Name: Sinonasal Carcinomas과 후 각 Neuroblastomas에 대 한 두 가지 가능한 분자 마커로 OTX1 OTX2의 식별 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 배우세요 면역조직화학과 실시간 PCR을 이용해 비강암과 후각신경모세포종의 분자 마커를 식별하는 방법을. 이 기술은 종양 아형을 구분하고 진단 정확도를 높이는 데 도움이 됩니다.

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이 작품은 센트 가족 Strumenti 사크 dell'Insubria, 피코 Comunitaria del Varesotto, 피코 델에 의해 지원 되었다 몬테 디 롬바르디아와 피코 안 나 빌라 e 펠리 Rusconi.

모든 연구 동의 서 면 및 바레 세에서 Insubria의 대학 윤리 위원회에 의해 승인와 (1975) 헬싱키의 선언에 따르면 수행 했다.
1입니다. 샘플의 수집
<ol><li>수집 하 고 모든 인간 Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) 샘플14머리와 목 종양의 WHO 분류에 따라 서로 다른 하위 그룹으로 나눕니다. 참고: 여기 우리는 다음 예제 사용: 일반 sinonasal 점 제어 (10 샘플); 거꾸로 유 두 종 (IP, ICD O 코드 8121/1); Sinonasal 그것 (ICD O 코드 8144/3, 32 샘플); NITAC (ICD O 코드 8140/3, 12 샘플); Adenoid 낭 성 암 (ACC, ICD O 코드 8200/3); Pleomorphic Adenoma (PA, ICD O 코드 8941/3); (ICD O 코드 9522/3, 13 샘플); 가난 하 게 분화 신경 내 분 비 암 종 (PDNEC, ICD O 코드 8041/3, 19 샘플); 신경 내 분 비 종양 (NET, ICD O 코드 8041/3).</li>
</ol>2입니다. immunochemistry
<ol><li>
Deparaffinization 및 리하이드레이션 섹션의
	<ol>
<li>30 분 동안 60 ° C에 오븐에 있는 샘플 슬라이드를 열 고 3 µ m 두께 FFPE 사용 하 여 섹션 물 알코올 시리즈를 rehydrate.</li>
		<li>간단히 10 분 동안 크 실 렌에 슬라이드를 세척 하 고 반복이 단계; 100% 술에 5 분에 대 한 슬라이드를 세척 하 고 직렬로 95%, 85%, 및 75% 알코올을 사용 하 여이 단계를 반복. 증류수에 5 분에 대 한 슬라이드를 씻어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
생 활동 차단
	<ol>
<li>12 분 동안 3% 수성 수소 과산화물에 슬라이드를 삽입 하 여 내 인 성 활동을 차단 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
항 원 복구
	<ol>
<li>10 m m 구 연산 염 버퍼 (pH 6) 치료를 전자 레인지에 10 분 동안 치료 하 여 항 원 복구를 수행 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
1 차적인 항 체를 가진 외피
	<ol>
<li>TBS 버퍼 (pH 7.4)에 섹션을 씻어 다음 10 분 동안 차단 솔루션을 추가 합니다.</li>
		<li>TBS 버퍼 (pH 7.4)에 섹션을 씻어 다음 0.2% 트리톤 X를 추가 합니다.</li>
		<li>염소 안티 인간 OTX2 항 체 희석 1: 100으로 4 ° C에서 밤새 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
이차 항 체를 가진 외피
	<ol>
<li>ABC-과산화 효소 복잡 한 뒤에 biotinylated 토끼 반대로 염소 이차 항 체 희석 1: 200으로 실 온에서 1 h에 대 한 섹션을 품 어 ( 테이블의 자료를 참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
immunoreaction 개발
	<ol>
<li>3, 3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride를 사용 하 여 immunoreaction를 개발 하 고 해리스 Hematoxylin와 핵을 counterstain.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
장착 및 이미징
	<ol>
