Name: 고해상도 광학 매핑 Murine Atria electrophysiological 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-22T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 배우세요 고해상도 광학 매핑을 이용한 쥐 심방 전기생리학 평가 방법을. Langendorff 관류 장치와 광학 매핑 시스템으로 막 전압 및 칼슘 역학을 정밀 측정하여 심방 부정맥의 발생 및 유지 기전을 연구할 수 있습니다.

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이 작품은 지원 프로그램에 의해 연구 환경 개선에 대 한 특별 조정 자금에서 젊은 연구자에 대 한 홍보 과학 및 기술 (SCF) (T.S.)를, 보조금에 대 한 과학적 연구 (제 16 K 09494, T.S., No. 26293052, T.F.)를 교육, 문화, 스포츠, 과학 및 기술 (MEXT) 일본의. 부탁 드립니다 Brainvision 및 씨 켄 지 Tsubokura 기술 지원에 대 한 그리고 우리는 또한 그의 언어 지원에 대 한 씨 존 마틴을 감사 드립니다.

이 동물 실험 승인 되었고 수행 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 도쿄 의료 및 치과 대학 규정.
1입니다. 준비
<ol><li>재고 솔루션<ol>
<li>분해 전압에 민감한 염료 (디-4-ANEPPS, 및 RH237) 및 캘리포니아2 + 표시기 (로드 2 오전) 100% 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 각각 6 m m, 10 mM, 10 mM의 농도로 재고 솔루션을 만들기 위해 함께.</li>
		<li>흥분-수축 (E-C) uncoupler, blebbistatin, 50 m m 재고 솔루션을 만들고 90 %DMSO 디졸브.</li>
		<li>Aliquot 0.2 mL PCR에에서 재고 솔루션, 어두운 방에 튜브 하 고 산화를 피하기 위해 질소 가스를 사용 하 여 재고 튜브에 공기를 대체 합니다.</li>
		<li>재고 튜브는 빛 으로부터 보호 하기 위해 개별적으로 알루미늄 호 일에 포장 하 고-20 ˚C에 그들을 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>작업 솔루션<ol>
<li>준비 없이 캘리포니아2 + (137 m NaCl m, 2.7 m m KCl, 8.0 m m 나2HPO4및 1.5 m m KH2포4, pH 7.40 NaOH에 의해 조정) 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)의 1 L</li>
		<li>Tyrode의 솔루션 (135 m m NaCl, 5.4 m m KCl, 1.8 m m CaCl2, 0.53 m m MgCl2, 0.33 m m NaH2포4, 5.5 m m D-포도 당, 및 5.0 mM HEPES, pH 7.40 NaOH에 의해 조정) 1 리터를 준비 합니다.</li>
		<li>0.22 μ m 병 맨 필터와 Tyrode의 솔루션 필터 및 거품 통 기 통풍 O2 가스 실린더에 연결 하는 공기 돌을 사용 하 여 잘 그것을 공기에 쐬 십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 광학 Langendorff 끼얹는다 마음에 매핑
<ol><li>(그림 1a& b) 두 개의 보완 금속 산화물 반도체 (CMOS) 카메라를 사용 하 여 광학 매핑 시스템 조립<ol>
<li>그림 1a& b에서와 같이 광학 매핑 시스템에 CMOS 카메라, 빔 스플리터, 렌즈, 렌즈 리볼버, 광원, dichroic 거울, 필터 및 기타 부품을 조립.</li>
		<li>다른 배율 (1.6 X와 5 X)를 장착 한 터렛의 대물 렌즈를 변경 하 여 확대를 선택 합니다. 참고: CMOS 센서의 크기는 10 mm × 10 mm, 100 × 100 해상도, 즉, 5 X 객관적 렌즈,이 시스템은 20 µ m 공간적 해상도 제공 합니다.</li>
		<li>여기 빛 530의 중심 파장으로 발광 다이오드 (LED) 램프를 사용 하 여 설정 nm, 대역 통과 필터를 통과 (520/35 nm), dichroic 거울과 반영 (560 nm).</li>
		<li>기록 방출 신호는 스플리터로 나눈 (665 nm), 긴 어떤 설정 카메라 1 통과 필터 (697/75 nm) 막 전압에 민감한 염료 (디 4-ANEPPS 또는 RH237), 그리고 카메라 2 대역 통과 필터를 사용 하 여 형광을 감지 (572/28 nm) 감지는 캘리포니아2 + 표시기 (Rhod2-오전)의 신호.</li>
	</ol></li>
	<li>Langendorff 관류 회로 조립<ol>
<li>폴 리 염화 비닐 (PVC) 튜브 연동 펌프에 연결 합니다.</li>
		<li>1.2.3 단계에서 언급 한 대로 100% O2 화난 Tyrode의 솔루션으로 PVC 튜브의 입구 쪽을 넣어.</li>
		<li>손으로 만든에 어 트랩, PVC 관의 방전 쪽 연결 다음 정렬 5 µ m 필터, 3 방향 stopcocks, 압력 변환기, 난방 유리 코일, 그리고 21-게이지 무딘된 바늘 (바늘 크기는 대동맥 크기에 따라 변경 가능) 순차적으로 다른 PVC 튜브를 사용 하 여.</li>
		<li>회로, 어떤 기포를 방지 하는 Tyrode의 솔루션 관류 회로 심장 회로에 연결 될 때까지 중단.</li>
	</ol></li>
	<li>Heparinization 및 마 취<ol>
<li>25 게이지 바늘과 1 mL 주사기를 사용 하 여 마우스에 intraperitoneally unfractionated 헤 파 린 (몸 무게에 200 IU)를 주입 수 있습니다.</li>
		<li>Anesthetize 마우스 pentobarbital (65 밀리 그램/kg)의 복 주사 하 여 10 분 후에 헤 파 린 주입.</li>
	</ol></li>
	<li>Cannulation 및 관류<ol>
<li>부정사 위치에 마우스를 놓습니다. 동물 핀치 발가락에 응답의 부족에 의해 anesthetized 확인 합니다. 가 위를 사용 하 여 칼 프로세스 수준 아래 복 부 벽을 엽니다. 가로 절 개를 횡 경 막에, 마음에 어떤 손상도 없이 중간 겨드랑이 선 갈비뼈의 양쪽 모두를 잘라 만들고 앞쪽 가슴 벽 위쪽으로 플립. 심장, 뒤에 곡선된 겸 자 사전 및 하강 대동맥, 식도, 및 열 등 한 베 나 정 맥. 다음, 인접 한 혈관 및 대동맥, 폐, 기관지, 식도, 지방 조직, 및 thymus 같은 조직 함께 급속 하 게가 위로 마음을 삭제할.</li>
		<li>페 트리 접시에 얼음 처럼 차가운 PBS의 10 mL와 함께 마음을 세척 하 고 인접 한 조직을 제거.</li>
		<li>오름차순 대동맥으로 관류 회로에 연결 된 21-게이지 무딘된 바늘의 팁을 소개 하 고 스레드는 stereomicroscope 아래와 그것을 해결.</li>
		<li>10 분 마음 100% O2화난 Tyrode의 솔루션 perfuse를 시작 합니다.</li>
		<li>증폭기와 레코더에 연결 된 압력 트랜스듀서와 관류 압력을 지속적으로 모니터링 합니다.</li>
		<li>모든 다음 단계를 수행 하는 동안 (일반적으로 2-5 mL/min 흐름 속도 대 한 해당) 80-100 mmHg 사이 관류 압력을 계속.</li>
		<li>얇은 폴 리 에틸렌 (PE) 관 삽입 초기 관류 (2.4.4 단계.), 동안 (외부 직경: 0.8 m m)는 SVC에 스레드 수정. 다음, 데워 진된 유리 챔버 (그림 1b& c)로 마음을 놓습니다.</li>
		<li>24 게이지 내재 바늘 찔린 (외경: 0.7 m m) 아 트리 움, 어떤 손상을 방지 하 고 내부 바늘을 제거 하 심 실 정점 통해 왼쪽된 심 실 (LV) 구멍에는 라스베가스에 외부 정을 떠나</li>
		<li>1 프랑스 크기 사용자 정의 만든 전극 카 테 터는 라스에 전기 자극을 수행할 SVC에서 PE 튜브를 통해 소개 필요한 경우, 심 실 서 성 대 한 우 심 실 (RV)으로 테를 사전.</li>
		<li>오름차순 대동맥 (그림 1c)에 핀 전극과 cannulation 바늘 사이 지속적으로 바이 폴라 심전도 (ECG)를 기록 하 심 실 꼭대기에 핀 전극을 삽입 합니다.</li>
		<li>전체 연구를 통해 심전도 관류 압력 모니터링을 계속 합니다.</li>
		<li>빛을 끄고 어두운 방에서 다음과 같은 실험을 수행.</li>
		<li>2.5 단계로 이동 합니다. 막 전압 또는 2.6의 단일 기록에 대 한. 막 전압 및 캘리포니아2 + 과도 듀얼 녹화에 대 한.</li>
	</ol></li>
	<li>막 전압의 단일 기록에 대 한 얼룩<ol>
