Name: 위독한 병의 마우스 모델에서 유체, 약물 및 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-02T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: 학습하세요 중심정맥라인을 이용한 마우스 패혈증 모델 구축 방법을. 이 기술은 중환자의 대사 및 내분비 변화 연구에 활용되며, 인간 임상 환경을 모방한 재현 가능한 중증질환 모델을 제공합니다.

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GVdB는 루벤 대학교(KU Leuven)를 통해 플랑드르 정부가 자금을 지원하는 메투살렘 프로그램(METH08/07)으로부터 장기 구조 연구 지원을 받고 있으며, 유럽 연합 7차 프레임워크 프로그램의 아이디어 프로그램으로부터 유럽 연구 위원회 고급 보조금 AdvG-2012-321670을 보유하고 있습니다. SET는 FWO(Research Foundation-Flanders) 연구 보조 펠로우십을 받았습니다.

이 프로토콜은 동물 연구를위한 루벤 윤리 심사위원회의 대학에 의해 승인되었다. 정맥 라인 1. 준비 <ol><li> 빠르게 고온 (&gt; 220 ℃) ​​참기름 60cm의 microrenathane (MRE) 관의 중간 부분을 침지시켜 정맥 카테터의 팁을 준비한다. 이어서 부드럽게 서로 떨어져 튜브의 단부를 이동시켜 좁은 직경 (외경 (OD) &lt;0.5 mm)을 생성하기 위해 상기 튜브의 중간 부분을 스트레칭. </li><li> 30cm 각 (도 1, 표 1)의 두 부분으로 튜브를 절단 날 메스를 사용한다. </li><li> 폴리에틸렌 PE50 커넥터를 사용하는 폴리에틸렌 튜브로 MRE PE10 튜브를 연결하고, 상기 스위블의 하단 부분이 PE10 튜브를 연결한다. PE10 튜브 스위블의 상부를 연결하고,도 1에 따라 PE50 커넥터 튜브와 스터브 루어 바늘이 연결한다. </li><li> 적용 강력한 빠른 ACTI모든 연결에 아교 접착 겨 공기로 세척하여 누설 테스트 카테터. 가스는 사용하기 전에 카테터를 소독. </li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55553/55553fig1.jpg" /> 그림 1 : 정맥 라인의 건설. 정맥 라인이 작은 직경으로 MRE 튜브 연신 및 설치류 스위블 장치에 폴리에틸렌 튜브를 통해 접속함으로써 제조된다. 다른 부분의 길이에 대한 지침은 표 1을 참조하십시오. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55553/55553fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 전설 </td><td> 길이 </td><td> 음량 </td></tr><tr><td> 1) 스터브 루어 바늘 (22)지 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2) PE50 - 폴리에틸렌 0.023 &quot;X 0.038&quot; </td><td> 5cm </td><td> 13 μL </td></tr><tr><td> 3) PE10 - 폴리에틸렌 0.011 &quot;X 0.024&quot; </td><td> 50cm </td><td> 30 μL </td></tr><tr><td> 4) 설치류 스위블 20 G </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5) PE-10 </td><td> 15cm </td><td> 9 μL </td></tr><tr><td> 6) PE-50 (커넥터) </td><td> 5cm </td><td> 13 μL </td></tr><tr><td> 7) MRE025 팁 뻗어 microrenathane .025 &quot;X 0.012&quot; </td><td> 30cm </td><td> 27 μL </td></tr><tr><td> 총 합계 </td><td> 105cm </td><td> 92 μL </td></tr></tbody></table> 표 1 : 정맥 라인의 건설. 이 테이블은 그림 1의 전설을 제공합니다. 2. 