Name: 환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: 배우세요 환자 유래 연조직 육종의 1차 배양을 수립하는 방법을 통해 종양 병태생리학과 치료 반응을 연구하세요. 이 인간 전임상 모델은 약물 효능 평가와 암세포 상호작용 분석에 활용됩니다.

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저자 편집에 Gráinne Tierney를 감사 하 고 싶습니다.

STS 세포 대량 수술 환자 STS에서에서 excised 종양 으로부터 격리 됩니다. 프로토콜 로컬 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 하 고 좋은 임상 연습 가이드라인과 헬싱키 선언에 따라 수행 됩니다. 모든 환자는 연구에 참여 하는 것 서 면된 동의 했다. 수술 표본 경험된 육 병리학 자에 의해 분석 하 고 수술의 3 시간 이내에 처리 됩니다.
1. 종양 표본 수집 및 처리:
<ol><li>DMEM 낮은 포도 당 매체 파라핀 필름으로 밀봉의 50 mL를 100 mL 무 균 소변 용기에 육 병리학의 도움으로 종양 표본을 수집 합니다.</li>
	<li>종양 절제 후 3 h의 최대 4 ° C에서 샘플을 저장 합니다.</li>
	<li>메 마른 조직 문화 후드 아래 모든 다음 단계를 수행 합니다.<ol>
<li>70% 에탄올과 후드를 소독 하 고 멸 균 장갑을 착용.</li>
		<li>70% 에탄올 (사용 멸 균 거 즈)와 철강 inox 족집게를 소독.</li>
		<li>파라핀 영화 소변 컨테이너에서 제거 하 고 삭제.</li>
		<li>70% 에탄올과 소변 컨테이너의 외부 세척.</li>
		<li>광장 페 트리 접시를 엽니다.</li>
		<li>소변 컨테이너를 열고 멸 균된 강철 inox 핀셋을 사용 하 여 사각형 페 트리 접시에 종양 견본을 전송 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PBS와 종양 표본 두 번 씻는 다.</li>
	<li>무 균 수술 메스를 엽니다.<ol>
<li>1-2 m m3 조각으로 종양 표본을 잘게 잘게.</li>
		<li>2 mL 튜브에 총 샘플의 1/4을 수집 합니다.</li>
		<li>Trizol 시 약 (구입) 튜브의 1 mL을 추가 하 고 즉시-80 ° C (샘플에에서 사용 됩니다 다운스트림 분석 STS 유전자 식 계산에 대 한)에서 동결.</li>
	</ol>
</li>
	<li>15 mL 튜브에 가늘게 파쇄 된 종양 재료의 나머지를 수집 합니다.<ol>
<li>콜라의 4 개 mL를 추가 유형 I 솔루션 (콜라 유형 내가 4 µ g/mL의 농도에서 PBS에 용 해).</li>
		<li>희석 된 콜라 DMEM 높은 문화 미디어의 4 mL와 함께 솔루션 타입 (최종 농도 콜라 종류의 나는 2 µ g/mL).</li>
		<li>15 mL 튜브 닫고 파라핀 영화와 함께 인감.</li>
		<li>소화를 활성화 하기 위해 15 분 교 반 조건에서 37 ° c 배양 기에서 압 연 통에 15 mL 튜브를 넣어.</li>
		<li>15 분 후 하룻밤 실 온에서 교 반 조건 아래 압 통에 튜브를 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>다음 날 살 균 후드 15 mL 튜브를 넣어.</li>
	<li>부드럽게 50 mL 튜브의 상단에 연결 된 100 µ m 살 균 필터를 통해 세포 현 탁 액을 필터링 합니다.</li>
	<li>10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 및 1% 페니실린/스 보충 DMEM 높은 문화 미디어 필터를 세척.</li>
	<li>100 µ m 살 균 필터, 실 온에서 5 분 동안 50 mL 튜브 및 225 x g에서 원심 분리기를 닫습니다.</li>
	<li>튜브를 거꾸로 하 여는 상쾌한을 삭제 합니다.</li>
	<li>다시 1-2 mL DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 및 1% 페니실린/스 보충 셀을 일시 중단 합니다. 참고: 볼륨 처리 종양 샘플의 크기에 따라 달라 집니다.</li>
	<li>Neubauer 챔버와 셀을 계산 합니다.<ol>
<li>Trypan 파랑의 1:2 샘플을 희석 하 고 희석의 10 µ L를 사용 하 여 셀의 개수.</li>
		<li>두 번 이상 계산 하 고 셀 수집된의 평균 총 알아야 복제의 평균을 계산.</li>
