Name: 풍선-기반 부상 마우스 복 부 대동맥에서 Myointimal 증식을 유도 하 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: 배우세요 풍선 기반 대동맥 손상을 이용하여 마우스에서 근육내피 과증식을 유도하는 방법을. 이 기법은 혈관 손상 후 병태생리학적 변화를 연구하고 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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저자는 그녀의 기술 지원에 대 한 크리스티안 Pahrmann 감사합니다.
D.W. 최대 kade 수 있다 재단에 의해 지원 되었다. T.D. 받은 보조금 다른 Kröner Fondation (2012_EKES.04)와 도이치 가운데 (DE2133/2-1_. S. S. 도이치 가운데 (DFG;에서 연구 보조금을 받은 SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

동물은 실험실 동물의 원칙에 대 한 가이드 준수 인도적인 치료를 받은 하 고 준비 하 여 연구소의 실험 동물 자원, 건강의 국가 학회에 의해 출판. 모든 동물 프로토콜 ('Amt에 Gesundheit und Verbraucherschutz, 타트 (건강 및 소비자 보호를 위한 사무실) 함부르크') 책임 있는 지방 기관에 의해 승인 되었다.
1. 카 테 터 준비
참고: 카 테 터에 관한 정보에 대 한 테이블의 자료 를 참조 하십시오.
<ol><li>카 테 터 홀더에서 카 테 터를 가져가 라.</li>
	<li>밖으로 원심 포트를 통해 루멘에서 guidewire를 당겨.</li>
	<li>카 테 터의 원심 끝에 cyanoacrylate 접착제 한 방울 넣어. 주의: 라텍스 또는 니트 릴 장갑을 착용 한다.</li>
	<li>카 테 터의 RX 포트에는 guidewire를 놓고 원심 포트 루멘을 통해 사전. 나중에, 당겨는 guidewire 다시 약간 공간을 두도록 ~ 5 mm의 끝에.</li>
	<li>접착제를 건조 수 있도록 5 분 기다립니다.</li>
	<li>guidewire를 이동, 수정 되어야 합니다. 그것은 여전히 모바일, 단계 1.3-1.6을 반복 합니다.</li>
	<li>1.5 mL 0.9% 식 염 수로 3 mL 주사기를 풍선 인플레이션 포트에 연결.</li>
	<li>풍선 인플레이션 테스트 주사기 플런저를 밀어. 두고 0.6 mL 주사기에 식 염 수 있습니다.</li>
</ol>2. 마우스 준비
<ol><li>14 주 약 30 g 무게의 나이에 남성 쥐를 얻을. 참고: 우리는 동물 실험실 동물 연구소에서 얻은 사용 합니다. 우리 여기 C57BL/6J 사용.</li>
	<li>유도 챔버를 사용 하 여 2.0-2.5 %isofurane (500 mL/min 산소 유량)와 마우스를 anaesthetize.</li>
	<li>생리대에 그것의 뒤에 마우스를 놓고 마우스의 코 및 입 안 면 마 취 유지 합니다. 뒷 다리와 꼬리를 반사의 부재를 확인 곤란 하 여 마 취의 충분 한 깊이를 확인 합니다.</li>
	<li>헤어 트리머를 사용 하 여 복 부 머리를 제거 합니다.</li>
	<li>뒷 다리를 확산 하 고 수정 테이프를 사용 하 여 그들의 위치.</li>
	<li>Povidone-요오드, 뒤에 80% 에탄올을 사용 하 여 복 부 영역을 치료. 두 번 이상이 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>외과 용 드 레이프를 사용 하 여 수술 부위의 오염 얻이 되지 않습니다 보장 하기 위해. 따라 피부와 근육 층을 열고는 교육 알바 복 부 장기 노출 시저 (또는 메스).</li>
	<li>0.9% 염 분 촉된 장갑에 내장을 그들을 축축한 유지로.</li>
	<li>두 개의 미세 집게를 사용 하 여 복 부 대동맥 위에 지방 조직을 제거.</li>
	<li>인슐린 주사기 (30 G)를 사용 하, 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)에 250 µ L 덤플링 솔루션 (50 U/mL)의 주입 하 고 그것의 조직 분포에 대 일 분을 기다릴. 헤 파 린 hemostasis 억제 하 고 수술 하는 동안 원하지 않는 응고 방지.</li>
	<li>두 개의 집게를 사용 하 여 그것의 분기와 그 보내는 분기 선박 infrarenal 대동맥 해 부.</li>
	<li>높은 온도 cauterizer와 클램핑 된 지역에 배치 될 것으로 예상 된다 하는 쪽 배 선</li>
	<li>신장 동맥 바로 아래 infrarenal 대동맥 클램핑 함으로써 혈액의 흐름을 중지.</li>
	<li>두 번째 클램프 바로 위에 대동맥 분기 원심 위치에 놓습니다.</li>
	<li>작은 가로 절 개를 그릇에 따라 클램프의 중간에가 위를 사용 하 여 수행 합니다. 참고: 절 개의 크기 배 둘레의 1/3에 해당 해야 합니다.</li>
	<li>절 개에 (30 G) 바늘으로 주사기를 삽입 하 고 250 µ L 덤플링 솔루션 (50 U/mL)와 대동맥을 플러시.</li>
	<li>10-0 봉합을 사용 하 여, 절 개의 각 측면에 하나의 단일 매듭을 배치 합니다.</li>
	<li>절 개 배 확장기를 삽입 하 여 대동맥 팽창 하 고 약간 배를 확산. 팽창 2 ~ 3 회 반복 합니다.</li>
	<li>0.9% 식 염 수와 풍선 카 테 터를 보습.</li>
	<li>대동맥으로 평면화 된 풍선 카 테 터를 삽입 하 고 대동맥에 인접 클램프 승급.</li>
	<li>근 위 클램프에 도달, 신중 하 게 인접 클램프 열고 ~0.6 mL 식 염 수를 주입 하 여 혈액 누출을 방지 하기 위해 풍선을 부 풀 려. 참고: 혈관을 팽창 된 풍선의 비율은 1.5:1 이다.</li>
	<li>약 2 cm 역행 카 테 터를 사전.</li>
	<li>확장 된 카 테 터, 주사기를 방출 하 여 약간 풍선 deflating 동안 당겨.</li>
	<li>카 테 터 대동맥의 절 개를 도달할 때 인접 클램프를 다시 연결 합니다. 풍선을 완전히 빼 다 고 그것을 제거 합니다.</li>
	<li>250 µ L 덤플링 솔루션 (50 U/mL)와 대동맥 30 G 주사기를 사용 하 여 린스 합니다.</li>
	<li>10-0 봉합을 사용 하 여 대동맥 절 개를 닫습니다. 장소는 복 부 쪽에 하나 또는 두 개의 바늘 뒤 측면 양쪽에 바늘을 중단.</li>
	<li>원심 클램프를 엽니다. 출혈, 경우 클램프 다시 닫고 추가 바늘을 배치 합니다.</li>
	<li>신중 하 게 인접 클램프를 엽니다.</li>
	<li>그것을 지원 하 고 어떤 출혈을 멈추게 하는 봉합에 두 개의 면봉을 배치 합니다.</li>
	<li>그것을 유지 하기 위해 봉합에 흡수 hemostats를 놓습니다. 참고: 대동맥 펄스 distally 절 개에서에서 표시 되어야 합니다.</li>
