2018년 2월 22일
이 프로토콜은 건강 한 쥐 만성 예측할 수에 노출에 의해 periodthrough 감염 스트레스 (CUS) 쥐 주어진된 시간 동안 우울증을 계약 수 새로운 모델을 설명 합니다.
이 모델의 전반적인 목표는 쥐에서 우울증 전염을 확립하는 것입니다. 이 방법은 전염성 우울증의 작용 기전, 예방, 억제 및 치료와 같은 행동 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 이것이 전염성 우울증을 확립하는 새로운 모델이라는 것입니다.
이 기법의 함의는 우울증 치료로 확장되는데, 현재로서는 전염성 우울증을 연구할 수 있는 기존 형식이 없기 때문이다. 실험 절차를 위해 각각 무게가 300g에서 350g 사이인 명백한 병리가 없는 수컷 Sprague Dawley 쥐를 선택합니다. 케이지 당 3 마리의 쥐를 수용하고 차우와 물을 자유롭게 사용할 수 있습니다.
12시간의 명암 주기로 최소 2주간의 적응을 허용합니다. 실험을 시작하기 전에 3일간의 자당 선호도 테스트를 사용하여 모든 쥐를 대상으로 우울증과 유사한 행동의 존재 여부를 테스트합니다. 이렇게하려면 암흑 주기 동안 주택과 같은 방의 개별 케이지에 쥐를 배치하십시오.
각 케이지에 100%자당 용액 100ml 병을 24시간 동안 놓고 적응할 수 있도록 합니다. 24 시간이 지나면 병을 제거하고 12 시간 동안 쥐에게 음식과 물을 주지 마십시오. 12시간 후, 100ml의 1%자당 용액과 100ml의 수돗물을 담은 두 병을 각 케이지에 4시간 동안 넣습니다.
4 시간 후, 소비 된 자당 용액과 물에 대한 부피를 밀리리터 단위로 기록하고 그림과 같이 자당 선호도에 대한 친화도를 계산하십시오. 우울증 검사에서 양성 반응을 보인 쥐를 제거하고, 우울증에 걸린 쥐와 같은 우리에 갇혀 있던 쥐를 제거한다. 필요한 경우 무작위로 추가 쥐를 제외하여 최종 그룹을 만듭니다.
번호가 매겨진 스티커를 사용하여 쥐에 태그를 지정합니다. 우울증을 유발하기 위해, 예측할 수 없는 만성 스트레스에 노출된 그룹의 쥐 60마리를 다음 7가지 스트레스 요인 중 2가지에 노출시켰다. 5주 연속으로 무작위 순서로 낮에는 하나의 스트레스 요인을, 밤에는 다른 하나의 스트레스 요인을 사용하십시오.
18시간 동안 우리당 평소 3마리 대신 6마리의 쥐를 배치하여 쥐를 더 큰 그룹으로 수용합니다. 쥐를 세로축을 따라 45도 기울어진 우리에 3시간 동안 놓습니다. 음식은 18 시간 동안 쥐를 박탈합니다.
쥐에게 18시간 동안 물을 주지 말고 1시간 후에 빈 물병에 노출시킵니다. 밤 주기 동안 8시간 동안 젖은 침구가 있는 새장에 쥐를 넣습니다. 쥐를 일주일에 두 번 역 명암 주기로 24시간 동안 연속 조명에 노출시킵니다.
밤 주기 동안 5분 동안 섭씨 40도로 설정된 더운 환경에 쥐를 놓습니다. 선택한 두 가지 스트레스 요인에 노출된 후 자당 선호도 테스트를 수행하여 우울증의 진행을 확인합니다. 먼저, CUS에 노출된 쥐 2마리를 케이지당 30개의 서로 다른 케이지에 배치합니다.
그런 다음 CUS에 노출된 쥐 2마리가 있는 각 케이지에 우울증 전염 그룹의 쥐 한 마리를 추가하고 표준 조건에서 5주 동안 동거를 허용합니다. 5주간의 동거 후, 모든 그룹에 자당 선호도, 야외 및 강제 수영 테스트를 실시합니다. 각 동물을 소개하기 전에 5% 알코올로 장치를 청소하십시오.