<li>초승달 알코올 규모를 사용 하 여 섹션을 탈수 하 고 명확히 terpene 근원의 개간 물질을 사용 하 여 ( 재료의 표참조). 설치 중간에 섹션을 포함, 섹션 현미경 슬라이드에 놓고 광학 현미경을 통해 섹션을 관찰 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. RNA 추출 및 역-전사
<ol><li>
RNA 추출
	<ol>
<li>Immunoprecipitation 프로토콜 (참조 섹션 2.1)의 첫 번째 단계를 수행 하 여 섹션에서 RNA를 추출 하 고 증류수에 슬라이드를 유지 합니다. 해당 되며 오신 관심의 조각 식별 섹션 스테인드과 흠 없는 섹션을 겹칩니다.</li>
		<li>RNA 추출 FFPE 샘플 ( 재료의 표참조) 및 다음 제조업체의 지침에 대 한 상업적인 RNA 추출 키트를 사용 하 여 수행 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
RNA 리버스-전사
	<ol>
<li>상업 키트를 사용 하 여 cDNA로 RNA 복고풍 녹음 ( 재료의 표참조) 다음 프로토콜. 여러 가지 분석을 수행 하기 위해 총 RNA의 레트로 녹음 적어도 1000 ng</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 실시간 PCR 및 데이터 분석
<ol><li>
실시간 PCR
	<ol>
<li>프로브 기반 기술로 양적 실시간 PCR 분석 (qRT-PCR) 수행 ( 재료의 표참조) 및 열 cycler.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
PCR 반응 혼합의 준비
	<ol>
<li>프로브 기반 마스터 믹스의 12.5 µ L를 사용 하 여 PCR 반응 혼합 준비, 1.25 µ L 각 OTX1, OTX2, 및 ACTB의 프로브 ( 재료의 표참조), 50 ng cDNA, 그리고 nuclease 무료 물 총 볼륨의 최대 25 µ L.</li>
		<li>3 중 유전자 표현 레벨을 정상화 하 생 컨트롤로 ACTB 유전자를 사용 하 여 모든 반응을 수행 합니다.</li>
		<li>1109 x g 3 분에 격판덮개 원심 고 실험까지 4 ° C에서 빛에서 보호 하는 접시를 저장.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
열 cycler 설정
	<ol>
<li>설정 열 cycler 프로필 초기 뜨거운 시작 2 분 및 10 분 동안 95 ° C 50 ° C에서 사이클 15 95 ° C에서 40 주기 다음 s와 1 분 동안 60 ° C에서 최종 주기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
진 식 수준 분석
	<ol>
<li>생 제어 ACTB 유전자를 사용 하 여 비교 주기 임계값 (ΔCt) 메서드를 통해 유전자 표현 레벨을 정상화.</li>
		<li>2-ΔCt 메서드를 사용 하 여 유전자 식 레벨을 평가 하 고 결과 플롯.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
통계 분석
	<ol>
<li>학생의 t를 사용 하 여 통계 분석을 수행- p < 0.05를 통계적으로 유의 한 결과 고려 하 고 테스트.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeobox+genes+in+the+developing+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+genet%22%5BJournal%5D)">Homeobox genes in the developing central nervous system.</a> Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).</li>
<li>Omodei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Brain+Transcription+Factor+OTX1+Occurs+in+a+Subset+of+Normal+Germinal-Center+B+Cells+and+in+Aggressive+Non-Hodgkin+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22American+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma.</a> American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