	<li>내장 복 부에 다시 놓습니다.</li>
	<li>된 37 ° c에 미리 데워 살 균 0.9% 식 염 수와 복 부 구멍을 씻어</li>
	<li>6-0 실행 봉합을 사용 하 여 복 부 근육 레이어를 닫습니다.</li>
	<li>5-0 실행 봉합 피부를 닫습니다.</li>
	<li>마우스를 허용 하기 전에 Carprofen 4-5 mg/kg을 피하 주사. 그것은 식을 얻고 있다 때까지 동물을 모니터링, sternal recumbency를 유지. 동물 혼자 장에 계속 완전 한 회복.</li>
	<li>3 일에 대 한 진통제로 서 식 수 (50 mg/100 mL)에 Metamizole를 추가 하 고 매일 동물을 모니터링. 일반적으로 달콤한 처럼 마우스 metamizole의 맛 하 고는 수술 후 즉시 마시는 시작 합니다. 선호 하는 경우 metamizole 대신 지속 릴리스 에이전트를 사용할 수 있습니다. 참고:이 모델에 대 한 관찰 기간은 28 일입니다.</li>
</ol>3입니다. histopathology
<ol><li>28 일 후 풍선 부상 대동맥을 수확 단계 2.2 2.9에서에서 설명한 대로 쥐를 준비 하 여.</li>
	<li>가 위를 사용 하 여 풍선 부상 대동맥 (분기 신장 혈관 위에 0.3 m m 사이)를 제거 하 고 그것의 심 혼을 절단 하 여 마우스를 안락사.</li>
	<li>0.9%로 선박의 루멘 플러시 NaCl.</li>
	<li>밤새 4 %paraformaldehyde (PFA)에서 수확된 한 배를 해결 하 고 5 시간 동안 2 시간, 2 시간, 1 시간에 80% 에탄올, 95% 에탄올에 대 한 70% 에탄올으로 시작 하는 에탄올과 100% 에탄올의 농도 증가에 탈수. 그런 다음, 품 어 크 실 렌에 샘플 2 시간 동안 3 번 샘플 파라핀을 침투 하기 전에. 참고: 0.9% 수확된 배를 내리는 대신 NaCl, 4%와 플러시 수 PFA. 주의: PFA 및 크 실 렌 독성이 있으며 특별 한 관리와 처리 해야 합니다.</li>
	<li>파라핀에 샘플을 포함 하 고 있는 톰을 사용 하 여 5 µ m 두께의 조각으로 잘라.</li>
	<li>3 시간 5 분 동안 크 실 렌과 슬라이드를 deparaffinize.</li>
	<li>에탄올의 감소 시리즈를 사용 하 여 조직 슬라이드 리하이드레이션 2 시간 5 분, 3 분 95%, 80%, 70% 에탄올의 뒤에 100% 에탄올으로 시작 합니다.</li>
	<li>슬라이드 설명된18로 Masson의 trichrome 얼룩과 얼룩.</li>
	<li>2 시간 10 분 대 한 100% 에탄올에 얼룩진된 슬라이드를 탈수. 2 시간 10 분 대 한 자일 렌을 하 고 설치 매체에 탑재.</li>
	<li>밝은 분야 현미경 슬라이드를 볼. 5 배 확대와 0.12의 숫자 조리개와 렌즈를 사용 하 여 개요 그림 이나 자세한 관찰을 위해 0.35의 숫자 조리개와 20 x 확대와 렌즈에 대 한.</li>
</ol>4. 면역 형광 검사 현미경 검사 법
<ol><li>에탄올의 감소 시리즈를 사용 하 여 조직 슬라이드 리하이드레이션 2 시간 5 분, 3 분 95%, 80%, 70% 에탄올의 뒤에 100% 에탄올으로 시작 합니다.</li>
	<li>20 분 동안 증기선에서 항 원 복구 솔루션에 슬라이드를가 열 하 여 항 원 복구를 수행 합니다.</li>
	<li>실내 온도 아래로 슬라이드 식 지.</li>
	<li>버퍼링 하는 인산 염 (PBS)와 3 시간 동안 슬라이드를 씻은 후 30 분에 대 한 섹션에 항 원을 차단 솔루션을 적용.</li>
	<li>PBS 가진 5 분에 대 한 세 번 슬라이드를 씻어.</li>
	<li>1 차적인 항 체 희석제에 희석 주 항 체와 섹션을 품 어. 참고: 적절 한 농도 및 부 화 시간 각 항 체에 대 한 개별적 선택 되어야 한다.</li>
	<li>슬라이드 언바운드 항 체를 제거 하는 PBS 가진 5 분 동안 세 번 씻는 다.</li>
	<li>이차 항 체 희석제에 희석 사전 활용 된 이차 항 체와 섹션을 품 어. 참고: 적절 한 농도 및 부 화 시간 각 항 체에 대 한 개별적 선택 되어야 한다.</li>
	<li>5 분에 대 한 슬라이드 세 번 세척 하 여 언바운드 항 체를 제거 합니다.</li>
	<li>15 분; 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 사용 하 여 셀 핵 counterstain 최종 DAPI 농도 350 이어야 한다 nM.</li>
	<li>면역 형광 검사 솔루션 장착 호환에 슬라이드를 탑재 합니다. 참고: 잘못 설치 솔루션을 사용 하 여 형광 신호를 모호한 수 있습니다.</li>
	<li>형광 현미경 슬라이드를 볼. 1.3 숫자 조리개와 40 x 확대 렌즈를 사용 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deaths%3A+final+data+for+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Natl+Vital+Stat+Rep%22%5BJournal%5D)">Deaths: final data for 2009.</a> Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).</li>
<li>Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intimal+proliferation+of+smooth+muscle+cells+as+an+explanation+for+recurrent+coronary+artery+stenosis+after+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).</li>
<li>Greenwald, S. E., Berry, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+vascular+grafts%3A+the+importance+of+mechanical+and+haemodynamic+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties.</a> J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).</li>
<li>Majesky, M. W., Schwartz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+diversity+in+arterial+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle diversity in arterial wound repair.</a> Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).</li>
