+bacterial+endotoxin+generates+a+distinct+strain+of+alpha-synuclein+fibril%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Exposure to bacterial endotoxin generates a distinct strain of alpha-synuclein fibril.</a> Sci Rep. 6, 30891(2016).</li>
<li>Keller, A. F., Gravel, M., Kriz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+pathogenesis%3A+disease+onset+is+characterized+by+marked+induction+of+GFAP+in+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Live imaging of amyotrophic lateral sclerosis pathogenesis: disease onset is characterized by marked induction of GFAP in Schwann cells.</a> Glia. 57 (10), 1130-1142 (2009).</li>
<li>Stöhr, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+synthetic+Abeta+prion+strains+producing+different+amyloid+deposits+in+bigenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinct synthetic Abeta prion strains producing different amyloid deposits in bigenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2014).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+inoculation+of+pathological+alpha-synuclein+initiates+a+rapidly+progressive+neurodegenerative+alpha-synucleinopathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice.</a> J Exp Med. 209 (5), 975-986 (2012).</li>
<li>Recasens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+extracts+from+Parkinson+disease+brains+trigger+alpha-synuclein+pathology+and+neurodegeneration+in+mice+and+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Lewy body extracts from Parkinson disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys.</a> Ann Neurol. 75 (3), 351-362 (2014).</li>
<li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+CNS+alpha-synuclein+pathology+by+fibrillar+and+non-amyloidogenic+recombinant+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 1 (1), 38(2013).</li>
<li>Peelaerts, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((alpha-Synuclein+strains+cause+distinct+synucleinopathies+after+local+and+systemic+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">alpha-Synuclein strains cause distinct synucleinopathies after local and systemic administration.</a> Nature. 522 (7556), 340-344 (2015).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

Tg는 (M83 +/- : GFAP의 -luc +/-)의 복막 내로의 α- 시누 클레인 브릴의 말초 주입 마우스 synucleinopathies의 중요한 특성 요점을 되풀이하는 신경 염증을 동반 신경 질환을 유발하는 용이 한 방법을 나타낸다. 마찬가지로, 혀 주입 트랜스 제닉 마우스에서의 α- 시누 클레인의 prionoids 의해 neuroinvasion 대한 다른 경로를 나타내고 있지만, 덜 효율적이다. 우리는 주사 후 420일에서 실험을 종료하기로 결정했습니다 우리는 더 많거나, 피 브릴 주입 마우스의 모든 이후의 시점에서 질병을 개발 할 수있는 가능성을 배제 할 수 없다. 또한, (+/- M83 : GFAP의 -luc +/-)의 Tg의 사용 마우스 astrogliosis의 비 침습성 시각화를 가능하게하고, 전체 수명 동안의 α- 시누 클레인의 neuroinvasion에 의한 염증 반응을 모니터링하기위한 간단한 방...

알파 - 시누 클레인은 특히 자기 씨앗 용량에, 프리온 단백질의 것과 유사 세포 사이의 연결 경로를 따라 미스 폴딩을 전파 특성을 가지고 성장 증거가있다. 알파 - 시누 클레인의이 속성은 &#39;프리온 같은&#39;또는 &#39;prionoid&#39;라고, 새로 건강한 뉴런 1, 2를 이식하는 병에 걸린 뉴런에서 잘못 접힌 알파 - 시누 클레인의 전달률을 제안 이식 실험에서 관찰에 의해 지원됩니다 3, 4. 또한 뇌 또는 주변부, 예 뒷다리 근육이나 장벽의 말단 부분의 α- 시누 클레인 병리의 확산의 결과로 잘못 폴딩의 α- 시누 클레인의 직접 분사 CNS의 5, 6, 7, &lt;SUP 클래스 = &quot;외부 참조&quot;&gt; 8, 9, 10. 우리는 더 상세히 주변 경로를 통해 알파 시누 클레인의 prionoids의 송신을 분석 미스 폴딩의 α- 시누 클레인은 단일 intraglossal 또는 복강 내 주사 한 후 이전 프리온 위해 아니라 잘못 폴딩 알파 위해 도시되었던 기능을 CNS를 neuroinvade 수 있는지 질문을 해결 시누 클레인. 혀에 프리온 주입 후 CNS의 neuroinvasion는 뇌간 (11)에있는 설하 신경의 핵 리드 혀 설하 신경을 따라 전달을 통해 달성된다. 하여 성상 세포의 활성화를 모니터 프리온 프로모터, 인간의 α- 시누 클레인의 A53T 변이체를 과발현하고 반딧불이 GFAP 프로모터의 제어 하에서 루시페라아제 마우스 : 마우스 모델로 우리의 Tg (GFAP의 -luc +/- M83를 +/-) 선택한 생물 발광, 이전의 뇌에서와 같이쥐 12 프리온은 감염. 우리의 손에 bigenic의 Tg (M83 +/- : GFAP의 -luc +/-) 다른 사람 (13)에 의해 도시 된 바와 같이 마우스는 시대의 23개월까지 질병을 개발하지 않았다. 뇌에서 병리학, Tg 및 척수와 intraglossal 또는 복강 내 경로 유도 된 신경 질환을 통해 인간의 α- 시누 클레인 브릴의 단일 주입 : 가설을지지 생쥐 (+/- +/- M83 GFAP의 -luc) 알파 - 시누 클레인의 prionoids 프리온 (14)와 중요한 특성을 공유합니다.

