Name: Sialoglycan Microarray Assay를 사용하여 Human Sera에서 Anti-Neu5Gc IgG 프로파일 링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: 학습하세요 sialoglycan microarray assay를 사용하여 human sera에서 Anti-Neu5Gc IgG를 고속 프로파일링하는 방법을. 이 기술은 glycoimmunology 연구와 암 및 만성 염증 질환 진단에 활용됩니다.

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이 연구는 부분적으로 Israel Cancer Research Fund의 Research Career Development Award, Israeli National Nanotechnology Initiative의 보조금 및 Personalized Theranostics (VP-K)의 Nanomedicines에 대한 Focal Technology Area의 Helmsley 자선 신탁 및 National 보건 당국 R01GM076360 (XC에).

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성공적인 glycan microarray 제작에는 신중한 계획이 필요하며 프로토콜에 몇 가지 중요한 단계가 포함됩니다. 여기에는 (1) 모든 후속 매개 변수 ( 예 : 거리, 간격, 샘플 양 및 인쇄)를 정의하는 블록 및 플레이트 레이아웃 계획. (2) 핀을 클리닝하고 핀의 완전성을 보장하는 것, 이는 스팟 동질성을 제어하는 ​​데 중요합니다. (3) 인쇄 중 습도를 높게 유지하며, 장시간 인쇄시 샘플 증발을 피하는 것이 중요하며, 이는 얼룩 동질성을 손상시킬 수 있습니다. (4) 결과에 영향을 줄 수있는 적절한 정렬 및 분석 매개 변수 ( 예 : 배경 빼기 방법, 임계 값 및 스폿 크기 유연성)를 선택합니다. 이 방법은 특정 실험 설계 및 목표를 충족시키기 위해 추가로 수정할 수 있습니다. 예를 들어, 예비 스포팅 번호는 어레이에 인쇄 할 각 유형의 재료에 더 잘 맞도록 수정할 수 있습니다. 핀 세척 단계인쇄물을 다른 인쇄물에 맞게 최적화 할...