	</ol>
</li>
	<li>80000 셀/c m2의 조밀도에 표준 단층 문화에 플레이트 세포. 참고: 항상 실험에 컨트롤을 포함 합니다. 각 조건에 대해 3 기술 복제를 수행 합니다. 2 생물 복제를 수행 합니다. 전 임상 약리학, 유전자 발현 및 단백질 표정 분석, 실험 한다 실시 문화 통로의 낮은 수와 함께 셀 손실 암 세포 고기를 뿌리기의 30-45 일 이내.</li>
	<li>Cytological 샘플 준비입니다.<ol>
<li>DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 1% 페니실린/스와 보충의 200 µ L에 100000 세포를 수집 합니다.</li>
		<li>피펫은 일회용 깔때기로 솔루션 (200 µ L 피 펫) 필터를 장착 하 고 유리 슬라이드와 함께 탑재.</li>
		<li>cytocentrifuge를 열고 예제를 삽입 합니다.</li>
		<li>18.6 x g 20 분에 cytocentrifuge를 실행 합니다.</li>
		<li>필터를 장착 하는 깔때기를 삭제 합니다.</li>
		<li>10 분 뒤에 5 분에 대 한 클로 프롬 아세톤에 슬라이드를 수정.</li>
		<li>-20 ° c.에 슬라이드 저장 참고: 해 동 하 고 얼룩이 지기 전에 샘플 화 얼룩 제조업체의 지침에 따라 수행. 3 기술 복제를 준비 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. STS 세포 배양:
<ol><li>일주일에 한 번 (DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민과 1% 페니실린/스 보충) 미디어를 변경 합니다.<ol>
<li>200-1000 µ L 피 펫을 사용 하 여 문화 매체를 버리십시오.</li>
		<li>200-1000 µ L 피 펫을 사용 하 여 새로운 신선한 매체를 추가 합니다.</li>
		<li>셀 통로:<ol>
<li>합류는 약 90% 세포 분리: 참고: STS 셀 문화 증폭 문화 조건에 따라 일주일에 한 번 수행 되어야 한다.</li>
			<li>폐기 매체, PBS로 세척 및 트립 신 1의 2-3 mL를 추가 PBS에 x 참고: 트립 신 사용의 볼륨 얻은 배양된 세포의 크기에 따라 달라 집니다.</li>
			<li>37 ° c.에 3-5 분에 대 한 셀을 품 어</li>
			<li>200-1000 µ L 피 펫을 사용 하 여 접시에서 분리 된 세포를 수집 합니다.</li>
			<li>15 mL 튜브로 분리 된 세포를 플라스틱 고 DMEM 높은 문화 미디어 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 효소 반응을 중지 하 1% 페니실린/스와 보충의 4 mL를 추가 합니다.</li>
			<li>실 온에서 5 분에 대 한 225 x g에서 원심.</li>
			<li>폐기는 상쾌한.</li>
			<li>다시 10% 태아 둔감 한 혈 청, 1% 글루타민, 및 1% 페니실린/스 보충 DMEM 높은 문화 미디어의 1 mL을 추가 하 여 셀 펠 릿을 일시 중단 합니다.</li>
			<li>새로운 문화 접시 또는 제조업체의 지침에 따라 최종 볼륨을 플라스 크에 세포 씨앗 참고: 1:3 보다는 더 많은 세포를 분할 하지 않습니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 다운스트림 분석:
참고: 다른 실험의 다양 한 밖으로이 모델 (아래 참조)를 사용 하 여 수행할 수 있습니다. 그것은, 그러므로, 연구의 설계 단계는 분석 샘플 및 복제의 충분 한 숫자를 준비할 수 있도록 수행 됩니다 결정 하는 중요 한.
<ol><li>MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium 브 로마 이드 등 확산 분석 실험</li>
	<li>Apoptotic 분석 터미널 deoxynucleotidyl 전이 효소 (TdT) 같은 닉 끝 라벨 (TUNEL) 분석 결과</li>
	<li>Immunohistochemical 분석</li>
	<li>유전자 표정 분석</li>
	<li>서쪽 오 점 분석</li>
	<li>ELISA 분석 결과</li>
	<li>형광 활성화 된 세포 분류 (FACS) 분석</li>
	<li>
이 종이 식 모델 vivo에서</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 관심의 없습니다 충돌 있다.