<table><tbody><tr><td>anti-actin 항체</td><td>Merck Millipore</td><td>MAB1501</td><td></td></tr><tr><td>anti-alpha-synuclein, phospho S129 항체 [pSyn#64]</td><td>Wako</td><td>015-25191</td><td></td></tr><tr><td>anti-alpha-synuclein, phospho S129 항체 [EP1536Y]</td><td>Abcam</td><td>ab51253</td><td></td></tr><tr><td>anti-GFAP 항체</td><td>Dako</td><td>Z0334 01</td><td></td></tr><tr><td>anti-IBA-1 항체</td><td>Wako</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>항-세퀘스토솜-1 (p62) 항체</td><td>Proteintech</td><td>18420-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>항-유비퀴틴 항체 [Ubi-1]</td><td>Merck Millipore</td><td>MAB1510</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 (PBS)</td><td>인비트로겐</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>케타민&nbsp;</td><td>Ratiopharm</td><td></td><td>100 mg/kg</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Ratiopharm</td><td></td><td>10 mg/kg</td></tr><tr><td>27 G 주사기</td><td>VWR</td><td>613-4900</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane&nbsp;</td><td>Piramal Healthcare</td><td>PZN&nbsp; 4831850</td><td></td></tr><tr><td>탈모 크림</td><td>Veet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Secureline 랩 마커&nbsp;</td><td>Neolab</td><td>25040</td><td></td></tr><tr><td>D-루시페린 칼륨염</td><td>Acris</td><td>LK10000</td><td>30 mg/mL 원액</td></tr><tr><td>써모믹서</td><td>Eppendorf</td><td>5776671</td><td></td></tr><tr><td>Sonopuls Mini20 초음파 발생기</td><td>Bandelin</td><td>3648</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II 이미징 시스템</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Image 3.0 소프트웨어</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tg(M83+/-) 마우스 또는 B6; C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J 마우스</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>004479</td><td></td></tr><tr><td>표준 패턴 펜치</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-16</td><td></td></tr><tr><td>좁은 패턴 펜치</td><td>Fine Science Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>N-laurylasarcosyl</td><td>Sigma</td><td>L5125-100G</td><td></td></tr><tr><td>Optima Max-XP 초원심분리기&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>TLA-110 로터&nbsp;</td></tr><tr><td>두꺼운 폴리카보네이트 튜브</td><td>Beckman Coulter</td><td>362305</td><td></td></tr><tr><td>NuPAG Novex 4-12% Bis-Tris Midi 단백질 젤</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>WG1401BOX</td><td></td></tr><tr><td>HRP 결합 항체</td><td>Cayman Cayman Cay10004301-1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IR Dye 680 결합 항체&nbsp;</td><td>LI-COR Biosciences</td><td>926-68070</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>34075</td><td></td></tr><tr><td>Stella 3200 이미징 시스템</td><td>Raytest</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Odyssey 적외선 이미징 시스템&nbsp;</td><td>LI-COR Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>트윈 20&nbsp;</td><td>MP Biomedicals</td><td>TWEEN201</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>SA/T8787</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon-FL PVDF 멤브레인</td><td>Merck Millipore</td><td>IPFL00010</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Sigma</td><td>Roth</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소</td><td>Sigma</td><td>SA/00216763/000500</td><td>작업 용액 3%</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A3294-100G</td><td></td></tr><tr><td>염소 혈청</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PCN5000</td><td></td></tr><tr><td>4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>working dilution 1:50,000</td></tr><tr><td>Fluoromount media&nbsp;</td><td>Omnilab</td><td>SA/F4680/000025</td><td></td></tr><tr><td>LSM700 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HALT 프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10516495</tr><tr><td>Precellys 24-Dual homogenizer&nbsp;</td><td>Peqlab</td><td>91-PCS24D</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 결합 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A31619</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 결합 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11005</td><td></td></tr><tr><td>피어스&nbsp; BCA&nbsp; 단백질&nbsp; 분석&nbsp; 키트</td>: <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10741395</td><td></td></tr><tr><td>Microtome RM2255</td>, <td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSM700 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