마취 전 수술 처리 <ol><li> (- 32g 27) 24 주 오래 된 남성 C57BL / 6J 마우스를 사용합니다. 참고 :이 시대는 집중 치료 환자의 평균 연령은 더 나은 대응으로 우리는 24 주 된 쥐 (성숙한 성인)를 사용합니다. 우리는 에스트로겐의 순환 영향을 피하기 만 수컷 마우스를 사용합니다. 선호하는 경우 기술은, 젊은 (16 주 된 쥐에서 테스트) 동물과 여성 사용할 수 있습니다. </li><li> 사용하기 전에 모든 수술기구를 소독. 공기 방울을 제거하고, 명백하고 잠재적 누출 테스트 멸균 식염수 수제 정맥 카테터를 세척. </li><li> 80 센티미터 길이의 금속 선재 (0.8 mm 직경)을 잘라 폴딩하여 두배 루프를 만든다. 루프에 두 배로 와이어를 통해 3 진주를 리드. 3 진주 통해 카테터의 팁을 유도하여, 금속 와이어에 카테터를 연결. 주 : 금속 와이어 부착 카테터가 연결되어있는 회전의 회전이 필요하다. 따라서, 마우스는 정맥 라인을 차단하지 않고, 자유롭게 이동할 수 있습니다. </li><li> M 개의 마취0.03 mL의 케타민 (100 ㎎ / ㎏)의 0.02 mL의 자일 라진 (/ kg 13 mg)의 혼합물을 복강 내 (IP) 주입에 의해 여러개. 그 마취가 반사의 부재를 확인하여 적절한 있는지 확인하십시오. 부드럽게 혀 삼켜 질식을 방지하기 위해 집게와 외부 마우스 혀를 빼냅니다. 참고 : 10 분 후, 마우스가 여전히 철회하려고하면 팔다리가 0.01 ML 볼러스 같은 추가 케타민을 제공합니다. </li><li> 복부, 목의 복부 측면 (턱, 흉골 및 쇄골 사이 삼각형)을 포함하는 외과 영역을 면도하고) 상기 헤드의베이스에 견갑골 사이. </li><li> , 미리 예열 가열 패드에 발생하기 쉬운 위치에 마우스를 놓고 70 % 에탄올로 소독하고 피부를 건조로부터 눈을 보호하기 위해 안과 용 윤활제를 소량 적용. 0.2 ML의 ropivacaine (/ kg 0.67 mg)을 갖는 수술 부위 (다시 복부, 목 앞)에 침투. </li><li> 마우스가 발생하기 쉬운 위치에있는 동안, 등쪽 측의 바닥에 작은 절개를메스 나 가위로 머리. 후방 경부 근육을 노출하고, 근육 하에서 3.0 나일론 실을 선도 3.0 나일론 부착 와이어 루프 근육 넥타이. </li><li> 그 오른쪽에 마우스를 놓습니다. 메스 나 가위로 복부 목의 피부에있는 작은 수직 절개를합니다. 시각적지도하에 터널 바늘을 통해 미리 만들어진 카테터 스레드 후면 절개 방향이 복부 절개를 통해 18- 게이지 바늘 피하는 복부 측면을 외면 화하다있다. </li><li> 그 뒷면에 마우스를 놓습니다. 가열 패드 마우스와 테이프를 아래의 위쪽 앞니 뒤에 3.0 나일론 실을 전달합니다. 산소 (2 리터 / 분)을 전달하는 안면 마스크에 헤드를 고정. 꼬리 두 앞발을 녹화하여 신장 된 위치에 마우스를 수정합니다. 참고 : 혼자 케타민 - 자일 라진 마취가 충분하지 않은 경우, 흡입 이소 플루 란 (0.5-1.5 %)이 수술 중 전달 될 수있다. </li></ol><p클래스 = &quot;jove_title&quot;&gt; 3. 만성 내주 카테터의 배치 <ol><li> 해부 현미경으로 마우스를 놓습니다. 경정맥이 가시화 될 때까지 복부 목에 이전에 만든 절개에서 부드럽게 떨어져 집게로 지방 조직과 땀샘을 애타게. </li><li> 직설적 혈관 결합 조직 사이 나이프의 선단부를 삽입하고 정맥과 평행 반복 집게를 열어 용기와 상기 주변 결합 및 피하 조직에서 경정맥을 확보 해부. 따라서 정맥의 손상을 피할 수 있습니다. </li><li> 정맥에서 무딘 집게를 배치하여 경정맥을 분리합니다. 정맥 하에서 3.0 견사 세 개의 피드, 경정맥 (뇌 결찰)과 흉쇄 근육 (꼬리 합자) 부근에 일체의 분기점에 위치 일체형 근위. 두개골 합자 및 정맥을 스트레칭하고 카테터를 배치하는 동안 과도한 출혈을 방지하기 위해 꼬리 끈을 조입니다. 티즉, 중간 스레드와 느슨한 합자 나중에 카테터를 쉽게 확보를 보장합니다. </li><li> 마이크로 가위를 사용하여 뇌 및 꼬리 합자 카테터를 통과하는데 충분한 크기의 혈관을 따라 절개. 집게로 카테터를 잡아하고 카테터를 혈관에 11mm를 삽입합니다. 