Sias는 척추 동물의 세포 표면 당 단백질과 당지질의 글리 칸 쇄를 덮는 산성 당입니다. Sia 발현은 암세포 1 에서 변형되고 진행 및 / 또는 전이와 관련이있다 2 , 3 . 포유 동물의 주요 시아 형태의 두 Neu5Ac 및 수산화 형태, Neu5Gc 2이다. 인간은 CMAH 효소를 암호화하는 유전자의 특정 불활 화 때문에 Neu5Gc를 합성 할 수 없다. 이 비인간적 인 Sia는 Neu5Gc가 풍부한식이 요법 ( 예 : 붉은 고기)에서 유래하여 &quot;자기&quot;로 인간 세포에 대사 적으로 결합합니다 4 , 5 . Neu5Gc는 인간 상피와 내피의 세포 표면에 낮은 수준으로 존재하지만 특히 암종에 축적됩니다. Neu5Gc는 인체 체액 성 면역계에 의해 외국으로 인정됩니다 2 , 6 .Neu5Gc 글리 칸의 항원 복잡성은 모든 인간 6 항 Neu5Gc 항체 반응의 복잡성에 의해 반사, Neu5Gc 수정, 연결, 기본 글리 칸과 비계, 그 밀도 등의 여러 수준에서 발생할 수 있습니다. 이러한 항체의 일부는 암 바이오 마커 및 잠재적 immunotherapeutics (7)의 역할을한다. 다른 sialoglycans (8)의 화학 효소 적 합성의 출현 당쇄 마이크로 어레이 기술 (9) (10)의 사용에 의해 용이 항체의 더 심도 깊은 분석을위한 방법을 닦았다. 따라서, 천연 및 합성 탄수화물의 큰 도서관의 촉진 준비와 조작으로, 글리 칸 마이크로 어레이는 생체 분자 (10), (11)의 무수히 많은 탄수화물의 상호 작용을 조사하기위한 강력한 높은 처리량 기술이있다, </sup&gt; 12 , 13 . 배열 형태로, 최소량의 물질이 사용되며, 생물학적으로 관련이있는 글리 칸의 다가의 디스플레이는 단일 실험에서 수천 개의 결합 상호 작용을 조사 할 수 있습니다. 중요한 것은,이 기술은 바이오 마커 발견 및 12, 다양한 시료 7에 대한 면역 반응을 모니터링에 적용될 수있다. 성공적인 glycan microarray 제작에는 3 가지 중요한 측면, 즉 프린터 로봇 유형, glycan 접합 화학 및 검출 광학을 고려해야합니다. 인쇄 기기 고려 사항에 관해서는 접촉 및 비접촉식 프린터의 두 가지 기술을 사용할 수 있습니다. 접촉 프린팅에서 1-48 강철 핀을 글리 칸 용액이 들어있는 멀티 웰 원판에 담궈 유리 슬라이드 표면에 직접 접촉시켜 관능 화 된 유리 슬라이드에 얼룩을지게합니다. 솔루션 금액 de슬라이드에 생존하는 것은 슬라이드 표면의 느린 지속 시간의 함수입니다. 일반적으로 샘플은 슬라이드 표면에 인쇄되기 전에 먼저 유리 블록 (균질 한 지점에 도달하기 위해)에서 미리 얼룩을지게됩니다. 비접촉식 프린터 ( 예 : 압전기 프린터)에서 글리 칸은 제어 된 전기 신호를 사용하여 유리 모세관에서 인쇄됩니다. 접촉 식 인쇄에 비해 더 정밀한 인쇄를 달성하기 위해 전기 신호를 미세하게 조정할 수 있습니다. 스폿의 크기와 형태 또한 비교적 균질합니다. 추가적인 이점은 인쇄 후 시료를 원판에 재활용하는 것입니다. 그럼에도 불구하고 피에조 전자 프린터의 가장 큰 단점은 인쇄 팁 제한 (4 또는 8)으로 매우 긴 인쇄 시간을 초래하며 슬라이드 안정성, 온도, 습도 및 샘플 증발에 특별한주의가 요구됩니다. 비접촉식 잉크젯 프린터에는 더 큰 샘플 용적이 필요합니다 14 . <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; 인쇄 방법에 대한 제한된 사용 가능한 옵션과는 대조적으로, 글리 칸 접합 화학은 선택할 수있는 많은 옵션이있는보다 복잡한 고려 사항입니다. 선택된 고정화 화학은 글리 칸의 활성 그룹 및 슬라이드 표면 반응성 모두를 고려해야한다. 합성 적으로 합성되거나 자연적으로 분리 된 특정 마이크로 어레이 표면 상에 고정화 될 글리 칸은 모두 동일한 반응기를 필요로한다. 또한, glycans은 순수하고 균질해야합니다. 한편, 고정화 표면 및 화학은 재현성 및 신뢰성있는 부착 밀도를 제공해야한다. 공유 결합 또는 비공유 (물리적 흡수) 부착 10 , 11 , 12 , 13 으로 다중 고정화 방법이 개발되었다. Uninitiate를위한 인쇄 된 glycan microarray 기술에 관한 매우 자세한 정보는연구원은 훌륭한 리뷰 13 , 15를 참조하십시오. 중요한 것은 글리코 믹스 실험 (MIRAGE) 이니셔티브에 대한 최근의 최소 필요한 정보는 샘플 준비 (16)과이 성장하는 분야의 표준을 개선하기 위해 (17)을 분석 글리 칸 마이크로 어레이 데이터를보고하기위한 지침을 설명합니다. 여기, 우리는 16 웰 형식의 특정 연락처 나노 프린터를 사용하여 sialoglycan microarrays의 제조에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 각 글리 칸은 에폭시 활성화 유리 슬라이드에 대한 공유 결합을 매개하는 1 차 아민을 가지고 있습니다. 우리는 또한 다양한 인간 혈청 시료, 항체 및 Sia 결합 식물 렉틴을 사용하여 한 슬라이드의 개발과 분석을 설명합니다. Sialoglycan 마이크로 어레이 분석은 어레이 제조, 프로세싱, 개발 및 분석을 포함한 몇 가지 주요 단계를 포함합니다. 어레이 제작에는 ar 계획이 필요합니다.나노 그리드 및 소스 플레이트 준비, 나노 프린터 프로그래밍, 슬라이드 인쇄 등의 작업을 수행 할 수 있습니다. 이어서 슬라이드를 처리, 개발 및 분석합니다 ( 그림 1 ).