알파 - 시누 클레인 브릴의 주변 접종 후 형질 전환 마우스의 신경 염증의 생물 발광 영상

Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils

잘못 접힌 알파 - 시누 클레인의 프리온 같은 동작을 연구하기 위해 마우스 모델은 중추 신경계 (CNS)에서 신경 병리학을 일으킬 알파 - 시누 클레인의 prionoids의 빠르고 간단하게 전송을 허용하는 것이 필요하다. 마우스, 프리온 단백질 프로모터로부터 A53T 돌연변이와 인간의 α- 시누 클레인 과발현과 반딧불에서 루시퍼 : 여기에서는 bigenic의 Tg (GFAP의 -luc +/- M83 +/-)으로의 α- 시누 클레인 브릴의 intraglossal 또는 복강 내 주사를 설명 글 리아 섬유 성 산성 단백질 프로모터 (GFAP), 신경 병리학 적 질환을 유발하기에 충분하다. 동물 그들이 도달 할 때까지 자연 질환 무료 남아 8 개월 이형의 Tg (GFAP의 -luc +/- M83 +/-)의 나이에 시작 심한 신경 학적 증상이 동형 접합의 Tg (M83 + / +) 마우스와 비교 22개월의 나이. 흥미롭게 intraperitone 통해 알파 시누 클레인 브릴 주입229 ± 십칠일의 중간 배양 시간과 마우스 : 알 경로가 다섯의 Tg (GFAP의 -luc +/- M83 +/-) 네 마비와 신경 학적 질병을 유발. 병에 걸린 동물은 뇌와 척수에서 인산화 된 알파 - 시누 클레인의 심각한 예금을 보였다. 알파 시누 클레인의 축적은 sarkosyl 불용성이었고 유비퀴틴과 P62와 colocalized 및 성상 신경교 증 및 microgliosis 결과 염증 반응을 수반 하였다. 놀랍게도, 혀에 알파 - 시누 클레인 원 섬유의 접종 285 일 후에 알파 - 시누 클레인 병리를 보여주는 다섯 주입 동물의 한으로 질병을 일으키는 덜 효과적이었다. 우리의 연구 결과는 (+/- M83을 : GFAP의 -luc를 +/-) 복강 내 경로를 통해 intraglossal 노선과 더욱 그렇다 통해 접종의 Tg에 synucleinopathies의 관련 특징과 신경 학적 질병을 유도하기 적합하다는 것을 보여 쥐를. 이 유도 프리온 같은 기전 연구를위한 새로운 모델을 제공합니다보다 상세히의 α- 시누 클레인의 prionoids d 개의.

