샘플 저장소 암 바이오 마커의 평가를 위한 유용한 툴으로 말린 혈액 및 혈 청 관광 명소

이 방법은 개발도상국 환자의 바이오마커를 연구할 수 있는 기회와 같은 중개 연구의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 동결 없이 최소 2주 동안 혈액 및 혈청 샘플을 보관할 수 있고 qPCR 및 ELISA와 같은 다운스트림 분석을 위한 고품질 재료를 제공할 수 있다는 것입니다. 이 기술의 의미는 암 및 전염병과 같은 질병의 진단으로 확장됩니다.

이 방법은 산전 질환 연구 또는 HIV와 같은 감염 병리학 분석과 같은 진단 또는 연구 분야에도 적용될 수 있습니다. 이 방법에 대한 아이디어는 냉동 샘플을 사용할 수 없는 백인과 아프리카 사례 시리즈 간의 바이오마커를 비교하기 시작했을 때 처음 떠올랐습니다. 이 방법의 시각적 시연은 혈액 탐지 단계를 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다.

이 절차에서는 3ml의 혈액 샘플을 5.4mg의 EDTA가 함유된 3ml 튜브에 수집합니다. 세이버 카드의 오른쪽 하단 모서리에 환자 코드 번호를 씁니다. 5ml 피펫으로 혈액을 조심스럽게 다시 현탁시킵니다.

다음으로, 피펫팅을 하고 혈액 한 점을 세이버 카드에 옮깁니다. 각 혈액 분취액에 대해 새로운 팁을 사용하여 스포팅을 반복하여 총 3-5개의 핏줄을 얻습니다. 건조된 혈흔 또는 DBS를 실온에서 밤새 건조시키도록 두고, 세이버 카드의 덮개를 개방된 비흡수성 표면 위에 수평으로 열고 직사광선을 피하십시오.

다음 날에는 카드를 사용할 때까지 건조제가 든 비닐 봉지에 넣어 실온에서 보관하십시오. 세이버 카드에서 세 개의 마른 혈액 반점에서 DNA를 추출합니다. 카드에서 각 DBS를 잘라내고 카드에서 분리하는 것으로 시작합니다.

분리된 DBS를 직경 약 1mm의 작은 조각으로 자릅니다. 하나의 DBS에서 작은 조각을 1.5ml 원심분리기 튜브에 넣습니다. 샘플을 분해하려면 시판되는 DNA 추출 키트에서 180마이크로리터의 용해 버퍼를 튜브에 추가한 다음 볼텍싱으로 20마이크로리터의 proteinase K.Mix를 추가합니다.

튜브를 보온 인큐베이터에 넣고 섭씨 56도에서 60분 동안 흔들면서 배양합니다. 배양이 끝나면 튜브를 잠시 원심분리하여 뚜껑에서 방울을 제거합니다. 200마이크로리터의 용해 버퍼 2를 추가하고 10초 동안 볼텍싱하여 세척을 시작합니다.

튜브를 온도 혼합기에 넣고 섭씨 70도에서 10분 동안 배양합니다. elusion 컬럼을 새 2ml 수집 튜브에 넣고 이전 튜브를 버립니다. 500마이크로리터의 세척 버퍼와 6000배 중력에서 1분 동안 원심분리기를 추가합니다.

컬럼을 새 2ml 수집 튜브에 넣고 기존 튜브를 버립니다. 500마이크로리터의 세척 버퍼 2를 추가하고 6000배 중력에서 1분 동안 원심분리합니다. 컬럼을 새 2ml 수집 튜브에 넣고 기존 튜브를 버립니다.

20, 막을 말리기 위하여 3 분 동안 중력에 000배 분리기. DNA를 용리하려면 컬럼을 새로운 1.5ml 원심분리 튜브에 넣고 수집 튜브를 폐기합니다. 50마이크로리터의 증류수를 멤브레인 중앙에 놓고 실온에서 10분 동안 배양합니다.

20, 1 분 동안 000 시간 중력에서 튜브를 원심분리하십시오. 용리액을 모아 멤브레인 중앙에 다시 놓습니다. 20, 1 분 동안 000 시간 중력에 관을 다시 원심 분리하십시오.

멤브레인을 버립니다. 분광 광도계를 사용하여 DNA 농도를 측정 한 후 사용할 때까지 DNA를 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오. 이 절차를 위해 먼저 EDTA가 없는 7ml 튜브에 7ml의 말초 혈액 샘플을 수집합니다.

혈액 샘플을 실온에서 30분 동안 응고시키도록 둡니다. 세이버 카드의 오른쪽 하단 모서리에 환자 코드 번호를 씁니다. 혈액 샘플을 실온에서 15분 동안 1100배 중력으로 원심분리합니다.

튜브에서 상등액을 제거하고 새 15ml 튜브로 옮깁니다. 5ml 피펫으로 혈액을 조심스럽게 다시 현탁시킵니다. 피펫팅하고 세럼 한 지점을 세이버 카드에 옮깁니다.

반점을 반복하면 총 3-5개의 핏자국이 생깁니다. 건조된 혈청 반점을 세이버 카드의 덮개를 연 상태로 실온에서 밤새 건조시킵니다. 다음 날에는 카드를 사용할 때까지 건조제가 든 비닐 봉지에 넣어 실온에서 보관하십시오.

보관 기간이 14일 이상인 경우 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오. 필요한 경우 각 샘플에 대해 DSS를 해동하여 ELISA 분석을 준비합니다. DSS에서 단백질을 용출하려면 DSS 하나를 직경 약 1mm의 작은 조각으로 자르고 1.5ml 튜브에 넣습니다.

그런 다음 4마이크로리터의 PBS를 추가합니다. 밤새 섭씨 4도의 저속으로 샘플을 흔듭니다. 다음 날, 시판되는 키트를 사용하여 분비 단백질 또는 성장 인자 분석을 위한 혈청 샘플로 용리된 단백질을 적절하게 희석하여 사용합니다.

이 프로토콜에서 혈액 및 혈청 샘플은 실온에서 여과지에 건조된 반점으로 보관되었습니다. 대표적인 단백질 절약 카드는 혈액 채취 전후에 표시됩니다. 여과지에 보관하는 것과 혈액을 용출하는 절차가 샘플 품질을 방해하지 않는지 확인하기 위해 비타민 D 결합 단백질 또는 DBP 수치에 대한 ELISA 분석을 2밀리리터 튜브에 채취한 8개의 혈청 샘플에 대해 수행하고 섭씨 영하 80도에서 즉시 보관하거나 건조된 혈청 반점으로 수집했습니다.

일치하는 샘플 간의 변동 계수 또는 CV는 2%에서 24% 사이였으며 평균 CV는 9.6%였습니다.이 기술을 마스터하면 제대로 수행되면 10, 15분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차에 따라 분자 생물학 또는 단백질 분석의 다운스트림 방법을 수행할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 중개 연구 및 바이오마커 분석 분야의 연구를 가능하게 하여 표준 조건에서 생물학적 샘플을 저장할 수 있는 실험실 장비를 갖춘 전 세계 기관과 협력할

이 비디오를 시청한 후에는 혈액 샘플을 건조된 혈액 및 혈청 반점에 올바르게 보관하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 혈액 및 화학 시약으로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으므로 이 절차를 수행하는 동안 항상 장갑과 실험복을 착용하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.