Name: 마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: 학습하세요 마우스 부분적 담관결찰술을 통해 국소 폐쇄성 담즙정체와 간 재생 메커니즘을 연구하는 방법을. 동일 개체 내 비교가 가능한 이 수술 모델은 간 손상 회복 과정을 심층 분석하는 데 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

박사 칸 NIH/NICHD K12HD052892, 알파-1 재단, 힐만 재단, 그리고 피츠버그 간 연구 센터에서 보조금 지원을 인정 한다. 박사 Michalopoulos는 NIH/NIDDK P01DK096990에서 보조금 지원을 인정합니다. 앤 오 어의 우수 하 고 관대 한 기술 지원 부탁 드립니다. 우리는 또한 이식/설치류 미세 실험실에 대 한 액세스를 제공 하기 위한 박사 데이비드 A. 겔러에 감사입니다.

모든 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 피츠버그 대학교의 윤리 지침에 따라 실시 했다.
1. 기본 기술 및 공통 절차
<ol><li>압력솥 사용 하기 전에 모든 microsurgical 장비.</li>
	<li>마우스 마 취에 의해 살해를 방지 하려면 신중 하 게 그것의 호흡 패턴을 확인 합니다.</li>
	<li>터치 기관 및 내장 기관 손상 및 출혈을 일으키는 방지 하기 위해 가능한 한 작은. 젖은 면봉 이나 거 즈 스폰지 출혈 포인트를 누릅니다.</li>
	<li>젖은 면봉을 사용 하 여 장기의 부드러운 조작. 3.5 × 3.5 cm 및 6.0 × 6.0 cm. 작은 하나를 사용 하 여 전체 간 안전 거리를, 젖은, 비-짠 거 즈 스폰지 2 개 크기에서 사용 된다. 더 큰 하나를 사용 하 여 크고 작은 창 자 하.</li>
</ol>2. presurgical 준비
<ol><li>남성 c57/b6 쥐, 부분적 담 관 결 찰에 대 한 (때 몸 무게는 약 20-35 g) 나이의 8-12 주를 사용 합니다.</li>
	<li>마 취의 유도까지 쥐 물과 음식에 대 한 무료 액세스를 허용 합니다.</li>
</ol>3. 부분 담 관 결 찰 수술
<ol><li>1.5-2.0 %isoflurane 및 1 L/min 산소의 혼합으로 유도 챔버에서 동물을 넣어 마우스를 anesthetize. 호흡 속도 관찰 하 여 동물을 신중 하 게 모니터링 합니다. 동물의 호흡 속도 초당 한 호흡, 마우스 잘 마 취입니다. 앞 다리 철수 반사는 더 빠르게 사라집니다, 이후 철수 반사의 완전 한 부재를 확인 뿐만 아니라 뒷 다리 발 핀치. 눈 각 막 궤 양을 방지 하기 위해 안과 윤 활 에이전트와 기름을 바른 다 한다. 참고 진통제의 그 첫 번째 복용량 통증 수용 체의 자극을 방지 하기 위해 수술 전 주어질 수 있다.</li>
	<li>헤어 클리퍼 스로 복 벽을 면도 하 고 수술 현미경 수술 테이블에 마우스를 놓습니다. 테이프와 함께 테이블에 모든 사지를 수정 합니다. Isoflurane 흡입을 사용 하 여 전신 마 취 아래 마우스를 유지.<ol>
<li>Isoflurane 기화 기를 조정 하 고 유도 2.0-3.0 %isoflurane 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>복 벽을 소독 멸 균 면봉을 사용 하 여, 먼저 0.3-0.5 mL povidone-요오드 응용 몸에 붙이기, 70% 에탄올에 의해 따라. 동물 살 균 드 레이프와 함께 처리 되어야 합니다.</li>
	<li>긴 중간 복 부 절 개를 고 칼에서 Adson 집게와가 위를 사용 하 여 액을 확인 합니다. 복 부 절 개 후, 줄일 isoflurane 0.8-1.0% 유지 보수에 대 한.</li>
	<li>마이크로-견인을 사용 하 여 복 부 구멍을 노출 합니다. 모기 겸 자는 칼 잡고 하 고 마우스의 머리 쪽으로 철회. 모기 겸 자 부드러운 흙을 사용 하 여 장소를 수정 했다.</li>
	<li>따뜻하게 (37 ° C)의 1-2 mL를 주입 멸 균된 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 복 부 장기 부상 방지 하려면 복 부 구멍으로. 젖은 면봉으로 소장 누른 부드럽게 마우스의 머리 쪽으로 그들을 취소 합니다. 작은 창 자, 작은 창 자 (그림 1A) 부상 피하려고 retroperitoneum 사이 인 대를 잘라.</li>
	<li>랩, 비-짠 젖은 거 즈 스폰지와 크고 작은 창 자. 복 부 구멍의 꼬리 쪽에 넣어. 멸 균 거 즈에 싸서 내장 오염을 피하기 위하여 메 마른 draped 필드에 배치할 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게 간 hilum와 성질과 십이지 장 인 대 (그림 1B)에 작은 젖은 비 짠 거 즈 스폰지를 사용 하 여 전체 간으로는 칼을 철회.</li>
	<li>간장 hilum의 것인지 확인 합니다. 일반적인 담 관은 포털 정 맥의 복 부 측에 있습니다. 오른쪽 및 왼쪽된 간 담 관 간 hilum에서 주요 담 즙 합류에 드레인의 위치를 확인 합니다.</li>
	<li>왼쪽된 간 담 즙 덕트는 왼쪽된 엽 빼낸 식별 하 고 10-0 나일론 봉합 봉합 바늘 (그림 2A)의 무딘 사이드를 사용 하 여 함께 그것을 둘러싸 자. 문맥, 간 동맥, 및 간 표면 부상 하지 마십시오.</li>
	<li>10-0 나일론 왼쪽된 담 관 선 (그림 2B)입니다.</li>
	<li>젖은 면봉을 사용 하 여 크고 작은 창 자 작업 이전에 같은 위치에 배치 합니다.</li>
	<li>장 비틀림 및 내부 복 부 출혈, 확인 후 근육과 4-0 vicryl와 2 개의 층에 피부를 닫습니다. 꼰된 봉합 (Vicryl) 피부 폐쇄를 위해 사용 되었다 그러나 monofilament 감염의 가능성을 줄이기 위해 선호 된다. 참고: 액, 하 칼에서 지속적인된 봉합 하 여 근 막 닫고 액에서 칼에 계속된 봉합 하 여 피부를 닫습니다.</li>