<li>막 전압의 단일 기록에 대 한이 얼룩 프로토콜 중 37 ˚C에서가 열 관류 솔루션을 유지 관리 합니다.</li>
		<li>Tyrode의 솔루션 (최종 농도 5 µ M)의 10 mL와 디-4-ANEPPS 재고 솔루션 (6 m m)의 8.3 µ L를 희석.</li>
		<li>2-5 분, 5 분에 대 한 Tyrode의 솔루션으로 희미하게 뒤 관류 루트를 통해 마음에 희석된 디-4-ANEPPS 솔루션의 총 볼륨 (10 mL)를 달 이다.</li>
		<li>Tyrode의 솔루션 (최종 농도 250 µ M)의 1 mL와 함께 blebbistatin 재고 솔루션 (50mm)의 5 µ L를 희석.</li>
		<li>관류 루트를 통해 희석된 blebbistatin 솔루션의 총 금액을 관리 합니다.</li>
		<li>2.6 단계를 생략 하 고 2.7 유실에 대 한 단계를 수행 하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>막 전압 및 캘리포니아2 + 과도 듀얼 녹화에 대 한 얼룩<ol>
<li>실 온에서 Tyrode의 솔루션을 유지. 참고:이 초기 설정 온도 막 전압 (2.5 단계.)의 단일 기록에 대 한 얼룩에 다릅니다.</li>
		<li>blebbistatin 단계 2.5.4 2.5.5에서 동일한 방식으로 관리 합니다.</li>
		<li>믹스 3 µ L Rhod2AM 재고 솔루션 (10 mM)의 그리고 30 µ L polyoxyethylene polyoxypropylene의 블록 공중 합체 (DMSO에 20%), F-127 Tyrode의 솔루션의 10 mL와 혼합 희석.</li>
		<li>Rhod2AM 솔루션 (3 µ M)의 총 금액을 로드는 blebbistatin로 동일한 경로 통해 2-5 분 이상.</li>
		<li>Tyrode의 솔루션의 10 mL와 함께 RH237 재고 솔루션 (10 mM)의 7 µ L를 희석.</li>
		<li>희석된 RH237 솔루션 (7 µ M)의 총 금액을 관리 2-5 분 이상.</li>
		<li>위의 절차의 완료, 후 열 37 ˚C에서 Tyrode의 솔루션을 시작 합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>희미하게<ol>
<li>다음 실험에 37 ˚C에서 Tyrode의 솔루션의 온도 유지.</li>
		<li>과도 한 염료를 적어도 5 분 동안 Tyrode의 솔루션 마음 perfuse 참고: 단계에 밖으로이 세척 동안 흐름 속도 높일 필요가 있다 (2.4.6 단계로 참조.)</li>
		<li>모든 모션 아티팩트 수축, 및 perfused에 균질 얼룩의 실종을 확인 합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>샘플링 및 데이터 분석<ol>
<li>커버 유리 (25 m m × 60 m m) perfused 심장에 신중 하 게, 너무 많은 기계적인 스트레스 없이 심 방 표면에 평평 하 게 놓고 모션 아티팩트는 솔루션의 진동에서 방지. 아 트리 움 적절 하 게 커버 유리에 부착을 확인 합니다.</li>
		<li>레코드는 샘플링으로 CMOS 카메라에 의해 형광 속도 최대 0.1 ms 디 4-ANEPPS, 및 1 RH237 및 Rhod2AM에 대 한 ms 얼룩.</li>
		<li>소프트웨어의 실제 작업에 대 한 제조업체의 지침에 따라 얻은 기록 분석 소프트웨어를 사용 하 여 분석 합니다.</li>
		<li>관심, 드리프트 제거, 시간축 필터링 및 3 X 3 binning5영역 추출 후 활성화 지도 및 영화를 만듭니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. electrophysiological 연구
<ol><li>서 성 전극 및 자극 기 설정<ol>
<li>자극에 대 한 조직에 RA에서 주문 품 서 성 전극의 팁의 접촉을 확인 (단계 2.4.9 참조.).</li>
		<li>프로그래밍 가능한 자극에 연결 하는 서 성 카 테 터에서 서 성 거 려 모든 자극을 제공 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>서 성 임계값의 결정<ol>
<li>세트 100와 150 ms (0.4 ms의 펄스 폭), 서 성 간격 피하고 어떤 본질적인 리듬 서 성 속도 능가.</li>
		<li>안정적인 심 성를 적어도 20 비트에 대 한 지속적인 서 성 자극을 제공 합니다.</li>
		<li>서 출력에서 설정 5 mV, 다음 안마당을 depolarize에 전달 된 서 성 실패까지 점차적으로 감소.</li>
		<li>광학 녹음 하 여, 심전도 및 심 방 흥분 신호에서 P 파의 존재에 의해 심 여기를 확인 합니다.</li>
		<li>최소 성 서 성 임계값으로 안마당을 depolarize 수 있는 출력을 결정 합니다.</li>
		<li>두 번 서 성 임계값에서 다음과 같은 연구에 대 한 서 성 출력을 설정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>상수와 버스트 속도<ol>
<li>99 박동에 대 한 지속적인 성 제공 150 ms에서 시작 된 서 성 간격 또는 내장 리듬을 능가 피하 긴 간격.</li>
		<li>5 ms 단계, 아 트리 움의 1:1 캡처를 실패 하는 간격에 도달 될 때까지 또는 40 ms로 진보적으로 서 성 간격을 줄일 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>단일 extrastimulus 서 성<ol>
<li>내장 리듬 outpaces 기본 드라이브 또는 1:1 심 방 흥분을 얻기 위해 서 성 실패 하지 않는 한 120 ms, 100 ms, 및 80 ms 기본 드라이브 (S1)의 서 성 주기 길이 설정 합니다.</li>
		<li>기본적인 드라이브 기차에 대 한 10 박동 자극 성의 수를 설정 합니다.</li>
		<li>-10 ms 기본 사이클 길이 대 한 첫 번째 extrastimulus (S2)를 설정 합니다.</li>
		<li>기본 드라이브의 마지막 서 성 자극 후 s 2를 제공 합니다.</li>
		<li>S2 depolarize 안마당에 실패할 때까지 진보적으로 5 ms 단계, s 2의 커플링 간격을 단축.</li>
		<li>아 트리 움 depolarize 실패 긴 S2 간격으로 효과적인 내 화물 기간 (ERP)를 결정 합니다.</li>
		<li>ERP의 속도 적응을 평가 하기 위해 3 가지 기본 사이클 길이 ERP를 평가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>더블, 트리플 extrastimuli atrial tachyarrhythmias 유도를 서 성<ol>
<li>없는 부정맥 관찰 하는 경우 포인트 S2 ERP 밖에 서 20 ms S2 간격 재설정.</li>
		<li>추가 두 번째 extrastimulus (S3), S2로 동일한 간격으로 시작 합니다.</li>
		<li>S3 depolarize 안마당에 실패할 때까지 진보적으로 5 ms 단계 S2 및 S3 사이의 커플링 간격을 줄입니다.</li>
		<li>포인트 10 ms ERP, 밖에 서 s 2의 간격 재설정 다음 3.5.3 단계를 반복 합니다.</li>
		<li>포인트 각 ERP 밖에 서 20 ms S2 및 S3 간격을 다시 설정 합니다.</li>
		<li>추가 3 extrastimulus (S4), s 3으로 동일한 간격으로 시작 합니다.</li>
		<li>S4 안마당을 depolarize에 실패할 때까지 진보적으로 5 ms 단계 S3 및 S4 사이의 커플링 간격을 줄입니다.</li>
		<li>포인트 10 ms ERP, 외부에 S3 간격 재설정 다음 단계 3.5.7 반복.</li>
		<li>포인트 10 ms ERP, 외부 S2 및 S3 간격 재설정 다음 단계 3.5.7 반복.</li>
		<li>마찬가지로 프로그램 된 자극을 사용 하 여 재현할 수 유도 하 여 심 방 tachyarrhythmias의 inducibility를 정의 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>심 방 tachyarrhythmias의 inducibility의 평가<ol>
<li>지속적으로 모든 서 성 프로토콜 (3.3-3.5 단계.) 동안에 심전도 기록 합니다.</li>
		<li>각 자극, 심 방 심 박 급진 (AT) 또는 반복적인 심 응답 (RAR)의 유도 기록 하는 동안 전후 광학 녹음을 수행 합니다.</li>
		<li>AF 또는 RAR 유도 하는 경우 동일한 서 성 프로토콜을 적용 하 여 재현성을 확인 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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저자는 공개 없다.