잘 정의 된 전 임상 모델 종양의 분자 배경 명료, 가난한 예 후를 예측 하 고 암 환자에 대 한 새로운 치료 전략을 개발 필요 합니다. 이것은 특히 STS 등 희귀 한 종양에 대 한 중요 한 형태에서 그 높은, 공격적인 잠재적인, 및 임상 행동 STS 생물학 및 환자 관리21의 우리의 이해에 도전. 또한, 사용할 수 있는 몇 가지 상업 육 종 셀 라인 엽 종양18의이 그룹에 대 한 전 임상 조사를 제한 합니다. Ex vivo 모델 따라서 STS에 대 한 귀중 한 연구 리소스를 나타냅니다. 우리는 모델을 완벽 하 게 인간의 체 외에 수술로 절제 종양 조직 (그림 3)에서 시작 하는 STS의 개발. 방법의 최적화 하는 동안 몇 가지 중요 한 문제는 해결 되었고 해결. 첫 번째 문제 우려 수술 치료 및 샘플 처리 사이 시간 간격. 처음에, 종양 표본을 특정 시간 후에 우리의 생물 과학 ...

모든 고체 종양1,2, 1%에 대 한 간 엽 기원 회계의 이질적인 장애의 스펙트럼을 포함 하는 부드러운 조직 sarcomas (STS) 그리고 이상의 50의 존재를 인식 하는 새로운 세계 보건 기구 분류 다른 하위3. 이 중, 가장 일반적인 histotypes 있으며 체형 육 종 또는 liposarcoma leiomyosarcoma, 15%와 모든 성인 STS, 각각4,5의 11%를 차지. STS는 신체의 다른 부분에서 개발할 수 있습니다, 비록 사지 그리고 retroperitoneum 60%와 20%의 경우, 각각6에서 발생 하는 가장 일반적인 사이트는.
지역화 된 질병에 대 한 치료의 초석은 넓은 외과 절제술, 보조 및 neoadjuvant 요법의 혜택은 아직 명확 하지 않다 고7선택 된 경우만 간주 됩니다. 전이성 설정에서 화학 요법 치료의 표준 이지만 제한 된 결과8를 보여줍니다. STS의 분자 생물학의 더 나은 이해는 현재 차별 진단 개선, 사용 가능한 치료를 최적화 하 고 치료를 위한 새로운 표적 식별에 도움이 될.
이 컨텍스트 내에서 불멸 하 게 셀 라인9를 사용 하 여 몇 년 동안 암에 대 한 연구를 수행 하고있다. 이러한 실험 모델 일반적으로 표준 단층 지원에 배양 또는 vivo에서 이 종이 식10모델 확립 immunodeficient 설치류에 이식. 불멸 하 게 셀 라인 관리 및 매장이 쉬운 자료를는 연구 실험의 충분 한 번호를 수행할 수 있습니다 나타냅니다. 그들은, 실제로, 가장 저렴 하 고 가장 널리 전 임상 연구11에 도구를 사용.
그러나, 셀 라인 기반 암 모델도 몇 가지 제한이, 구절의 증가 함께 단층 시스템에서 예: 연장 문화 유도 phenotypic 및 유전적 부동, 만들기에 정리 주요 종양을 적은 셀 기능입니다. 또한, 셀 라인 문화 셀 상호 작용 및 신호 분자 크로스 토크는 종양의 생물 학적 행동을 모방 하 고 종양 microenvironment 특성화를 재현 하지. 이러한 문제는 전 임상 및 임상 결과12사이 기존 하는 격차의 기초를 형성 합니다.
위의 감안할 때, 환자 파생 주 문화에 관심13을증가 했다. 실제로, 악성과 정상적인 직물의 절단 암 세포 표현 형 및 따라서 종양 microenvironment의 대표는 시작 물자를 제공 하 고이 잃기의 위험을 줄여줍니다. 또한, 외과 절제술을 받은 환자에서 수확 한 신선한 종양 견본의 사용 단일 종양을 조사 하 고 다른 병 변 환자의 몸14의 동일한 부분에서 비교 하 있습니다. 위의 이유로 조직 파생 셀 문화 종양 이상과 약리학15,16,17, 특히 어떤 상용 육 종 세포 라인에 STS를 연구 하는 귀중 한 자료를 제공 제한 된18있습니다. 우리는 따라서 환자 파생 STS 1 차 셀 문화 수술 삭제 종양 조직13,,1920에서 시작을 설정 하는 방법을 최적화 합니다. 우리의 방법 뒤에 단일 세포 현 탁 액을 얻기 위해 하룻밤 효소 조직 분리 하는 작은 조직 조각으로 종양 견본 disaggregating 이루어져 있다. 다음 날, 효소 소화 신선한 문화 미디어를 추가 하 여 중지 되 고 얻은 서 스 펜 션 조직 파편, 셀 집계 및 초과 매트릭스 또는 파편을 제거 하도록 필터링 됩니다. 마지막으로, 격리 된 종양 세포의 일부분은 유리 슬라이드, 고정 및 cytomorphological, immunohistochemical 및 분자 cytogenetic 평가 STS 주 문화 설립을 확인 하기 위한 다운스트림 분석에 대 한 저장에 cytospinned (MDM2 증폭의예: 물고기 분석이 나타냅니다 잘 차별화 liposarcoma 및 dedifferentiated liposarcoma 표준 차별 진단을) 4. 나머지는 유전자 식 프로 파일링 및 약리 연구에 대 한 표준 단층 문화로 시드. 실험 낮은 사용 하 여 수행 됩니다 모든 구절을 피하기 위해 특정 암 subclones의 선택 주 문화 그리고 경험된 육 병리학 자에 의해 분석. 우리는 완전히 인간 STS ex vivo 모델13,19,20를 따라서 만들었습니다. 이 높게 다재 다능 한, 쉽게 핸들 모델의 전 임상 연구, 예를 들어 진단 및 예 후에 대 한 새로운 분자 마커를 식별 하거나 활동의 깊은 이해 및 메커니즘의 종류에 대 한 유용한 도구를 나타낼 수 STS의 관리에 사용 되는 표준 및 새로운 약물의 액션.