느슨하게 중간 끈을 묶는하여 카테터를 확보하고 부드럽게 멸균 식염수로 세척하여 정확한 위치를 확인합니다. </li><li> 단단히 선박 및 카테터 주위의 중간과 꼬리 끈을 묶는하여 카테터를 고정합니다. 타이 단단히 카테터를 확보하기 위해 함께 꼬리와 중간 합자 끝. 매듭은 모든 매듭을 만든 후 카테터를 세척하여 혈관을 폐색하지 않는 것이 확인하십시오. 마지막으로, 꼬리와 두개골 합자 넥타이. 5.0 실크 봉합과 절개를 닫습니다. </li></ol> 4. 맹장 결찰 및 찔린 <ol><li> 메스 나 가위로 복부 아래쪽의 피부를 통해 1 cm의 중간 선 절개를합니다;복강 내로 침투하지 않도록주의. </li><li> 복부 근육의 원격 교육 알바 식별 및 복강 내로 진입을 취득 할 intermuscular 절개. 맹장을 찾아 맹장을 분리하고 그것을 외면 화하다하는 무딘 해부 집게를 사용합니다. </li><li> 3.0 실크 봉합과의 길이의 50 % 맹장 결찰. 장 연속성이 유지되도록 회맹 판을 결찰하지 않도록합니다. </li><li> 관통와 연결하여 하나의 18 게이지 바늘로 맹장을 결찰 및 천공 맹장의 팁 사이의 천공 도중에. 바늘을 제거한 후에 개방성을 보장하기 위해 구멍 대변 소량 돌출. </li><li> 복강 내의 장 위치를 ​​조정하고, 5.0 실크 봉합사와 복막 피부를 닫는다. 참고 : 평균적으로, 새로운 연수생이 원활 정맥 카테터를 배치하고 45 분 이내에 CLP을 수행 할 수 있도록 10 ~ 15 동물을 필요로한다. 훈련 기간, 마취 / 수술 RELA 후10 %의 테드 사망률 기대할 수있다. </li></ol> 5. 후 수술 치료 및 유체 소생 <ol><li> 앙와위 마우스를 위치시키고 테이프 부착 와이어에 카테터를 고정. 개인 케이지에 마우스를 이동합니다. 스위블 장치를 마우스 위 25cm를 개최 조절 클램프와 스탠드를 사용하여 단단히 회전의 회전 지점에 금속 부착 와이어의 자유 부분을 테이프. </li><li> 정맥 라인에 유체 소생 시작 : 균형 콜로이드 정출 (4 1)의 혼합물을 함유하는 주사기를 첨부. </li><li> 12 시간의 명암 사이클을 갖는 조절 된 온도 (27 ° C) 동물 캐비닛의 케이지를 놓고 정확한 주사기 구동 주입 펌프를 통해 정맥 소생 유체 (10 ㎖ / kg / H)를 시작한다. 이러한 중첩 재료와 나무 블록으로 케이지 농축을 제공합니다. </li></ol> 6. 집중 치료 <ol><li> 6 시간 후 동작에서 통증 피하 주사 medication 및 항생제 (0.3 mL로의 부 프레 노르 핀 (0.15 ㎎ / ㎏) 및 0.2 ㎖의의 이미페넴 (16.67mg / kg)). 참고 : 기관의 동물 정책의 지시에 따라 표준 실험 동물 의학 연습 다음은 통증 약을 처음 투여 후 초기 수술 절개하기 전에 주어진된다. 피하 주사는 신중 피하 공간에 주입한다. </li><li> 20 후 - 소생 유체에 24 시간, 총 정맥 영양 (6.67 ㎖ / kg / h)에 의해 정출 / 콜로이드 대체. 참고 : 관리 총 정맥 영양 (5.8 킬로 칼로리 / 24 시간)은 중환자 실에서 환자의 초기 칼로리 섭취량과 유사한 쥐의 일일 칼로리 요구의 40 %를 커버한다. </li><li> 피하 진통제 항생제 (0.6 mL로의 부 프레 노르 핀 (0.3 ㎎ / ㎏) 및 0.2 ㎖의의 이미페넴 (16.67 ㎎ / ㎏) 중요 질병의 전체 기간 동안 매 12 시간 관리. </li><li> 낮에는 동물 적어도 매 3 시간을 확인합니다. 고통을 주어 고통을 평가검증 된 마우스 얼굴을 찡 그리기 스케일 (11)을 기준으로 점수. 높은 통증 점수 동물에 대한 모니터링을 강화합니다. </li></ol> 실험 7. 끝 참고 : 승인 및 모델과 인간의 엔드 포인트에 대한 지침과 정책의 정도의 수준에 대한 권장 사항은 동물 연구를위한 지역 기관 윤리 심사위원회에서 모색되어야한다. 주 : 차단 카테터는 카테터의 비편 재화 등의 비 기능 정맥 라인의 경우, 주사기 펌프에 문제가 동물이 연구에서 제외하고 안락사된다. <ol><li> 실험 기간의 끝에서, 깊이 0.03 mL의 케타민 (100 ㎎ / ㎏) 및 0.02 ㎖ (13 ㎎ / ㎏) 자일 라진의 혼합물을 사용하여 마우스를 마취. 심장 천자로 혈액을 철회하여 마우스를 안락사. 스토어는 -80 ° C에서 관심의 냉동 조직 샘플 웁니다. </li></ol>