광학 매핑 심장 전기 생리학7공부에 대 한 확고 책략 이며 심 실 부정맥8,9, 뿐만 아니라 심 방 들을 평가 하는 매우 유용한 도구10,11 . 막 횡단 잠재력 및 캘리포니아2 + 과도 동시 매핑 심장 마비 및 다른 심장 질환12,13관련 된 부정맥의 근본적인 메커니즘을 이해 하는 데 유용 합니다. 단일 셀 또는 셀 시트를 사용 하 여 같은 다른 electrophysiological 평가 방법 비교 perfused 마음에 광학 매핑의 절대 우월 중 하나입니다 그대로 중앙홀에 전도 패턴의 평가 심 실, 부정맥14를 유도 하는 부 비 동 리듬 중 뿐만 아니라 중. 그러나 Murine 마음, 특히 아 트리 움, 인간의 대리로 서 활용 하는 시도 그들의 작은 크기 때문에 주로 어려움 발생 했습니다, 그리고, 마우스는 유전자 조작 동물에 평가 측면에서 매력적인 실험 모델 모델, 그리고이 문제는 극복 되어야 한다. 우리의 방법은 그것을 해결 하기 위해 한 방향으로 제공 합니다.
비록 우리의 광학 매핑 장치 전체 murine 마음15기존의 시스템에 기본적으로 유사 했다, 우리의 메서드는 murine 안마당을 일부 수정 하 여 평가의 이점이 있다. 첫째, 우리는 최대 0.1 ms/프레임 및 20 µ m/픽셀, 그리고이 고해상도 매핑 murine 안마당에서 전도 속도 및 전파 패턴의 더 정확한 측정에 기여의 높은 공간과 시간 해상도를 추구. 둘째, 불필요 한 기계적 손상이 나 electrophysiological 속성 16,17변경 수, 아 트리 움의 스트레치를 피하기 위해 내재 바늘 내부 챔버 압력을 줄이기 위해 라스베가스에 직접 삽입 됩니다. 이전에 수행 하는 라를 통해 삽입 하는 대신 연구15. 또한, 서 성 자극, RA에 주문 품된 1-프랑스 크기 전극 카 테 테 르 통해 전달 하지만 하지 바늘 전극에 의해는 아 트리 움 손상 수 있습니다. 어떤 핀은 지난 연구15에 사용 했다는 심 돌출부를 해결에 피 한다. 셋째, 평가 부정맥의 기본 메커니즘의 측면에서 atrial tachyarrhythmias 유도 프로그램된 자극 프로토콜은 중요 한18,19입니다. 우리 임상 electrophysiological 연구, 버스트 속도 트리플 extrastimuli 마우스 마음에 대 한 서 성 간격의 수정, 서 성까지 프로그램된 자극 동일을 수행 합니다. 따라서, 초기 측정 매개 변수 외에 프로토콜 AT의 inducibility 평가 수 있습니다. 필요할 때, AT의 inducibility isoproterenol 또는 다른 약물의 관리와 평가 이다. 우리의 경험 야생-타입 마우스는 거의 전체 자극 프로토콜 후에 어떤 ATs 보여. 따라서,의 inducibility 유전자 돌연변이, 수술, 약11의 관리 등 여러 가지 병 적인 조건에의 기여를 평가 하기 위한 중요 한 정보 이어야 한다. 이러한 수정 사항을 그대로 murine 중앙홀에 정확한 electrophysiological 평가 최적화 수 있습니다.
또한이 메서드는 몇 가지 제한이 있습니다. 첫째, 최대 공간 해상도 5 배 목표 렌즈를 사용 하는 아 트리 움의 한 부분에 국한 시야 (FOV) (즉.에 표시 된 그림 2a로 왼쪽된 심 방 돌출부). 아 트리 움의 더 큰 시야를 얻기위한, 1.6 X 목표 렌즈는 때로는 바람직합니다 (그림 2b). 둘째, 핀 안마당을 고정 하지 않고 가끔은 심 방 전도 속성을 올바르게 측정 하기 어려운 심 방 표면이 곡선 이기 때문에. 그래서, 우리는 핀으로 고정 하는 대신 그것을 버리고 그것의 표면에 커버 유리를 배치. 이 방법은 또한 솔루션의 진동에서 모션 아티팩트를 방지 하기 위한 도움이 됩니다. 셋째, 우리의 방법으로, 그것은 그것의 전체 FOV를 꽤 어려운 그래서, 앞쪽 및 후부 보기를 제대로 사용 하려면 그림 2와 같이 다른 접근 보다 우리의 접근 방식에 더 중요 하다. 이전 보기를 이용 병 적인 조건, 특히 돌출부 (그림 4)에 경우 재입국의 명확한 관찰 될 것 이다. 다른 한편으로, 후부 보기 심 방 후 벽의 좋은 볼을 얻기의 이점이 있다 고 트리거링 심근 소매 활동의 상세한 기록 될 수도 있습니다. 때 그것은 적절 한 보기를 얻을 우리의 방법으로 곡선된 표면 평평 어렵습니다, 아 트리 움 핀에 의해 최소한의 긴장으로 해결할 수 있습니다.
우리의 방법으로, 얼룩, 서 성, 그리고 부정맥 유도의 실패 3 가능한 문제 있다. 얼룩, 없는 경우의 오류에 대 한 또는 약간의 형광 관찰, 여부 광학 매핑 장치는 올바르게 조립, 그리고 시 적절 하 게 저장 및 사용 여부를 확인 해야 합니다. 관류 솔루션의 조건 또한 중요 한는 또한 자체, 그래서, pH, 온도를 포함 한 솔루션의 상태는 심장의 electrophysiological 속성 영향을 줄 수 이며 충분 한 통 기 통풍 엄격 하 게 모니터링 하는 여부. 그것은 또한 마음에 어떤 어 혈을 방지 하는 것이 중요입니다. 실패 속도 대 한 서 성 자극 아 트리 움, 흥분 수 없습니다 하는 경우 연구원은 확인 해야 배선 회로 시험기를 사용 하 여 정확한 인지 합니다. 서 성 자극은 올바르게 출력 하 고, 문제는 조직와 전극의 접촉 이다. 전극의 위치 문제를 해결할 수 있습니다 그리고 우리의 접근 서 성 카 테 터를 사용 하 여 쉽게. 부정맥 유도, 어려움에 대 한 계 서는 일부 제한 된 경우에는의 유도 대 한 사용할 수 있습니다. 원심 두 전극과 인접 전극 수에 위치할 RV 및 RA, 각각 quadripolar 전극 카 테 터를 사용 하 여, 그것은 쉽게 RV에 RA에서 서 성 사이트를 변경 하려면 이 카 테이 터 동시 심 실 활성화 신호 마스크 심 방 흥분 신호 때 이동 하는 심 실 흥분에도 유용 합니다.
이 방법은 기여할 것입니다 유전자 표현 형을 평가 하는 AF에서 상호 작용 관련 유전자 유전자는 다른 방법으로 그들을 표시 조사 실패에 대 한 특히 GWAS, 같은 소설 연구에 의해 새로 발견. 장치 및 기술 진보와 함께이 방법을 그대로 마음에 어20의 중요 한 소스는, 폐 정 맥 소매의 electrophysiological 속성을 평가 수 있습니다.