	<li>절 개를 닫은 후 마 취를 중지 합니다.</li>
</ol>4. 수술 후 치료 및 후속
<ol><li>그냥 수술 후, 마우스의 등 쪽 피부를 꼬 집 고 주사 Buprenex (0.1 mg/kg) 및 Cefazolin (100mg/kg), 피하 주입에 의해 Buprenex 모든 12 h 3 일, 그리고 Cefazolin에 대 한 모든 24 h 3 일 뒤에 각각11,12 ,13. 참고 진통제의 그 첫 번째 복용량 통증 수용 체의 자극을 방지 하기 위해 수술 전 주어질 수 있다. Cefazolin 및 다른 요정 요원 항생제만 이식 연구에 사용 된 같은 면역 억제 동물에 대 한 필요 하다. 참고: 경우에 수술을 성공적으로 수행 하 고, 마우스 일반적으로 복구 30 분 이내 쥐의 활동 거의 수술 전 상태와 동일 있을 것입니다.</li>
	<li>고통의 어떤 표시 든 지를 위한 매일 쥐를 확인 하십시오.<ol>
<li>PBDL 후 간 및 정의 된 시간 점 (즉, 7, 14, 21 일)에서 다른 조직 샘플을 조달 전신 마 취하에 자 궁 경부 전위에 의해 쥐를 희생.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Higgins, G. M., Anderson, R. <a target="_blank" href="https://www.scienceopen.com/document?vid=57858414-5eff-4c8d-a028-ccb3fc1c44a6">Experimental pathology of the liver - Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).</li>
<li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/path.1700350512/abstract">Ligation of the common bile duct.</a> The Journal of Pathology and Bacteriology. 35 (5), 769-798 (1932).</li>
<li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+bile+duct+obstruction%3A+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Barua, L., Bowen, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transdifferentiation+of+rat+hepatocytes+into+biliary+cells+after+bile+duct+ligation+and+toxic+biliary+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Transdifferentiation of rat hepatocytes into biliary cells after bile duct ligation and toxic biliary injury.</a> Hepatology. 41 (3), 535-544 (2005).</li>
<li>Dipaola, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+intramural+epithelial+networks+linked+to+peribiliary+glands+that+express+progenitor+cell+markers+and+proliferate+after+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Identification of intramural epithelial networks linked to peribiliary glands that express progenitor cell markers and proliferate after injury in mice.</a> Hepatology. 58 (4), 1486-1496 (2013).</li>
<li>Guyot, C., Combe, C., Desmouliere, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+common+bile+duct+ligation+in+rat%3A+A+relevant+in+vivo+model+to+study+the+role+of+mechanical+stress+on+cell+and+matrix+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The common bile duct ligation in rat: A relevant in vivo model to study the role of mechanical stress on cell and matrix behaviour.</a> Histochem Cell Biol. 126 (4), 517-523 (2006).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+bile+duct+ligation+on+bile+acid+composition+in+mouse+serum+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Effect of bile duct ligation on bile acid composition in mouse serum and liver.</a> Liver Int. 32 (1), 58-69 (2012).</li>
<li>Tag, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+duct+ligation+in+mice%3A+induction+of+inflammatory+liver+injury+and+fibrosis+by+obstructive+cholestasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis.</a> J Vis Exp. (96), e52438(2015).</li>