<li>Owens, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+differentiation+of+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells.</a> Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).</li>
<li>Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease.</a> Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).</li>
<li>Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+atherosclerosis%3A+a+comprehensive+review+of+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice.</a> Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).</li>
<li>Karas, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+intimal+proliferation+after+balloon+injury+and+stenting+in+swine%3A+an+animal+model+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis.</a> J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).</li>
<li>Ip, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelets%2C+thrombin+and+hyperplasia+in+restenosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty.</a> J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).</li>
<li>Mason, R. G., Read, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+species+differences+in+fibrinolysis+and+blood+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res%22%5BJournal%5D)">Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation.</a> J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).</li>
<li>Lafont, A., Faxon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+animal+models+of+post-angioplasty+restenosis+sometimes+poorly+predict+the+outcome+of+clinical+trials%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).</li>
<li>Matter, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+balloon-induced+inflammation%2C+proliferation%2C+and+neointima+formation+in+apolipoprotein+E+%28ApoE%29+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice.</a> Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).</li>
<li>Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+arterial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of arterial injury.</a> Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).</li>
<li>Simon, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+neointimal+formation+in+Mac-1%28-%2F-%29+mice+reveals+a+role+for+inflammation+in+vascular+repair+after+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty.</a> J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).</li>
<li>Sata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).</li>
<li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide%2C+gender%2C+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li>
<li>Painter, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myointimal+hyperplasia%3A+pathogenesis+and+implications.+2.+Animal+injury+models+and+mechanical+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors.</a> Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).</li>
<li>Stubbendorff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+myointimal+hyperplasia+versus+atherosclerosis+in+mice%3A+an+introduction+of+two+valid+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models.</a> J Vis Exp. (87), e51459(2014).</li>
<li>Deuse, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichloroacetate+prevents+restenosis+in+preclinical+animal+models+of+vessel+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury.</a> Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