마우스 (표 1 및도 1)은 혀 또는 bigenic의 Tg의 CNS (GFAP의 -luc +/- +/- M83)의 복막 유도 병리학 통해 알파 시누 클레인의 prionoids 주변의 주입. 알파 - 시누 클레인 섬유소와 하나의 복강 내 주사 한 후, 다섯 마우스의 네 229 ± 십칠일의 중간 배양 시간과 신경 학적 질환을 개발했다. 놀랍게도, 단지 1 ~ 5의 마우스 285 일 후 알파 - 시누 클레인 원 섬유와 intraglossal 주사 후 CNS 질환을 개발했다. PBS로 접종 실험의 420 일 이내에 질병이 발생하지 않았다. 웨스턴 블로 팅 및 알파 - 시누 클레인의 Ser129에 대한 인산화 특정 EP1536Y 항체 프로브에 의한 생화학...

(+/- M83 : GFAP의 -luc +/-)의 Tg는 복막 내로 또는 혀의 α- 시누 클레인 브릴의 말초 주입 가족적 A53T 돌연변이와 반딧불이 루시퍼 라제와 인간의 α- 시누 클레인 표현 마우스, 신경 염증을 포함한 신경 병리학을 유도 할 그들의 중추 신경계한다.

To study the prion-like behavior of misfolded alpha-synuclein, mouse models are needed that allow fast and simple transmission of alpha-synuclein ...

