Name: 마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: 배우세요 당뇨병 마우스에서 대막에 섬유소 수소겔과 함께 섬 이식하는 방법을. 이 기술은 1형 당뇨병 치료 연구에 활용되며 섬 생존율을 향상시킵니다.

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이 작품의 저자 중 일부 국가 키 R & D 중국 프로그램 (2017YFC1103704), 심천 (SZSM201412020), 높은 수준의 의료 분야 건설의 심천 (2016031638)에 대 한 기금에서에서 의학의 인민 프로젝트에서 교부 금에 의해 부분적으로 지원 되었다 심천 과학 및 기술 (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), 보건 및 가족 계획 위원회 (SZXJ2017021)의 심천 기초의 기초.

이 연구에 사용 된 모든 마우스 의료 동물 센터의 광 동성에서 얻은 했다. 동물의 사용은 동물 복지의 원칙에 따라 윤리 검토 위원회의 심천 제 2 인민 병원에 의해 승인 되었다.
1. 섬 이식은 Omentum 하
참고:이 프로토콜 2 인을 달성 하기 위해 필요 합니다.
<ol><li>표 1에 나열 되는 수술 재료를 조립 한다. 커튼 및 disposables와 같은 메 마른 재료로 외과 영역에서 무 균 필드를 준비 하 고 수술을 통해 무 균 상태를 유지. 모든 수술 기구를 소독. 멸 균 가운 착용.</li>
	<li>독도 stereomicroscope에서 200 µ L 피 펫 팁을 사용 하 여 선택 합니다. 각 마우스 450-500 섬 상응 (IEQ) tansplant 당 받게 됩니다. 각 동물에 대 한 CMRL-1066 매체의 100 µ L 살 균 1.5 mL 스냅-탑 튜브에 단일 이식에 대 한 충분 한 독도 놓습니다. 참고: 독도 이식의 날에 고립 될 수 있다 하지만 격리 프로세스에 대 한 복구를 허용 하도록 하루 전에 그들을 분리 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>이식 준비까지 얼음에 독도 스냅-탑 튜브를 유지.</li>
	<li>지하실 막 매트릭스 히드로 해 동 고-20 ° C 냉장고에서 그것을 제거한 후 얼음에 그것을 유지. 히드로 4 ° C ~ 10 ° C에 액체 이며 높은 온도에 고형화 한다.</li>
	<li>모든 당뇨병 받는 사람 마우스 태그 및 무게. Intraperitoneally 60 mg/kg pentobarbital 나트륨을 주입. 테스트는 발가락 꼬 집 음을 투여 하 여 마 취의 깊이. 동물 꼬 집 음에 반응 하는 경우는 추가 10 mg/kg pentobarbital 나트륨을 제공 합니다. 경우 없는 철수 반사, 마 취의는 수술에 대 한 올바른.</li>
	<li>70% 에탄올을 사용 하 여 복 부에 수술 부위의 면봉. Razer 블레이드와 사이트에서 머리를 면도 하 고 소독 Iodophor 지역. 수 의사 연 고 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 눈을 관리 합니다.</li>
	<li>복 부 중간에 따라 복 부 절 개의 4 ~ 5 cm. 이동 열 왼쪽에 창 안과 위를 사용 하 고 수술 절차 동안 과도 한 탈수를 방지 하기 위해 염 분 젖은 거 즈로 커버.</li>
	<li>면봉을 사용 하 여 완벽 하 게 위장의 시야 노출과 omentum (위 아래에 있는)을 찾습니다. 두 켤레 미세 집게를 사용 하 여 distend는 omentum. 끊어지고 손상 되지 않도록 주의.</li>
	<li>완전히는 하이드로 겔이 시점에서 해 동. 30 독도와 튜브를 회전 g 및 제거는 상쾌한 x 200에서 s. 하이드로 겔의 50 µ L 발음, 독도, 포함 된 튜브에 그것을 추가 하 고 부드럽게 거품의 형성을 방지 하는 믹스 resuspend. 절차 동안 얼음에 튜브를 유지.</li>