<li>Osawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+mediators+induce+fibrogenic+effects+in+normal+liver+after+partial+bile+duct+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Systemic mediators induce fibrogenic effects in normal liver after partial bile duct ligation.</a> Liver Int. 26 (9), 1138-1147 (2006).</li>
<li>Khan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+Duct+Ligation+Induces+ATZ+Globule+Clearance+in+a+Mouse+Model+of+alpha-1+Antitrypsin+Deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Expr%22%5BJournal%5D)">Bile Duct Ligation Induces ATZ Globule Clearance in a Mouse Model of alpha-1 Antitrypsin Deficiency.</a> Gene Expr. 17 (2), 115-127 (2017).</li>
<li>Birkhead, H. A., Briggs, G. B., Saunders, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicology+of+cefazolin+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Toxicology of cefazolin in animals.</a> J Infect Dis. 128, 378(1973).</li>
<li>Kunst, M. W., Mattie, H., van Furth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+efficacy+of+cefazolin+and+cephradine+in+neutropenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infection%22%5BJournal%5D)">Antibacterial efficacy of cefazolin and cephradine in neutropenic mice.</a> Infection. 7 (1), 30-34 (1979).</li>
<li>Traul, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+studies+of+post-surgical+buprenorphine+therapy+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Safety studies of post-surgical buprenorphine therapy for mice.</a> Lab Anim. 49 (2), 100-110 (2015).</li>
<li>Carlson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+PiZ+alpha+1-antitrypsin+causes+liver+damage+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Accumulation of PiZ alpha 1-antitrypsin causes liver damage in transgenic mice.</a> J Clin Invest. 83 (4), 1183-1190 (1989).</li>
<li>Sifers, R. N., Finegold, M. J., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-1-antitrypsin+deficiency%3A+accumulation+or+degradation+of+mutant+variants+within+the+hepatic+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Alpha-1-antitrypsin deficiency: accumulation or degradation of mutant variants within the hepatic endoplasmic reticulum.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 1 (5), 341-345 (1989).</li>
<li>Rudnick, D. A., Shikapwashya, O., Blomenkamp, K., Teckman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indomethacin+increases+liver+damage+in+a+murine+model+of+liver+injury+from+alpha-1-antitrypsin+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Indomethacin increases liver damage in a murine model of liver injury from alpha-1-antitrypsin deficiency.</a> Hepatology. 44 (4), 976-982 (2006).</li>
<li>Heinrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+bile+duct+ligation+in+mice%3A+a+novel+model+of+acute+cholestasis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis.</a> Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).</li>