이 문서는 myointimal 증식 개발 연구는 murine 모델을 보여 줍니다 고 기본 병 적인 프로세스의 탐사와 새로운 약물 이나 치료 옵션의 테스트 수 있습니다.
이 프로토콜의 가장 중요 한 단계는 대동맥의 노출입니다. 으로 과도 한 노출 동맥 류 형성과 모델 실패 이어질 것입니다이 단계 동안 특별 한 주의 지불 합니다. 다른 한편으로, 노출 충분히 수행 됩니다, 너무 작은 myointima 개발할 것입니다. 따라서, 노출의 강도 결과이 동물 모델의 성공에 결정적 이다.
수술 절차에 관하여 그릇의 두 벽 선박 patency의 초기 실패에 발생할 수 있습니다 stiches를 설정 하 여 관통 하지는 중요 하다. 우리는 우리가 쥐18의 복 부 대동맥에서 혈관 협 착 증을 유발 하는 마우스 모델을 설명 이전 했습니다. 그러나,이 고 대부분의 다른 모델만 제공 매우 적은 양의 조직 분석에 ...

동맥 협 착 증 관상 동맥 및 주변 동맥에 병 적 상태와 환자1의 사망률에 큰 효과가 있다. 1 기본 병 적인 메커니즘은 myointima 증식 (MH), 증가 확산, 마이그레이션, 및 혈관 평활 근 세포 (SMC)2에서 세포 외 기질 단백질의 합성에 의해 특징입니다. SMC는 선박의 미디어 계층에 있으며 루멘의 표면에 자극에 따라 마이그레이션할. 물질로 신호 등 성장 인자, cytokines, 셀 연락처, 지질, 기질 구성 요소, 기계적 전단 고 힘3,4,,56을 스트레칭. 부상 병 적인 또는 의원 성, 혈관 벽의 내 피 세포 및 평활 근 세포 손상 원인 및 염증 성 반응, 자극 고 따라서 수소7.
다른 동물 모델 동맥 상해 및 myointima 증식 연구를 현재 사용할 수 있습니다. 큰 동물 같은 돼지 또는 개 인간과 유사한 동맥 및 관상 동맥 해부학을 공유의 장점은 특히 혈관 기술, 절차, 및 장치8조사 연구에 적합. 그러나, 돼지 모델 개 하나만 배 부상11가벼운 응답 하는 동안 더 높은 thrombogenicity9,10, 단점이 있다. 또한, 모든 큰 동물 모델 특별 한 주택, 장비, 및 직원, 높은 비용으로 연결 되 고 항상 기관에 제공 하지 않습니다 필요 합니다. 작은 동물 모델에는 쥐와 쥐 포함 됩니다. 쥐에 비해, 쥐 있고 저렴 한 비용의 장점 다양 한 모델에 밖으로 노크의 존재. 이 비디오에서 설명 하는 모델 ApoE-/-생쥐 서양 다이어트 먹이 밀접 하 게 혈관 동맥 경 화성 혈관12의 임상 설정 모방 하 결합 될 수 있다. 이전 모델 유도 철사 부상13, 액체 건조14,15봄 또는 팔목 부상16통해 혈관 상해. 상해의 자연 크게 개발 및 수소의 헌법에 영향을 미칠 것 이다, 혈관 상해를 유발 하는 풍선 카 테 터를 사용 하 여 이므로 임상 설정을 모방 하는 가장 좋은 방법은.
이 문서에서 우리는 쥐에서 풍선 카 테 터와 수소를 유도 하는 소설 방법을 설명 합니다. 풍선 카 테 터 (1.2 m m x 6 m m) RX 포트 (그림 1A)와 함께 사용 하면 된다고 내 층의 하 고, 동시에, 선박에의 한 overdistension의 유도에 있습니다. 이러한 요소 둘 다는 MH의 개발에 대 한 중요 한 트리거입니다. 이 모델에 대 한 관측 시간 28 일17이다.

