생선 기름 보충제의 지질 프로필의 신속한 평가를위한 강력한 도구로 NMR 분광학

이 방법의 전반적인 목표는 핵 자기 공명 분광법(Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy)을 사용하여 피쉬 오일 보충제의 지질 프로필을 측정하는 것입니다. 이 방법은 피쉬 오일 보충제의 지질 함량 및 글리세롤 골격에 대한 다양한 지방산의 위치 분포와 같은 지질 분석의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 분리 및 정제 단계를 사용하지 않고 하나의 스냅샷에서 여러 다른 분자에 대한 빠르고 강력한 분석을 가능하게 한다는 것입니다.

양성자 및 탄소 NMR 분석을 위해 샘플을 준비하려면 먼저 주사기를 사용하여 식이 캡슐에서 약 110mg의 어유인 120마이크로리터를 추출하고 4mL 유리 바이알에 넣습니다. 피쉬 오일의 무게를 기록하십시오. 500마이크로리터의 BHT 스톡 용액을 사용하여 100mg의 피쉬 오일을 더하거나 뺀 10mg을 녹입니다.

오일을 용해시킨 후 모든 용액을 고품질의 5mm NMR 튜브로 직접 옮기고 캡을 부착합니다. 샘플 준비 후 24시간 이내에 샘플을 분석합니다. NMR 튜브를 스피너 터빈에 삽입합니다.

등급이 매겨진 깊이 게이지의 상단에 스피너와 튜브를 놓고 바닥 부분이 게이지 바닥에 닿을 때까지 튜브 상단을 부드럽게 밉니다. 그런 다음 NMR 튜브를 샘플 케이스의 열린 곳에 놓습니다. 샘플이 배치된 슬롯 번호를 기록해 둡니다.

NMR 기기에 샘플을 로드하려면 제어 컴퓨터로 돌아가서 SX-number를 입력하며, 여기서 number는 샘플을 담고 있는 샘플 케이스의 슬롯입니다. 중수소화 클로로포름의 중수소 신호가 화면에 나타날 때까지 기다립니다. 중수소 신호가 보이면 명령줄에 lock"을 입력하고 용매 목록에서 중수소 클로로포름을 선택하여 중수소 공명을 사용하여 샘플을 잠급니다.

명령줄에 bsmsdisp"를 입력하여 회전이 활성화되지 않았는지 확인합니다. 스핀 버튼이 녹색이면 클릭하여 스핀을 비활성화합니다. 새 데이터 세트를 생성하려면 new" 명령을 입력한 후 이름 탭에 데이터 세트의 이름을 입력하고 EXPNO라는 제목의 실험 번호 탭에 실험 번호를 입력합니다.

PROCNO라는 제목의 프로세스 번호 탭에서 1번을 사용합니다. TITLE 탭에서 실험의 제목을 작성합니다. 실험 탭에서 선택을 누르고 C13IG 매개변수 파일을 선택합니다.

그런 다음 편집기에서 선택한 항목 설정"을 누르고 확인을 클릭하십시오. 명령줄에 getprosol"을 입력하여 현재 NMR 프로브 및 용매에 대한 표준 매개변수를 얻습니다. 그런 다음 atma"명령을 입력하여 자동 튜닝을 수행하고 탄소 핵과 양성자 핵 모두에 대한 프로브를 일치시킵니다. 다음으로, 1차원 그래디언트 시밍(gradient shimming)을 수행하여 매우 균일한 자기장을 달성하여 NMR 신호에 대한 최적의 선 모양을 달성합니다.

이렇게 하려면 qu topshim 1dfast ss 명령을 순차적으로 실행하여 1D shim에 대한 표준 자동 절차를 사용하십시오. qu topshim tuneb ss; 및 qu topshim report"를 실행합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 매개변수 최적화 후 1차원 탄소 NMR 스펙트럼을 획득합니다. 이렇게 하려면 탄소 데이터 세트로 이동한 후 명령줄에 pulprog zgig"를 입력하여 역 게이트 디커플링 펄스 시퀀스를 사용하십시오.

명령줄에 명령을 입력하여 nppm으로 스펙트럼, RF 송신기의 중심, 스캔 수, 더미 스캔 수, 데이터 포인트 수 및 90도 펄스 각도에 대한 펄스 지속 시간을 설정합니다. 명령줄에 digmod baseopt"를 입력하여 개선된 기준선으로 스펙트럼을 획득합니다. 그런 다음 명령줄에 di 60s"를 입력하여 850MHz 기기에 대해 60초의 이완 지연을 설정합니다.