이 생물발광 이미징 방법의 전반적인 목적은 alpha-synuclein 피브릴을 말초에 주입한 파킨슨병 마우스 모델의 중추신경계 내 신경염증을 정량화하는 것입니다. 이 방법은 신경퇴행성 질환 마우스 모델에서 신경염증이 언제, 어느 정도 발생하는지 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 마우스에서 신경학적 질환이 발생할 때까지 신경염증을 비침습적으로 반복해서 모니터링할 수 있다는 점입니다.이 기술의 시사점은 신경계 질환의 10시간 내 진단이 가능하다는 점인데, 이는 신경 염증으로 인한 생물 발광의 증가가 신경계 질환에 수반될 뿐만 아니라 종종 질환보다 먼저 나타나기 때문입니다. 먼저 수술을 위해 동물을 적절히 마취하십시오. 발가락 꼬집기 테스트를 실시하여 동물이 사지를 움츠리지 않는 것을 확인함으로써 수술 가능 수준의 마취 평면에 도달했음을 확인합니다.마취 중에 안구 건조를 방지하기 위해 안연고를 도포합니다. 접착 테이프를 사용하여 동물의 머리가 실험자를 향하도록 한 상태에서 배와 상단이 위를 향하는 dorsal recumbent 자세로 가열판 위에 조심스럽게 고정합니다. 그다음, 초음파 처리된 alpha-synuclein 피브릴 5 µL를 27 gauge 일회용 하이포더믹 주사기에 채웁니다.다음으로, 뭉툭한 끝의 핀셋을 사용하여 동물의 입을 벌리고, 더 작은 핀셋을 사용하여 혀를 조심스럽게 끌어내어 혀 아랫부분에 주사할 수 있도록 합니다. 주사기 바늘을 설하신경 근처의 혀 오른쪽 또는 왼쪽 바닥면에 삽입합니다. 5초 후, 접종물을 천천히 주입합니다.접종물이 조직에 충분히 침투할 수 있도록 바늘을 5초 동안 더 유지한 후, 조심스럽게 바늘을 뽑습니다. 주사 후에는 동물을 풀어주고 완전히 회복될 때까지 지속적으로 모니터링하며 가열판 위에 머물게 합니다. 복강 내 주사의 경우, 이소플루레인(isoflurane)이 들어 있는 마취 챔버에서 동물을 잠시 마취시킵니다.다시 한번 동물의 발가락을 꼬집어 뒷다리를 움츠리지 않는지 확인하여 마취가 적절히 되었는지 확인합니다. 27게이지 일회용 저압 주사기에 초음파 처리된 alpha-synuclein fibrils 또는 PBS 50 microliters를 채웁니다. 동물을 배측 자세로 잡고, 머리가 실험자 반대 방향을 향하게 하며 약 45도 각도로 아래를 향하게 합니다.복벽 뒤에 위치한 소장이나 맹장을 찌르지 않도록 주의하며 마우스의 복강 내로 직접 주입하십시오. 동물들이 마취에서 회복될 때까지 관찰하십시오. 영상 촬영 전, 이소플루란으로 마취시킨 마우스의 머리 부분을 삭모하고 제모하십시오.비특이적 생물발광을 차단하기 위해 자극이 없는 마커로 귀 부분을 검게 칠합니다. 주입 전 동물의 무게를 잽니다. 그런 다음 체중 kg당 150 milligrams의 비율로 주입할 D-Luciferin의 정확한 부피를 계산합니다.계산된 양의 D-Luciferin을 복강 내로 주입한 후, 각 동물을 마취 챔버로 되돌립니다. 이미징 소프트웨어를 실행합니다. 이미징 시스템이 작동 온도에 도달하면 제어판의 Initialize 버튼을 클릭하여 시스템을 초기화합니다.그다음 Luminescent 및 Photograph 버튼을 선택하십시오. 노출 시간은 60초, Binning은 medium, F/Stop은 1, EM gain은 off로 설정하십시오. Block을 선택한 후 Open을 누르십시오.그런 다음 subject height 탭 아래의 드롭다운 메뉴에서 1.50을 선택하십시오. D-Luciferin 주입 10분 후, 동물들을 이미징 챔버 내의 가열 플레이트 위에 올리고, 근육이 마취 배출구에 올바르게 위치했는지 확인하십시오. 이소플루란 흐름을 흡입 챔버에서 이미징 챔버로 전환하고, 이미징 챔버의 문을 제대로 닫으십시오.acquire 버튼을 클릭하여 생체 발광을 측정하며, 이 과정에는 60초가 소요됩니다. 이소플루란 흐름을 중단한 후, 동물을 케이지로 돌려보냅니다. 도구 팔레트 메뉴를 열고 ROI Tools를 선택하여 이미지 분석 소프트웨어로 생체 발광을 정량화합니다.유형(type)에서 Measurement ROI를 선택하십시오. ROI 도구(ROI Tools) 내에서 원형 도구를 클릭하고 드롭다운 메뉴에서 그릴 ROI의 개수를 선택하십시오. 세 마리의 마우스의 경우 세 개가 이상적입니다.이미지에서 각 ROI를 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고, 속성(properties)에서 너비와 높이를 1.25 centimeters로 조정합니다. 각 ROI를 정량화할 뇌 영역 위에 배치합니다. 이미지의 왼쪽 상단에서 단위 패널을 radiance in photons로 설정합니다.그런 다음 도구 팔레트 메뉴를 엽니다. 이미지 조정을 선택하고 컬러 스케일의 최소값과 최대값을 조정합니다. 예를 들어, 200,000에서 1,000,000까지로 설정합니다.마지막으로, 파일(file) 메뉴에서 저장(save)을 클릭하여 데이터를 저장합니다. 여기에서 보시는 바와 같이, alpha-synuclein fibril을 복강 내로 주입한 후, A53T synuclein GFAP luciferous 리포터 형질전환 마우스 5마리 중 4마리가 보라색 사각형으로 표시된 바와 같이 229일 이내에 신경계 질환이 발생했습니다. 반면, 설하 주입을 받은 마우스 5마리 중에서는 단 한 마리만이 녹색 원으로 표시된 바와 같이 285일 이내에 신경계 질환이 발생했습니다.생체 발광 이미징 결과, 형질전환 생쥐는 신경계 질환 징후가 나타나기 직전에 뇌와 척수에서 증가된 생체 발광을 방출하는 것으로 나타났습니다. 이러한 생체 발광은 복강 내 투여 후 더 뚜렷하게 나타났으며, PBS 투여 후에는 나타나지 않아 성상교세포 글리오시스(astrocytic gliosis)가 없음을 시사했습니다. 이 그림은 alpha-synuclein 섬유질을 복강 내 투여한 후 시간이 경과함에 따라 형질전환 생쥐의 뇌에서 나타나는 생체 발광을 보여줍니다.파란색, 녹색, 갈색 및 주황색 원으로 표시된 바와 같이, 이 네 마리의 개별 마우스에서 질병의 신경학적 증상이 나타나기 몇 주 전에 제곱센티미터당 스테라디안당 초당 200만 광자를 초과하는 생물 발광 수치의 증가가 관찰되었습니다. 또한 다섯 마리의 동물 중 한 마리는 alpha-synuclein 피브릴을 설하 주사한 후 285일째에 사망하기 직전에 생물 발광 수치의 상승을 보였습니다.이와 대조적으로, PBS를 주입한 건강한 대조군 생쥐와 복강 내 주입 후 질병이 발생하지 않은 한 마리의 동물에서는, 빨간색 원으로 표시된 alpha-synuclein 섬유가 있음에도 불구하고 관찰 기간 동안 생체 발광 신호가 임계값 아래로 유지되었습니다. GFAP 및 Iba1에 대한 항체를 이용한 질환 동물의 뇌 절편 면역형광 염색 결과, alpha-synuclein 침전물이 있는 영역에서 미세아교세포증 및 반응성 성상세포를 동반한 신경 염증이 확인되었습니다. alpha-synuclein 침전물이 축적되지 않은 건강한 동물에서는 GFAP 및 Iba1 염색이 거의 나타나지 않았습니다.이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 1시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 기술의 개발 이후, 신경퇴행 분야의 연구자들은 생쥐의 중추신경계 내 신경염증을 비침습적으로 탐색할 수 있는 길을 열게 되었습니다. 이 영상을 시청한 후에는 생쥐에게 alpha-synuclein fibril을 말초 주입하는 방법과 CNS 신경염증을 모니터링하기 위한 생물발광 이미징 수행 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.본 절차의 전반적인 목표는 alpha-synuclein 피브릴을 설하 또는 복강 내로 주입하여 신경계 질환을 말초적으로 유도하고, 시간에 따른 신경 염증의 유도를 비침습적으로 영상화하는 것입니다.