포유류에서 4 챔버가 마음에 의하여 이루어져 있다. 위 두 개의 챔버는 심 방, 되며 낮은 사람 심. 심 전신 또는 폐 순환 하는 혈액을 추출 펌프 작동 합니다. 심 방 조직 또는 폐 정 맥에서 돌아오는 혈액을 받을 고 심으로 혈액을 운반 효율적인 심장 펌프 기능을 얻기 위해. Electrophysiological 측면에서는 atria의 중요 한 기능은 심장 리듬 조절입니다. 전기 신호 뛰어난 베 나 정 맥 (SVC)와 오른쪽 아 트리 움 (RA) 사이의 교차점에 있는 부 비 동 노드에서 발생 그리고 RA와 왼쪽된 아 트리 움 (LA), 전파 atrioventricular 노드 및 그의 Purkinje 심 실 하 실시 유도 시스템입니다.
심장 리듬 장애, 부정맥, 심 방 및 심 실 그들의 기원에 따르면로 분류 됩니다. 심 방 섬유 성 연 축 (AF)은 무작위이 고 신속한 여기는 심 방의 특징, 부정맥의 가장 일반적인 지속적인된 형태 이다. 최근 유전 분석 및 게놈 넓은 협회 연구 결과 (GWAS) AF와 유전자 변이 또는 monopolymorphisms,12,,34사이 협회를 보여주었다. 이러한 연구 결과 어 적어도 부분적으로 유전 원인에 연관 나타냅니다. 따라서, 그것은 유전자 조작 동물 모델을 사용 하 여 심 방에 인 자형 표현 형 상호 작용을 평가 하는 중요 한입니다. 그것은 널리는 마우스 유전자 조작에 대 한 가장 설립 된 포유동물은 허용 됩니다.
광학 매핑 기술 심장 조직의 흥분을 평가 하기 위해 개발 되었습니다. 그러나, 광학 매핑에 의해 murine 아 트리 움의 관찰의 상대적으로 작은 크기에 의해 방해 된다. 우리는 시간적, 공간적 고해상도 murine 아 트리 움의 상세한 평가 달성 하려고 합니다.