<li>Glaser, S. S., Alpini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+cholehepatic+shunt+as+a+potential+therapy+for+primary+sclerosing+cholangitis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation of the cholehepatic shunt as a potential therapy for primary sclerosing cholangitis.</a> Hepatology. 49 (6), 1795-1797 (2009).</li>
<li>Gurpinar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+sulindac+derivative+inhibits+lung+adenocarcinoma+cell+growth+through+suppression+of+Akt%2FmTOR+signaling+and+induction+of+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel sulindac derivative inhibits lung adenocarcinoma cell growth through suppression of Akt/mTOR signaling and induction of autophagy.</a> Mol Cancer Ther. 12 (5), 663-674 (2013).</li>
<li>Alpini, G. G., Francis, H., Marzioni, M., Venter, J., Phinizy, J., LeSage, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK5974/">Madame Curie Bioscience Database</a>. , Landes Bioscience. Austin, TX. (2013).</li>
<li>Kirkland, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+surgical+model+of+biliary+inflammation+and+obstructive+jaundice+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice.</a> J Surg Res. 164 (2), 221-227 (2010).</li>
<li>Delhove, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+in+vivo+bioimaging+of+hepatocyte+transcription+factor+activity+following+cholestatic+liver+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Longitudinal in vivo bioimaging of hepatocyte transcription factor activity following cholestatic liver injury in mice.</a> Sci Rep. 7, 41874(2017).</li>
<li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homing+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+mediated+by+sphingosine+1-phosphate+contributes+to+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Homing of bone marrow mesenchymal stem cells mediated by sphingosine 1-phosphate contributes to liver fibrosis.</a> J Hepatol. 50 (6), 1174-1183 (2009).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+released+from+cholestatic+rat+livers+possibly+involved+in+inducing+bone+marrow+hepatic+stem+cell+priming%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Factors released from cholestatic rat livers possibly involved in inducing bone marrow hepatic stem cell priming.</a> Stem Cells Dev. 17 (1), 143-155 (2008).</li>
<li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propitious+role+of+bone+marrow-derived+mononuclear+cells+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model%3A+potential+clinical+implications+in+obstructive+cholangiopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Surg+Int%22%5BJournal%5D)">Propitious role of bone marrow-derived mononuclear cells in an experimental bile duct ligation model: potential clinical implications in obstructive cholangiopathy.</a> Pediatr Surg Int. 29 (6), 623-632 (2013).</li>
</ol>