bioluminescence-imaging-neuroinflammation-transgenic-mice-after

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

우리는 반복 murine microglia를 시각화하고 monocytes 순환하는 방법을...

만성 두 광자를위한 박막 해골 창 기법 생체내에서</emNeuroinflammation의 모델 Murine Microglia의> 이미징

파킨슨병은 살충제에 대한 노출과 관련된되었습니다. 여기서 우리는 원하는 농도와 장용 신경계의 알파 synuclein의 축적에서 효과를 분석하는 방법에 위장 튜브를 사용하는 살충제를 전달하는 방법을 보여줍니다.

장용 신경계의 알파 synuclein의 흠도의 Gavage 및 이미지 분석을 사용하여 Rotenone의 구강 관리

소설로 루시 페라 제 및 생체 이미징 시스템 (IVIS)에서를 활용하면 임상 개발가 발생하기 전에 질병 끝점을 식별 할 수 의미합니다. IVIS은 우리가 미래 연구를위한보다 정확한 질병 모델을 제공 실시간으로 여러 일 동안 encephalitic 바이러스의 침입을 시각화 할 수 있습니다. 또한 우리는 신속하게 현재 활용 동물 모델보다 antivirals과 백신의 잠재적 인 보호 기능을 식별 할 수 있습니다. 여러 시간 지점을 통해 개인 동물을 활용하는 기능은 감소 동물의 요구 사항, 비용, 질병 연구의 더 인간적 더 과학적인 수단을 확보 활용 동물 전반적인 질병을 보장합니다.

신경 침윤성 Encephalitic 바이러스의 생체 이미징 시스템 (IVIS) 검색에서

이 비디오는 신경 염증을 유도하기 위해 알파-시누클레인 피브릴을 마우스에 주입하는 방법을 보여줍니다. 원섬유는 돌연변이된 알파-시누클레인 단백질을 발현하는 형질전환 마우스에 복강내로 주입됩니다. 중추신경계에 도달하면, 원섬유는 뉴런으로 들어가 돌연변이된 단백질의 응집을 유도합니다. 응집체는 인접한 뉴런, 미세아교세포 및 성상세포로 퍼집니다. 응집체의 인식은 미세아교세포를 유발하여 신경 염증을 유발하여 뉴런을 손상시킵니다.