<table><tbody><tr><td>10-0 Ethilon 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>2814G</td><td></td></tr><tr><td>3 mL 주사기</td><td>BD 의료</td><td>309658</td><td></td></tr><tr><td>37% HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>5-0 프롤렌 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>EH7229H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 프롤렌 봉합</td><td>사 Ethicon</td><td>8706H</td><td></td></tr><tr><td>산성 Fuchsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8129-25G</td><td>삼색 염색</td></tr><tr><td>항원 회수 용액</td><td>Dako</td><td>S1699</td><td></td></tr><tr><td>Azophloxin</td><td>Waldeck</td><td>1B-103</td><td>삼색 염색</td></tr><tr><td>Bepanthen 눈과 코 연고</td><td>Bayer</td><td>1578675</td><td>Eye 연고</td></tr><tr><td>Betadine 용액</td><td>Betadine Purdue Pharma</td><td>NDC : 67618-152</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6J</td><td>Charles River</td><td>재고 번호 000664</td><td></td></tr><tr><td>클램프 애플리케이터</td><td>Fine Science Tools</td><td>18056-14</td><td>턱 치수: 4 x 0.75 mm
길이 : 13 mm</td></tr><tr><td>콜라겐 3</td><td>abcam</td><td>ab7778</td><td>항체</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fischer</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 안티 염소 IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A21432</td><td>2 차 항체</td></tr><tr><td>당나귀 안티 Rabbit IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td>2 차 항체</td></tr><tr><td>당나귀 안티 토끼 IgG AF488</td><td>Invitrogen</td><td>A11055</td><td>2 차 항체</td></tr><tr><td>: 당나귀 anti-Rabbit IgG AF555</td><td>Invitrogen</td><td>A31572</td><td>2 차 항체</td></tr><tr><td>: 에탄올 70 %</td> <td>Th. Geyer</td><td>: 2270</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 : 96 %</td> <td>Th. Geyer</td><td>: 2295</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 절대</td><td>Th. Geyer</td><td>2246</td><td></td></tr><tr><td>FAP</td><td>abcam</td><td>ab28246</td><td>항체</td></tr><tr><td>집게 미세</td><td>과학 도구</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>집게 표준</td><td>Fine Science Tools</td><td>11023-10</td><td></td></tr><tr><td>빙하 아세트산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020</td><td></td></tr><tr><td>이발기</td><td>WAHL</td><td>8786-451A ARCO SE</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Rotexmedica</td><td>PZN 3862340</td><td>25.000 IE/mL</td></tr><tr><td>고온 소작 키트</td><td>Bovie</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Image-iT FX Signal Enhancer</td><td>Invitrogen</td><td>I36933</td><td>차단 솔루션</td></tr><tr><td>Light Green SF</td><td>Waldeck</td><td>1B-211</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Microsurgical clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td>Micro-Serrefine - 4mm</td></tr><tr><td>MINI TREK 관상동맥 확장 카테터 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange</td><td>Abbott</td><td>1012268-06U</td><td></td></tr><tr><td>몰리브다토인산 수화물</td><td>Merck</td><td>1.00532.0100</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>B.Braun</td><td>PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12075-14</td><td></td></tr><tr><td>Novaminsulfon</td><td>Ratiopharm</td><td>PZN 03530402</td><td>Metamizole</td></tr><tr><td>Orange G</td><td>Waldeck</td><td>1B-221</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Leica biosystems</td><td>REF 39602004</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>PFA 4%</td><td>전자 현미경 과학</td><td>#157135S</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau S 용액</td><td>Serva 전기영</td>동 <td>33427</td><td>트리크롬 염색</td></tr><tr><td>1차 항체 희석제</td><td>Dako</td><td>S3022</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold Mounting solution</td><td>Thermo Fischer</td><td>P36930</td><td>면역형광 염색 슬라이드용 장착 솔루션</td></tr><tr><td>교체 가능한 미세 팁</td><td>Bovie</td><td>H101</td><td></td></tr><tr><td>Resorcin-Fuchsin Weigert</td><td>Waldeck</td><td>2E-30</td><td>Trichrome staining</td></tr><tr><td>Rimadyl</td><td>Pfizer</td><td>400684.00.00</td><td>Carprofen</td></tr><tr><td>가위</td><td>Fine Science Tools</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>가위 Vannas 스타일</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>2차 항체 희석제</td><td>Dako</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>속효성 접착제 MINIS 3x1g</td><td>UHU</td><td>45370</td><td>시아노아크릴레이트</td></tr><tr><td>슬라이드 랙</td><td>Ted Pella</td><td>21057</td><td></td></tr><tr><td>SM22</td><td>abcam</td><td>ab10135</td><td>항체</td></tr><tr><td>SMA</td><td>abcam</td><td>ab21027</td><td>항체</td></tr><tr><td>염색 접시</td><td>Ted Pella</td><td>21075</td><td></td></tr><tr><td>수술 현미경</td><td>Leica</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>Tabotamp fibrillar</td><td>Ethicon</td><td>431962</td><td>흡수성 지혈</td></tr>구 <tr><td>Transpore 수술 테이프</td><td>3M</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>U-100 인슐린 주사기</td><td>BD 의료</td><td>324825</td><td></td></tr><tr><td>용기 확장기</td><td>미세 과학 도구</td><td>18603-14</td><td></td></tr><tr><td>Vitro-Clud</td><td>Langenbrinck</td><td>04-0001</td><td></td></tr><tr><td>Weigerts 철 헤마톡실린 키트</td><td>Merck</td><td>1.15973.0002</td><td>트리크롬 염색</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Th. Geyer</td><td>3410</td><td></td></tr></tbody></table>