<table><tbody><tr><td>1 차 아민 함유 sialoglycans</td><td>Glycohub, Inc., Davis, CA, USA (http://www.glycohub.com/services)</td> <td>화합물 요청 문의 info@glycohubusa.com 인쇄</td><td>된 글리칸</td></tr><tr><td>인산 Monosodium phosphate monohydrate</td><td>시그마</td><td>S9638</td><td>인쇄 버퍼 구성 요소</td></tr><tr><td>인산 나트륨 헵타 하이드레이트</td><td>시그마</td><td>S9390</td><td>인쇄 버퍼 구성</td></tr><tr><td>요소 인산염 완충 식염수</td><td>Hy-Labs</td><td>BP-507/500D</td><td>인쇄 완충액/배양/세척 완충액</td></tr><tr><td>Tris-base</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td>슬라이드 차단 시약</td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>Sigma</td><td>G-7893</td><td>인쇄 버퍼 구성 요소</td></tr><tr><td>Ethanolamine</td><td>Thermo-Fisher Scientific</td><td>0700/08</td><td>슬라이드 차단 시약</td></tr><tr><td>오브알부민(V 등급)</td><td>Sigma</td><td>A5503</td><td>슬라이드 차단 단백질</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma</td><td>P7949</td><td>슬라이드 세척 세제</td></tr><tr><td>Alexa 555-Hydrazide</td><td>Thermo-Fisher Scientific</td><td>A20501MP</td><td>Marker on array</td></tr><tr><td>ChromPure Human IgG, whole molecule</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>009-000-003</td><td>Printing component</td></tr><tr><td>Biotinylated- SNA</td><td>Vector Laboratories</td><td>B-1305</td><td>Plant Lectin &ndash; binding 시아-알파2&ndash; 6-linked</td></tr><tr><td>Biotinylated-MALII</td><td>Vector Laboratories</td><td>B-1265</td><td>식물 렉틴 &ndash; 결합 Sia-alpha2&ndash; 3-linked</td></tr><tr><td>Chicken-anti Neu5Gc IgY</td><td>BioLegend</td><td>146903</td><td>1차 검출</td></tr><tr><td>Cy3-Streptavidin</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>016-160-0848</td><td>비오틴 결합</td></tr><tr><td>Cy3-anti Human IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>109-165-088</td><td>human IgG</td></tr><tr><td>Cy3-anti Chicken IgY</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>703-165-155</td><td>Secondary 닭고기에 대한 검출 IgY</td></tr><tr><td>인간 혈청 샘플</td><td>이스라엘 혈액 은행</td><td></td><td>1차 검출</td></tr><tr><td>압축 질소(5등급)</td><td></td><td></td><td>일반 분진/건조 도구</td></tr><tr><td>에폭시 코팅 슬라이드</td><td>Corning</td><td>40044</td><td>슬라이드</td></tr><tr><td>에폭시 코팅 슬라이드</td><td>PolyAn</td><td>2D 104-00-221</td><td>슬라이드. 이러한 유형의 슬라이드에서 표면은 (코어링 슬라이드에 비해) 소수성이므로 글라이칸 인쇄 버퍼에 0.005% Tween-20을 보충하여 100 &micro를 얻어야 합니다. M 사이즈 반점.</td></tr><tr><td>384웰 마이크로타이터 플레이트</td><td>Genetix</td><td>2070</td><td>인쇄판</td></tr><tr><td>VWR 랩 마커</td><td>VWR</td><td>52877-310</td><td>슬라이드 라벨링</td></tr><tr><td>염색 튜브</td><td>어레이It</td><td>MST</td><td>슬라이드 현상 도구</td></tr><tr><td>염색조</td><td>VWR</td><td>25608-904</td><td>슬라이드 현상 도구</td></tr><tr><td>슬라이드 유리 홀더</td><td>VWR</td><td>631-9321</td><td>슬라이드 현상 도구</td></tr><tr><td>GenePix 스캐너</td><td>분자 장치</td><td>4000B</td><td>슬라이드 스캐너</td></tr><tr><td>LM-60 나노프린터</td><td>어레이잇</td><td>LM-60</td><td>어레이 프린터</td></tr><tr><td>핀</td><td>어레이잇</td><td>946MP3</td><td>프린팅 핀</td></tr><tr><td>ProPlate 모듈</td><td>Grace Bio-Labs</td><td>P37004</td><td>슬라이드 개발 모듈</td></tr><tr><td>어레이어 및 가습기에 필요한</td> <td>증류수</td><td>Bio-Lab</td><td>2321020500</td></tr><tr><td>전자 멀티 피펫, 8 채널, 볼륨 범위 2-125 &mu; L</td><td>Thermo-Fisher Scientific (Matrix)</td><td>MA-2131 Impact2 Equalizer 384</td><td>멀티 피펫으로 시료를 384웰 플레이트로 분배</td></tr></tbody></table>