이 연구는, mRNA 수준에 따라 처음으로 보여줍니다 OTX1 및 OTX2 HB 유전자가 정상적인 sinonasal 점 막과 submucosal 선, 염증 성 폴립, sinonasal Schneiderian 갑, 그리고 다른 표현 상피와 neuroectodermal 신생, 편평 carcinomas, 비-장의 유형 sinonasal adenocarcinomas, 침 샘 타입 종양, 신경 내 분 비 신생 및 기능을 포함 하 여
수정 및 문제 해결:
RNA 저하를 방지 하려면 우리 병 리의 실험실에서 deparaffinization 프로토콜을 수행 합니다. 후에 우리가 긁힌 슬라이드, 모든 샘플 급속 하 게 냉각 되었고 추가 사용까지 드라이 아이스에 저장. 우리는 층 류 흐름 안전 후드 무 균 실험 조건 유지 하 고 RNA 오염 방지 살 균 팁 펫 전용된 세트를 사용 하 여 모든 후속 분석을 수행 합니다.
<p class="jove_...

OTX HB 유전자 초파리 orthodenticle 유전자 (otd)의 척추 homologue 그리고 그들은 일반적으로 배아 morphogenesis 동안 표현 녹음 방송 요인에 대 한 인코딩 하지만 그들은 또한 다른 기능을 가진 성인 유기 체에 표현 될 수 있습니다. . 배아 개발 하는 동안 그들은 셀 정체성, 세포 분화, 및 몸 axis¹의 위치 지정을 제어 합니다. OTX 가족 포함 OTX1 와 OTX2 유전자는 서로 다른 기능을 표시 합니다. OTX1 두뇌와 감각 기관이 개발에 참여 하고있다. 성인 유기 체에서 그것은 감각 기관에서 표현 되며 뇌2;의 앞쪽 엽의 낮은 수준에서 복사했습니다 그것은 또한 조, 만능 조 혈 및 조상 세포3에 표현 되 고 있는 역할을 하고있다. OTX2 rostral 머리의 개발에 참여 하 고는 morphogen로 그것의 번역된 단백질 행위는 다른 유전자를 통해 그라데이션 생성 하기 때문에 활성화 또는 따라서 셀에 기여 spatio 시간적 방식 억압 확산 그리고 감 별 법입니다. 성인 유기 체에서 OTX2 맥락 막 신경 총 및 송과선4에서 독점적으로 발견 된다.
종종 OTX 유전자에 있는 돌연변이 인간의 선 천 적, 체세포, 또는 신진 대사 결함의 모양을 관련이 있습니다. 이득 또는 손실 OTX 유전자에 있는 돌연변이 세포 성장 및 분화5를 제대로 제어할 수 없는 경우 tumorigenesis 홍보 수 있습니다. Leukemias과 lymphomas 또한 많은 고체 종양 (예를 들어, medulloblastomas6, 적극적인 비 Hodgkin 림프 종2, 유 방 carcinomas7, 대 장 암8및 retinoblastoma9)로 규제 완화 표현의 OTX HB 유전자는 잘 문서화 되어10입니다. 또한, OTX2 돌연변이 눈 개발의 컨트롤에이 유전자에 대 한 중요 한 역할 때문에 anophthalmia와 microphtalmia11 의 경우에 증명 했습니다.
단단한 신생에서 분자 및 phenotypic 마커의 발견은 진단, 분류, 그리고 종양11, 비 강 및 코에를 포함 하 여 여러 종류의 치료에 대 한 중요 한 도전 sinuses입니다. 사실, 그럼에도 불구 하 고이 지역을 차지할만 겸손 해 부 공간, 점 막 상피, 샘, 부드러운 조직, 뼈, 연골 또는 신경/neuroectodermal, 및 hematolymphoid 세포는 종종 복잡 하 고 다른 조직학의 기원에 대 한 사이트가 될 수 있습니다. 종양의 그룹입니다. 신생 sinonasal로 관련 된 다른 유형의 다양 한 기능 위 aerodigestive로 또는 본문12의 대부분의 부품에 걸쳐도 본 것 일반적으로 극복을 제시. Sinonasal 악성 드물다 전세계 1:100,000 주민의 연간 발생률을 제시 하 고 그래서이 방지는 tumorigenesis와 대체 치료 전략의 테스트에 관련 된 경로 관한 연구. 그럼에도 불구 하 고, 영상 기법, 진보 수술 방법과 방사선 치료 sinonasal 암의 임상 관리를 개선 했습니다. 또한, 셀 라인으로 동물 모델 및 암 유전자 프로 파일링의 개발 현재13미래 표적으로 한 항 암 치료 대 한 기초를 구성 한다. 날짜 하려면, 비 강, paranasal sinuses과 nasopharynx의 신생에 OTX1 또는 OTX2 식에 관한 보고 있다. 이후 우리가 이전 OTX1 와 OTX2 유 방 암7에 참여 관찰, 우리가이 유전자는 정상적인 비 강 점 막 뿐만 아니라 비 강에 종양에 존재 수 궁금해. 우리는 "스타지오네 디 Circolo" 바레 세 샘플에 정상적인 점 막, 그리고 2012 년 1985에서 수집 하 고 분류 하는 세계 보건 기구 (WHO)에 따르면 코와 sinonasal adenocarcinomas의의 병 리 학과에서 얻은이 목표에 도달 하 머리와 목 종양의 분류입니다. 우리 실시간 PCR 및 immunohistochemistry 분석을 통해 분석을 선택 하 고 우리가 만약 그들이 이러한 유형의 종양에 대 한 분자 마커 간주 될 수 있습니다 확인 하려면 OTX1 및 OTX2 식 평가.