<table><tbody><tr><td>DMEM 고포도</td>당 <td>EuroClone</td><td>ECB7501L</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>EuroClone</td><td>ECS0180D</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 4% 수용액, EM 등급</td><td>전자 현미경 과학</td><td>157-4-100</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Triazol 시약</td><td>Ambion Life-Technologies</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>EuroClone</td><td>ECB3052D</td><td></td></tr></tbody></table>

환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

연 조직 sarcomas (STS) 어려운 진단, 분류 및 관리와 함께 다른 유형의 악성의 스펙트럼을 나타냅니다. 날짜 하려면,이 드문 단단한 종양의 50 이상 조직학 하위 확인 되었습니다. 따라서, 그들의 특별 한 다양성 및 낮은 발병 률,이 종양의 생물학의 우리의 이해 여전히 제한 됩니다. 환자 파생 문화 STS 이상과 약리학 연구에 이상적인 플랫폼을 나타냅니다. 우리는 따라서 종양 표본을 외과 절제술을 받은 환자에서가 걷이에서 시작 하는 STS의는 인간의 전 임상 모델을 개발 했다. STS 세포 배양 환자 파생 콜라 소화에 의해 수술 표본에서 얻은 고 여과 의해 분리. 셀 계산, 시드, 그리고 표준 단층 문화에서 14 일에 대 한 되었고 다운스트림 분석 처리. 분자 또는 제약 분석을 수행 하기 전에 STS 주 문화의 설립 cytomorphologic 기능, 그리고 가능한 경우, 평가 통해 확인 되었다 immunohistochemical 마커. 이 메서드는 1)이 제대로 탐험된 악성의 자연의 역사를 공부 하 고 2) 그들의 행동의 메커니즘에 대 한 자세한 노력에 다른 약물의 효과 테스트 하는 유용한 도구를 나타냅니다.