풍선-기반 부상 마우스 복 부 대동맥에서 myointimal 증식을 유도 하

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

동물 모델의 사용은 수소, 동맥 협 착 증에 대 한 하나의 주요 원인의 더 나은 이해를 위해 근본적 이다. 이 문서에서는, 큰 동물에 설립된 선박 부상 모델 비교는 murine 풍선 노출 모델을 설명 합니다. 풍선 카 테 터 대동맥 노출 모델 임상 설정을 모방 하 고 유사한 pathobiological 및 생리 적 변화를 리드. 간단히, 대동맥 abdominalis에 수평 절 개 후, 풍선 카 테 터 혈관에 삽입, 팽창, 고 됩니다 retrogradely 소개. 풍선의 인플레이션 intima 상해 및 선박의 overdistension 이어질 것입니다. 카 테 터 제거 후 대동맥 절 개 한 stiches 함께 종료 됩니다. 이 문서에 표시 된 모델은 재현, 수행, 쉬운 및 신속 하 고 안정적으로 설정할 수 있습니다. 그것은 특히 비싼 실험 치료제, 경제적인 방식으로 적용 될 수 있는 평가 적합 합니다. 다른 녹아웃 마우스 종자를 사용 하 여 수소 개발에 다른 유전자의 영향 평가 될 수 있다.

풍선 노출은 쥐에 있는 수소의 개발 연구에 적합 한 모델. 동물 수술에서 잘 복구와 우수한 건강 상태 후 작업을 표시 합니다. 우리는 수술으로 인해 3% 사망률 보다 적은 50 쥐에이 모델을 설립. 그림 1B -C 키 수술 단계를 보여줍니다. 따라 피부 절 개 후는 교육 알바, 대동맥 abdominalis식별. Microsurgical 클램프 (그림 1B)를 배치 합니다. 대동맥의 한가운데에 작은 절 개, 배와 역행 하는 혈액의 흐름 (그림 1C)의 방향에 대 한 슬라이드에 풍선 카 테 터를 설정. 팽창 된 풍선의 운동 된다고 intima의 하 고, 동시에, 그릇의 overdistension에 이끌어 낸다. 대동맥 절 개 한 stiches 함께 종료 ...

이 문서에서는 대동맥 풍선 부상 후 murine 모델 myointimal 증식 (수소)의 개발 연구를 보여줍니다.