	<li>집게의 2 개 쌍을 사용 하 여는 omentum의 가장자리를 선택 하 고 부드럽게 위 벽과 창 자 섬 이식 한 액체의 작은 볼륨을 수용할 수 있는 사이 홈을 형성 하기 위하여 그것을 인상.</li>
	<li>두 번째 사람은 절차에 200 µ L 피 펫 팁 resuspended 섬-히드로 혼합물 (튜브의 전체 내용)를 발음, 홈으로 콘텐츠를 전달 하자.</li>
	<li>혼합물 부드럽게 올리거나 낮추는 omentum의 가장자리에 의해 홈에 잘 배치 됩니다 확인 하십시오. 체온의 효과로 하이드로 겔 전에 3 분 이내 혼합물의 위치 완전 한 굳은 것 이다. 후에 하이드로 겔 세트, 커버는 이식 omentum 접어. 참고:는 히드로 굳은는 omentum 주변 위 벽에 준수 합니다.</li>
	<li>히드로 경화 완전히 후 면봉을 사용 하 여 내장을 만지지 이식의 사이트 돌 복 부 구멍으로 위치를.</li>
	<li>20 µ L cephalosporin의 추가 (5 ~ 10 mg) 감염을 방지 하기 위해 복 부 구멍으로를 사용 하 여 4-0 봉합 복 부를 닫습니다.</li>
	<li>그것의 감 금 소를 마우스를 반환 하 고 마우스 받는 사람 각각에 대 한 모든 단계를 반복 합니다. 쥐를 따뜻하게 유지 하 고 그들은 완전히 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 때까지 시각적으로 모니터링 합니다. 그들은 완전히 복구 될 때까지 쥐를 다른 동물에서 별도 유지.</li>
	<li>수술 후 예방으로 일주일 동안 매일 50 µ L cefazolin 나트륨 (0.05 mg/mL)의 주입. Bupivicaine + Buprenorphine 관리, 즉 0.25%의 1-3 방울을 적용 상처 클립의 배치 이전에 몸에 붙이기도 절 개 사이트에 Bupivicaine. 관리 Buprenorphine(0.03 mg/ml with sterile 0.9% saline, 0.05-0.10 mg/kg) 복 (IP) 루트를 통해.</li>
	<li>측정 비 단식 혈액 포도 당 수준을 혈액 포도 당 미터를 사용 하 여 꼬리 정 맥 혈액 샘플에서 이식 후 하루에 한 번. omentum, 이식 때 섬 이식 지연 기능 하 고 2-3 주 동안 완전 하 게 정상적인 혈액 포도 당 수준에 도달 하지 않을 수 있습니다.</li>
	<li>조직학, omental 이식 다음 이식 하는 실험의 끝에 마우스에서 제거 합니다. 조직학 프로토콜에 따라 조직 수정. 이식 immunostaining 또는 면역 형광 연구 분석할 수 있습니다.</li>
</ol>2. 대체는 Omentum에 이식 방법
참고: 실 온에서 사용 되는 대체 섬유 소-트 롬 빈 히드로 지하실 멤브레인 매트릭스 하이드로 겔에 대 한 대체 수 있습니다. 2 부품, 섬유 소 마감재 단백질 해결책 (50 U/mL 트 롬 빈 10 mg/mL fibrinogen) 그것에 의하여 이루어져 있다. 구성 요소가 혼합 되어, 그들은 장소에는 독도 보유 하는 응고 형성.
<ol><li>섬유 소 thombin 하이드로 겔 화합물을 사용 하 여 실내 온도에. 1.2 단계에서 각 마우스 이식 당 450-500 섬 등가물 (IEQ)를 받게 됩니다. CMRL-1066 매체의 100 µ L 살 균 1.5 mL 스냅-탑 튜브에는 독도 놓습니다. 즉시 이식, 전에 10 cm의 길이 대 한 살 균 PE50 튜브에는 독도 발음 하 고 부드럽게 원심 (30에서 200 x g s) 느슨한 펠 릿을 형성 하기 위하여.</li>
	<li>퍼져 omentum와 (단계 1.5-1.8) 위에 말한 대로 동물을 준비 합니다. 하이드로 겔 구성 요소 (10 µ L/각)을 혼합 하 고는 omentum에. (그림 3D)</li>
	<li>바로 독도 히드로에 튜브에서 추방. 히드로 독도 주위 응고를 형성 한다. (그림 3E)</li>
	<li>히드로와 주머니를 형성 하는 독도 omentum 접어. (그림 3 층) 1.13 1.18 단계를 계속 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+research+and+clinical+practice%22%5BJournal%5D)">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).</li>
<li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+Induction+Immunotherapy+Promotes+Long-Term+Insulin+Independence+After+Islet+Transplantation+in+Type+1+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes.</a> American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).</li>
<li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+lancet%22%5BJournal%5D)">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li>
<li>Nilsson, B., Ekdahl, K. N., Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction+to+improve+islets+of+Langerhans+engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Control of instant blood-mediated inflammatory reaction to improve islets of Langerhans engraftment.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 16 (6), 620-626 (2011).</li>
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<li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes%3A+recent+advances+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+metabolic+syndrome+and+obesity%3A+targets+and+therapy%22%5BJournal%5D)">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211(2014).</li>
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<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. , (2016).</li>
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<li>Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28109023">Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment.</a> Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).</li>
<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).</li>
<li>Hajizadeh-Saffar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+VEGF+expression+by+human+embryonic+stem+cell-derived+mesenchymal+stromal+cells+reduces+the+minimal+islet+mass+required+to+reverse+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li>
</ol>