우리 설계 환자 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립 여기 한 특정 STS histotype13에서 얻은 결과의 예를 보고 하는 간단한 방법. 프로토콜, 잘 분화 liposarcoma를 포함 하 여 다른 STS histotypes의 기본 문화의 설립을 위해 사용 되었다 liposarcoma, myxoid liposarcoma, pleomorphic liposarcoma, myxofibrosarcoma, undifferentiated dedifferentiated pleomorphic 육 종, 요점, 및 desmoid fibromatosis입니다.
주 문화의 설립에 대 한 성공률 수술 표본 환자 화학 요법, 방사선 요법으로 치료 또는 치료 하지에서 파생 된에 대 한 54% (24 STS 외과 샘플에서 13 주 문화)를...

다음 프로토콜 환자 파생 된 연 조직 육 종 (STS)의 주 문화는의 설립에 집중 한다. 이 모델 분자 배경 및 약리 프로필 이러한 드문 악성 종양의 더 나은 이해를 우리를 도울 수 및 STS 관리를 개선 하기 위한 추가 연구에 대 한 출발점을 대표할 수 있었다.

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

외과적으로 절제된 종양 조직에서 파생된 이 인간 전임상 모델의 전반적인 목표는 환자 유래 연조직 육종의 1차 배양을 확립하는 것입니다. 이 방법은 연조직 육종의 병태생리학에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며 치료에 대한 반응을 예측하기 위한 중요한 전임상 도구입니다. 이 기술의 주요 장점은 완전한 인간 전임상 모델이라는 것입니다.이 기술의 의미는 연조직 육종 치료로 확장되는데, 그 이유는 이 전임상 모델을 기존의 혁신적인 약물로 테스트하여 활성과 작용 메커니즘을 조사할 수 있기 때문입니다. 이 방법은 연조직 육종에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 암세포 연조직 세포 상호 작용 연구에도 적용할 수 있습니다. 이 방법을 처음 접하는 개인은 종양 조직의 이질성과 종양 세포를 분리하는 데 어려움을 겪을 것입니다.이 방법의 시각적 시연은 초기 연조직 육종 세포 선택 및 CD 단계에서 숙련도를 달성하기 전에 많은 경험이 필요하기 때문에 매우 중요합니다. 종양 표본은 파라핀 필름으로 밀봉된 50ml의 DMEM 저혈당 배지가 있는 100ml 멸균 소변 용기에 넣어야 합니다. 샘플은 종양 절제 후 최대 3시간 동안 섭씨 4도에서 보관할 수 있습니다.조직 배양 후드를 70% 에탄올로 살균하고 강철 INOX 핀셋을 70% 에탄올로 살균합니다. 소변 용기에서 파라핀 필름을 제거하고 버립니다. 소변 용기 외부를 70% 에탄올로 청소합니다.사각형 페트리 접시를 연 다음 소변 용기를 열고 멸균된 강철 INOX 핀셋을 사용하여 종양 표본을 접시에 옮깁니다. PBS를 추가하고 종양 표본을 두 번 세척합니다. 세척 후 종양 표본을 1-2mm 크기의 조각으로 잘게 썰어줍니다.전체 샘플의 1/4을 2mm 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 TRIzol 시약 1ml를 튜브에 넣고 즉시 섭씨 영하 80도에서 동결합니다. 미세하게 파쇄된 나머지 종양 물질을 15ml 튜브에 모으고 4ml의 콜라겐분해효소 유형 1 용액을 추가합니다.그런 다음 콜라겐 분해 효소 유형 1 용액을 4 밀리리터의 배양 배지로 희석하고 튜브를 닫은 다음 파라핀 필름으로 밀봉합니다. 섭씨 37도에서 롤링 셰이커에서 15분 동안 배양하여 소화를 활성화합니다. 15분 후 롤링 셰이커가 있는 튜브를 실온에 놓고 밤새 그대로 둡니다.다음 날, 100미크론 멸균 필터를 통해 세포 현탁액을 50ml 튜브에 부드럽게 여과합니다. 그런 다음 필터를 배양 배지로 세척하고 실온에서 5분 동안 225배 g의 여과액을 원심분리합니다. 튜브를 뒤집어 상층액을 버리고 1-2ml의 배양 배지로 세포를 재현탁합니다.세포 수를 수행하고 세포 수를 계산한 후 표준 단층 배양에서 평방 센티미터당 80, 000 세포의 밀도로 세포를 플레이트화합니다. cytological 견본을 준비하기 위하여는, 100 의 배양 매체의 200 마이크로리터에 있는 000의 세포를 모으는 것에서 시작한다. 