풍선-기반 부상 마우스 복 부 대동맥에서 Myointimal 증식을 유도 하

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

이 마우스 기반 모델 시스템의 전반적인 목표는 대동맥 풍선 손상 후 근육 내막 증식증의 발달을 연구하는 것입니다. 이 모델 시스템은 어떤 요인이 발병에 기여하는지와 같은 근내막 증식증에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 형질전환 마우스에서 근내막 증식증의 발달을 연구함으로써 우리는 질병의 병리 메커니즘에 대해 더 잘 이해할 수 있기를 희망합니다.이 동물 모델의 또 다른 장점은 질병이 빠르게 진행된다는 것입니다. 불과 몇 주 만에 우리는 쥐를 대상으로 연구를 마쳤습니다. 먼저 필요한 카테터를 준비합니다.홀더에서 제거하고 원위 포트를 통해 루멘을 통해 가이드 와이어를 당겨 빼냅니다. 다음으로 카테터의 말단부에 시아노아크릴레이트 한 방울을 넣고 RX 포트를 통해 가이드 와이어를 공급한 다음 내강을 통해 원위 포트를 밖으로 공급합니다. 그런 다음 가이드 와이어를 약간 뒤로 당겨 약 5mm 정도 튀어나오게 하고 접착제를 건조시킵니다.나중에 3 밀리리터 주사기에 1.5 밀리리터의 0.9 % 식염수를 채우고 카테터의 풍선 팽창 포트에 연결합니다. 그런 다음 플런저를 밀어 풍선 팽창을 테스트합니다. 주사기에 약 0.6ml의 식염수를 남겨 두십시오.다음으로 수술을 위해 마우스를 준비합니다. 이소플루란 챔버에서 마취하고 나중에 수술 중에 콧방울을 통해 이소플루란을 전달합니다. 진행하기 전에 뒷발과 꼬리를 꼬집어 충분한 마취 깊이를 확인하여 반사 신경이 없는지 확인합니다.그런 다음 트리머를 사용하여 복근을 제거하고 테이프를 사용하여 뒷다리의 위치를 고정합니다. 마지막으로, 포비돈 요오드를 3회 교대로 스크럽한 다음 80%의 에탄올을 사용하여 복부 부위를 소독합니다. 먼저 알바 선을 따라 피부와 근육층을 열어 복부 장기를 노출시키는 것으로 시작합니다.그런 다음 장을 옆으로 치우고 식염수에 적신 거즈로 싸서 촉촉하게 유지하십시오. 이제 두 개의 가는 집게를 사용하여 복부 대동맥 위의 지방 조직을 제거합니다. 그런 다음 인슐린 주사기에서 약 12단위의 황산헤파린을 IVC에 주입하고 전신 분배를 위해 3분 동안 기다립니다.다음으로, 겸자를 사용하여 대동맥을 분기점까지 절개하고 나가는 가지를 드러냅니다. 그런 다음 소작을 사용하여 고정될 영역 내의 대동맥을 따라 측혈관을 결찰합니다. 그런 다음 신장 동맥 바로 아래에 있는 혈관을 조이고 대동맥 분기점 바로 위의 원위 위치에서 조여 혈류를 멈춥니다.이제 클램프 사이의 중간 지점에서 혈관을 따라 작은 수평 절개를 수행합니다. 절개 부위는 혈관 둘레의 약 1/3 정도가 되어야 합니다. 그런 다음 인슐린 주사기를 사용하여 이전과 같이 헤파린 용액으로 대동맥을 세척합니다.다음으로 절개 부위의 양쪽에 단일 매듭으로 10-0 봉합사를 놓습니다. 계속 진행하려면 대동맥을 확장하십시오. 절개 부위에 혈관 확장기를 놓고 혈관을 약간 벌립니다.이것을 두세 번 반복하십시오. 그런 다음 풍선 카테터를 식염수로 적셔 준비합니다. 그런 다음 수축된 풍선 카테터를 대동맥에 삽입하고 근위 클램프 쪽으로 전진시킵니다.근위 클램프를 조심스럽게 열고 약 0.6ml의 식염수를 주입하여 혈액 누출을 방지하기 위해 풍선을 팽창시킵니다. 다음으로, 카테터를 약 2cm 전진시킵니다. 풍선을 약간 수축시키면서 카테터를 뒤로 당깁니다.카테터가 대동맥 절개 부위에 도달하면 근위 클램프를 다시 부착합니다. 그런 다음 풍선을 완전히 수축시키고 제거하십시오. 이제 헤파린 용액으로 대동맥을 헹굽니다.그런 다음 각 측면에 중단된 10-0 봉합사를 사용하여 대동맥 절개 부위를 봉합하여 진행합니다. 그 후 복부 쪽을 한두 바늘 꿰맸습니다. 그런 다음 말단 클램프를 열고 출혈을 확인하고 필요에 따라 추가 봉합사를 배치합니다.출혈이 없으면 근위 클램프를 조심스럽게 엽니다. 봉합사에 면봉을 사용하여 지지하고 출혈을 늦춥니다. 그런 다음 봉합사에 흡수성 지혈제를 놓아 봉합사를 지탱합니다.두 클램프를 모두 열면 절개 부위에서 원거리로 대동맥 맥박이 보여야 합니다. 이제 장을 다시 복부에 넣고 섭씨 37도로 데운 식염수로 복강을 헹굽니다. 다음으로 6-0 러닝 봉합사를 사용하여 복부 근육층을 닫습니다.그런 다음 5-0 러닝 봉합사로 피부를 닫습니다. 다음으로, 동물이 깨어나기 전에 즉시 진통제를 피하로 주사하십시오. 이제 마우스가 의식을 얻고 흉골 누운 상태를 유지할 수 있을 때까지 마우스를 모니터링합니다.의식이 생기면 완전히 회복될 때까지 동물을 혼자 수용합니다. 3일 동안 식수에 메타미졸을 공급합니다. 좋은 회복을 위해 매일 마우스를 확인하십시오.풍선 제거는 마우스에서 근내막 증식증의 발달을 연구하는 데 적합한 방법입니다. 동물들은 수술에서 잘 회복되었으며 신체 상태도 매우 좋았습니다. 50건 이상의 수술에서 사망한 경우는 3% 미만입니다.근내막 증식증은 이식편에서 점진적으로 진행되었습니다. Masson의 트리크롬을 사용한 조직학적 염색은 내부 탄성 얇은 판 내부의 myointima 형성을 보여주었습니다. 근내막 병변은 주로 SM22에 양성인 세포 성분으로 구성되어 있었는데, 이는 평활근 세포를 나타내며, 역시 빨간색으로 표시된 근섬유아세포와 같은 ECM 세포를 나타냅니다.이 비디오를 시청한 후에는 생쥐에서 풍선 부상을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 20분 안에 완료할 수 있습니다.

balloon-based-injury-to-induce-myointimal-hyperplasia-mouse-abdominal

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 동영상은 쥐의 동맥 내막 플라크 개발의 두 가지 모델을 보여주고 myointimal 증식과 죽상 경화증의 차이를 강조한다.

