<em>In Vitro</em> SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

Wan-Shan Yang; Mel Campbell; Hsing-Jien Kung; Pei-Ching Chang

doi:10.3791/56629

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Biology

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In Vitro SUMOylation Assay to Study SUMO E3 Ligase Activity

생체 외에서 스모 E3 리가 활동 공부 SUMOylation 분석 결과

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09:45 min

January 29, 2018

DOI: 10.3791/56629-v

Wan-Shan Yang¹, Mel Campbell², Hsing-Jien Kung^2,3,4,5, Pei-Ching Chang^1,6

¹Institute of Microbiology and Immunology,National Yang-Ming University, ²UC Davis Cancer Center,University of California, Davis, ³Department of Biochemistry and Molecular Medicine,University of California, Davis, ⁴Institute for Translational Medicine, College of Medical Science and Technology,Taipei Medical University, ⁵Division of Molecular and Genomic Medicine,National Health Research Institutes, ⁶Center for Infectious Disease and Cancer Research,Kaohsiung Medical University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

유비퀴틴 ligases와 달리 몇 E3 스모 ligases가 확인 되었습니다. 이 수정 된 생체 외에서 SUMOylation 프로토콜 생체 외에서 재구성 분석 결과 의해 소설 스모 E3 ligases를 확인 할 수 있다.

이 실험의 전반적인 목표는 SUMOylated가 가능하거나 SUMO E3 lygase인 관심 단백질을 검증하는 것입니다. 이 방법은 SUMO E3 리가제 식별과 같은 SUMOylation 필드의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 다양한 SUMO iso 형태에 대한 SUMO E3 리가제 특이성을 조사하는 데 활용할 수 있다는 것입니다.

이 절차를 시연하는 사람은 제 연구실의 박사 과정 학생인 Wan-Shan Young입니다. 태그 K-bZIP을 정제하려면 먼저 14ml 폴리프로필렌 튜브에서 10ml의 세포 용해물을 50마이크로리터의 항체 태그 마그네틱 비드와 함께 배양합니다. 그런 다음 서스펜션 믹서에서 3시간 동안 섭씨 4도에서 분당 50회전으로 튜브를 회전합니다.

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