저자 아무 공개 있다.

CBDL cholestasis 폐쇄성에 대 한 가장 일반적인 실험 기술 이지만, 그것은 설치류에 여러 과제를 제시할 수 있습니다. 끝점을 달성 하는 데 필요한 수술 일 수에 따라 동물 중요 한 병 적 상태와 사망률 진행으로 경험할 수 있습니다. 조직 상해 및 담 즙 괴 사 정도 간 질병의 비정상적인 간 실질 및 기준선에서 기능을 설명 하는 몇 가지 유전자 변형 마우스 모델에서 작업할 때 더 악화 됩니다. CBDL에 비해, pBDL의 보고서는, 하지만이 기술은 부정적인 결과 및 동물 손실을 줄이기 위해 선택 실험에서 다른 방법으로 적용 될 수 있다.
PBDL 방법에 있는 변이 또한 보고 되었다. 하인리히 외의 방법에는 외부 곡선된 바늘 합자 일반적인 담 관 및 바늘17주위 다음 일반적인 담 관에 인접 한 배치 됩니다. 바늘은 다음 복 부 벽 폐쇄, 담 관17의 좁게 루멘 (...

급성 간 손상 및 수리, 부분 hepatectomy 등 일반적인 담 관 결 찰 (cBDL)의 외과 모델 간 재생 pathobiology1,2를 공부 하 고 설치류에 수십 년 동안 사용 되었습니다. CBDL에서 일반적인 담 관 (간에 서 생산 하는 모든 담 즙을 빼낸)는 출혈, 폐쇄성 cholestasis, 염증과 섬유 증 수술, 간 경 변3최종 진행 후 첫 2-3 주에 결과. 담 즙 덕트 확산, transdifferentiation, 및 주민 간 조상 세포의 유도 또한 cBDL4,5의 기능. 비록 cBDL 보통 잘 재현할 결과 야생-타입 마우스와 정상적인 간 은6,,78그 긴장 특징이 있는 폐쇄성 cholangiopathy의 특정 메커니즘에 절차는 높은 사망률 및 사망 시간이 지남에 담 즙 방해의 예상 보다 더 많은 동물을 요구 하는 간 질환의 일부 유전자 변형 마우스 모델에 기술적으로 요구 될 수 있습니다. 이 기술은 또한 유전자 변형 생쥐 기본 간 질병, 그렇지 않으면 장기간된 시간 과정 실험 cBDL 다음의 스트레스를 용납 하지 않을 수 있습니다 공부에 대 한 도움이 됩니다.
pBDL는 이러한 문제 들을 극복할 수 있도록 적당 한 대안을 제공할 수 있습니다. 초기 pBDL 로컬 행동 및 조직의 염증9의 중재자를 구별 하는 목적으로 야생-타입 쥐에 있는 학문. PBDL에서 일반적인 담 관 위에 좌우 간 담 관의 담 즙 주 합류는 hilum에서 신중 하 게 시각 이다 고만 왼쪽된 간 담 즙 덕트 지역화 된 폐쇄성 cholestasis 생성 하 출혈. pBDL은 cBDL에 여러 이점을 제공합니다. PBDL에서 unligated 오른쪽 엽 합자 왼쪽된 엽, 영양 상태 등 요소를 순환 같은 조직의 효과를 받게에 대 한 동일 하 게 일치 하는 내부 통제 역할을 합니다. 조직 프로-염증 성 중재자 존재 했지만, 오 사와 외 적은 섬유 증 및 unligated 돌출부에 괴 사를 관찰 하지만 염증 성 세포와 변형 성장 인자-β 표현의 합자 엽9증가.
더 최근에, pBDL는 유지 담 즙10간 parenchymal 효과 연구 재정의 되었다. 내부 제어 (unligated "가짜") 및 실험적인 그룹 같은 동물을 사용 하 여 pBDL는 효과적으로 차례 차례로 더 비용 효율적인 실험 당 필요한 동물의 수를 반. 이상적인 시간 과정 실험 (≥2 주) 합자 엽에서 달성 될 수 있다 그래야 쥐 훨씬, pBDL의 효과 용납. 가장 중요 한 것은, pBDL의 폐쇄성 cholestasis 직접 intrahepatic 효과 구분할 수 있습니다 하 고 합자 엽, unligated 제어 엽에 비해 담 즙 구성 요소를 유지. 전반적으로, pBDL 간에서 지역화 cholestasis의 엽 특정 효과 공부 하는 매력적인 방법입니다.