<table><tbody><tr><td>RecoverAll 총 핵산 분리</td><td>Applied Biosystem</td><td>AM1975</td><td></td></tr><tr><td>고용량 cDNA 역전사 키트</td><td>Applied Biosystem</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG</td><td>Applied Biosystem</td><td>4326614</td><td></td></tr><tr><td>ABI Prism 7000&nbsp;</td><td>Applied Biosystem</td><td>270001857</td><td></td></tr><tr><td>ACTB 프로브</td><td>Applied Biosystem</td><td></td><td>생산 중단. 저작권으로 보호되는 염기서열</td></tr><tr><td>OTX1 프로브</td><td>Applied Biosystem</td><td></td><td>생산 중단. 저작권으로 보호되는 염기서열</td></tr><tr><td>OTX2 프로브</td><td>Applied Biosystem</td><td></td><td>생산 중단. 저작권에 의해 보호되는 서열</td></tr>: <tr><td>Acqueous Hydrogen Peroxide</td>, <td>Merk</td><td>1072090250</td><td></td></tr><tr><td>Citrate Buffer</td><td>, Sigma-Aldrich</td><td>20276292</td><td></td></tr><tr><td>Triton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>101473728</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Merk</td><td>108382</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merk</td><td>106404</td><td></td></tr><tr><td>Goat Anti-OTX2 Antibody</td><td>Vector Laboratories</td><td></td><td>생산 중단. 카탈로그 번호 not available</td></tr><tr><td>Rabbit Anti-Goat Antibody</td><td>Vector Laboratories</td><td>BA5000</td><td></td></tr><tr><td>ABC-Peroxidase Complex</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK6100</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5905</td><td></td></tr><tr><td>Harris Hematoxylin</td><td>Bioptica</td><td>0506004/L</td><td></td></tr><tr><td>Pertek</td><td>Kaltek SRL</td><td>1560</td><td></td></tr><tr><td>BioClear</td><td>Bioptica</td><td>W01030799</td><td></td></tr></tbody></table>

sinonasal carcinomas과 후 각 neuroblastomas에 대 한 두 가지 가능한 분자 마커로 otx1 otx2의 식별

Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas

OTX homeobox (HB) 유전자는 배아 morphogenesis 그리고 성인 유기 체에 있는 후 각 상피의 개발에 표현 됩니다. 이 유전자에서 발생 하는 돌연변이 종종 인간의 tumorigenesis 관련이 있습니다. 데이터가는 OTX 유전자와 비 강 종양 간의 가능한 상관 관계에 관한 오늘 사용할 수 있습니다. 이 작품의 목적은 경우 OTX1 및 OTX2 분자 마커 비 강 종양의 개발에서로 간주 될 수 있습니다 이해 하는 것입니다. 우리가 선택한 immunohistochemical 및 실시간 PCR 분석 통해 OTX1 및 OTX2 유전자의 표정을 조사 하 강과 sinonasal adenocarcinomas. 모두 OTX1 OTX2 했다 결 석 sinonasal Intestinal 형 Adenocarcinomas (ITACs)의 모든 샘플에서. OTX1 mRNA OTX2 mRNA 후 각 Neuroblastomas (기능)에 표현 하는 동안 비 장 유형 Adenocarcinomas (NITACs)에 확인 되었다. 우리 OTX1 와 OTX2 유전자에 대 한 차동 유전자 발현 sinonasal 종양의 종류를 구별 하는 유용한 분자 마커 수 있습니다 설명 했다.