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</ol>

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우리는 유체, 마약과 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용과 패혈증을 유발하는 맹장 결찰 및 천공 방법을 결합하여, 중요한 질병의보다 임상 적 마우스 모델을 개발했다. 이 실험 장치는 재현, 이에 인간의 임상 상황 (1)을 흉내 낸, 안정적인 사망률에 중요한 질병 및 결과의 연장 상을 연구 할 수 있습니다. 맹장 결찰 및 천공 광범위 패혈증 6, 7의 주요 기능을 재현 급성 중요한 질병의 동물 모델로 인식되고있다. 그러나, 급성 중요한 질병의 모델은 해결되지 않은 여러 장기 부전, 근육 쇠약, 내분비 및 주요 질병의 연장 단계의 전형적인 대사 변화에 대한 연구를 허용하지 않습니다. 또한,이 모델 전임상 연구 결과는 종종 translat하는 데 실패8, <sup cla...

중요한 질병은 하나 이상의 기관 시스템의 기능을 집중적으로 의료 지원을 투여하지 않는 환자가 죽을 정도에 방해되는 질병 상태이다. 중환자 실 (ICU) 외상, 복잡한 수술, 화상, 패혈증 질병 악화에 이르기까지 다양 할 수 입학 초기 원인 반면, 모든 중증 환자는 다른 사람의 사이에서 혈류, 저산소증과 과도한 염증에 의한 세포 손상, 고통 어느 장기 장애로 이끈다. 대부분의 환자들은 급성 모욕 생존하지만, 환자의 중요한 부분은 즉시 복구하고 장기 집중 치료가 필요하지 않습니다. 그들은 인해 여러 장기 부전 비 해결에 죽음의 높은 위험이 있습니다. 또한, 중요한 질환의 연장 상 기전은 현재 불완전하게 이해되어있는 심각한 근육 약화 및 내분비 및 대사 변화에 의해 hallmarked된다. 여러 연구odent 모델은 중요한 치료 연구 환경에서 사용되고있다. 두 주로 사용 모델은 지질 다당류 (LPS) 및 맹장 결찰과 천자 (CLP)의 외생 관리입니다. 두 모델은 감염에 대한 조절 이상 호스트 응답에 의한 생명을 위협하는 장기 부전으로 정의 패혈증의 급성기를 모방하기 위해 개발, 전 세계적으로 ICU 1, 2, 입학의 주요 원인 중 하나입니다. 그것은 단지 일시적으로 사이토 카인의 방출과 동물 3의 혈역학 적 상태에 영향을 미치는 것처럼 LPS 모델은 몇 가지 단점이있다. 인간과 달리, 설치류은 독소 특히 저항성 및 내 독소 &quot;고용량&quot;의 사용은 본 명세서에있어서,이 방법 (4, 5)의 유효성에 대한 우려를 제기, 저혈압 및 사망률을 생성 할 필요가있다. 다른 모델, 맹장 결찰과 천자 모델 (CLP)바늘 구멍 및 관통 연결 하였다 맹장의 일부분의 결찰을 특징으로한다. 이 절차는 혈액 구획 내로 박테리아의 전위이어서 조직 손상과 함께 polymicrobial 복부 감염을 야기한다. 이것은 전신 염증 반응 및 패혈증의 개발을 트리거합니다. hyperinflammation, 혈관 확장, 저혈압 및 증가 된 심 박출량 6, 7 : CLP 모델은 광범위 패혈증의 주요 특징을 재현 중요한 급성 질환의 동물 모델로서 인식되어왔다. 그러나이 모델은 해결되지 않은 여러 장기 부전, 근육 쇠약, 내분비 및 주요 질병의 연장 단계의 전형적인 대사 변화의 연구를 허용하지 않습니다. 마우스 모델에서 연구 결과는 항상 인간의 8 설정으로 변환 할 수 없기 때문에 또한, 최근 주요 질병에 대한 마우스 모델의 타당성은 의문을 제기 한9, 10. 가능한 설명은 아픈 사람의 환자를 결정적 제공되는지지 요법이 중증 마우스에 제공되는 관리에서 실질적으로 차이가 있음을 수 있습니다. 따라서, 더 밀접하게 인간의 설정을 닮은 중요한 질병의 연장 단계의 조사를 할 수 있도록, 우리는 광범위한 정맥 유체 관리 및 항생제 치료로 인간에게 주어진 급성 집중 치료를 모방 한 마우스 모델을 개발하고, 허용하는 같은 영양 지원과 같은 중요한 질병의 연장 상을 살아 남기 위해지지 요법을 관리합니다. 이를 위해, 우리는 패혈증을위한 황금 표준되고, CLP-에 의한 패혈증의 마우스 모델을 채택하고, 유체, 영양과 약물의 관리를 가능하게하는 중심 정맥 라인을 배치했다.