<table><tbody><tr><td>현미경-Leica Wild M650, 6&ndash; 40&회; 확대</td><td>Leica Microsystems</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Tec 3 이소플루란 깔때기 채우기 기화기</td><td>일반 마취 서비스</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>스티븐스 테노토미 가위</td><td>정확한 수술 & Scientific Instruments Corporation</td><td>ASSI.9193</td><td></td></tr><tr><td>Adson 집게</td><td>미세 과학 도구</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>모기 클래식 섬세한 지혈 집게</td><td>Codman</td><td>30-4472</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 견인</td>기 <td>머독; Roboz 수술 기구</td><td>RS-6550</td><td></td></tr><tr><td>부직포 거즈 스폰지</td><td>Fisherband</td><td>870-PC-DBL</td><td></td></tr><tr><td>청교도 6" 나무 손잡이가 있는 작은 면 면봉</td><td>Puritan Medical Products Company</td><td>868-WCS</td><td></td></tr><tr><td>Dumont SS 펜치 - 표준 팁/스트레이트/이녹스/13.5cm</td><td>세밀 과학 도구</td><td>11203-23</td><td></td></tr><tr><td>듀몬트 SS 포셉스 - 표준 팁/각도 45도;/이녹스/13.5cm</td><td>세밀 과학 도구</td><td>11203-25</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 스프링 가위 - 3mm 커팅 엣지</td><td>세밀 과학 도구</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>마이크로니들 홀더</td><td>Aesculap 수술 기구</td><td>FD231R</td><td></td></tr><tr><td>Micro ARO봉합사, 멸균 10-0 나일론 봉합사, 70 &micro; m, TAP 포인트</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>T4A10N07</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>J662H</td><td></td></tr><tr><td>5-ml 주사기</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 조직 배양 접시, 60 &times; 15 mm</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, 미국 약전 (USP) 액체 흡입, 250 ml</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Buprenex 주사 가능한 (부프레노르핀 염산염)</td><td>Reckitt Benckiser Pharmaceuticals</td><td>NDC 12496-0757-1</td><td></td></tr><tr><td>주입용 Cefazolin, USP</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>NDC 63323-238-61</td><td></td></tr><tr><td>PVP 스크럽 솔루션 (povidone&ndash; 요오드 7.5%)</td> <td>Medline</td><td>NDC 12496-0757-1</td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Decon Labs</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>칼슘 또는 마그네슘 없는 인산염 완충 식염수</td><td>LONZA</td><td>17-516F</td><td></td></tr><tr><td>Sirius Red</td><td>Sigma</td><td>365548</td><td></td></tr><tr><td>Hematolxylin</td><td>Fisher (Richard-Allan Scientific)</td><td>22-050-111 (7211)</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Anatech (Fisher)</td><td>832 (NC9686037)</td><td></td></tr><tr><td>포르말린</td><td>피셔</td><td>SF100-20</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 cholestasis의 제어 모델

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

설치류, 일반적인 담 관의 완전 한 담 관 결 찰 (cBDL)에서는 폐쇄성 cholestasis 및 담 즙 덕트 확산 연구 설립된 수술 방법입니다. 그러나, 장기 실험 증가 병 적 상태와 사망률 이어질 수 있습니다. 선택 마우스 기본 간 질환과 긴장, 의미 있는 비교 동물 손실 및 비용을 줄일 수 있는 간, 단일 엽의 결 찰으로도 만들 수 있습니다. 여기, 우리 왼쪽된 엽만 하지 나머지 돌출부에 담 즙 방해를 일으키는 부분 담 관 결 찰 (pBDL)는 간 담 즙 덕트 왼쪽된만 출혈은, 마우스에서 설명 합니다. 주의 microsurgical 기법, pBDL 실험 수 비용, 같은 동물에 동일한 조건을 복종 때 unligated 엽 합자 돌출부를 내부 통제 역할 때문. CBDL, 달리 별도 운영 하는 가짜 제어 그룹 필요 하지 않습니다. pBDL은 cholestasis 및 기타 유지 담 즙 구성 요소 조직의 효과 대 지역화 직접 비교에 매우 유용 합니다. pBDL 또한 메커니즘 약물 및 세포 마이그레이션에 관련 된 조사를 새로운 방법으로 repurposed 수 있습니다.

이 전형적인 실험에 대 한 pBDL (A1AT) 알파-1 antitrypsin 결핍에서 발견 인간의 간 질환 정리는 triplicate 피 즈 유전자 변형 생쥐에서 수행 되었다. 피 즈 마우스 overexpresses transgene 조각의 여러 genomic DNA의 돌연변이 인간 A1AT 유전자, introns 및 업스트림 및 다운스트림 영역14, 측면의 ~ 2 kilobases 발기인의 코딩 영역을 포함 하는 구성 된 15. 정상적인 A1AT 간에서 생산 분 비 혈 청 단백질 이다. A1AT의 돌연변이 형태 간 독성 스트레스를 일으키는에 자발적으로 누적 되는 불용 성 단백질 집계를 생성 합니다. 실험 3 달 오래 된 남성 피 즈 쥐, 단백질 집계 봉우리16이 질병의 가장 심각한 표현 형 표현 활용.
<p cl...

여기, 선물이 간 부상 및 설치류에서 중생의 외과 모델로 부분 담 관 결 찰.