<table><tbody><tr><td>(-)-Blebbistatin</td><td>SIGMA</td><td>B0560-1MG</td><td>E-C 디커플러는 광학 매핑 중 모션 아티팩트를 제거합니다</td></tr>. <tr><td>RH237</td><td>Biotium</td><td>61018</td><td>전압 민감 염료</td></tr><tr><td>Rhod2AM</td><td>Biotium</td><td>50024</td><td>Ca 지시자</td></tr><tr><td>Pluronic F-127 DMSO</td><td>Biotium</td><td>#59000</td>의 20% 용액 Rhod2AM Di-4-ANEPPS<td></td></tr><tr><td></td><td>로 염색을 향상시키기 위해Wako</td><td>041-29111</td><td>전압 민감 염료</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Wako</td><td>046-21981</td><td>시약용 용제</td></tr><tr><td>병 상단 필터</td><td>Corning</td><td>430513</td><td>Tyrode의 용액 여과용</td></tr><tr><td>Haparin Sodium</td><td>Mochida Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>N/A</td><td>관상 동맥의 혈전을 피하기 위해</td></tr><tr><td>에어 스톤 (&phi; 8 mm x 10 mm)</td><td>Tokyo Koshin Rikagaku Seisakusho</td><td>N/A</td><td>폭기용</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Kyoritsu Seiyaku Corporation</td><td>N/A</td><td>마취용</td></tr><tr><td>프로그래밍 가능한 자극기</td><td>후쿠다 덴시</td><td>BC-05</td><td>후쿠다 덴시가 친절하게 대여해 주었습니다.</td></tr><tr><td>Power Lab</td><td>AD Instruments</td><td>Powerlab 26/8SP</td><td>혈압 및 심전도를 기록하려면</td></tr><tr><td>Bio Amp</td><td>AD Instruments</td><td>ML132</td><td>심전도용 Amprifier</td></tr><tr><td>BP Amp</td><td>AD Instruments</td><td>FE117</td><td>혈압 Amprifier</td></tr><tr><td>LabChart</td><td>AD Instruments</td><td>Version 7</td><td>혈압 및 심전도</td></tr><tr><td>를 기록하고 분석하는 소프트웨어일회용 BP 변환기</td><td>AD 기기</td><td>MLT0670</td><td>압력 변환기</td></tr><tr><td>1-Fr 맞춤형 전극 카테터</td><td>고유 의료</td><td>N/A</td><td>우심방</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜브(OD: 0.8mm, ID: 0.5mm)</td><td>Natume Seisakujo</td><td>SP31</td> 전극 카테터 Millex-SV 5.00 &mu를 <td>도입하기 위해 상정맥에 넣습니다</td></tr><tr><td>. m</td><td>Merk Millipore</td><td>SLSV025LS</td><td>순환 Tyrode</td></tr><tr><td>24 게이지 내주 바늘</td><td>TERUMO</td><td>SR-FS2419</td>를 <td>필터링하기 위해 챔버</td></tr><tr><td>21 게이지 바늘</td><td>TERUMO</td><td>SN-2170</td> 바늘 끝을 자르고 25 게이지 바늘 TERUMO NN-2525R <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1ml 주사기</td><td>TERUMO</td> 를 줄바꿈하여 무디게 만들었습니다.<td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>PVC 튜브</td><td>TERUMO</td><td>SF-ET0525</td><td>Langendorff의 관류 회로용</td></tr><tr><td>삼방향 마개</td><td>TERUMO</td><td>TS-TL2K</td><td>Langendorff의 관류 회로용</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>1개</td><td>3-1491-01</td><td></td></tr><tr><td>Custum 만든 가열 유리 코일</td><td>Motohashi Rika</td><td>N/A</td><td>관류 용액</td></tr><tr><td>Custum 온도 유지 온난화 유리 챔버 제작</td><td>Motohashi Rika</td> 관<td>류 용액의 온도를 유지하기 위해</td><td>N/A</td></tr><tr><td>항온 순환 장치</td><td>Lauda</td><td>E100</td><td>가열 코일 및 온난화 챔버에 연결</td></tr><tr><td>커버 유리(25mm &times; 60mm)</td><td>Matsunami</td><td>C025601</td><td>녹음 영역을 평평하게 하기 위해 아트리아를 착용</td></tr><tr><td>Perista 펌프</td><td>ATTO</td><td>SJ-1211</td><td>연동 펌프</td></tr><tr><td>Stemi DV4</td><td>Carl Zeiss</td><td>N/A</td><td>실체현미경</td></tr><tr><td>MiCAM ULTIMA-L2</td><td>Brainvision Inc.</td><td>UL-L2</td><td>광학 매핑 시스템</td></tr><tr><td>BV_Ana 소프트웨어</td><td>Brainvision Inc.</td><td>BV_Ana</td><td>데이터 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>THT Macroscope</td><td>Brainvision Inc.</td><td>THT-ZS</td><td>에피 조명 유닛</td></tr><tr><td>LED 광원</td><td>Brainvision Inc.</td><td>LEX2-G</td><td></td></tr><tr><td>다이크로익 미러 560nm</td><td>Brainvision Inc.</td><td>DM560</td><td>에피 일루미나티논</td></tr><tr><td>여기 필터 520/35nm</td><td>Semrock, Inc.</td><td>FF01-520/35-25</td><td></td></tr><tr><td>프로젝션 렌즈 플랜 S 1.0X</td><td>칼 자이스</td><td>435200-0000-000</td><td></td></tr><tr><td>포커스 드라이브</td><td>칼 자이스</td><td>435400-0000-000</td><td></td></tr><tr><td>대물 렌즈 리볼버</td><td>칼 자이스</td><td>435302-0000-000</td><td></td></tr><tr><td>수동 초점 컬럼</td><td>칼 자이스</td><td>435400-0000-000</td><td></td></tr><tr><td>매크로스코프 베이스</td><td>칼 자이스</td><td>435430-9901-000</td><td></td></tr><tr><td>스트레이트 라이트 가이드</td><td>: MORITEX Corporation</td><td>MSG10-2200S</td>, <td>Epi-Illuminatinon</td></tr><tr><td>집광 렌즈</td>, <td>MORITEX Corporation</td><td>, ML-50</td><td></td></tr>, <tr><td>PLANAPO 5.0X</td><td>Leica Microsystems</td><td>, 10447243</td><td>대물 렌즈</td></tr><tr><td>PLANAPO 1.0X</td><td>Leica Microsystems</td><td>, 10447157</td><td>대물 렌즈</td></tr><tr><td>PLANAPO 1.6X</td><td>Leica Microsystems</td><td>10447050</td><td>대물 렌즈</td></tr><tr><td>빔 스플리터</td><td>Brainvision Inc.</td><td>FLSP-2</td><td></td></tr><tr><td>다이크로익 미러 665nm</td><td>Brainvision Inc.</td><td>DM665</td><td>빔 스플리터</td></tr><tr><td>방출 필터 572/28nm</td><td>Edmund Optics</td><td>#84-100</td><td>Rhod2-AM</td></tr><tr><td>방출 필터 697/75nm</td><td>Semrock, Inc.</td><td>FF01-697/75-25</td><td>RH237 및 Di-4-ANEPPS</td></tr><tr><td>0.2 mL PCR 튜브</td><td>Greiner Bio-One</td><td>671201</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 호일</td><td>Toyo alumi</td><td>0020</td><td></td></tr></tbody></table>