필터가 장착되고 유리 슬라이드가 장착된 일회용 깔때기에 용액을 피펫팅합니다.세포원심분리기를 열고 샘플을 삽입합니다. 세포 원심분리 후 필터가 장착된 깔때기를 폐기합니다. 그런 다음 슬라이드를 아세톤으로 10분 동안 고정한 다음 클로로포름을 5분 동안 고정합니다.합류점이 약 90%일 때 STS 세포를 통과시킵니다.PBS로 세포 시트를 세척한 후 PBS에 1X 트립신 2-3ml를 첨가하고 섭씨 37도에서 3-5분 동안 배양합니다. 배양 후 200-1, 000 마이크로 리터 피펫을 사용하여 분리 된 세포를 수집하고 15 밀리리터 튜브로 옮깁니다. 효소 반응을 멈추기 위해 배지 4ml를 첨가합니다.그런 다음 실온에서 5분 동안 225회 g으로 원심분리합니다. 상등액을 버린 후, 1ml의 배지를 첨가하여 세포 펠릿을 재현탁시키고 세포를 새로운 배양 플레이트 또는 플라스크에 시딩합니다. 종양 세포는 54세 환자로부터 외과적으로 제거된 지방육종에서 분리되었습니다.환자 조직 표본에서 MDM2 증폭을 검출하기 위해 형광 현장 혼성화를 수행했습니다. 분리된 종양 세포에서 MDM2 증폭에 대한 세포학적 분석을 통해 환자 유래 1차 배양이 확립되었음을 확인할 수 있습니다. 배양물을 이포스파미드(Ifosfamide), 에피루비신(Epirubicin), 이포스파미드(Ifosfamide) 및 에피루비신(Epirubicin), 트라벡테딘(Trabectedin) 및 에리불린(Eribulin)으로 처리했을 때 염기로부터의 형태학적 변화가 유도되었습니다.각 생존 가능성 실험에 대해 3개의 독립적인 반복실험을 수행했습니다. 그 결과 화학요법에 대한 배양물의 민감성이 확인되었습니다. 가장 적극적인 치료법은 이포스파마이드(Ifosfamide)와 에피루비신(Epirubicin)을 병용한 것으로, 진행성 또는 전이성 ALT-DDLPS에 사용되는 1차 치료법이다.일단 숙달되면 이 기술을 제대로 수행하면 15-16시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 종양 표본을 잘게 썰어야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 연조직 육종 생물학에 대한 추가 질문에 답하기 위해 유전자 발현 프로파일링, 면역조직화학 분석 또는 세포 독성 분석을 포함한 다양한 다운스트림 분석을 수행할 수 있습니다.개발 후, 이 기술은 연조직 육종 분야의 연구자들이 제대로 연구되지 않은 악성 종양의 자연사를 연구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 환자 유래 연조직 육종의 1차 배양을 확립하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 생물학적 샘플 및 약물로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 장갑 착용 및 흄 후드 작업과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 문서는 기본 셀 문화, 및 종양 세포에서 적혈구와 섬유 아세포의 contaminations를 제거하는 방법에 신선한 얻은 흑색 증 조직의 준비에 대해 설명합니다. 마지막으로, 우리는 어떻게 묘사...

환자 유래 세포 배양 및 CD133의 절연<sup&gt; +</sup흑종에서&gt; Putative 암 줄기 세포

전정 신경초종 (VSS는) NF2 종양 억제 유전자의 돌연변이와 관련된 슈반 세포 (SC) 기원의 비 악성 종양이다. 우리는 분자 및 세포 실험 조작 및 분석이 가능하며 인간의 질병의 이질적인 성격을 되풀이되었습니다 세포 배양 VS 인간의 기본에 대한 재현, 효율적인 프로토콜을보고합니다.

인간의 전정 신경초종의 차 문화

외과적 결장 종양 및 정상 조직에서 일차 인간 세포를 추출하기 위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 그런 다음 분리된 세포를 세포외 기질 단백질에 의해 기능화되고 형광 마이크로비드가 내장된 부드럽고 탄력 있는 기질(폴리아크릴아미드 하이드로겔)에서 배양합니다. 견인 세포 분석은 세포 수축 응력을 평가하기 위해 수행됩니다.