<table><tbody><tr><td>부프레노르핀</td><td>에쿠파르</td><td></td><td>베터지식 0.3 mg/mL</td></tr><tr><td>C57BL/6&nbsp;</td><td>Janvier labs</td><td>C57BL/6JRj</td><td></td></tr><tr><td>콜로이드</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td>Volulyte 6%</td></tr><tr><td>crystalloids</td><td>Baxter</td><td></td><td>Plasmalyte a viaflo</td></tr><tr><td>Ethilon 3.0</td><td>Ethicon</td><td>F3211</td><td></td></tr><tr><td>Imipenem</td><td>MSD</td><td></td><td>Tienam 500&nbsp; 주입 유체용 mg 분말</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Eurovet</td><td></td><td>Iso-vet</td></tr><tr><td>케타민</td><td>Eurovet</td><td></td><td>Nimatek 100 mg/mL</td></tr><tr><td>LocTite Super glue3 모든 플라스틱&nbsp;</td><td>Rectavit</td><td>119818</td><td></td></tr><tr><td>Mersilk 3.0</td><td>Ethicon</td><td>L192</td><td></td></tr><tr><td>Mersilk 5.0</td><td>Ethicon</td><td>F682</td><td></td></tr><tr><td>Microrenathane .025" O.D. x .012" I.D.</td><td>Bioseb</td><td>MRE-025</td><td></td></tr><tr><td>올리멜 N7E</td><td>Baxter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE10 - 폴리에틸렌 .011" x .024"&nbsp;</td><td>Instech Solomon</td><td>BTPE-10</td><td></td></tr><tr><td>PE-50 튜빙 .023" x.038"</td><td>Instech Solomon</td><td>BTPE-50</td><td></td></tr><tr><td>설치류 회전 20 G</td><td>Bioseb</td><td>RS-20G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>로피바카&이울; ne</td><td>Astrazenica</td><td></td><td>Naropin 2&nbsp; mg/mL</td></tr><tr><td>자일라진</td><td>VMD</td><td></td><td>자일라진 염산염 2%</td></tr></tbody></table>

위독한 병의 마우스 모델에서 유체, 약물 및 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용

Use of a Central Venous Line for Fluids, Drugs and Nutrient Administration in a Mouse Model of Critical Illness

이 프로토콜은 장기간 중요한 질병의 중앙 카테터 마우스 모델에 대해 설명합니다. 우리는 인간의 임상 설정을 모방하는 유체, 마약과 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용과 패혈증을 유발하는 맹장 결찰 및 천공 방식을 결합한다. 비판적으로 아픈 환자는 살아 남기 위해 집중적 인 의료 지원을 필요로한다. 환자의 대부분은 몇 일 내에 회복되지만, 환자의 4 분의 1 정도는 장기간 집중적 인 치료가 필요하고 여러 장기 부전 비 해결 사망의 위험이 높은. 또한, 중요한 질환의 연장 상 기전은 현재 불완전하게 이해되어있는 심각한 근육 약화 및 내분비 및 대사 변화에 의해 hallmarked된다. 중요한 치료 연구에서 가장 널리 사용되는 동물 모델은 패혈증을 유발하는 맹장 결찰 및 천공 모델입니다. 이것은 인간의 9월과 유사한 급성 염증 및 혈역학 적 변화에 매우 재현성 모델입니다중요한 질병의 급성기을 연구하기 위해 설계 동생. 그러나,이 모델은 임상 인간의 상황과 다른, 중요한 질병의 연장 상을 연구하기 위해 개발되지 않은 높은 치사율에 의해 hallmarked됩니다. 따라서, 우리는 더 중요한 질병의 인간 임상 상황을 모방하기 위해, 우리가 임상 적으로지지 요법을 관리 할 수 ​​있도록 경정맥에 중심 정맥 카테터를 배치하여 기술을 적용. 이 마우스 모델은 동물의 광범위한 수술 및 일상 집중 치료를 필요로하지만, 중요한 질병의 급성 및 장기간 단계의 관련 모델을 초래한다.

상술 한 바와 같이 C57BL / 6 마우스는 중환자 하였다. 우리는 두 시점까지 후 CLP 생존율을 평가하기 위해 두 가지 실험을 수행 하였다 : 생존 7 일 (N = 22)까지 5 일 (N = 15)를 생존 후 CLP까지. 두 실험의 생존 곡선은 실험 장치의 재현성을 나타내는 (제 5 일까지 비교) 차이가 없었다. 비 생존 동물로 인해 인명 엔드 포인트에 죽음을 발견하거나 안락사되었다. 3 일 후, 항생제의 대정 jugularis의 정맥 카테터를 통한 유체 소생 총 정맥 영양과 조합 맹장 50 %의 결찰, 설명한 바와 같이, 중요한 질환 후 1 일 후에 13 % 치사율 결과, 24 % 사망률 중요한 질병, 27 - 중요한 질병 5 일 후에 31 %의 사망률과 중요한 질병 7 일 후 36 %. 열량 있었던 건강 쌍 먹인 마우스는 매우의 영양 섭취에 한정병 마우스는 어떤 사망률을 보이지 않았다. <p class="jove_content" fo:keep-toget...