정상 점 막에서 OTX 유전자 ciliated pseudostratified 형 호흡 상피와 submucosal 선 세포 (그림 1A)에 대 한 강력 하 고 동종 핵 반응을 관찰합니다. 우리는 모든 NITACs 샘플에 (그림 1B), 작은 동안 또는 immunoreactivity 결 석 OTX1 핵 식을 ITACs (그림 1C)에서 강조 했다 발견. 강렬한 immunoreactivity는 모든 기능 (그림 1D);에 PDNECs, 중 OTX 식 강도에 긍정적인 세포 (그림 1E)의 백분율 변화. 통계 분석 치 평방 또는 피셔의 정확한 시험 수행 Immunohistochemical 시연 OTX 그것 견본에서 ...

Homeobox 유전자는 종종 종양 성인 유기 체와 관련 된 규제 유전자. 우리 immunohistochemical와 실시간 PCR 분석, 정상 및 염증 코 거칠어 고 가능한 진단 및 치료 대상으로 그들을 사용 하려면 sinonasal 신생 그들의 비교 식을 조사.

Sinonasal Carcinomas과 후 각 Neuroblastomas에 대 한 두 가지 가능한 분자 마커로 OTX1 OTX2의 식별

OTX homeobox (HB) genes are expressed during embryonic morphogenesis and during the development of olfactory epithelium in adult organisms. Mutations ...

이 실험의 전반적인 목표는 단순하고 효율적인 방법으로 부노나살 암종 및 후각 신경 모세포종에 대한 유용한 분자 마커를 식별하는 것입니다. 이 방법은 후각 신경 모세포종 및 부노나살 암종 의 분야에서 핵심 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다, 종양 아형을 차별하는 분자 마커의 식별과 같은. 이 기술의 주요 장점은 병원 보고를 위해 6 시간 미만 또는 하루 이내에 결과를 얻을 수 있다는 것입니다.RNA 추출 및 실시간 PCR의 절차를 시연하는 것은 박사 Giorgia Millefanti, 내 실험실에서 박사 과정 학생이 될 것입니다. 그리고 면역 히스토케의 절차를 보여주는 것은 조반니 미켈로니, 또한 내 실험실에서 박사 과정 학생이 될 것입니다. 절차를 시작하려면 머리와 목 종양의 WHO 분류에 따라 모든 인간 FFPE 샘플을 다른 하위 그룹으로 수집하고 나눕니다.샘플 슬라이드를 섭씨 60도에서 30분간 가열합니다. 다음으로, 3 마이크로미터 두께의 FFPE 섹션을 10분 동안 자일렌으로 간략하게 세척하여 재수화합니다. 그런 다음 슬라이드를 100%95%85%와 75%의 알코올로 5분간 연속적으로 세척합니다.증류수에서 5분간 슬라이드를 헹구십시오. 이어서, 12분 동안 3%의 수성 과산화수소에 슬라이드를 배치하여 내인성 활성을 차단한다. 그 후, 10 밀리머 구연산 완충제로 슬라이드를 처리하고 10 분 동안 마이크로 웨이브를 하여 항원 검색을 수행합니다.10분 후 TBS 버퍼로 섹션을 세척합니다. 그런 다음 트리톤 X의 0.2 %를 추가하고 염소 항인간 OTX2 항체와 함께 섭씨 4도에서 하룻밤 을 배양하고 1 대 100 비율로 희석합니다. 다음 날, 1에서 200에 희석된 생체개래 토끼 방지 염소 이차 항체를 추가하고 실온에서 1 시간 동안 섹션을 배양합니다.그런 다음 샘플을 ABC peroxidase 복합체로 처리합니다. 그 후, 디아미노벤젠 테트라하이드로염화물을 사용하여 면역 반응을 개발하고, 해리스 헤마톡시린과 함께 핵을 염색한다. 그런 다음 초승달 알코올 척도에서 섹션을 탈수하고 turpine 기원의 클리어링 물질에서 명확히하십시오.다음으로 마운트 미디엄이 있는 슬라이드에 섹션을 장착합니다. RNA 추출 및 역전사 후 프로브 기반 기술과 열 사이클러를 통해 정량적 실시간 PCR 분석을 수행합니다. 프로브 기반 마스터 믹스 12.5 마이크로리터, 각 OTX1, OTX2 및 ACTB 프로브의 1.25 마이크로리터, 50 나노그램의 CDNA 및 총 부피의 핵이 없는 물을 사용하여 PCR 반응 믹스를 준비합니다.ACTB 유전자를 사용하여 유전자 발현 수준을 정상화하기 위한 내인성 대조군으로 삼중반응의 모든 반응을 수행한다. 다음으로, 3분 동안 1109배의 중력으로 플레이트를 원심분리합니다. 그런 다음 실험까지 빛으로부터 보호된 판을 섭씨 4도에 보관합니다.실시간 PCR을 수행하려면 샘플을 컴퓨터에 배치합니다. 그런 다음 초기 핫 스타트 사이클로 열 사이클러 프로파일을 2분 동안 50도, 섭씨 95도에서 10분 동안 설정하고, 15초 동안 섭씨 95도에서 40사이클, 1분간 60°C에서 최종 사이클을 설정합니다. 유전자 발현 수준 분석을 위해 ACTB 유전자를 내인성 대조군으로 사용하여 비교 주기 임계값 방법을 통해 유전자 발현 수준을 정상화한다.비교 주기 임계값 방법을 사용하여 유전자 발현 수준을 평가하고 결과를 플롯합니다. 그런 다음, 학생의 t-테스트를 사용하여 통계 분석을 수행, p와 통계적으로 유의 한 결과를 고려OTX1에 대한 핵 발현은 모든 비장형 아데노암 샘플에서 발견되었으며, 면역 반응성은 장형 선암에서 거의 또는 결석한 것으로 강조되었다. 강렬한 면역 반응성은 모든 후각 신경 모세포종에 존재하였다. 모든 제대로 분화 된 신경 내 분 비 암 중, OTX 발현 강도와 긍정적인 세포의 비율에 변화.이 절차를 시도하는 동안, 또한 멸균 장비를 사용하여 멸균 조건에서 RNA 추출의 모든 단일 단계를 수행하는 것이 중요하다. 이 절차와 병행하여, 엑스레이 분석, 비강 내시경 검사, CT 검사, 자기 공명 화상 진찰 및 생검과 같은 그밖 방법은, 우리의 기술에서 얻은 결과를 확인하기 위하여 수행될 수 있습니다. 개발 후, 이 기술은 종양학 분야의 연구원들이 세포 모델에서이 질병을 탐구할 수있는 길을 열었습니다.이 비디오를 본 후에는 면역 히스토케스화학 및 실시간 PCR을 사용하여 종양 아류형을 차별하기 위해 분자 마커를 식별하는 방법에 대한 좋은 이해가 있어야 합니다. 이러한 시약, 계측 및 샘플로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이러한 절차를 수행할 때 DPI와 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

