위독한 병의 마우스 모델에서 유체, 약물 및 영양 관리를위한 중심 정맥 라인의 사용

두골 결찰 및 천자(CLP)를 위한 이 중앙 분류 마우스 방법의 전반적인 목표는 인간의 임상 환경을 모방하는 집중 치료 조치를 통해 장기간의 심각한 질병에 대한 재현 가능한 모델을 만드는 것입니다. 이 방법은 집중 치료 의학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 급성 및 장기간의 심각한 질병 중 내분비 및 대사 변화의 발병 기전에 대해.

이 기술의 주요 장점은 잘 표준화된 CLP 기술과 수액, 약물 및 영양 투여를 위한 중심 정맥 라인의 사용을 결합한다는 것입니다. 이 절차를 시연하는 사람은 우리 연구실의 기술자인 Thomas Dufour입니다. 정맥 라인 팁을 준비하려면 60cm 마이크로 레나탄 튜브 조각의 중간 부분을 섭씨 220도 또는 더 뜨거운 참기름에 빠르게 담그십시오.

튜브의 끝을 부드럽게 당겨 튜브의 중앙을 늘리고 좁은 중앙 직경을 만들고 메스 날을 사용하여 튜브를 30cm 크기의 두 조각으로 자릅니다. 이제 튜브를 폴리에틸렌 PE 50 커넥터, 스위블 및 루어 스터브 바늘에 연결하여 시연된 대로 카테터를 구성하고 모든 연결부에 강력하고 속효성 접착 접착제를 바릅니다. 접착제가 경화되면 카테터를 공기로 씻어내고 누출 여부를 확인한 다음 직경 0.8mm의 금속 와이어에서 80cm 조각을 자르고 와이어를 다시 접어 고리를 만듭니다.

루프의 이중 와이어 위로 3개의 진주를 연결하고 멸균된 카테터의 끝을 3개의 진주를 통해 안내하여 카테터를 와이어에 부착합니다. 27-32g, 24주 된 수컷 c57 블랙 식스 마우스를 마취하고 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족으로 진정을 확인합니다. 혀를 삼키지 않도록 집게를 사용하여 혀를 입 밖으로 부드럽게 빼냅니다.

다음으로, 수술 부위를 면도한 다음 미리 예열된 발열 패드에 엎드린 자세로 마우스를 놓습니다. 노출된 피부를 70% 에탄올로 소독하고 소량의 안과 윤활제를 바릅니다. 진통제로 수술 부위에 침투하여 머리의 등쪽 기저부를 작게 절개합니다.

후방 경추 근육을 노출시키고 근육 아래에 3.0 나일론 조각을 끼워 부착 와이어의 고리를 근육에 묶습니다. 그런 다음 마우스를 오른쪽에 놓고 복부 목의 피부를 세로로 작게 절개합니다. 이 복부 절개 부위를 통해 18 게이지 바늘을 뒤쪽 절개 부위 쪽으로 피하 터널을 뚫고 바늘을 통해 카테터를 끼워 넣어 복부 쪽에서 바늘을 돌출시킵니다.

마우스를 등에 업고 위쪽 앞니 치아 뒤에 3개의 0 나일론 실을 통과시키고 나일론을 가열 패드에 테이프로 붙입니다. 그런 다음 꼬리와 앞다리를 쭉 뻗은 자세로 고정합니다. 이제 해부 현미경의 초점을 맞추고 집게를 사용하여 경정맥이 시각화될 때까지 복부 절개 부위의 지방 조직과 땀샘을 부드럽게 떼어냅니다.

겸자 끝을 정맥과 결합 조직 사이에 놓고 정맥과 평행하게 집게를 반복적으로 열어 혈관 주변의 결합 및 피하 조직에서 경정맥을 무디게 절개합니다. 혈관이 분리되면 뭉툭한 집게를 경정맥 아래에 놓고 정맥 아래에 3개의 0 명주실 2개를 공급합니다. 한 조각은 두개골 결찰을 위해 경정맥의 분기점에 근사하고 한 조각은 꼬리 결찰을 위해 흉쇄유돌근에 가깝게 배치합니다.

두개골과 꼬리 결찰을 조여 정맥을 늘리고 카테터를 삽입하는 동안 과도한 출혈을 방지합니다. 세 번째 실을 사용하여 느슨한 결찰을 만든 다음 마이크로 가위를 사용하여 카테터를 통과할 수 있을 만큼 큰 두개골과 꼬리 결찰 사이의 정맥을 따라 절개합니다. 집게를 사용하여 카테터를 정맥에 11mm 삽입하고 중간 결찰로 카테터를 느슨하게 고정합니다.