이 프로토콜은 장기간의 심각한 질병에 대한 중앙 카테터 삽입 마우스 모델을 설명합니다. 우리는 패혈증을 유도하기 위해 두골 결찰 및 천자 방법을 결합하고 수액, 약물 및 영양 투여를 위한 중심 정맥 라인을 사용하여 인간의 임상 환경을 모방합니다.

This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce ...

중앙 분류된 이 마우스 맹장 결찰 및 천공(cecal ligation and puncture, CLP) 방법의 전반적인 목표는 인간의 임상 환경을 모방하기 위해 집중 치료 조치를 병행하여, 장기화된 중증 질환의 재현 가능한 모델을 만드는 것입니다. 이 방법은 급성 및 장기 중증 질환 동안 발생하는 내분비 및 대사 변화의 병인과 관련하여 집중 치료 의학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.이 기술의 주요 장점은 잘 표준화된 CLP 기술과 수액, 약물 및 영양제 투여를 위한 중심 정맥관 사용을 결합했다는 점입니다. 본 실험실의 기술자인 Thomas Dufour가 해당 절차를 시연하겠습니다. 정맥관 팁을 준비하려면, 60 centimeter 마이크로-레나테인 튜브 조각의 중간 부분을 220 degree celsius 이상의 참기름에 빠르게 담그십시오.튜브 양 끝을 조심스럽게 잡아당겨 튜브 중간 부분을 늘려 중앙 직경을 좁게 만든 다음, 메스 날을 사용하여 튜브를 30 cm 길이의 동일한 두 조각으로 자릅니다. 이제 시연된 것과 같이 폴리에틸렌 PE 50 커넥터, 스위벨 및 Luer stub 니들을 튜브에 연결하여 카테터를 제작하고, 모든 연결 부위에 강력하고 빠르게 경화되는 접착제를 도포합니다. 접착제가 완전히 경화되면 카테터에 공기를 불어넣어 누출 여부를 확인합니다. 그다음, 직경 0.8 mm의 금속 와이어를 80 cm 길이로 잘라 와이어를 반으로 접어 루프를 만듭니다.루프의 이중 와이어 위로 진주 3개를 끼우고, 멸균된 카테터의 팁을 이 진주 3개 사이로 통과시켜 카테터를 와이어에 부착합니다. 27~32 g 무게의 24주령 수컷 c57 black six 마우스를 마취시키고, 발가락 꼬집기 반응이 없는 것을 통해 진정 상태를 확인합니다. 혀를 삼키는 것을 방지하기 위해 포셉을 사용하여 혀를 입 밖으로 조심스럽게 당겨냅니다.다음으로 수술 부위를 제모한 후, 마우스를 미리 가열된 가열 패드 위에 복와위로 놓습니다. 노출된 피부를 70% ethanol로 소독하고 안과용 윤활제를 소량 도포합니다. 수술 부위에 진통제를 침윤시키고 머리 등쪽 기저부에 작은 절개창을 냅니다.후경부 근육을 노출시키고, 3.0 나일론 실을 근육 아래로 통과시켜 고정 와이어의 루프를 근육에 묶습니다. 다음으로, 마우스를 오른쪽으로 눕힌 상태에서 복측 목 피부에 작은 수직 절개를 가합니다. 18게이지 바늘을 이 복측 절개 부위를 통해 피하로 등 쪽 절개 부위를 향해 삽입한 후, 카테터를 바늘을 통해 통과시켜 바늘이 복측으로 나오게 합니다.마우스의 등을 아래로 향하게 한 상태에서, 3-0 나일론 실을 상악 절치 뒤로 통과시켜 가열 패드에 테이프로 고정합니다. 그런 다음, 꼬리와 앞다리를 팽팽하게 펴진 상태로 고정합니다. 이제 해부 현미경의 초점을 맞추고, 핀셋을 사용하여 경정맥이 보일 때까지 복부 절개 부위의 지방 조직과 샘을 조심스럽게 걷어냅니다.포셉의 끝을 정맥과 결합 조직 사이에 두고, 정맥과 평행하게 포셉을 반복적으로 벌려 경정맥을 혈관 주위의 결합 조직 및 피하 조직으로부터 둔성 박리합니다. 혈관이 분리되면, 둔성 포셉을 경정맥 아래에 놓고 3-0 실크사 두 가닥을 정맥 아래로 통과시킵니다. 이때 한 가닥은 두부 결찰을 위해 경정맥 분지점에 가깝게 배치하고, 다른 한 가닥은 미부 결찰을 위해 흉쇄유돌근 가까이에 배치합니다.카테터를 삽입하는 동안 정맥을 신장시키고 과도한 출혈을 방지하기 위해 두측 및 미측 결찰사를 조입니다. 세 번째 실을 사용하여 느슨하게 결찰한 다음, 미세 가위를 이용해 두측 결찰사와 미측 결찰사 사이의 정맥을 따라 카테터가 통과할 수 있을 만큼 충분한 크기로 절개합니다. 