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연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

우리는 여기서 쥐, 인간의 비강 충치의 후각 점막 조직 검사로 연구를 해왔하는 방법을 설명합니다. 이러한 biopsies은 뇌 질환의 분자 변이를 식별하거나 뇌 손상 / 질병의 동물 모델에 세포 이식을 위해 활용할 수 multipotent 성인의 줄기 세포를 분리하거나 사용할 수 있습니다.

설치류 또는 인간의 네이절 강한 줄기 세포를 분리

본 연구에서는 새로운 플랫폼을 개발하고 검증 된 양극성 장애 (BD)의 치료 반응의 intraneuronal 분자 서명을 조사합니다. BD 환자의 후각 상피 비강 생검을 통해 얻었다. 이어서 레이저 캡처 미세 절제가 BD 리튬 응답의 분자 특성을 조사하기 위해 실시간 RT PCR과 결합시켰다.

레이저 캡처 이외에 Microdissection과 코 생검 결합을 통해 획득 후각 뉴런 : 정신 장애의 치료 반응을 연구하기 위해 잠재적 인 접근

후각 감각 뉴런은 적절한 신경 회로를 만들기 위해 다양한 축삭 정렬 분자를 발현합니다. 이 프로토콜은 후각 감각 뉴런의 축삭 종말에 축삭 - 정렬 분자의 조합 표현을 시각화하기 위해 면역 조직 화학 염색법을 설명합니다.