sialoglycan microarray assay를 사용하여 human sera에서 anti-neu5gc igg 프로파일 링

Profiling Anti-Neu5Gc IgG in Human Sera with a Sialoglycan Microarray Assay 

세포는 일반적으로 암에서 변형되고 시알 산 (Sia) 발현의 변화를 포함하는 탄수화물 사슬 (glycans)의 외투로 덮여 있습니다. 이들은 9 탄소 백본을 가지고 있으며 세포 표면에 척추 동물의 glycan을 캡핑하는 산성 당입니다. 포유 동물의 주요 Sia 형태 중 두 가지는 N- 아세틸 뉴 라민 산 (Neu5Ac)과 N- 히드 록 실화 형태 인 N- 글리콜 노 뉴라민 산 (Neu5Gc)입니다. 인간은 cytidine 5&#39;monophosphate-Neu5Ac (CMP-Neu5Ac) hydroxylase (CMAH)를 암호화하는 유전자의 불 활성화 때문에 내인성 Neu5Gc를 생성 할 수 없다. 외래 Neu5Gc는 붉은 육류 및 유제품의식이 섭취를 통해 인간 세포에 의해 획득되고 이후 세포 표면의 다양한 글리 칸에 주로 나타나 암종에 축적됩니다. 결과적으로 인간은 암 및 기타 만성 염증 매개 질환에서 다양한 역할을하는 순환 Neu5Gc 항체를 가지고 있으며 잠재적 인 진단 및 치료제가되고있다rgets. 여기, 우리는 인간 항체에서 이러한 안티 Neu5Gc 항체를 평가하는 높은 처리량 sialoglycan microarray 분석을 설명합니다. Neu5Gc 함유 글리 칸과 각각 일치하는 대조군 쌍 (Neu5Ac 함유 글리 칸)은 각각 핵심 1 차 아민과 함께 에폭시 코팅 유리 슬라이드에 공유 결합되어 있습니다. 우리는 인쇄 당 최대 896 개의 어레이를 생성 할 수있는 특정 나노 프린터를 사용하여 16- 웰 포맷으로 56 개의 슬라이드를 인쇄하는 것을 예시합니다. 각 슬라이드는 안티 Neu5Gc 항체 특이성, 강도 및 다양성의 평가를 위해 16 개의 다른 인간 혈청 샘플을 스크리닝하는 데 사용할 수 있습니다. 프로토콜은이 견고한 도구의 복잡성을 설명하고 배열 형식으로 다양한 임상 샘플에서 Neu5Gc식이 탄수화물 항원에 대한 반응을 조사하고자하는 사람들을위한 기본 지침을 제공합니다.

배열 인쇄, 개발 및 분석 : 여러 개의 glycan 시료와 human IgG STD 곡선을 가진 sialoglycan microarray를 16 개 블록으로 인쇄하려면 모든 시료가 슬라이드 당 16 개의 블록과 동일한 인쇄 작업에서 모든 슬라이드에 가능한 한 균일하게 인쇄되도록 철저한 보정이 필요합니다. 따라서 각 시료 유형, 슬라이드 유형 및 제조, 384-well plate type, 습도 수준, 384-well plate의 시료 부피, pre-of-plate의 양에 대한 buffer 조성을 포함하여 특정 인쇄 매개 변수가 결정되기 전에 여러 교정 실험이 필요합니다 모든 샘플 유형, 인간 IgG STD 곡선 농도 및 마커 유형에 대한 인쇄. 인쇄 된 sialoglycan 어레이 슬라이드의 내구성은 실온에서 어두운 곳에서 진공 밀봉 된 상자에서 최대 10 개월 ...

시알로 글리 칸 마이크로 어레이 분석은 인체 혈청에서 항 -Neu5Gc 항체를 평가하는 데 사용될 수있어 암 및 기타 만성 염증 매개 질환에 대한 잠재적 인 고효율 진단 분석법이됩니다.