저자는 충돌의 관심을 보고.

문맥을 통해 간 섬 이식 가장 일반적으로 사용 되는 작은 섬 이식의 방법 인간, 하지만 여전히 포털 정 맥 혈전 증과 간 steatosis17등 효율성과 안전 문제입니다. 최근 연구는 omentum 간, 하지만 더 많은 연구 필요 임상 번역12,14,,1819전에 실시 해야 적당 한 대안이 있을 수 있습니다 보여줍니다.
마우스 섬 이식에 대 한 사이트는 omentum 테스트를 위해 적합 한 모델입니다. 마우스에는 omentum는 위 벽 아래 있으며 일반적으로 접혀 있다. 그러나, 쥐에서 omentum의 크기는 작고 접근 하기 어려운. 이식에 대 한 사용, 그것은 부드럽게 전체 크기에 그것을 밖으로 확산 다음 독...

국제 당뇨병 연맹 (IDF)에 따르면 당뇨병 mellitus 현재 382 백만 사람들, 20351592 백만 명 예상된 증가 함께 적용 됩니다. 두 수용자와 xenogeneic 섬 이식 조직 면역 치료가 필요 합니다. 면역 억제, 없이 면역 거부 이식 손실2의 주요 원인입니다. 또한 중재 인스턴트 혈액 염증 반응 (IBMIR)3,4인 이식된 섬 손실의 중요 한 문제가입니다. 그러나, syngeneic와 같은 면역 반응의 부재에도 자동 이식 모델, 작은 섬 세포는 문맥을 통해 간으로 이식 가난한 혈액 등 불리 한 환경 조건, 또는 염증 때문에 손실 됩니다 또는 공급 감소 산소 및 영양소5,6. 그 결과, 장기 신진 대사 기능을 보장 하기 위해 높은 섬 번호는 감소 engraftment7초기 세포 손실을 보상 하는 데 필요한.
섬 engraftment를 최적화 하기 위해 시도, 여러 대체 해 부 사이트 실험적으로 조사 뿐 아니라 임상, 약속, 아직 하지 확실 한 결과8. 대체 사이트 중 일부는 간단 하 고 안전한 액세스를 제공 하는 반면 (예., 피부, 신장 캡슐, 위 submucosa 및 눈의 앞쪽 챔버) 또는 더 큰 섬 대 중을 위한 더 넓은 표면 (예., 복 막 구멍), 생존 및 생리 신진 대사 이식된 독도의 제한는 성능과 우려9유지. 섬 engraftment에 대 한 더 적합 한 사이트에 대 한 검색 진행 중 이다.
omentum 많은 해 부 사이트를 작은 섬 이식의 초기 개발에 조사 하 고 독도10,,1112,13, 성공적인 환경 입증 했다 중 하나 였습니다. 14. 그러나, intraportal 섬 주입 임상 선택 인해 일부 절차의 상대적 단순 되었고 동물에 이른 성공 모델6. 또한, 부분적으로, 원판이 관련 사이트, 특히 대규모 초기 섬 손실, 덜 이해 하 고 덜 제한 필드 실험 섬 이식의 초기 시절에 했다 성숙. 최근 강력한 증거를 나타내는 혈관 내 섬 주입에서 멀리 이상적는 omentum은 세포 이식에 대 한 잠재적으로 가치 있는 사이트로 다시 신흥.
(Omental 주머니의 형태로) omentum 간15,16상대적 이점을 제공합니다. 그것은 쉽게 접근할 수 있는 잘 vascularized입니다. 이식 (필요한 경우) 생 검의 검색 수 있습니다. 독도 의해 경험 하는 허 혈 성 기간 간에 비해 감소 하 고 있는 omentum 불가능 intraportally, 어디 포털 압력에서 상승 큰 섬 대 중 합병증을 일으킬 수 있습니다 상대적으로 받아들일 수 있다.
이식의 syngeneic 마우스 모델 연구, 고용 6-8 주 몸 무게의 20-25 g. 섬 받는 250의 복용량 streptozotocin의 단일 주사와 당뇨병 렌더링 했다와 오래 된 사이 남성 마우스 C57BL/6에서에서 테스트 프로토콜에 사용 된 mg/kg ip입니다. 당뇨병의 유도 경우 마우스의 혈액 포도 당 수준 24 mmol/L 48 h 보다 큰 주입 후 최소 5 일에 대 한 해당 수준의 위 남아 성공적인 간주 될 수 있습니다.
Syngeneic 독도 일부 수정 이전 게시 된 방법에 따라 나이 일치 하는 기증자의 췌 장 으로부터 격리 했다. 간단히는 콜라 대신 담 관 담 낭에 주입 했다. 이 주입의 용이성을 촉진 하기 위하여 개선으로 이루어졌다. 콜라 주입이 했다 뒤에 부 화, 조직 파괴, 밀도 그라데이션 분리 및 순수 독도를 손으로 따기. 독도 아래 10% 열 비활성화 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 37 ° C에서 플라스 크 T175에에서 보충 하는 CMRL-1066 매체에서 하룻밤 배양 했다 이식 전에 95% 공기-5% CO2 .