알파 Synuclein 섬유의 주입을 통해 쥐에 있는 neuroinflammation의 감응작용

출처: Breid, S., et. al. alpha-synuclein fibrils의 말초 접종 후 형질전환 마우스의 신경염증에 대한 생물 발광 이미징. J. Vis. Exp. (2017)이 비디오는 형질전환 마우스의 신경염증에 대한 생물 발광 이미징을 보여주며, 활성화된 성상세포에서 루시페라제-루시페린 반응을 보여줍니다. 이 프로토콜은 성상세포 활성화의 비침습적 정량화를 가능하게 하여 CNS 염증 및 치료 효능에 대한 연구를 지원합니다.

형질전환 마우스의 신경염증에 대한 생물발광 이미징

출처: Bosco, A., et al. In vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma(신경 퇴행 중 망막 미세아교세포 활성화의 생체 내 역학: 마우스 녹내장의 컨포칼 안과 영상 및 세포 형태 측정).   J. Vis. 특급 (2015년) 이 비디오는 녹내장의 마우스 모델에서 망막 미세아교세포의 생체 내 이미징을 보여줍니다. 형광 단백질 발현 망막 미세아교세포를 가진 형질전환 마우스가 검안경 아래에 위치합니다. 적외선 조명은 시신경두(ONH)를 찾는 데 사용되며, 초점면은 망막 혈관을 랜드마크로 사용하여 설정됩니다. 그런 다음 형광 미세아교세포를 시각화하기 위해 형광 이미징을 사용합니다. 세포체가 커지고 분지 복잡성이 감소하는 것을 특징으로 하는 활성화된 미세아교세포를...

In Vivo Imaging of Retinal Microglia in a Mouse Model of Glaucoma

출처 : 슈미츠, K.,  et al., 생쥐의 다발성 경화증의 EAE 모델에서 시신경염 및 뇌 염증의 생물 발광 및 근적외선 이미징. J. Vis. 특급. (2017).이 비디오는 다음을 사용하여 시신경에서 실험적 자가면역 뇌척수염 또는 EAE 유발 염증을 시각화하고 모니터링하는 방법을 보여줍니다. 생물 발광 이미징. 여기에는 마우스 위치 지정, 시약 주입, 순차적 이미지 캡처를 포함하여 시간 경과에 따른 생물 발광의 변화를 모니터링하는 것이 포함됩니다.

EAE 마우스 모델의 생물 발광 이미징

우리는 염증 단계를 구별하기위한 비 침습 이미징 방법을 설명합니다. 루미놀의 전신 배달 호중구의 MPO 활동에 의존 급성 염증의 영역을 보여준다. 대조적으로, lucigenin의 주입은 대 식세포에서 Phox 활동에 의존 만성 염증으로 시각화 할 수 있습니다.

생체 내 이미징 방법에 급성 및 만성 염증을 구별하는

우리는 생체 살아있는 생물 발광 및 근적외선 SJL / J 마우스에서 다발성 경화증에 대한 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 모델에서 시신경염과 뇌염의 이미징 기술을 보여준다.

마우스의 다발성 경화증의 EAE 모델에서 시신경염 및 뇌 염증의 생물 발광 및 근적외선 영상

이 프로토콜 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 등 어떻게 고해상도 이미징 기술을 설명 하 고 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy에 정보를 얻기 위해 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하 여 작은 설치류에 이용 될 수 있다 망막 두께 microglial 각각 유통, 셀.

Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

이 프로토콜의 목표는 vivo에서집계 하는 알파 synuclein의 형성을 복제 하는 셀 기반 시스템을 제공 하는입니다. 세포내 알파 synuclein 포함은 국제화에 의해 주 뉴런에 시드는 고 세의 전파 관리 네이티브 microsomes 관련 알파 synuclein 집계 병 알파 synuclein 유전자 변형 쥐에서 분리.

소 대형의 강력한 셀 모델로 기본 신경 하 Microsomes 관련 알파 synuclein 집계의 외 인 관리

배우세요 알파-시누클레인 섬유를 주변 접종한 파킨슨병 마우스 모델에서 생체 발광 영상을 이용해 중추신경계 신경염증을 정량화하는 방법을. 비침습적 모니터링으로 신경 퇴행성 질환의 조기 진단이 가능합니다.

알파 - 시누 클레인 브릴의 주변 접종 후 형질 전환 마우스의 신경 염증의 생물 발광 영상

더 많은 동영상 탐색