벽을 향한 열린 들판 모서리에 쥐를 놓습니다. 5분 동안 비디오 카메라로 쥐의 행동을 기록한다. 총 이동 거리, 필드 중앙 부분의 속도, 필드 중앙 부분에서 보낸 시간에 대한 사후 기록을 분석합니다.
습관화를 위해 실온의 물이 담긴 유리 실린더에 쥐를 넣고 15분 동안 수영을 합니다. 실린더에서 쥐를 제거하고 종이 타월로 말리고 쥐를 가정용 케이지로 되돌리기 전에 15분 동안 따뜻한 케이지에 넣습니다. 다음 날, 5분간의 수영 세션을 비디오로 녹화하고 부동자세, 등반, 배변
기록 등을 분석합니다.우울증을 유발하기 위해 쥐를 5주 동안 흉부 초음파 검사에 노출시킨 후, 건강한 쥐를 흉부 초음파 검사에 노출된 쥐에게 5주 동안 더 노출시킨 후, 두 그룹의 쥐 모두 자당에 대한 선호도 감소에서 알 수 있듯이 마지막에 우울증과 유사한 행동을 보였다. 야외 테스트에서 CUS에 노출된 전염 그룹과 우울증 전염 그룹 모두의 쥐는 대조군에 비해 총 이동 거리가 감소하고 평균 속도가 감소했습니다. 두 실험 그룹에서 대조군의 쥐가 열린 들판 중앙에서 보낸 시간은 유의하지 않게 달랐습니다.
흉초음파 검사와 우울증 전염성 쥐 모두 강제 수영 테스트 후 확장된 부동성을 보였다. 그러나, 현저하게 확장된 비활동 시간은 대조군과 비교했을 때 CUS에 노출된 그룹에서만 등록되었다. 또 다른 조사된 강제 수영 테스트 매개변수인 등반 시간에서 CUS에 노출된 두 그룹과 전염성 우울증 쥐는 대조군과 비교할 때 매우 제한된 등반 특성을 보였습니다.
배변 비율에 대한 평가는 대조군과 비교하여 두 실험군 모두에서 많은 양의 대변을 등록하는 결과를 낳았습니다. 이 절차를 시도하는 동안, 육체 노동에 대한 수요가 높기 때문에 만성적인 예측할 수 없는 스트레스 모델 동안 스트레스 요인의 무작위 회전을 미리 계획하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 우울증 이후의 행동 변화를 추가로 조사하기 위해 고가 미로 또는 거울 테스트와 같은 다른 테스트를 수행할 수 있습니다.
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본 연구는 전염성 우울증에 대한 최초의 동물 모델을 구축하여, 건강한 쥐가 만성 예측 불가능 스트레스(CUS)에 노출된 쥐와 함께 생활할 때 우울증 유사 행동이 나타날 수 있음을 입증하였습니다. 본 프로토콜은 통제된 실험실 환경에서 우울증 전염의 메커니즘, 예방 및 치료 방법을 조사하기 위한 재현 가능한 프레임워크를 제공합니다.
이 모델은 기분 장애의 사회적 전파를 이해하는 데 중요한 영향을 미치는 현상인 우울증 전염 연구를 가능하게 함으로써 행동 신경과학의 결정적인 공백을 메웁니다. 이는 집단 내 우울증 확산의 기저 메커니즘을 조사할 수 있는 전임상 시스템을 제공하며, 전염 효과를 예방하거나 완화하기 위한 중재법의 타겟 검증을 지원합니다. 이러한 접근 방식은 기존의 스트레스 유도 모델에서는 포착되지 않는 우울증의 사회적 매개 차원을 모델링함으로써 치료 전략의 리스크를 줄이는 예측 가치를 제공합니다.
이 방법은 표적 가설 검증부터 전임상 검증에 이르는 발견 연속체 내에 적합하며, 특히 사회적 영향으로 인한 행동 표현형에 유용합니다. 이를 통해 직접적인 스트레스 노출뿐만 아니라 환경적 전이를 통해 우울증이 발생하는 모델에서 표적 결합(target engagement)을 조기에 평가할 수 있습니다.