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 inch (12-13 cm) 가위</td><td>RWD 생명 과학&nbsp;</td><td>S12030-11</td><td></td></tr><tr><td>세밀한 집게</td><td>RWD 생명 과학</td><td>F11010-13</td><td></td></tr><tr><td>작은 상처 클립</td><td>RWD 생명 과학</td><td>R33003-01</td><td></td></tr><tr><td>Acutenaculum</td><td>RWD 생명 과학</td><td>F31044-13</td><td></td></tr><tr><td>2 쌍의 조직 집게</td><td>RWD 생명 과학</td><td>&nbsp; F13023-10</td><td></td></tr><tr><td>4-0 바늘 봉합사</td><td>Chenghe, 중국</td><td>17094</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; L 피펫 및 팁</td><td>Gilson</td><td>PN11</td><td></td></tr><tr><td>One Touch ultraeasy Basic 혈당 모니터링 시스템&nbsp; &nbsp;</td><td>존슨 & Johnson</td><td>33391713</td><td></td></tr><tr><td>면도날</td><td>Philips</td><td>HC1099/15</td><td></td></tr><tr><td>Material and animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodium</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P3761</td><td>마취용&nbsp;</td></tr><tr><td>하이드로겔&nbsp;</td><td>bdbiosciences.com</td><td>356234</td><td>베이스먼트 멤브레인 매트릭스</td></tr><tr><td>피브린-트롬빈 하이드로겔&nbsp;</td><td>Baxter.com</td><td>1501250</td><td>성분은 혼합시 응고</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Yingniu medical, 안후이, 중국</td><td>23170608</td><td></td></tr><tr><td>요오도퍼</td><td>Lierkang 의료 기술, Shangdong, 중국</td><td>170521</td><td></td></tr><tr><td>생리식염수</td><td>Baxter.com</td><td>2B1324</td><td></td></tr><tr><td>Cephalosporin</td><td>Lukang medical, Shangdong, China</td><td>150303</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin</td><td>Baxter.com</td><td>2G3508</td><td></td></tr><tr><td>윤활제 안연</td><td>203964</td><td></td><td>주요 제약</td></tr><tr><td>스트렙토조토신</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해 효소 V 형</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>C9262</td><td></td></tr><tr><td>CMRL-1066 미디어</td><td>celltrans, 온주, 중국</td><td>X018D1</td><td></td></tr><tr><td>histopaque</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>10771</td><td>밀도 구배</td></tr><tr><td>PE50 튜빙</td><td>Braintreesci.com</td><td>PE50 100 FT</td><td>폴리에틸렌 .023" x .038</td></tr><tr><td>Calcein AM</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>C1359</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iodide</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>최적 절단 온도 화합물 (OCT)</td><td>Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL</td><td>4583</td><td>임베딩 배지</td></tr><tr><td>인슐린 항체</td><td>세포 신호 기술, Danvers, MA 01923</td><td>8138S</td><td></td></tr><tr><td>헤마톡실린 염색 매체</td><td>세포 신호 전달 기술, Danvers, MA 01923</td><td>14166S</td><td></td></tr><tr><td>에오신 염색 매체</td><td>Beyotime Biotech, China</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.&nbsp;</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6 생쥐</td><td>의학 동물 센터 광동성</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>GE 헬스케어 생명 과학</td><td>SH30084</td><td></td></tr><tr><td>T175 플라스크</td><td>팔콘</td><td>353112</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 스냅 탑 튜브</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에 omentum 작은 섬 이식 하는 방법

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

타입-1 당뇨병에 대 한 잠재적인 치료를 작은 섬 이식 제안 되었습니다. 최근 강력한 증거 나타냅니다 혈관 내 섬 주입 이상 까지입니다 이며 따라서는 omentum 섬 이식에 대 한 잠재적으로 가치 있는 사이트로 다시 신흥. 이 실험에는 고품질 독도의 고립과 당뇨병 받는 사람에 게 독도의 주입 필요합니다. omentum에 이식 수술 단계를 더 시각적으로 설명 될 수 있다 필요 합니다. 여기,이 절차에 대 한 자세한 내용은 표시 됩니다. 당뇨병 쥐의 omental 주머니에 혼합물을 배치 하기 전에 히드로와 격리 된 독도 혼합의 두 가지 방법은 여기 설명 되어 있습니다. 다른 hydrogels 다른 조건을 위해 사용 됩니다. Syngeneic 독도 omentum에서 받는 사람 당뇨 마우스의 혈당은 최대 35 일 동안 감시 되었다. 일부 동물 면역 조직화 학적인 분석을 수행 하기 위해 14 일 후에 희생 되었다. 전 임상 이식 이렇게 예비 데이터 임상 이식에 번역을 사용할 수 있습니다.

췌 장 post-digestive 상태는 그림 1A에 표시 됩니다. 순화 독도 그림 1B에서 표시 됩니다. Dithizone 얼룩이 지 고는 독도의 생존 테스트는 그림 2에 표시 됩니다. omentum 작은 섬 이식의 주요 단계는 그림 3에 나와 있습니다. 혈액 포도 당 수준은 omental 이식 후 받는 사람의 그림 4에 나와 있습니다. 이식의 조직학 분석은 그림 5에 표시 됩니다.
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마우스에 독도의 omental 이식 하는 방법을 소개 합니다. 격리 된 독도 히드로와 혼합 하 고 혼합 당뇨 마우스의 omental 주머니에 배치 됩니다. 그리고, 혈액 포도 당 감시 면역 조직화 학적인 분석을 수행 합니다.