카테터를 멸균 식염수로 부드럽게 세척하여 올바른 위치를 확인합니다. 그런 다음 꼬리와 중간 결찰을 단단히 조입니다. 꼬리와 중간 결찰의 끝을 함께 묶어 카테터를 고정합니다.

정맥이 매듭에 의해 막히지 않았는지 확인하고, 매듭을 묶을 때마다 카테터를 세척합니다. 마지막으로 두개골 결찰도 합니다. 그런 다음 5개의 제로 실크 봉합사로 절개 부위를 봉합합니다.

세칼 결찰 및 천자의 경우 복막강을 관통하지 않도록 주의하면서 복부 하반부 피부를 통해 1cm 정중선을 절개합니다. 복부 근육 조직의 linea alba를 확인한 후. 복막강으로 들어가기 위해 근육 사이를 절개합니다.

뭉툭한 해부학적 겸자를 사용하여 맹장을 분리하고 외부화합니다. 3개의 제로 실크 봉합사로 맹장을 길이의 50%로 접합하고 회장 판막을 수축시키지 않도록 주의하여 장의 연속성이 유지되도록 합니다. 그런 다음 18게이지 바늘을 사용하여 결찰과 맹장 끝 사이의 중간에 단일 관통 및 관통 천공으로 맹장을 뚫고 구멍에서 소량의 대변을 추출하여 바늘을 제거한 후 개통성을 보장합니다.

복강에서 장의 위치를 조정하고 5개의 제로 실크 봉합사로 복막과 피부를 닫습니다. 마우스를 누운 위치에 놓고 카테터를 부착 와이어에 테이프로 붙입니다. 그런 다음 중첩 재료와 나무 블록이 있는 개별 케이지에 마우스를 넣습니다.

조정 가능한 cl이 있는 스탠드 사용amp, 회전 장치를 cl에 놓습니다.amp 금속 부착 와이어의 자유 부분을 회전의 회전 지점에 단단히 테이프로 붙입니다. 그런 다음 케이지를 섭씨 27도의 온도 조절 동물 캐비닛에 12시간 동안 밝고 어두운 주기로 놓습니다. 균형 잡힌 콜로이드와 결정질의 적절한 혼합물이 포함된 주사기를 정맥관에 부착하고 정확한 주사기 구동 주입 펌프를 사용하여 시간당 0.3mm로 유체 소생을 시작합니다.

6시간 후 진통제와 항생제를 주사합니다. 1회, 5일, 1회, 1회, 7일째의 두부 결찰 및 천자 실험의 생존 곡선을 분석한 결과, 5일차까지 두 연구의 생존율이 크게 다르지 않았음을 확인할 수 있으며, 이는 실험 설정의 재현성을 강조합니다. 경정맥의 정맥 카테터를 통해 항생제, 수액 소생술 및 전체 비경구 영양과 함께 맹장의 50%를 결찰하면 심각한 질병 하루 후 13%의 사망

중증 질환 3일 후 사망률은 24%, 중증 질환 5일 후 사망률은 27%-31%, 중증 질환 7일 후 사망률은 36%입니다. 그러나 위독한 질병에 걸린 쥐의 영양 섭취량으로 칼로리가 제한된 건강한 파라 사료 쥐는 두 실험 모두에서 사망률을 보여주지 않았습니다. 10-15마리의 동물이 이 기술을 마스터한 후, 절차가 적절하게 수행되면 카테터를 삽입하고 45분 동안 CLP를 수행할 수 있습니다.

이 절차를 수행할 때 카테터를 정맥에 조심스럽게 삽입하는 것을 잊지 마십시오. 카테터를 심장 깊숙이 너무 깊이 삽입하면 심장 부정맥이 유발됩니다. 충분히 멀리 두지 않으면 쉽게 빼낼 수 있습니다.

카테터가 혈관의 내강 내에 삽입되어 있는지 항상 확인하십시오. 카테터를 혈관 벽의 층 내에 삽입하면 액체가 주변 조직으로 누출됩니다. 이 모델은 광범위한 수술 절차와 동물에 대한 일상적인 집중 치료가 필요할 수 있습니다.

그러나 이는 급성 및 장기 중증 질환의 여러 측면을 연구할 수 있는 안정적이고 재현 가능한 모델을 제공합니다.