고해상도 광학 매핑 murine atria electrophysiological 평가

Electrophysiological Assessment of Murine Atria with High-Resolution Optical Mapping

최근 게놈 넓은 협회 연구 결과 심 방 섬유 성 연 축 (AF)를 대상으로 유전자는 atria에 electrophysiological 표현 형 사이 강한 협회를 표시 했습니다. 그 우리 AF의 메커니즘을 명료 하 게 하는 유전으로 설계 된 마우스 모델을 활용 하는 것을 권장 합니다. 그러나, 그들의 작은 크기로 인해 murine atria에 electrophysiological 속성을 평가 하기 어렵습니다. 이 프로토콜 electrophysiological atria Langendorff 끼얹는다 murine 마음에 높은 시간적, 공간적 해상도 광학 매핑 시스템을 사용 하 여 평가 설명 합니다. 광학 매핑 시스템 듀얼 고속 보완 금속 산화물 반도체 카메라와 고배율 렌즈, 전압에 민감한 염료 및 캘리포니아2 + 표시기의 형광을 검출 하기 위하여 조립 된다. Murine atria의 평가에 초점, 광학 매핑 2 m m × 2 m m 또는 10 m m x 10 m m, 100 × 100 해상도 (20 µ m/픽셀 또는 100 µ m/픽셀)와 10 khz (0.1 ms) 최대 샘플링 속도의 영역으로 수행 됩니다. 1 프랑스 크기 quadripolar 전극 카 테 터를 서 성 아 트리 움에 기계적 손상을 피하 뛰어난 베 나 정 맥을 통해 오른쪽 아 트리 움으로 배치 되 고는 카 테 테 르 통해 전달 자극 성. 일정 성 등 프로그램 자극 electrophysiological 연구 수행, 서 성, 그리고 트리플 extrastimuli 성 파열. 자연 또는 리듬 성, 광학 매핑 활동 전위 기간, 활성화 지도, 전도 속도, 및 캘리포니아2 + 과도 오른쪽과 왼쪽 atria에 개별적으로 기록. 또한, 프로그램 된 자극은 심 방 tachyarrhythmias의 inducibility를 결정합니다. 정확한 정품 인증 매핑 유도 atrial tachyarrhythmia 동안 안마당에서 여기의 전파를 식별 하기 위해 수행 됩니다. 특수 설정 광학 매핑 murine 병 적인 모델에서 안마당의 철저 한 electrophysiological 평가 수 있습니다.

광학 매핑 실험 그림 1a와 같이 장치를 사용 하 여 수행 됩니다. 광학 시스템의 스키마는 그림 1b에서 나와 있습니다. 시스템 막 잠재력 및 캘리포니아2 + 안마당에 과도의 고해상도 분석을 제공합니다.
그림 1 c 와 d와 같이, 고립 된 마음 온도 제어 챔버에 배치 됩니다. 1 프랑스 크기 전극 카 테 터 삽입 SVC, PE 튜브를 통해 RA에 배치 되 고 다른 내재 PE 관을 심장 챔버에 과도 한 압력을 피하기 위해 LV 꼭대기에서 LV 구멍에 삽입 됩니다. 동시 ECG 기록에 대 한 음극 (ECG 리드 [-]) cannulation 바늘에 연결 하 고 양극 (ECG 리드 [+]) 심 실 정점에 삽입 핀 전극에 연결 합니다. 이 어셈블리의 기능에 심 방에 기계적 손상을 방지 하는.
막 전압의 평가 대 한 형광 디-4-ANEPPS를 사용 하 여 최대 10000 프레임/s의 샘플링 속도 (그림 2)와 함께 기록 됩니다. 활성화 지도 라스에서 배달 일정 성 하는 동안 얻은 고급 매핑 작은 murine atria에 상세한 전도 패턴의 분석을 수 있습니다.
그림 3 에서는 막 전압 및 캘리포니아2 + 는 라스에서 일정 성 중 RH237 및 Rhod2AM를 사용 하 여 LA에 과도의 대표적인 흔적 우리는 매핑 현재 설정을 Rhod2AM 신호의 충분 한 신호/잡음 비율을 얻기 위해 1000 프레임/s의 샘플링 속도 줄일. 그러나, 시스템 활동 전위 및 캘리포니아2 + 과도 관계를 분석 하기 위한 충분 한 품질을 제공 합니다.
우리는 다음 병 적인 상태에서 마우스를 사용 하 여 프로그램 된 자극 atrial tachyarrhythmia의 유도 수행 합니다. 그림 4 는 유도의 광학 기록 전시 murine 중앙홀에 AT 디-4-ANEPPS로 얼룩진. 마우스는 압력 과부하에 적용할 안마당 10 일전 실험6가로 대동맥 수축 절차를 거칩니다. 우리는 트리플 extrastimuli (120/100/100/80), 서 성 여 AT를 유발 하 고 재진입 회로의 전파를 관찰.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56478/56478fig1.jpg"> 그림 1입니다. 광학 매핑 시스템. a. 전기 생리학/광학 매핑 시스템의 일반 어셈블리입니다. b. 회로도 광학 매핑 시스템의 구성: 파란색 화살표는 광원에 의해 생성 된 여기 빛 나타냅니다. 포대와 대물 렌즈를 교환할 수 있습니다. 얼룩진된 마음에서 내보낸된 빛 카메라 1 카메라 2 사이 분할 됩니다. 막 전압에 대 한 긴 파장 신호를 탐지 하는 카메라 1 고 카메라 2 Ca2 + 과도 대 한 대역 통과 필터 580 ± 20 nm의 파장을 기록 한다. 절차 동안, ECG 및 관류 압력은 지속적으로 기록 하 고 ECG 신호는 또한 동시에 레코딩 소프트웨어 광학 지도에 가져올. c. 준비의 고립 된 마음: 마음은 관류에 대 한 오름차순 대동맥을 통해 무딘 바늘 cannulated. 동시 심전도 기록에 대 한 음극 cannulation 바늘에 연결 하 고 핀 전극으로 양극 심 실 정점에 삽입 됩니다. d. Cannulation 튜브와 전극: 심장 관류 (cannulation 바늘)에 대 한 21-게이지 무딘 바늘 cannulated. 전극 (전극)을 자극 하는 1-프랑스 크기 뛰어난 베 나 정 맥에 삽입 하는 폴 리 에틸렌 튜브를 통해 오른쪽 아 트리 움에 배치 됩니다. 유리 챔버는 챔버의 캐비티에 순환 온수 물으로 37 ˚C에 예 열. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56478/56478fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56478/56478fig2.jpg"> 그림 2입니다. 안마당에서 활성화 지도. 5 X 렌즈, 및 b. 앞쪽 보기 a. 대표적인 활성화 지도 1.6 X 객관적 렌즈 후부 보기에서 (왼쪽 패널) 격리 된 마음과 아 트리 움의 회로도 (오른쪽 패널) 활성화 지도 왼쪽된 아 트리 움의 디-4-ANEPPS 10000 프레임/s에서 얼룩을 얻을. 녹음은 오른쪽 아 트리 움에 배치 하는 자극 전극과 일정 속도에서 수행 됩니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56478/56478fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56478/56478fig3.jpg"> 그림 3입니다. 활동 전위 및 좌 심에서 Ca2 + 과도 듀얼 녹화. a. 격리 된 심장의 도식. b. Ca2 + 과도 막 전압 (Vm) 및 Rhod2AM RH237를 사용 하 여 왼쪽된 안마당에서 형광의 강도의 대표 이미지. 녹음 1000 프레임/s. c. 에서 5 배 목표 렌즈를 사용 하 여 수행 오른쪽 아 트리 움의 자극 전극으로 서 일정 기간 동안 ECG (맨 위), RH237 신호 (중간), 그리고 Rhod2AM 신호 (아래)의 동시 녹음. 검정색 화살표는 자극 스파이크, 그리고 노란색 화살표 심 실 흥분을 나타냅니다. 심 실에서 산란 효과 또한 볼 수 있습니다 (노란색 화살표) 모두 RH237 신호와 Rhod2AM 신호에. d. 는 병합 된 RH237 및 Rhod2AM 추적입니다. 활동 전위 및 과도 Ca2 + 변화 동시에 기록 됩니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56478/56478fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56478/56478fig4.jpg"> 그림 4입니다. 심 방 심 박 급진 동안 정품 인증 매핑. (왼쪽 패널) 격리 된 심장의 회로도 (중간 패널) 동안에 심 방 심 박 급진 (AT) 지도 활성화. AT는 오른쪽 아 트리 움에서 배달 트리플 extrastimuli 서 성에 의해 유발 되었다. (오른쪽 패널) 부 비 동 리듬 같은 마우스 마음에 동안 활성화 지도. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56478/56478fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
보충 영화 1. 디-4-ANEPPS로 얼룩을 사용 하 여 안마당에 잠재적인 막의 대표적인 영화. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56478/Supplementary_movie_1.zip">이 파일을 다운로드 하려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
보충 영화 2. 심 방 심 박 급진 및 부 비 동 리듬 동안 정품 인증 매핑의 대표적인 영화. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56478/Supplementary_movie_2.zip">이 파일을 다운로드 하려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