수술 조직에서 기본 인간 대장 종양 세포의 분리 및 견인 세포 계측법 부드러운 탄성 기판에 직접 배양

뼈 육종 암 줄기 세포의 존재 (CSC 추가)는 최근에 발병에 연결되어있다. 이 글에서, 우리는 비 접착 조건에서 성장하는 암줄 기세포의 능력을 사용하여 기존의 골육종 (OS)의 인간 생체 검사에서 얻은 기본 세포 배양에서 암줄 기세포의 분리를 제시한다.

암의 설립은 인간 기존의 골육종에서 세포 배양 줄기

우리는 형광 활성화 세포 선별에 의한 인간 육종 환자 유래 이종이식에서 종양 을 자극하는 세포의 분리를 위한 상세한 프로토콜을 설명하고, 인간 백혈구 항원-1(HLA-1)을 음성 마커로 사용하고, 추가검증및 이러한 HLA-1 음성 종양 을 자극 하는 세포의 특성.

육종 환자 유래 이종이식에서 종양 을 발하는 세포의 격리 및 특성화

이 프로토콜에서, 우리는 테스트 (네오) 보조 요법을위한 연조직 육종의 불완전한 수술 절제술의 마우스 모델을 설명합니다.

시험을 위해 불완전하게 절제술된 연조직 육종의 마우스 모델(Neo) 보조 요법

현재 프로토콜은 원발성 암세포에서 3D 종양 배양 모델을 생성하고 세포 생존력 분석 및 현미경 검사를 사용하여 약물에 대한 민감도를 평가하는 것을 설명합니다.

환자 유래 종양 샘플에서 3차원 스페로이드 설정 및 약물에 대한 민감도 평가

환자 유래 유방 종양 절제술 또는 정상 유방 조직에서 인간 유방 오가노이드를 확립하기 위한 자세한 프로토콜이 여기에 제공됩니다. 이 프로토콜은 인간 환자 유래 유방 오가노이드의 배양, 동결 및 해동에 대한 포괄적인 단계별 지침을 제공합니다.

환자 유래 유방 오가노이드의 확립 및 배양

이 논문은 외식물 배양 방법을 사용하여 치수 줄기세포의 1차 배양을 확립하고 ICSCRT 지침에 따라 이러한 세포의 특성을 분석하기 위한 단계별 가이드를 제공합니다. 이 프로토콜에 의해 분리된 세포는 추가 응용을 위한 중간엽 줄기 세포로 간주될 수 있습니다.

치과용 치수줄기세포의 1차 배양

종양 오가노이드는 암 연구와 개인 맞춤형 의학에 대한 접근 방식에 혁명을 일으켰습니다. 이는 임상적으로 관련성이 높은 종양 모델을 나타내며 이를 통해 연구자들은 임상에서 종양보다 한 발 앞서 나갈 수 있습니다. 이 프로토콜은 신선한 췌장 종양 조직 샘플과 췌장 선암 기원의 환자 유래 이종이식에서 종양 오가노이드를 확립합니다.

췌장암 유래 종양 오가노이드 및 섬유아세포를 신선한 조직에서 확립

이 프로토콜은 종양 침윤 림프구(TIL)와 공동 배양된 환자 유래 대장암(CRC) 오가노이드 모델을 만들어 이들의 상호 작용과 치료 잠재력을 연구하는 방법을 설명합니다. 이 모델은 종양 미세환경에서 면역 반응을 탐색하고 맞춤형 CRC 치료를 위한 TIL 기반 요법의 효능을 예측할 수 있는 전임상 플랫폼을 제공합니다.

환자 유래 대장직장 종양 오가노이드(Patient-derived Colorectal Tumor Organoids)와 종양 침윤 림프구(TIL)의 공동 배양 시스템 구축

배우세요 환자 유래 연조직 육종의 1차 배양을 수립하는 방법을 통해 종양 병태생리학과 치료 반응을 연구하세요. 이 인간 전임상 모델은 약물 효능 평가와 암세포 상호작용 분석에 활용됩니다.

환자에서 파생 된 연 조직 육 종의 기본 문화 설립

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