마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

이 방법은 섬 이식 과 같은 섬 이식 분야의 주요 질문에 대한 답변을 도와 줍니다. 이 기술의 의미는 omentum이 섬 이식을 위한 잠재적인 가치 사이트로 다시 나타나기 때문에 타입-I 당뇨병의 치료로 확장합니다. 이 기술의 주요 장점은 분리된 섬이 하이드로겔과 혼합되어 혼합물이 당뇨 마우스의 오멘텀 파우치에 배치된다는 것입니다.

커튼과 일회용 과 같은 멸균 물질로 수술 부위의 무균 필드를 준비하여 시작합니다. 멸균 수술 기구를 무균 장에 놓습니다. 200 마이크로리터 파이펫 팁을 사용하여 스테레오 현미경 으로 기증자 섬을 선택합니다.

각 동물에 대해 450~500개의 섬을 수집하고 CMRL 10 66 배지 100마이크로리터가 있는 멸균 1.5 밀리리터 스냅 탑 튜브로 이송한다. 이식할 준비가 될 때까지 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 섬이 수확되면 지하 막 매트릭스 하이드로겔을 얼음 위에 해동하십시오.

무게와 태그 모든 당뇨병 받는 사람 마우스. 제도적으로 승인된 프로토콜에 따라 첫 번째 마우스를 마취한 후 발가락 핀치를 투여하여 마취의 깊이를 테스트합니다. 금단 반사가없는 경우 마취 수준은 수술에 적합합니다.

마취 하에 건조를 방지하기 위해 수의사 연고를 눈에 투여하십시오. 70%에탄올로 복부를 면봉하십시오. 그런 다음 수술 부위에서 머리카락을 면도합니다.

멸균 커튼으로 동물을 덮고 요오드 스크럽으로 이 지역을 소독하십시오. 안과 가위를 사용하여 복부의 중간선을 따라 4~5센티미터 절개를 만든 후, 창자를 왼쪽으로 이동하고 수술 시 탈수를 방지하기 위해 식염수에 젖은 거즈로 덮습니다. 그런 다음 면봉을 사용하여 위장을 완전히 노출시키고 위 아래에 있는 오멘텀을 찾습니다.

이 시점에서 하이드로겔은 완전히 해동되어야 합니다. 섬이 들어 있는 튜브를 200배 g에서 30초 간 회전시다. 스핀 후 상체를 제거합니다.

그런 다음 하이드로겔의 50 마이크로리터를 섬이 함유하는 튜브에 추가하고 거품의 형성을 피하여 부드럽게 섞는다. 다음으로 두 쌍의 집게를 사용하여 모멘텀의 가장자리를 집어 들고 부드럽게 올려 위 벽과 내장 사이에 홈을 형성합니다. 수술의 이 시점에서, 200 마이크로리터 파이펫 팁으로 리펜시드 섬 하이드로겔 혼합물을 흡인하고 홈으로 전달하는 두 번째 사람이 필요합니다.

혼합물이 오멘텀의 가장자리를 부드럽게 올리거나 내리면서 홈에 잘 배치되었는지 확인합니다. 하이드로겔이 고화되기 3분 전에 혼합물의 위치를 완료합니다. 하이드로겔 세트 후, 접목을 커버하기 위해 오멘텀을 접습니다.

수압겔이 고화됨에 따라 오멘텀은 주변 위벽을 고수합니다. 하이드로겔이 완전히 고화되면 면봉을 사용하여 복강내 의 장을 재배치하여 이식 부위를 만지지 않도록 주의하십시오. 다음으로 감염을 방지하기 위해 복강에 적절한 항생제의 200 마이크로 리터를 분배합니다.

그런 다음 4 O 봉합사를 사용하여 복부를 닫습니다. 일반적으로 이 방법에 새로 인한 개인은 마우스에 있는 omentum의 사이트가 작고 평가하기 위하여 피곤하기 때문에 투쟁할 것입니다. 마우스를 완전히 외부 의정을 회복할 때까지 따뜻하게 된 복구 케이지에 넣습니다.

다음 날과 그 후 매일 일주일 동안, 수술 후 예방으로 항생제를 주입. 또한, 이식 후 하루에 한 번 혈당 측정을 사용하여 꼬리 정맥 혈액 샘플에서 비 금식 혈액 포도당 수준을 측정한다. 모멘텀에 이식할 때, 섬 이식편은 지연된 기능을 가질 수 있고 2 3주 동안 완전히 정상적인 혈당 수준에 도달하지 않을 수 있다.

이식된 조직은 이식 후 14일 동안 안락사된 마우스로부터 회수되었다. 여기서 접목은 DAPI 염색 후 핵의 클러스터로 볼 수 있다. 접목된 조직의 기능은 항 인슐린 항체를 가진 면역 형광 염색에 의해 드러난다.

H&E 염색은 오멘텀의 대각막으로 둘러싸인 접목된 조직을 보여줍니다. 일단 마스터되면 제대로 수행되는 경우 이 기술을 1시간 만에 수행할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 마우스 omentum이 깨지기 쉽다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

이 절차에 따라 다른 고등학교에서 사용되는 다른 방법, 병화에 대한 아슬렛의 확산 및 성능과 같은 특정 질문에 대답 할 모든 MB 성능. 이 발달 후에, 이 기술은 그들의 및 이식에 있는 연구원을 위한 도로를 열어 두 개 이상의 발췌에서 타입 I 당뇨병을 위한 처리를 탐구하기 위하여. 이 비디오를 시청 한 후, 당신은 마우스의 오멘텀에 섬을 이식하는 방법에 대한 좋은 이해를해야합니다.