후각 감각 축색 돌연변이 분자 식별 코드의 시각화를위한 뒷 전구의 4 배 면역 면역 측정법

이 논문은 digoxigenin (DIG) 표지 또는 바이오틴 표지 프로브를 사용하는 곤충 안테나에서 특히 낮은 수준으로 발현 된 Odorant Receptor (OR) 유전자 및 기타 유전자에 대해 상세하고 매우 효과적인 RNA in situ hybridization 프로토콜을 설명합니다.

RNA에 의한 Locust Antenna 내의 악취 수용체 유전자의 국산화<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드 화

생물정보학은 대규모 데이터 세트를 처리하는 유용한 방법입니다. 생물 정보학 접근법의 구현을 통해 연구원은 통찰력 있는 응용 분야및 과학적 발견을 신속하고 안정적으로 효율적으로 얻을 수 있습니다. 이 문서는 난소암 연구에서 생물 정보학의 활용을 보여줍니다. 또한 실험을 통해 생물 정보학 연구 결과를 성공적으로 검증합니다.

난소암에서 노치 신호의 역할을 이해하기 위한 생물정보학 접근법 및 실험 검증의 통합

여기에서 우리는 유전자 조작 마우스 모델 종양에서 파생된 세포의 두개내 주입에 의해 확립된 GBM에 대한 전임상 동소 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 인간 GBM의 질병 특징을 표시합니다. 중개 연구를 위해 마우스 뇌종양은 생체 내 MRI 및 조직병리학에 의해 추적됩니다.

다형성 교모세포종의 번역 동소 모델

우리는 성공적으로 슬라이드를 전체 마운트로 고정시킨 유방 조직을 조직 병리학 적 평가를 위해 성공적으로 제거, 가공, 절단 및 착색하는 방법을 개발했습니다. 이 방법은 생식 및 발달 테스트 지침 연구에서 유선 전체 마운트의 수집 및 평가를 촉진 할 수 있습니다.

병변 식별을위한 유선 절개 전체 장착

유전자 조작된 생쥐 전립선 암 메커니즘을 조사를 위해 유용한 모델이 있습니다. 여기를 식별 하 고 마우스 비뇨 생식 기 시스템에서 전립선 엽 해 부, 조직학에 따라 구분 하 고 분리 다운스트림 분석에 대 한 spheroids로 기본 전립선 세포에는 생체 외에서 문화 프로토콜 선물이.

식별, 조직학 특성화 및 체 외 3D 회전 타원 체 문화 모델에 대 한 마우스 전립선 돌출부의 해 부

이 프로토콜은 애벌레 얼룩말어를 숙주로서 사용하여 바이러스 기반 이중 형광 표지 종양 이종이식 모델에서 최적화 절차를 설명합니다. 이 이기종 이종이식 모델은 생체 내 췌장암 미세환경의 조직 조성을 모방하고 맞춤형 zPDX(제브라피쉬 환자 유래 이종이식) 모델에서 약물 반응을 평가하기 위한 보다 정밀한 도구역할을 한다.

비교 약물 평가를 위한 호스트로 Zebrafish 애벌레를 사용하여 췌장암의 환자 유래 이종 이종이식 모형

여기서, 우리는 순환 종양 세포 (CTCs)를 특성화 하는 표현 형 및 분자 특징을 식별 하는 통합 워크플로우를 제시 합니다. 당사는 단일 및 클러스터형 CTCs의 살아있는 면역 염색 및 로봇 미세 조작을 단일 세포 기반 기술로 결합 하 여 전이 시드 능력의 다운스트림 분석과 평가를 제공 합니다.

하류 분자 분석 및 전이성 전위 평가를 위한 순환 종양 세포의 미세 조작

배우세요 면역조직화학과 실시간 PCR을 이용해 비강암과 후각신경모세포종의 분자 마커를 식별하는 방법을. 이 기술은 종양 아형을 구분하고 진단 정확도를 높이는 데 도움이 됩니다.

Sinonasal Carcinomas과 후 각 Neuroblastomas에 대 한 두 가지 가능한 분자 마커로 OTX1 OTX2의 식별

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