마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

이 방법은 섬 이식 과 같은 섬 이식 분야의 주요 질문에 대한 답변을 도와 줍니다. 이 기술의 의미는 omentum이 섬 이식을 위한 잠재적인 가치 사이트로 다시 나타나기 때문에 타입-I 당뇨병의 치료로 확장합니다. 이 기술의 주요 장점은 분리된 섬이 하이드로겔과 혼합되어 혼합물이 당뇨 마우스의 오멘텀 파우치에 배치된다는 것입니다.커튼과 일회용 과 같은 멸균 물질로 수술 부위의 무균 필드를 준비하여 시작합니다. 멸균 수술 기구를 무균 장에 놓습니다. 200 마이크로리터 파이펫 팁을 사용하여 스테레오 현미경 으로 기증자 섬을 선택합니다.각 동물에 대해 450~500개의 섬을 수집하고 CMRL 10 66 배지 100마이크로리터가 있는 멸균 1.5 밀리리터 스냅 탑 튜브로 이송한다. 이식할 준비가 될 때까지 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 섬이 수확되면 지하 막 매트릭스 하이드로겔을 얼음 위에 해동하십시오.무게와 태그 모든 당뇨병 받는 사람 마우스. 제도적으로 승인된 프로토콜에 따라 첫 번째 마우스를 마취한 후 발가락 핀치를 투여하여 마취의 깊이를 테스트합니다. 금단 반사가없는 경우 마취 수준은 수술에 적합합니다.마취 하에 건조를 방지하기 위해 수의사 연고를 눈에 투여하십시오. 70%에탄올로 복부를 면봉하십시오. 그런 다음 수술 부위에서 머리카락을 면도합니다.멸균 커튼으로 동물을 덮고 요오드 스크럽으로 이 지역을 소독하십시오. 안과 가위를 사용하여 복부의 중간선을 따라 4~5센티미터 절개를 만든 후, 창자를 왼쪽으로 이동하고 수술 시 탈수를 방지하기 위해 식염수에 젖은 거즈로 덮습니다. 그런 다음 면봉을 사용하여 위장을 완전히 노출시키고 위 아래에 있는 오멘텀을 찾습니다.이 시점에서 하이드로겔은 완전히 해동되어야 합니다. 섬이 들어 있는 튜브를 200배 g에서 30초 간 회전시다. 스핀 후 상체를 제거합니다.그런 다음 하이드로겔의 50 마이크로리터를 섬이 함유하는 튜브에 추가하고 거품의 형성을 피하여 부드럽게 섞는다. 다음으로 두 쌍의 집게를 사용하여 모멘텀의 가장자리를 집어 들고 부드럽게 올려 위 벽과 내장 사이에 홈을 형성합니다. 수술의 이 시점에서, 200 마이크로리터 파이펫 팁으로 리펜시드 섬 하이드로겔 혼합물을 흡인하고 홈으로 전달하는 두 번째 사람이 필요합니다.혼합물이 오멘텀의 가장자리를 부드럽게 올리거나 내리면서 홈에 잘 배치되었는지 확인합니다. 하이드로겔이 고화되기 3분 전에 혼합물의 위치를 완료합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리 프로토콜이 정상적으로 쉽게 생쥐의 신장에 따라 캡슐 아일 레츠이나 세포를 제공하기 위해 개발되었습니다. 세포 신장 캡슐에서 세포를 이식에 사용되는 최종 튜브에 쥐똥에 집중되어있다. 이 기법의 용이성은 세포와 마우스에 스트레스를 줄여줍니다.