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

이 외과적 개입의 전반적인 목표는 국소 폐쇄성 담즙정체증의 영향을 관찰하는 것입니다. 이 방법은 간 재생의 메커니즘을 식별하는 방법에 대한 간학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 동일한 동물 내에서 결찰된 실험엽과 결찰되지 않은 대조엽 사이에 의미 있는 비교가 이루어질 수 있다는 것입니다.오늘 이 절차를 시연하는 사람은 이식 수술 실험실의 박사후 연구원인 Toshimasa Nakao 박사입니다. 마취된 8주에서 12주 된 C57 블랙 6 마우스에서 발가락 꼬집음에 대한 반응이 없음을 확인한 후, 이발기로 복부를 면도하고 동물을 수술용 현미경 아래에 놓습니다. 팔다리를 테이블에 고정하고 멸균 면봉을 사용하여 0.3-0.5 밀리리터의 포비돈 요오드와 70% 에탄올로 수술 부위를 순차적으로 소독합니다.다음으로, xipoid에서 치골까지 정중선을 절개하고 마이크로 견인기를 사용하여 복강을 엽니다. 모기 집게를 사용하여 xipoid를 마우스 머리 쪽으로 집어넣고 부드러운 점토를 사용하여 집게와 xipoid를 이 위치에 고정합니다. 멸균된 섭씨 37도 PBS 1-2밀리리터로 복강에 수분을 공급하고 젖은 면봉을 사용하여 소장을 마우스의 머리 쪽으로 부드럽게 움직입니다.조직이 손상되지 않도록 소장과 후복막 사이의 인대를 자르고 소장과 대장을 젖은 부직포 거즈 스폰지로 감쌉니다. 장 조직을 복강의 꼬리 쪽에 놓고 작은 젖은 부직포 거즈 스폰지를 사용하여 간 전체를 xipoid 쪽으로 부드럽게 집어넣어 간문과 간십이지장 인대를 노출시킵니다. 간문맥의 복부 쪽에 있는 총담관(common bile duct), 그리고 간문맥(hepatic hilum)에서 주요 담즙 합류점으로 배출되는 왼쪽 및 오른쪽 간 담관(hepatic bile ducts)을 찾습니다.10-0 나일론 봉합사와 봉합사 바늘의 뭉툭한 면을 사용하여 왼쪽 간담관엽을 접합합니다. 봉합사가 놓이면 소장과 대장을 해부학적 위치로 되돌리고 장 염전이나 복강 내 출혈이 없는지 확인합니다. 그런 다음 모기 집게를 제거하고 연속 4-0 Vicryl 봉합사로 근육과 피부층을 별도로 봉합한 다음 마우스를 열 아래에 놓습니다.amp 완전히 회복될 때까지 모니터링하면서 모니터링합니다.부분 담관 결찰 마우스와 불용성 간 단백질 응집에 대한 형질전환 완전 담관 결찰 마우스 사이의 혈청 간 생화학을 비교한 결과, 부분 담관 결찰 마우스에서는 간 손상 또는 담즙 정체가 경미하고 완전 담관 결찰 형질전환 동물에서는 심각한 손상 및 효소 축적이 나타났습니다. 부분적인 담관 결찰술을 받은 마우스는 시간이 지남에 따라 엽 특이적 폐쇄성 담즙 정체증이 발생함에 따라, 결찰된 엽은 정상적인 짙은 적갈색을 유지한 결찰되지 않은 엽에 비해 수술 후 14일이 지나면 색이 약간 더 옅어집니다. 결찰엽은 또한 결찰엽에 비해 결찰에 의한 국소 담즙정체에 대한 반응으로 담관 증식 및 섬유증의 증가를 보여줍니다.이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 10-12분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차에 따라 계통 추적과 같은 다른 방법을 사용하여 간 손상 및 재생 부위에 대한 줄기세포 귀환에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 부분 담관 결찰술을 사용하여 국소 효과와 전신 효과를 식별하기 위해 의미 있는 비교를 하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

partial-bile-duct-ligation-mouse-controlled-model-localized

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Cholestasis은 일반적으로 외과의와 소화기 전문 내과 모두에 의해 발생 임상 조건입니다. 가역 cholestatic 랫 모델의 생성 쥐의 작은 크기와 독특한 hepatopancreatobiliary 해부학보기에 도전하실 수 있습니다. 이 동영상이 문서는 가역 cholestatic 모델의 생성을 보여줍니다.