이 프로토콜 설명 electrophysiological murine atria는 높은 시간적, 공간적 해상도, 막 전압의 듀얼 녹음을 포함 한 광학 매핑 시스템을 활용 하 여 평가 하 고 캘리포니아2 + 에서 과도 프로그램 특수 전극 카 테 터를 통해 자극입니다.

고해상도 광학 매핑 Murine Atria electrophysiological 평가

Recent genome-wide association studies targeting atrial fibrillation (AF) have indicated a strong association between the genotype and ...

이 실험의 전반적인 목표는 전기 자극에 의해 유도된 정상적인 부비동 리듬 및 심방 부정맥 동안 높은 시간적, 공간적 해상도로 쥐 심방에 대한 상세한 평가를 달성하는 것입니다. 이 방법은 유전적 돌연변이가 심방 부정맥에 어떻게 기여하는지와 같은 심장 전기생리학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 심방 부정맥의 시작 및 유지 메커니즘에 초점을 맞춰 심방에서 정확한 광학 매핑을 얻을 수 있다는 것입니다.관류 회로의 조립을 포함하여 설정된 Langendorff 장치에 대한 자세한 내용은 텍스트 프로토콜에 제공됩니다. 이미징 매개변수도 텍스트에 제공됩니다. 캐뉼레이션을 위해 마우스를 준비하려면 헤파린으로 처리하고 텍스트에 설명 된대로 마취하십시오.진행하기 전에 반사 검사로 마취를 확인하십시오. 계속하려면 마우스를 작동 보드의 누운 위치에 고정하십시오. 그런 다음 가위를 사용하여 xiphoid 프로세스 수준 아래의 복벽을 엽니다.다음으로 횡격막을 가로 절개하고 심장을 손상시키지 않고 내측 겨드랑이 라인의 갈비뼈 양쪽을 절단합니다. 그런 다음 인접한 혈관 및 조직과 함께 심장을 빠르게 절제합니다. 다음으로, 얼음처럼 차가운 PBS 10ml로 심장을 씻고 주변 조직을 제거합니다.그런 다음 상행 대동맥으로 관류 회로에 연결된 21 게이지 무딘 바늘의 끝을 삽입합니다. 입체경 아래에서 봉합사로 제자리에 고정하십시오. 이제 순수한 산소로 폭기된 Tyrode의 용액을 10분 동안 심장에 주입합니다.관류하는 동안 관류 압력을 지속적으로 모니터링하십시오. 80에서 100mm 사이의 수은을 유지하십시오. 관류하는 동안 얇은 폴리에틸렌 튜브를 상대정맥에 삽입하고 봉합사를 사용하여 제자리에 고정합니다.그런 다음 따뜻한 유리 챔버에 심장을 넣습니다. 챔버에 들어가면 심실 정점을 통과하여 24게이지 주거 바늘로 좌심실 구멍을 뚫어 심방 손상을 방지합니다. 그런 다음 내부 바늘을 제거하고 좌심실에 외부 캐뉼라를 남깁니다.다음으로, 우심방을 자극하기 위해 상대정맥의 튜브를 통해 1-프렌치 맞춤형 사극 전극 카테터를 삽입합니다. 이제 심실 정점에 핀 전극을 삽입하여 핀 전극과 캐럴 바늘 사이의 양극성 심전도를 지속적으로 기록합니다. 전체 연구에서 심전도와 관류 압력을 지속적으로 모니터링합니다.멤브레인 전압의 단일 기록을 위해 염색하려면 먼저 주변 조명을 최소화하십시오. 관류 용액 온도는 섭씨 37도로 유지되어야 합니다. 관류 경로를 통해 2-5분에 걸쳐 10ml의 얼룩을 전달합니다.다음으로, 티로드의 용액을 5분 동안 관류하여 얼룩을 제거합니다. 관류 압력을 80mm에서 100mm 사이의 수은 사이로 유지하십시오. 다음으로, 관류 경로를 통해 희석된 블레비스타틴 1ml를 투여합니다.심장 수축 제거를 확인합니다. 또한 심장이 균일하게 얼룩을 흡수했는지 확인하십시오. 계속하기 전에 페이싱 전극과 자극기를 설정하고 페이싱 임계값을 찾으십시오.계속 진행하려면 관류된 심장에 커버 유리를 조심스럽게 씌워 심방 표면을 평평하게 하고 용액의 진동으로 인한 모션 아티팩트를 방지합니다. 아트리움이 커버 유리에 적절하게 부착되었는지 확인합니다. 이제 다양한 페이싱 연대를 평가할 수 있습니다.일정 또는 버스트 페이싱의 경우 150밀리초 또는 고유한 리듬을 능가하지 않는 가장 긴 간격에서 시작하는 페이싱 간격으로 99비트를 제공합니다. 그런 다음 페이싱 간격을 5밀리초 단계씩 점진적으로 줄여 40밀리초까지 또는 간격이 심방을 자극하지 못할 때까지 줄입니다. 단일 추가 자극 페이싱의 경우 기본 드라이브의 페이싱 주기 길이를 설정하거나 120, 100 및 80밀리초와 같이 최소 3개의 S1에서 S1 간격을 테스트해야 하는 S1.At 설정합니다.다음으로, 기본 사이클 길이에 대해 첫 번째 추가 자극 또는 S2를 음의 10밀리초로 설정하고 기본 드라이브의 마지막 페이싱 자극 후에 S2를 전달합니다. 점차적으로 S2가 심방의 탈분극에 실패할 때까지 S2의 결합 간격을 5밀리초 단계씩 점진적으로 줄입니다. 유효 불응 기간을 심방을 탈분극에 실패하는 가장 긴 S2 간격으로 결정합니다.환자 역치 또는 유효 불응기를 결정할 때 심전도에서 페이싱을 관찰하여 심방 캡처를 확인하기 어려운 경우가 있습니다. 이러한 경우 광학 매핑을 사용하여 확인해야 합니다. 계속 진행하려면 텍스트 프로토콜에 따라 심방 빈맥을 유도하기 위해 이중 및 삼중 추가 자극 페이싱을 적용합니다.Langendorff 심장의 막 전압은 초당 10, 000 프레임으로 di-4-ANEPPs의 형광 신호를 모니터링하여 기록되었습니다. 우심방에서 전달되는 일정한 페이싱에 의해 활성화 맵을 얻었고 작은 쥐 심방의 상세한 전도 패턴을 분석할 수 있었습니다. RH237 및 Rhod2AM은 동일한 일정한 페이싱 프로토콜 동안 좌심방의 칼슘 과도 현상을 모니터링하는 데 사용되었습니다.초당 1, 000 프레임으로 샘플링하는 것은 칼슘 과도현상의 활동 전위를 비교할 수 있을 만큼 충분히 빨랐습니다. 다음으로, 횡방향 대동맥 수축 시술 후 10일 후에 마우스에서 채취한 심장에서 심방 빈맥맥을 생성하여 심방에 압력 과부하를 가했습니다. 빈맥을 생성하기 위해 120에서 80밀리초까지 3중 추가 자극 페이싱이 사용되었으며 빈맥의 전파가 재진입 회로를 통과하는 것이 관찰되었습니다.이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 3시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 심방의 전기생리학적 특성을 변경할 수 있는 손상이나 스트레스가 없도록 심방을 유지하는 것이 중요합니다.