수신기 게인의 자동 계산을 위해 rga" 명령을 사용하여 수신기 게인을 적절한 값으로 설정합니다. 마지막으로, 명령줄에 pulse acquire command zg"를 입력하여 수집을 시작합니다. 데이터를 처리하려면 먼저 명령 줄에 si 64K"를 입력하여 제로 채우기를 적용하고 레일 스펙트럼의 크기를 64K로 설정하십시오.

그런 다음 명령줄에 lb 1.0"을 입력하여 회선 확장 매개 변수를 1.0Hz로 설정하여 4ea 변환 전에 회선 확장 계수가 1.0Hz인 대기 함수를 적용합니다. 명령줄에 efp"를 입력하여 4ea 변환을 실행합니다. 그런 다음 명령줄에 apk" 명령을 입력하여 자동 위상 보정을 수행합니다.

스펙트럼을 더욱 개선하기 위해 추가 상 조정이 필요한 경우 Process 탭을 클릭하십시오. 그런 다음 Adjust Phase 아이콘과 Phase Correction 아이콘을 클릭하여 0차 및 1차 위상 보정을 수행합니다. 0차 및 1차 위상 보정 아이콘을 클릭하는 동안 모든 신호가 포지티브 흡수 모드가 될 때까지 마우스를 드래그합니다.

Phase Correction 모드를 종료하려면 Return and Save 버튼을 클릭하여 위상 보정 값을 적용하고 저장합니다. 적분 시 기준선 수정을 위해 다항식 순방향 함수를 적용하려면 명령줄에 abs n" 명령을 입력합니다. TMS에서 화학적 이동을 ppm 단위로 보고하려면 TMS 신호를 확대한 다음 보정 아이콘을 클릭하고 참조할 NMR 신호(이 경우 TMS) 위에 빨간색 선이 있는 커서를 놓습니다.

임계값 강도를 조정하려면 필요한 경우 마우스 가운데 버튼을 사용합니다. 마우스 왼쪽 버튼을 클릭하고 0을 입력합니다. BHT를 내부 표준물질로 사용하는 경우, 피크의 각 측면에서 5헤르츠까지 확장되는 델타 151.45에서 피크를 적분합니다.

그런 다음 적분을 원액 0.5 밀리리터당 BHT의 마이크로몰과 동일하게 설정합니다. 관심 피크를 적분하여 피크의 각 측면에서 5헤르츠까지 확장합니다. 영역에 집중해야 하는 경우 강조 아이콘을 클릭하여 비활성화합니다.

그런 다음 마우스 왼쪽 버튼을 클릭하고 드래그하여 영역을 확대합니다. 강조 표시 아이콘을 다시 클릭하여 적분 기능을 활성화하고 다음 피크로 이동합니다. 마우스 왼쪽 버튼을 클릭하고 적분을 통해 커서를 끕니다.

Return Save Regions 버튼을 클릭합니다. 여기에 표시된 것은 카르보닐 탄소 영역에서의 탄소 NMR 분석의 대표적인 스펙트럼입니다. sn-1, 3 및 sn-2 위치에서 EPA 및 DHA의 NMR 신호가 표시됩니다.

이러한 신호는 EPA 및 DHA의 정량적 측정에 사용할 수 있습니다. 여기에 표시된 것은 양성자 NMR 분석의 대표적인 스펙트럼입니다. 이들의 결정에 사용될 수 있는 EPA 및 DHA의 NMR 신호가 표시되어 있습니다.

양성자 NMR 스펙트럼은 탄소 NMR 스펙트럼에 비해 스펙트럼 폭이 더 좁고 따라서 스펙트럼 해상도가 더 낮은 것이 특징입니다. 이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 30분 이내에 완료할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 지질 분석 분야의 연구자들이 건강 보조 식품, 식물성 기름 및 바이오 연료와 같은 다중 구성 요소 매트릭스에 나타나는 다양한 지질 성분을 신속하게 분석할 수 있는 길을 열었습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 어유 보충제의 지질 프로필 분석을 위해 양성자 및 탄소, NMR 분광법을 적용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. NMR 분광계에서 생성되는 강한 자기장으로 작업하는 것은 심박 조율기 및 수술 보철물뿐만 아니라 신용 카드 및 시계와 같은 전자 제품에 매우 위험할 수 있음을 잊지 마십시오.