Sialoglycan Microarray Assay를 사용하여 Human Sera에서 Anti-Neu5Gc IgG 프로파일 링

Cells are covered with a cloak of carbohydrate chains (glycans) that is commonly altered in cancer and that includes variations in sialic acid (Sia) ...

sialoglycan 마이크로어레이 분석의 전반적인 목표는 다양한 sialoglycan 컬렉션에 대해 고처리량 방식으로 인간 혈청에서 Anti-Neu5Gc IgG를 평가하는 것입니다. 이 방법은 Anti-Neu5Gc 항체가 암, 심장 질환 및 이종 이식을 포함한 다양한 인간 질병과 어떻게 관련되어 있는지와 같은 당면역학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 수많은 시알로글리칸 항원에 대한 Anti-Neu5Gc 항체의 고처리량 프로파일링이 가능하다는 것입니다.이 절차를 시연하는 사람은 제 연구실의 석사 과정 학생인 Sharon Yehuda입니다. 어레이 제작 및 레이아웃에 대한 신중하고 상세한 계획은 성공을 보장하는 데 중요합니다. 이 프로세스는 텍스트 프로토콜 및 추가 정보에 자세히 설명되어 있습니다.마이크로 원심분리기 튜브에서 각 글라이칸을 총 100마이크로리터의 글라이칸 인쇄 버퍼에 100마이크로몰로 희석합니다. 다음으로, 마커 버퍼를 사용하여 형광 염료를 함유한 1차 아민을 밀리미터당 1밀리그램으로 준비합니다. 그런 다음 총 부피 1밀리리터에서 밀리리터당 1마이크로그램으로 희석합니다.텍스트 프로토콜에 설명된 대로 human IgG 표준 곡선 희석액을 준비합니다. 얼음 위에 384웰 플레이트를 놓습니다. 전자 멀티 피펫을 사용하여 텍스트 프로토콜에 있는 플레이트 레이아웃에 따라 각 글라이칸, 마커 및 스타다드 곡선 IgG의 7마이크로리터를 분취합니다.파라필름으로 접시를 덮고 250배 g 및 섭씨 12도에서 2분 동안 회전합니다. 인쇄는 습도가 60-70%인 먼지가 없는 곳에서 수행해야 합니다.여기에서 모든 단계는 보호를 위해 적절한 장갑과 의복이 있는 클린룸에서 수행됩니다. 나노 프린터 기기와 가습기를 켭니다.텍스트 프로토콜에 설명된 대로 인쇄기를 프로그래밍한 후 분주된 샘플이 있는 384웰 플레이트를 어레이 데크의 해당 위치에 배치하고 파라필름 덮개를 제거합니다. 이 시점에서 인쇄를 시작합니다. 알코올 용제 저항성 마킹 펜으로 슬라이드에 번호를 매기고 어두운 곳에서 진공 밀봉 상자에 보관하십시오.어레이를 처리하려면 먼저 진공 밀봉 상자에서 슬라이드를 제거하고 어레이가 위를 향하도록 하여 화학 후드에 5분 동안 넣어 여분의 액체를 증발시킵니다. 다음으로, 슬라이드를 탈이온수로 채워진 염색 튜브에 넣어 수분을 공급합니다. 튜브를 호일로 덮고 실온에서 느리고 부드럽게 흔들면서 5분 동안 배양합니다.슬라이드의 반응성 에폭시기 그룹을 차단하려면 예열된 에탄올아민 차단 용액으로 채워진 50ml 염색 튜브에 슬라이드를 담그십시오. 튜브를 호일로 덮고 실온에서 천천히 부드럽게 흔들면서 30분 동안 배양합니다. 에탄올아민 차단 용액을 적절한 생물학적 위험 쓰레기통에 버리십시오.그런 다음 슬라이드를 섭씨 50도의 탈이온수로 채워진 깨끗한 새 염색 튜브에 넣습니다. 튜브를 호일로 덮고 실온에서 천천히 부드럽게 흔들면서 10분 동안 배양합니다. 물을 버리고 슬라이드를 유리 염색 홀더에 옮깁니다.장치를 스윙 플레이트 홀더에 놓고 슬라이드를 원심분리하여 건조시킵니다. 