포셉을 사용하여 카테터를 정맥 내부로 11 mm 삽입하고, 중앙 결찰사로 카테터를 느슨하게 고정합니다.멸균 식염수로 카테터를 부드럽게 세척하여 정확하게 배치되었는지 확인합니다. 그런 다음, 미측 및 중간 결찰사를 단단히 조입니다. 카테터를 고정하기 위해 미측 및 중간 결찰사의 끝을 서로 묶습니다.매듭을 지을 때마다 카테터를 플러싱하여 정맥이 매듭에 의해 폐쇄되지 않았음을 확인합니다. 마지막으로, 두측 결찰 부위 또한 결찰합니다. 그런 다음, 5-0 실크 봉합사로 절개 부위를 봉합합니다.맹장 결찰 및 천공을 위해, 복강 내로 침범하지 않도록 주의하며 복부 하단 절반의 피부 중앙을 1cm 절개합니다. 복근의 백선(linea alba)을 확인한 후, 근육 사이를 절개하여 복강 내로 진입합니다.뭉툭한 해부학용 포셉을 사용하여 맹장을 분리하고 외부로 노출시킵니다. 회맹판이 압박되지 않도록 주의하며 3-0 실크 봉합사로 맹장 길이의 50% 지점을 결찰하여 장의 연속성을 유지합니다. 그런 다음, 18게이지 바늘을 사용하여 결찰 부위와 맹장 끝의 중간 지점에 맹장을 완전히 관통하는 단일 천공을 만들고, 바늘을 제거한 후 개통성을 확인하기 위해 구멍을 통해 소량의 분변을 밀어내어 배출시킵니다.장관을 복강 내로 다시 배치하고, 5-0 silk 봉합사로 복막과 피부를 봉합합니다. 마우스를 배와위(supine position)로 눕힌 상태에서 카테터를 고정 와이어에 테이프로 고정합니다. 그런 다음, 둥지 재료와 나무 블록이 들어 있는 개별 케이지에 마우스를 넣습니다.조절 가능한 클램프가 달린 스탠드를 사용하여 스위블 장치를 클램프에 고정하고, 금속 연결 와이어의 자유로운 부분을 스위블의 회전 지점에 단단히 테이프로 고정합니다. 그다음, 케이지를 12시간의 명암 주기가 설정된 27 degree celsius 온도 조절 동물 사육장에 넣습니다. 균형 잡힌 콜로이드와 결정질 용액의 적절한 혼합물이 들어 있는 주사기를 정맥 라인에 연결하고, 정밀한 주사기 펌프를 사용하여 0.3 millimeters per hour의 속도로 수액 소생술을 시작합니다.6시간 후, 진통제와 항생제를 투여합니다. 5일 및 7일 기간의 맹장 결찰 및 천공 실험의 생존 곡선을 분석한 결과, 두 연구 간의 생존율은 5일까지 유의미한 차이가 없었으며, 이는 실험 설정의 재현성을 강조합니다. 정맥 카테터를 통한 경정맥 내 항생제, 수액 소생술 및 총정맥영양법과 병행하여 맹장의 50%를 결찰했을 때, 중증 질환 발생 1일 후 사망률은 13%로 나타납니다.중증 질환 발생 3일 후의 사망률은 24%, 5일 후의 사망률은 27%에서 31%, 7일 후의 사망률은 36%였습니다. 반면, 중증 질환 쥐의 영양 섭취 수준으로 칼로리를 제한하여 급여한 건강한 대조군 쥐들은 두 실험 모두에서 사망 사례가 나타나지 않았습니다. 기술을 숙달하기 위해 10~15마리의 동물을 대상으로 연습한 후에는, 절차가 적절하게 수행된다는 가정하에 45분 이내에 카테터 삽입 및 CLP를 완료할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때 카테터를 정맥에 조심스럽게 삽입해야 함을 기억하십시오. 카테터를 심장 쪽으로 너무 깊게 삽입하면 심부정맥을 유발할 수 있습니다. 반대로 충분히 깊게 삽입하지 않으면 카테터가 쉽게 빠져나올 수 있습니다.카테터가 혈관의 내강 내에 배치되었는지 항상 확인하십시오. 카테터가 혈관벽의 층 사이에 배치되면 액체가 주변 조직으로 누출됩니다. 이 모델은 광범위한 외과적 수술 절차와 동물에 대한 매일의 집중 관리가 필요할 수 있습니다.하지만 이는 급성 및 만성 중증 질환의 다양한 측면을 연구할 수 있게 하는 안정적이고 재현 가능한 모델을 생성합니다.

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인슈린 과다 - euglycemic 클램프, 또는 인슐린 클램프는 인슐린 행동을 평가하기위한 황금...