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연구

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Medicine

의학

이 문서 potentiometric 염료 (DI - 8 - ANEPPS)를 사용 Langendorff - perfused 쥐 심장의 표면에 광학 이미지 조치 가능성이 운동에 높은 시간적 및 공간적 해상도 기법을 설명합니다.

Langendorff - perfused 랫 하트의 광학 매핑

이 보고서는 방법론과 스트레치 유발 심방 세동 동안 Langendorff - perfused 양의 마음을 그대로 좌심방의 전기적 자극을 동시에 endocardial와 epicardial 광학 매핑의 결과에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

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이 문서는 파노라마 영상 시스템을 사용 Langendorff - perfused 토끼 마음에 광학 매핑 실험을 실시하기위한 기본 절차 및 듀얼 (전압과 칼슘) 이미징 양상을 설명합니다.

Langendorff - perfused 토끼 하트의 Multiparametric 광 매핑

그대로 고립 Langendorff에 transmembrane 잠재력 (VM)과 일시적인 세포 내 칼슘 (CAT)의 광학 매핑하는 동안이 종이 자세히 해부 절차를, 수단 설치, 그리고 실험 조건 마우스 마음을 perfused.

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여기에, 우리는 높은 공간 및 시간 해상도, 마우스 우심방 특히 중국 - 심방 노드에서 전기 활동의 광학 매핑을위한 프로토콜을 제시한다.

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ElectroMap을 사용한 광학 매핑 데이터의 높은 처리량 분석

우리는 뮤린 근세포를 분리하는 방법론과 동시 디지털 세포 기하학 측정을 통해 형광 광도계를 사용하여 sarcomere 단축 추적과 동시에 전압 또는 칼슘 흔적을 얻는 방법을 제시합니다.

고립 된 뮤린 심실 근세포의 광학 이미징

이 프로토콜은 전임상 약물 검사를 위해 인간의 심장 조각을 단면화 및 배양하는 절차를 설명하고 이러한 조각에서 동시에 세포간 전압 및 세포내 칼슘 신호를 기록하기 위한 광학 매핑의 사용을 자세히 설명합니다.

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이 프로토콜은 높은 시간 및 공간 분해능으로 막관통 전압 및 세포 내 Ca2+ 과도 현상의 전기 생리학적 측정을 포함하여 카테콜아민성 다형성 심실 빈맥의 영향을 받는 야생형 및 녹인 동물에서 얻은 마우스 심장의 이중 염료 광학 매핑을 소개합니다.

Catecholaminergic Polymorphic Ventricular Tachycardia의 RyR2R2474S Knock-In 마우스의 심장에 대한 이중 염료 광학 매핑

고주파 도플러 초음파는 지역 심근 기능을 평가하기위한 새로운 기술입니다. 이 작품은 심근 스트레인, 국소 빈혈 - reperfused (IR) murine 마음에 DP / DT 및 승모판 병리 현상의 반복 측정이 다양한 이미징 플랫폼의 응용을 보여주는 첫번째 증거를 제공합니다.

고주파 고해상도 Echocardiography : 국소 빈혈 - reperfused Murine 중심부에 심근 스트레인, 수축성 및 승모판 병리 현상의 비침습 반복 측정에 대한 최초의 증거

배우세요 고해상도 광학 매핑을 이용한 쥐 심방 전기생리학 평가 방법을. Langendorff 관류 장치와 광학 매핑 시스템으로 막 전압 및 칼슘 역학을 정밀 측정하여 심방 부정맥의 발생 및 유지 기전을 연구할 수 있습니다.

고해상도 광학 매핑 Murine Atria electrophysiological 평가

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