고립 된 랫트 심장으로부터의 간질과 투과 물 수집을위한 역전 된 심장 모델

이 거꾸로 된 심장 모델의 전반적인 목표는 분리된 쥐 심장에서 심장 간질성 transudate를 수집하는 것입니다. 박동하는 심장 내에서 심장의 개별 감각은 부분비 인자를 방출하고 이를 주변 간질액 공간으로 방출합니다. 이것은 간질액 공간이 심장 세포 간의 통신을 위한 정보를 전달하기 때문에 중요합니다.

그리고 그것은 경색된 심근의 염증과 재생 상태에서 특히 중요합니다. 이 비디오에서 제 공동 작업자인 Dr.Ding과 Tan은 우리가 이 어-러브에서 고립된 관류된 쥐 심장의 표면에서 간질액을 수집하는 기술을 보여줄 것입니다. 라텍스 심장 덮개 또는 뚜껑을 만들려면 쥐의 평균 심장 크기와 일치하는 알루미늄 몰드를 사용하고 극상 에머리 종이로 광택을 냈습니다.

금형의 넥을 밀링 머신에 수직으로 고정하고 금형을 천천히 회전시키기 시작합니다. 그런 다음 20ml의 액체 라텍스를 50ml 유리 비커에 붓고 회전하는 몰드를 라텍스에 담글 때까지 내립니다. 그런 다음 천천히 들어 올려 라텍스가 응고될 때까지 15분 동안 금형을 계속 회전시킵니다.

회전은 이 무스를 만들고 액체 라텍스 층을 금형 표면에 고르게 분배하는 데 중요합니다. 따라서 금형이 라텍스에서 들어 올려질 때 회전하고 있는지 확인하십시오. 라텍스가 마르면 라텍스에 활석 가루를 발라 라텍스가 손상되지 않도록 합니다.

회전을 멈춘 다음 기계에서 금형을 부드럽게 분리합니다. 금형에서 라텍스를 조심스럽게 제거하십시오. 이제 25cm 길이의 실리콘 튜브를 라텍스 캡의 배출구에 부착합니다.

이 튜브는 간질성 심장 경유데이트(CT)를 수집하는 데 사용됩니다. 다음으로, 쥐 크기의 심실 풍선을 1밀리리터의 물이 채워진 주사기에 연결된 L자형 금속 캐뉼라에 단단히 부착합니다. 그리고 쥐 크기의 심실 풍선에 물을 채웁니다. 주사기를 사용하여 풍선을 여러 번 팽창 및 수축하여 풍선이 밀폐되어 있는지 확인하십시오.

그런 다음 3방향 정지 장치를 통해 캐뉼라를 압력 변환기에 연결합니다. 마지막으로, 주사기에 풍선이 심실을 채울 위치를 표시하여 심실 압력을 측정합니다. 심장 준비를 진행하기 전에 텍스트 프로토콜에 따라 Langendorff 관류 시스템을 준비하십시오.

이제 300-350g의 수컷 Wistar 쥐를 완전히 마취한 후 실온 수술대에 옮깁니다. 경험에 비추어 볼 때, 심장 캐뉼레이션으로 이어지는 다음 단계는 약 3분 밖에 걸리지 않습니다. 집게를 사용하여 흉골 바로 아래의 피부와 근육을 들어 올리고 무거운 가위를 사용하여 갈비뼈의 아래쪽 가장자리를 자릅니다.

다음으로, 가는 가위로 갈비뼈 가장자리의 횡격막을 작게 자릅니다. 다음으로, 갈비뼈의 꼬리 쪽을 잘라 복부 흉벽 전체를 플랩으로 만듭니다. 이제, 부드럽게 심장을 잡고 심장 혈관이 늘어나기 시작할 때까지 천천히 생명을 불어넣으십시오.

그런 다음 대동맥이 완전히 노출될 때까지 심장을 절제하고 50ml의 얼음처럼 차가운 KHB가 들어 있는 100ml 비커로 심장을 옮깁니다. 이제 즉시 심장을 풍성한 기관으로 가져가 대동맥을 뚝뚝 떨어지는 캐뉼라에 장착하십시오. 기포가 심장에 들어가지 않도록 4-0 봉합사로 단단히 고정합니다.

그런 다음 일정한 풍력 압력 또는 풍량 흐름을 적용합니다. 역전된 심장 설정을 확립하려면 먼저 수사슴의 후벽이 얼굴을 향할 때까지 대동맥 캐뉼라를 부드럽게 회전시킵니다. 그런 다음 결합 조직을 잘라내어 왼쪽 심방의 입구를 노출시킵니다.

그런 다음 심장을 부드럽게 잡고 거꾸로 뒤집습니다. 풍선을 수축시킨 상태로 준비된 심실 풍선에 심장을 장착하고 좌심실에 공급합니다. 심장은 이제 풍선 카테터 어셈블리를 지지대로 사용하여 똑바로 세운 상태에서 기계적으로 안정화됩니다.

플런저를 채우기 표시까지 전진시켜 전체 심실강을 채울 때까지 풍선을 팽창시킵니다. 대동맥 뿌리에 가해지는 스트레스를 최소화하도록 심장을 고정합니다. 절차의 이 부분에는 연습이 필요합니다.

이제 풍선의 게이지를 관찰하고 이완기 혈압을 3-5mm의 수은으로 조정하십시오. 압력이 올바르게 설정되면 심외막에 작은 물방울이 형성되어야 합니다. 그런 다음 라텍스 캡을 심장 위로 부드럽게 당깁니다.

가장 심실이 있는 표면도 덮어야 합니다. 계속하기 전에 캡 내부에 기포가 있는지 확인하십시오. 기포를 제거하려면 주사기를 부드럽게 흡입하십시오.

이제 방류관의 끝을 심장 아래 10cm에 위치시킨다. 떨어지는 CT를 1.5ml 튜브에 모으고 얼음과 염화나트륨의 1:1 혼합물에 튜브를 넣어 섭씨 4도 이하로 유지합니다. 0.15 - 1.5 밀리리터의 CT를 채취한 다음 샘플의 무게를 측정하고 액체 질소에서 스냅 동결합니다.

처리할 수 있을 때까지 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오. 100cm의 일정한 수압에서 역심장 모델을 역관류하면 관상동맥 정맥 유출물의 1/10에서 1% 사이를 수집할 수 있습니다. CT의 단백질 함량은 BCA 분석법으로 측정되었으며 평균 밀리리터당 1.1mg이었습니다.

간단한 젤 전기 이동법은 단백질의 넓은 스펙트럼을 계시했습니다. 정상 샘플은 2D DIGE를 사용하여 50분 동안 허혈 재관류를 받은 심장의 샘플과 비교되었습니다. 허혈성 심장의 CT에서 여러 단백질이 상향 조절되는 것으로 밝혀졌습니다.

상향 조절된 단백질에 대해 단백질체학 분석을 수행했습니다. 퓨린도 큰 관심의 대상이었습니다. 퓨린은 심장 면역 반응, 혈관 운동 긴장도 및 심장 기능을 조절하는 중추적인 신호 분자이며, 특히 허혈성 손상 후에 그렇습니다.

CT의 HPLC 분석은 손상된 심장에서 많은 퓨린의 농도가 상승한 것을 보여주었습니다. 이 절차를 시도하는 동안, 고립된 심장에서 형성되는 심장 트랜스-인-데이트(cardiac trans-in-date)가 인-바이-뷰(in-vee-vuh) 상태의 실제 구성을 완전히 모방하지는 않는다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.