마우스에서 초기 임신 특성에 대 한 3 차원 높은-주파수 초음파의 새로운 사용

이 초음파 이미징 절차의 전반적인 목표는 마우스의 초기 임신을 감지, 모니터링 및 특성화하는 것입니다. 이 방법은 쥐 생식 생물학 분야의 주요 질문에 답하고 조기 마우스 임신의 성장, 발달 및 생존 가능성을 확립하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 마우스 임신을 중단하지 않고 생체 내에서 이러한 임신을 특성화하고 표현형을 분석할 수 있어 종단적 데이터 수집이 가능하다는 것입니다.

일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 개인은 한 평면에서 모든 이미지를 얻는 데 어려움을 겪을 것입니다. 이것은 필요한 초음파 프로브의 작은 증분 움직임 때문입니다. 초음파 기계를 준비하는 것부터 시작하십시오.

트랜스듀서를 켠 다음 3D 모터 스테이지를 트랜스듀서에 부착합니다. 그런 다음 프로브를 변환기 cl에 부착합니다.amp. 이제 모니터링 플랫폼에 마우스를 누운 상태로 놓습니다.

노즈콘을 통해 마취제를 투여하고 모든 발을 플랫폼의 심박수 모니터링 패드에 부드럽게 테이프로 붙입니다. 다음으로, 초음파 투과 젤 약 1-2ml를 복부에 문지릅니다. 그런 다음 수동 모터 스테이지를 사용하여 초음파 프로브를 하복부에 배치합니다.

초음파를 사용하여 방광을 찾으면 질 입구 바로 옆에 음식으로 가득 찬 다크서클처럼 보여야 합니다. 방광을 찾으면 프로브를 두부로 매우 천천히 움직여 임신한 자궁을 시각화하며, 자궁은 임신 부위에 둥근 영역이 있는 원통형 모양으로 나타나야 합니다. 이것은 사슬에 걸린 진주처럼 보인다고 설명할 수 있습니다.

이제 2D 이미징을 진행합니다. 임신한 자궁이 확인되면 방광에서 가장 가까운 임신 부위에서 시작하여 두족을 천천히 순차적으로 움직여 모든 임신 부위의 위치를 확인합니다. 이미지를 저장합니다.

신장, 비장 또는 간이 보이면 스캔이 너무 멀리 있는 것입니다. 프로브를 방광에 더 가깝게 재배치하고 이미지를 저장합니다. 다음으로, 같은 방식으로 반대쪽 자궁 뿔을 이미지화합니다.

초음파 프레임이 임신 또는 착상 부위의 중앙에 있을 때 이미지를 고정하고 분석을 위해 이미지를 저장합니다. 지금 또는 나중에, 저장된 이미지를 사용하여 hyperechoic decidualization 반응을 마커로 사용하여 주입 위치를 측정합니다. 측정 도구를 수동으로 클릭하고 이식 부위의 위치를 클릭합니다.

그런 다음 커서를 다음 이식 부위로 드래그하고 다시 클릭하여 선을 그립니다. 그런 다음 소프트웨어는 선의 길이를 보고합니다. 모든 착상 부위를 측정한 후 동일한 기술을 사용하여 임신낭 크기와 태아 극 크기를 측정합니다.

2-D 이미징 후 원하는 3-D 이미지의 대략적인 중간 지점에 있는 영역에 프로브를 배치합니다. 예를 들어, 사과를 3D로 이미징하는 경우 프로브를 코어에 배치합니다. 프로브가 적절하게 배치되면 3D 획득을 얻습니다.

3D 운동 단계는 일련의 단계 또는 프레임으로 자궁을 가로질러 이 거리를 이동합니다. 스캔을 얻을 때 의도한 구조가 스캔에서 완전히 캡처되었는지 확인합니다. 스캔을 수집한 후 이미지 처리를 위해 로드합니다.

처리를 위한 병렬 및 회전 방법을 선택하면 모든 3차원 이미지 프레임이 하나의 3차원 상자에 로드됩니다. 그런 다음 0.08mm의 스텝 크기를 선택한 다음 이미지 블록의 한쪽 끝에서 시작하여 모든 프레임을 스크롤하여 데이터에 익숙해집니다. 다음으로, 스택의 한쪽 끝에서 시작하여 관심 있는 개체의 윤곽선을 수동으로 추적합니다.

그런 다음 다음 프레임으로 진행하여 개체의 윤곽을 수동으로 다시 추적합니다. 모든 프레임에 수동으로 주석을 달 때까지 이 프로세스를 계속합니다. 완료되면 finish(마침)를 클릭하여 3D 이미지를 얻고 개체의 부피를 계산합니다.

이미지의 경우 메쉬 또는 솔리드 오버레이 중에서 선택합니다. 그런 다음 명확성을 위해 주변 이미지 정보를 유지하거나 제거하도록 선택합니다. 고주파 초음파는 임신 후 5.5일 이내에 착상 부위의 발달을 감지할 수 있습니다.

더 가벼운 초반향 탈이중화된 자궁내막을 착상 부위의 마커로 사용하여 착상 부위의 수와 이러한 부위의 간격을 수태 후 6.5일에 정량화합니다. 임신 후 7.5일까지 임신이 진행됨에 따라 더 어둡고 저반향성 임신낭과 태아극을 모두 쉽게 식별할 수 있습니다. 수정 후 6.5일째에 마우스 자궁의 3차원 재구성은 메쉬 및 솔리드 오버레이 형식으로 이루어졌습니다.

임신 후 7.5일째 되는 시점에 3D 스캔은 그만큼 놀라운 결과를 보여주었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 중단 없이 임신을 특성화하기 위해 2D 및 3D 모두에서 정확한 초음파 이미지를 얻는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 2-D 및 3-D 모두에서 초음파 획득에 필요한 총 시간은 숙련된 사용자의 손에 약 10-20분

이 절차를 시도하는 동안 움직임을 작고 점진적으로 유지하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 기술은 연구자들이 쥐의 정상 및 비정상 임신 표현형을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.