그런 다음 슬라이드를 16웰 칸막이에 놓습니다. 웰을 미리 적신 후 멀티 피펫을 사용하여 200마이크로리터의 PBST를 슬라이드 웰로 분취합니다.그런 다음 뚜껑이 있고 습한 방에 넣고 5분 동안 흔든다. 깨끗한 종이 타월을 가볍게 두드려 PBST를 제거합니다. 그런 다음 200마이크로리터의 PBS-Ovalbumine 차단 완충액을 각 웰에 분취합니다.슬라이드를 습한 챔버에 놓고 실온에서 부드럽게 흔들어 1시간 동안 배양합니다. 다음으로, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 PBS-OVA 차단 버퍼에 희석된 1차 검출을 준비합니다. PBS-OVA 차단 버퍼를 슬라이드에서 튕기고 웰당 200마이크로리터의 1차 항체를 추가합니다.습한 챔버에서 슬라이드를 2시간 동안 배양합니다. 그런 다음 슬라이드에서 기본 감지를 튕기고 PBST로 세 번 씻습니다. PBST로 마지막으로 세척하기 전에 습한 챔버에서 PBST로 슬라이드를 5분 동안 배양합니다.그런 다음 PBS로 한 번 씻으십시오. 다음으로, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 PBS에서 2차 항체를 준비합니다. 슬라이드에서 PBS를 튕기고 200마이크로리터의 2차 항체를 추가합니다.슬라이드에서 2차 항체를 튕겨내고 이전과 같이 PBST로 4회 세척합니다. 프레임을 조심스럽게 제거한 다음 PBS로 채워진 50ml 슬라이드 염색 튜브에 슬라이드를 넣고 5분 동안 흔듭니다. 다음으로, 두 개의 슬라이드 염색 수조에 탈이온수를 채웁니다.슬라이드를 슬라이드 홀더에 넣고 슬라이드를 첫 번째 수조에 담그십시오. 슬라이드를 빠르게 10번 담그십시오. 그런 다음 슬라이드를 두 번째 수조로 옮기고 10회 더 담그십시오.담근 후 실온에서 10분 동안 흔들면서 슬라이드를 배양합니다. 배양 후에는 물을 버리고 슬라이드를 유리 염색 홀더에 옮깁니다. 유리 염색 홀더를 스윙 플레이트 홀더에 놓고 슬라이드를 원심 분리하여 건조시킵니다.스캐너 도어를 열고 어레이가 아래를 향하도록 슬라이드를 내부에 놓습니다. 이 시점에서 스캔을 시작합니다. 스캔한 슬라이드를 TIFF 파일로 저장합니다.분석을 위해 슬라이드를 준비하려면 "배열 목록 로드"를 선택하고 슬라이드의 각 블록에 있는 배열을 매핑하는 적절한 GAL 파일을 업로드합니다. 슬라이드는 각 블록에 하나씩 16개의 서로 다른 1차 감지 부분으로 개발되었습니다. 식물 Lectin SNA는 a2-6 결합 시알산과 결합합니다.식물 Lectin MALII는 a2-3 연결된 시알산과 결합합니다. Polyclonal Anti-Neu5Gc IgY는 Neu5Gc 함유 시알로글리칸과 결합하지만 Neu5Ac 함유 시알로글리칸에는 결합하지 않습니다. Anti-Neu5Gc IgG를 프로파일링하기 위해 건강한 인간 기증자의 혈청 12개를 인쇄된 시알로글리칸 마이크로어레이에서 분석하고 마이크로리터당 나노그램으로 정규화된 형광 표지된 항인간 IgG를 사용하여 개발했습니다.테스트된 모든 인간 혈청에는 다양한 수준의 Anti-Neu5Gc IgG가 포함되어 있었으며, 일치하는 Neu5Ac-함유 시알로글리칸 쌍은 거의 인식되지 않았습니다. 또한, Anti-Neu5Gc IgG 인식 패턴은 강도와 다양성 수준 모두에서 이 12가지 혈청 간에 매우 다양합니다. 이 동영상을 시청한 후에는 글라이칸 마이크로어레이 시스템을 사용하여 다양한 인간 샘플에서 Anti-Neu5Gc 항체를 고처리량 방식으로 프로파일링하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