가역 Cholestatic 쥐 모델의 생성

이 비디오는 타우로콜레이트나트륨의 췌장 주입을 통해 급성 담췌장염이 있는 마우스 모델을 생성하는 절차를 설명합니다. 이 모델은 췌장에서 타우로콜산나트륨에 의해 유발된 병태생리학적 변화를 연구하는 데 도움이 됩니다.

급성 담췌구염 모델: 췌관관 주입을 통해 급성 담췌구염 마우스 모델을 생성하는 방법

담즙 흐름의 중단은 형태학적 변화의 특징적인 시간 의존적 순서와 함께 심각한 염증성 담즙 유발성 간 손상을 초래합니다. 여기에서는 21일에서 28일 후에 강한 섬유화 반응을 유도할 수 있는 마우스의 총담관 수술 결찰에 대한 프로토콜을 제시합니다.

마우스의 담관 결찰 : 폐쇄성 담즙에 의한 염증성 간 손상과 섬유화의 유도

소장-종속 담 즙 산 재흡수 및 간 담 즙 산 합성의 피드백 저해 조직의 항상성 및 건강에 대 한 중요 하다. 이 연구에서 우리는 ileal 절제술 ileectomy 유도 담 즙 흡수 장애, overaccumulation, 그리고 마우스 소장에서 독성 평가를 위한 마우스 모델을 설명 합니다.

Ileectomy 유도 담 즙 Overaccumulation 마우스 소장에서

우리는 마우스 간에서 담관 밀도의 정확한 정량화를 위한 다소 간단하고 민감한 방법을 제시합니다. 이 방법은 유전 및 환경 수정자의 효과와 담즙 질환의 마우스 모델에서 잠재적 인 치료의 효과를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다.

마우스 간에서 담관 밀도 결정

만성 췌장염 (CP)은 췌장의 염증과 섬유증을 특징으로하는 질병이며 종종 난치성 복통과 관련이 있습니다. 이 문서는 2,4,6 -trinitrobenzene 설포닉 산 (TNBS)로 담관 주입을 통해 CP의 마우스 모델을 생성하는 기술을 정제에 초점을 맞추고 있습니다.

담즙 덕트 TNBS 주입을 통한 만성 췌장염을 위한 마우스 모델

쥐 신생아 담관 장애를 관찰하려면 손상되지 않은 담관과 효율적인 준비가 필요합니다. 따라서 쥐 신생아에서 전체 간외 담관 시스템을 분리하기위한 새로운 접근법이 담관의 완전성을 유지하면서 성공적으로 개발되었습니다.

9 일 된 마우스 신생아의 간외 담관 및 담낭 박리

우리는 담도 폐쇄증(BA)에 대한 바이러스 유발 간 섬유증 기계론적 연구에 적합한 동물 모델과 향후 BA 치료를 위한 플랫폼을 제공하는 만성 간 섬유증의 마우스 모델을 확립했습니다.

담도 폐쇄증 연구를 위한 만성 간 섬유증의 마우스 모델

단계적 간절제술(ALPPS)을 위한 간 분할 및 문맥 결찰술의 연관성은 1단계 수술 후 몇 주 후에 놀라운 간 재생을 초래하는 것으로 나타났습니다. ALPPS를 받은 동물 모델은 잠재적인 간 재생 능력을 탐색하고 유리한 임상 결과를 달성하기 위해 개발되었습니다.

현미경 검사의 도움을 받은 병기 간절제술 절차를 위한 연관 간 분할 및 문맥 결찰의 마우스 모델

이 비디오에서 우리는 microfluidic 프로브를...

Microfluidic 프로브 : 운영 및 현지화된 표면 처리에 사용

학습하세요 마우스 부분적 담관결찰술을 통해 국소 폐쇄성 담즙정체와 간 재생 메커니즘을 연구하는 방법을. 동일 개체 내 비교가 가능한 이 수술 모델은 간 손상 회복 과정을 심층 분석하는 데 활용됩니다.

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델

더 많은 동영상 탐색