Multimodal 접근을 이미징 Bleomycin 유도 폐 섬유 증 생쥐에서의 경도 평가 대 한 마이크로-CT와 형광 분자 단층에 따라

IPF 유사 마우스 모델에 대한 이 연구의 전반적인 목표는 FMT 및 마이크로 CT와 같은 비침습적 이미징 기술로 폐 섬유증을 종단적으로 모니터링하는 것입니다. 이 방법은 폐 섬유증에서 발생하는 이 특정 분자 사건과 관련하여 어떤 순서를 발전시킬 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 특정 분자 이벤트의 해부학적 변화를 비침습적으로 모니터링할 수 있다는 것입니다.

FMT와 마이크로 CT의 융합은 질병 진행 및 새로운 치료 평가를 연구할 수 있는 가능성을 나타내기 때문에 이 기술의 응용은 IPF 병리학 치료로 확장됩니다. 마취된 마우스를 삽관 플랫폼에 놓고 와이어에 놓인 앞니에 매달아 놓는 것으로 시작합니다. 후두경을 켠 다음 끝이 뭉툭한 집게를 잡고 부드럽게 입을 벌립니다.

기관이 열리는 부분이 보일 때까지 후두경 날을 입 뒤쪽으로 놓습니다. 다른 손을 사용하여 PE 튜브의 끝에 연결된 전달 튜브를 기관에 삽입합니다. 3방향 밸브를 회전하여 50마이크로리터의 블레오마이신을 전달합니다.

설치 후에는 질식을 방지하기 위해 기관에서 튜브를 신속하게 제거하십시오. 몇 초 동안 마우스를 똑바로 세웁니다. 프로브 주입의 경우 마우스의 꼬리를 잡고 케이지 뚜껑을 잡을 수 있도록 합니다.

그런 다음 어깨를 잡고 목덜미를 잡고 마우스를 잡습니다. 따뜻한 물이 담긴 비커에 꼬리를 담그면 정맥이 부풀어 오르므로 쉽게 시각화하고 바늘을 삽입할 수 있습니다. 꼬리 아래쪽의 동맥이 아니라 꼬리의 양쪽에 있는 두 개의 꼬리 정맥을 찾으십시오.

MMP가 장전된 1ml 주사기의 26 게이지 바늘을 정맥에 삽입하고 MMP 프로브 용액을 체중 1kg당 10ml로 주입합니다. 먼저 날짜 수집 소프트웨어를 초기화하고 실험을 위해 데이터베이스에서 새 스터디를 엽니다. 이미징을 시작하기 전에 면도 및 마취된 마우스를 이미징 카세트 중앙으로 옮깁니다.

마우스를 평평하고 안전하게 유지하고 이미징 카세트의 양쪽 창에 부드럽게 압축합니다. 그런 다음 소프트웨어의 스캔 창에서 제목"을 클릭한 다음 미리 보고 라이브 이미지를 확인합니다. 예상되는 형광 영역을 둘러싼 조직이 캡처될 수 있도록 스캔 영역을 충분히 크게 그립니다.

ROY가 그려지면 Add to Reconstruction Queue(재구성 대기열에 추가)"를 클릭한 다음 Scan(스캔)"을 클릭하여 마우스를 이미지화합니다. 이미지 획득이 완료되면 이미징 카세트에서 마우스를 제거하고 가정용 케이지에 다시 넣습니다. ROY 도구를 사용하여 형광의 피코몰을 정량화하고 폐 영역에서 오는 신호에서 ROY를 약 700-800 세제곱 밀리미터 감소시킵니다.

7일마다 또는 필요에 따라 이미징을 반복합니다. 마이크로 CT로 이미지를 만들려면 먼저 녹색 전원 버튼을 눌러 마이크로 CT를 켜고 소프트웨어를 실행하여 X선 소스를 예열합니다. 새 데이터베이스를 클릭하여 데이터베이스를 만듭니다."실험에 참여한 마우스 수에 따라 브라우저를 구축합니다.

스캔을 시작하기 전에 다음과 같이 소프트웨어 제어 창에서 획득 매개변수를 선택합니다. X선관 전압을 90kV로, CT X선관 전류를 160마이크로 옹스트롬으로, 활선 X선관 전류를 80마이크로 옹스트롬으로, 시야를 36mm로 설정합니다. No Gating Technique(게이팅 기법) 및 High Resolution(고해상도)"을 선택하고 스캔 기법의 경우 4분을 선택합니다.

3%의 이소플루란을 흡입하여 마우스를 마취한 후, 일정한 마취제를 제공하는 콧방울로 작은 구멍에 삽입된 동물 침대에 놓습니다. 가슴이 드러나도록 침대에 테이프로 발을 고정합니다. 다음으로 악기 도어가 닫히고 라이브 모드를 켜면 캡처 버튼을 눌러 실시간으로 마우스 위치를 볼 수 있습니다.

CT 기기의 버튼을 사용하여 동물의 침대를 움직여 가슴을 시야에 맞춥니다. 마우스가 중앙에 오면 갠트리를 회전하여 90도를 선택하고 "설정"을 클릭한 다음 CT 스캔 버튼을 클릭하여 최적의 침대 위치를 확인합니다. 딸깍 하는 소리 예"X-ray 소스가 켜질 것임을 알리는 메시지에.

이미징 후 동물을 다시 우리에 넣고 마취에서 완전히 회복될 때까지 모니터링합니다. 7일마다 또는 필요에 따라 이미징을 반복합니다. Masson의 트리크롬으로 염색하면 폐 조직의 형태가 드러납니다.

블레오마이신 투여군의 사진은 7일째부터 주로 단일 섬유화 종괴로 시작하여 14일째에 치환된 콜라겐의 합류 덩어리로 진행되어 21일까지 변하지 않은 섬유증의 뚜렷한 패턴을 보여주었습니다. 반복적인 micro-CT 이미징을 통해 섬유증 폐엽의 기도를 정량화하고 세분화할 수 있었습니다. 기도는 중앙부와 원위부로 나뉘어져 있었습니다.

기도의 원위부는 폐내(intrapulmonary tract)이며 폐엽(lung lobes)으로 나뉘어 우측 두개엽(cranial lobe), 우측 중간엽(right middle lobe), 우측 꼬리엽(right caudal lobe), 우측 부속엽(right accessory lobe), 좌측 폐(left lung)로 나뉩니다. 기도 반경의 정량화는 식염수 대조군에 비해 블레오마이신을 처리한 마우스에서 반경이 증가한 것으로 나타났습니다. 각 점은 총 30마리의 마우스에 대한 5마리 동물의 평균의 평균 표준 오차를 나타냅니다.

서로 다른 시점에서의 비히클 또는 블레오마이신 처리 마우스의 총 폐 섬유증 정량화는 이러한 마이크로 CT 매개변수가 조직학적 결과와 일치함을 보여줍니다. 이 기술을 숙달하면 약물 스크리닝을 위해 일상적으로 수행할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 폐 섬유증 질환 분야의 연구자가 IPF와 같은 동물 모델에서 반복 치료의 효능을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.