본 연구에서 우리는 특정 단백질의 글리코 실화 프로 파일링에서 사용할 수있는 렉틴 검출 방법과 멀티 플렉스 높은 처리량 항체 microarray를위한 향상된 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 새로운 신뢰할 수있는 시약을 갖추고 있으며 훨씬 이전 절차에 비해 시간, 비용, 연구 장비 요구 사항을 줄여줍니다.

단지 샘플의 특정 단백질 글리코 실화의 다중 높은 처리량 프로파일을위한 화학을 차단 항체 Microarray

이 동영상은 마우스 혈청에서 순환하는 항글라이칸 항체를 분석하기 위한 인쇄된 글라이칸 어레이 기술을 보여줍니다. 혈청의 항체는 칩의 특정 글라이칸과 상호 작용하며, 이는 면역 염색 후 형광 스캔으로 확인됩니다.

Printed Glycan Array를 사용한 순환 항글라이칸 항체 검출

인쇄된 글라이칸 마이크로어레이 전략을 사용하여 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌 열성 및 시알산 함유 수용체에 대한 특이성을 분석하기 위해 기존의 96웰 플레이트 분석을 소형화했습니다.

인플루엔자 바이러스 Hemagglutinins의 결합력 및 특이도를 평가하기위한 소형화 글리 칸 마이크로 어레이 분석

여기에서는 인간과 생쥐의 혈청 IgG 및 IgM 자가항체를 동시에 검출하는 데 사용할 수 있는 맞춤형 항원 마이크로어레이를 생성하는 방법을 설명합니다. 이러한 어레이를 통해 관심 항원 또는 항원결정기에 대한 항체를 고처리량 및 정량적으로 검출할 수 있습니다.

의 IgG 및 IgM의자가 항체의 동시 검출을위한 2 색 항원 마이크로 어레이의 생성

Glycan microarray를 개발 하 고 광범위 하 게 항 체를 중화 하는 HIV의 프로 파일링에 대 한 사용 설명 되는 산화 알루미늄 코팅 유리에 첨부 파일에 대 한 N-glycans의 합성에 모듈 접근 (ACG 슬라이드) 슬라이드.

N-glycans 배열 개발 및 HIV 항 체의 항 암 치료 효소 합성 프로 파일링

이 작은 동물에 반대로 탄수화물 항 체 순환의 분석에 대 한 인쇄 glycan 배열 (PGA) 기술의 잠재력을 보여줍니다.

인쇄 Glycan 배열: 작은 동물에 반대로 탄수화물 항 체 순환의 레 퍼 토리의 분석에 대 한 민감한 기술

우리는 다른 바이러스 긴장에서 250개 이상의 항원에 대하여 다중 항체 이소타입을 위한 혈청을 동시에 조사하기 위하여 니트로셀룰로오스 코팅된 슬라이드에 인플루엔자 항원을 인쇄해서 건설된 단백질 마이크로어레이를 이용하기 위한 프로토콜을 제시합니다, 이렇게 바이러스 특수형에 걸쳐 혈청 항체의 폭의 측정을 허용.

바이러스 특수형에 걸쳐 혈청 항체의 폭을 측정하기 위해 인플루엔자 항원 마이크로어레이의 사용

면역글로불린 G(IgG) N-글리칸은 친수성 상호작용 UPLC를 사용하는 것을 특징으로 한다. 또한, IgG N-글리칸의 구조는 명확하게 분리된다.  여기에 제시된 이 실험 방법에 대한 소개는 연구 환경에서 널리 사용될 수 있도록 한다.

초고성능 액체 크로마토그래피에 의한 면역글로불린 G N-글리칸 분석

항체의 글리코실화 패턴은 그의 임상 성능을 결정하고, 따라서 글리코실화를 조절하기 위한 산업적 및 학문적 노력이 지속된다. 전형적인 글리코엔지니어링 캠페인은 시간과 노동 집약적이기 때문에, 일시적 침묵을 사용하여 글리코실화 유전자의 영향을 특성화하는 신속한 프로토콜의 생성은 유용할 것이다.

중국 햄스터 난소 세포의 신속한 항체 당공학

마이크로어레이 폴리머 프로파일링(MAPP)은 생물학적 샘플에서 글라이칸의 조성 분석을 위한 고처리량 기술입니다.

고처리량 글라이칸 분석을 위한 마이크로어레이 폴리머 프로파일링(MAPP)

학습하세요 sialoglycan microarray assay를 사용하여 human sera에서 Anti-Neu5Gc IgG를 고속 프로파일링하는 방법을. 이 기술은 glycoimmunology 연구와 암 및 만성 염증 질환 진단에 활용됩니다.

Sialoglycan Microarray Assay를 사용하여 Human Sera에서 Anti-Neu5Gc IgG 프로파일 링

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