의식 억제 마우스에 인슈린 과다 - euglycemic 클램프

정맥자가 관리 (IVSA) 패러다임은 동물의 학대 약물의 강화 속성을 검사의 황금 표준으로 간주됩니다. 이 원고는 신뢰할 수있는 IVSA 데이터를 얻기 위해 필요한 실험 절차와 수술 기법을 설명합니다. 특히, 세심한 카테 테르 주입 및 유지 관리가 강조 표시됩니다.

마우스 모델에서 정맥 주사 자기 관리를위한 방법

이 비디오에서는 약물 및 추적 염료와 같은 실험제를 생체 내에서 정맥 주사할 수 있는 마우스 모델의 경정맥에 카테터를 이식하는 방법을 설명합니다. 이러한 배열은 다른 시스템에 연결될 때 혈역학 및 혈액 샘플링을 모니터링하는 데에도 사용할 수 있습니다.

카테터 기반 실험제의 정맥 주사: 마우스 모델에서 경정맥을 통해 실험제를 정맥 주사하는 기술

혈역학을 측정하고, 체액을 제공하고, 혈액 샘플링을 수행하기 위한 혈관 접근은 모든 소동물 모델 연구에 중요합니다. 우리는 마취된 쥐의 경동맥과 총경정맥에 카테터를 이식하여 모니터링, 주입 및 샘플링을 수행하기 위해 시스템에 연결하는 기술을 제시합니다.

경동맥과 경정맥의 도관은 의식 쥐 모델에서, 혼합 및 혈액 샘플링을 혈역학 적 조치를 수행하는

이 영화는 생쥐의 조직 및 간 혈류 역학을 취득하는 방법을 보여줍니다. 전체의 모니터링은 중요한 파라미터, 전신 혈압, 중심 정맥압, 간동맥 유량 및 포털 정맥 압력뿐만 아니라 마우스에서 포털 유량의 획득을 포함한다.

마우스의 전신과 간장 혈 역동 학적 파라미터의 모니터링

여기 선물이 아닌 intubated에 veno 정 맥 체 외 막 산 소화 (ECMO)의 기술, 저절로 호흡 마우스를 설명 하는 프로토콜. ECMO murine 모델 실험 연구의 급성 및 말기 폐 질환에 효과적으로 구현할 수 있습니다.

마우스에 Veno 정 맥 체 외 막 산소

대반 카발 누공은 두 벽을 통해 뮤린 적외선 대인 대공을 열등한 정맥으로 뚫고 열등한 정맥 카바의 부분 결찰을 통해 유출에 협착증을 생성하여 만들어졌습니다. 이 재현 가능한 모델은 중앙 정맥 협착증을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

이 프로토콜은 마우스에서 다중 정맥 볼루스 용량 투여 및 침습적 혈류역학적 모니터링을 실행하기 위한 단계별 절차를 제공합니다. 조사관은 폐동맥 고혈압에 대한 향후 치료 화합물 스크리닝을 위해 이 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

저산소증 유도 마우스 폐동맥 고혈압 모델에서 다중 정맥 볼루스 투여 및 침습적 혈류역학 평가

이 프로토콜은 반복적인 약물 치료를 위해 경정맥 카테터를 갖는 혈관 접근 포트의 아포리포단백질 E(ApoE) 결핍 마우스에서 안지오텐신 II 방출에 의해 복부 대동맥류를 유도하기 위한 삼투압 펌프의 연속 이식을 기술한다. 3D 초음파에 의한 동맥류 발달 모니터링은 등쪽 임플란트에도 불구하고 효과적으로 수행됩니다.

안지오텐신 II의 마우스 모델에서 중앙 정맥 카테터에 의한 약물 치료 유도 복부 대동맥류 및 3D 초음파에 의한 모니터링

이 논문은 정맥 결찰을 달성하기 위해 혈관 클립을 사용하여 마우스 암 모델에서 정맥 혈전증을 평가하기 위한 최적화된 방법을 제시하는 것을 목표로 합니다. 최적화는 혈전증 관련 측정의 변동성을 최소화하고 인간 암 관련 정맥 혈전증과의 관련성을 향상시킵니다.

암의 마우스 모델에서 정맥 혈전증 분석

간 인슐린 청소는 포도당 항상성을 조절하는 데 중요합니다. 이 기사는 마우스의 현장 간 인슐린 제거율을 직접 평가하기 위한 사용자 친화적인 간 관류 절차에 대해 설명합니다.

In Situ Liver Perfusion을 통한 마우스의 인슐린 제거율 평가

학습하세요 중심정맥라인을 이용한 마우스 패혈증 모델 구축 방법을. 이 기술은 중환자의 대사 및 내분비 변화 연구에 활용되며, 인간 임상 환경을 모방한 재현 가능한 중증질환 모델을 제공합니다.

위독한 병의 마우스 모델에서 유체, 약물 및 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용

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