쥐에서 동맥 경화 수스 Myointimal 증식을 유도 : 두 개의 유효한 모델의 소개

이 프로토콜은 쥐의 경동맥에 관내 부상의 원인이 이제부터는 신생 내막의 증식을 유도하는 풍선 카테터를 사용합니다. 이 부상에 대한 응답으로 혈관 재 형성의 메커니즘을 연구하는 잘 확립 된 모델입니다. 또한 널리 잠재적 인 치료 방법의 유효성을 결정하는데 사용된다.

쥐 경동맥의 혈관 풍선 부상과 관내 관리

우리는 생쥐의 대퇴 동맥에 와이어 손상을 일으켜 신내막 증식을 유도하는 수술 기법을 설명하며, 이는 재협착 억제를 위한 치료 화합물의 혈관 주위 전달을 위한 모델 테스트 시스템으로 사용됩니다.

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

심혈관 수술 (바이 패스 수술, 혈관 성형술 또는 스텐트 삽입) 후의 재 협착은 이러한 과정의 내구성을 감소시키는 중요한 문제입니다. 이상적인 치료법은 내피 세포의 재생을 촉진시키면서 평활근 세포 (VSMC)의 증식을 억제합니다. 우리는 생체 내에서 VSMC의 증식과 내피 기능의 동시 평가를위한 모델을 설명합니다.

소뇌 대동맥 파열 상해 : 효율적<em&gt; In Vivo</em&gt; 평활근 세포 증식과 내피 기능 모델

동맥 경화 증의 동물 모델 메커니즘을 이해 하 고 패 개발 또는 파열, 산업화 된 세계에서 죽음의 주요 원인이 방지 하기 위해 새로운 접근을 조사 하기 위해 필수적입니다. 이 프로토콜 풍선 부상과 콜레스테롤 풍부한 다이어트의 조합을 사용 하 여 토끼 장 골 동맥에 동맥 경 화성 플 라크를 유도.

가속된 동맥 경화의 토끼 모델: 장 골 동맥 풍선 상해의 방법 론 적 관점

여기서, 우리는 자궁 경부 뮤린 모델에서 비 봉합술 커프 기술을 사용하여 마우스에서 이종성 대동맥 이식의 프로토콜을 제시한다. 이 모형은 만성 동종 이식 혈관병증 (CAV)의 근본적인 병리를 공부하기 위하여 이용될 수 있고 그것의 대형을 방지하기 위하여 새로운 치료에이전트를 평가하는 것을 도울 수 있습니다.

수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델

쥐 경동맥 풍선 부상은 죽상 경화성 혈관에서 혈류를 복원하기 위해 수행 된 임상 혈관 성형술 절차를 모방합니다. 이 모델은 동맥 벽을 손상시키고 내피 세포의 친밀감 층을 비명하여 동맥 손상 반응을 유도하여 궁극적으로 리모델링 및 친밀한 과플라스틱 반응을 일으킵니다.

쥐 경동맥 압력 제어 세그먼트 풍선 부상 과식 치료 응용 프로그램

본 프로토콜은 마우스에서 적외선 복부 대동맥의 출현에 엘라스타제의 직접 적용을 통해 엘라스타아제 유도 AAA 모델에 대한 표준화된 수술 방법을 기술한다.

엘라스타제의 혈관주위 적용에 의해 유도된 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 AAA의 병리학적 특징과 분자 메커니즘을 연구하기 위해 인산칼슘 유발 복부 대동맥류(AAA) 마우스 모델을 설명합니다.

인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델

이 원고는 염화칼슘과 엘라스타제를 사용하여 생쥐 복부 대동맥류 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시하고 이전 모델링 방법의 장점을 결합합니다. 이 모델은 복부 대동맥류의 기저에 있는 병태생리학적 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration에 의한 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 면역 감작 성분을 포함한 AAA 모델로서, 엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제 적용을 사용하여 C57BL/6 마우스에서 복부 대동맥류(AAA)를 반복 가능하고 신뢰할 수 있게 유도하는 방법을 제공합니다.

엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제를 이용한 쥐 복부 대동맥류 모델의 신뢰성 높은 생성

배우세요 풍선 기반 대동맥 손상을 이용하여 마우스에서 근육내피 과증식을 유도하는 방법을. 이 기법은 혈관 손상 후 병태생리학적 변화를 연구하고 치료 전략 개발에 활용됩니다.

풍선-기반 부상 마우스 복 부 대동맥에서 Myointimal 증식을 유도 하

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