당뇨병 마우스의 신장 캡슐으로 췌장 아일 레츠의 이식

절연 아일 레츠의 이식은 제 1 형 당뇨병에 대한 잠재적인 치료로 제안되었습니다. 여기 마우스 pancreata에서 아일 레츠를 분리하고 신장의 subcapsular 공간을 이식하는 방법을 설명합니다.

Murine 아일릿 절연 및 Subcapsular 신장 이식을위한 방법

이 비디오는 생체 내에서 인간 췌장 이식편의 혈관 재생화를 모니터링하기 위해 인간 췌장도를 마우스 눈의 전방에 이식하는 프로토콜을 설명합니다. 또한 이식편의 캡슐화 및 혈관화를 촉진하는 데 있어 수용자 세포와 기증자 세포의 기여도를 이해하는 데 도움이 됩니다.

췌장섬 접목: 생체 내 이미징을 위해 췌장섬을 마우스 눈의 전방에 이식하는 방법

이 비디오에서는 췌장섬 세포를 간 문맥에 주입한 다음 출혈을 성공적으로 방지하기 위해 젤 폼을 적용하는 절차를 설명합니다. 수술 후 출혈은 섬 이식 중 높은 사망률의 흔한 원인입니다.

섬 이식의 쥐 모델: 췌장도를 문맥에 주입하는 수술 방법 및 수술 후 출혈 예방

우리는 여성의 생식 기관의 정상 및 형질 전환 상피의 연구에 적합한 난소 유행 패드 이식 분석에 대해 설명합니다. 마우스 지방 패드는 큰 조직 조각의 이식을 허용 수술과 이미징을위한 쉽게 접근 할 수 있으며, 뮐러 기원의 조직에 가장 유리한 기본 환경을 제공합니다.

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

이 프로토콜은 murine islet isolation과 decellularized scaffold상의 seeding을 증명합니다. Scaffold-supported 랑게질을 streptozotocin (STZ) 유도 당뇨병 생쥐의 부고환 지방 패드에 이식 하였다. 아일 레트는 이식 부위에서 생존하고 고혈당 상태를 역전시켰다.

당뇨병 쥐의 부고환 지방 세포에 이식 된 지지체 지지대 지지대

췌 장 섬 이식 타입-1 당뇨병에 normoglycemia를 달성 하는 방법입니다. 이 문서는 당뇨병 쥐의 정상적인 포도 당 수준을 유지 하는 intraportal 경로 통해 이식 기술에 초점을 맞추고.

Intraportal 이식 마우스 모델에서 췌 장 독도의

여기, 우리는 히드로 기반 세포 치료, 섬 이식의 예에 의해 그림의 vivo에서 유효성 검사에 대 한 프로토콜을 제시. h Omental 매트릭스 섬 작성 (귀환) 이식 혈관, 적절 한 변화 환경에서 engraftment를 극대화 하기 위해 가까이 omental 레이어 사이 셀 하이드로 겔 혼합물의 주입 수 있습니다.

내부 Omental 작은 섬이 식을 사용 하 여 h Omental 매트릭스 섬 작성 (유도)

이 프로토콜에서, 뮤린 아일렛 분리 및 인추니얼 피하 백색 지방 조직내로이식하는 방법이 기재되어 있다. 분리된 합성 뮤린 섬은 지하 막 하이드로겔을 사용하여 뮤린 수용자로 이식된다. 수령인의 혈당 수준을 모니터링하고, 아일렛 이식의 학력 분석이 수행됩니다.

뮤린 아일렛의 인과 피하 백색 지방 조직 (ISWAT) 이식 모형

여기서 우리는 마우스에서 임상적으로 관련이 있지만 기술적으로 도전적인 수술 절차 인 포털 내 섬 이식을 성공적으로 수행하는 세련된 수술 절차를 제시합니다.

마우스에서 간내 섬 이식 중 주입 후 포털 정맥 출혈 최소화

이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

배우세요 당뇨병 마우스에서 대막에 섬유소 수소겔과 함께 섬 이식하는 방법을. 이 기술은 1형 당뇨병 치료 연구에 활용되며 섬 생존율을 향상시킵니다.

마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

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