Name: 마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: 배우세요 당뇨병 마우스에서 대막에 섬유소 수소겔과 함께 섬 이식하는 방법을. 이 기술은 1형 당뇨병 치료 연구에 활용되며 섬 생존율을 향상시킵니다.

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이 작품의 저자 중 일부 국가 키 R & D 중국 프로그램 (2017YFC1103704), 심천 (SZSM201412020), 높은 수준의 의료 분야 건설의 심천 (2016031638)에 대 한 기금에서에서 의학의 인민 프로젝트에서 교부 금에 의해 부분적으로 지원 되었다 심천 과학 및 기술 (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), 보건 및 가족 계획 위원회 (SZXJ2017021)의 심천 기초의 기초.

이 연구에 사용 된 모든 마우스 의료 동물 센터의 광 동성에서 얻은 했다. 동물의 사용은 동물 복지의 원칙에 따라 윤리 검토 위원회의 심천 제 2 인민 병원에 의해 승인 되었다.
1. 섬 이식은 Omentum 하
참고:이 프로토콜 2 인을 달성 하기 위해 필요 합니다.
<ol><li>표 1에 나열 되는 수술 재료를 조립 한다. 커튼 및 disposables와 같은 메 마른 재료로 외과 영역에서 무 균 필드를 준비 하 고 수술을 통해 무 균 상태를 유지. 모든 수술 기구를 소독. 멸 균 가운 착용.</li>
	<li>독도 stereomicroscope에서 200 µ L 피 펫 팁을 사용 하 여 선택 합니다. 각 마우스 450-500 섬 상응 (IEQ) tansplant 당 받게 됩니다. 각 동물에 대 한 CMRL-1066 매체의 100 µ L 살 균 1.5 mL 스냅-탑 튜브에 단일 이식에 대 한 충분 한 독도 놓습니다. 참고: 독도 이식의 날에 고립 될 수 있다 하지만 격리 프로세스에 대 한 복구를 허용 하도록 하루 전에 그들을 분리 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>이식 준비까지 얼음에 독도 스냅-탑 튜브를 유지.</li>
	<li>지하실 막 매트릭스 히드로 해 동 고-20 ° C 냉장고에서 그것을 제거한 후 얼음에 그것을 유지. 히드로 4 ° C ~ 10 ° C에 액체 이며 높은 온도에 고형화 한다.</li>
	<li>모든 당뇨병 받는 사람 마우스 태그 및 무게. Intraperitoneally 60 mg/kg pentobarbital 나트륨을 주입. 테스트는 발가락 꼬 집 음을 투여 하 여 마 취의 깊이. 동물 꼬 집 음에 반응 하는 경우는 추가 10 mg/kg pentobarbital 나트륨을 제공 합니다. 경우 없는 철수 반사, 마 취의는 수술에 대 한 올바른.</li>
	<li>70% 에탄올을 사용 하 여 복 부에 수술 부위의 면봉. Razer 블레이드와 사이트에서 머리를 면도 하 고 소독 Iodophor 지역. 수 의사 연 고 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 눈을 관리 합니다.</li>
	<li>복 부 중간에 따라 복 부 절 개의 4 ~ 5 cm. 이동 열 왼쪽에 창 안과 위를 사용 하 고 수술 절차 동안 과도 한 탈수를 방지 하기 위해 염 분 젖은 거 즈로 커버.</li>
	<li>면봉을 사용 하 여 완벽 하 게 위장의 시야 노출과 omentum (위 아래에 있는)을 찾습니다. 두 켤레 미세 집게를 사용 하 여 distend는 omentum. 끊어지고 손상 되지 않도록 주의.</li>
	<li>완전히는 하이드로 겔이 시점에서 해 동. 30 독도와 튜브를 회전 g 및 제거는 상쾌한 x 200에서 s. 하이드로 겔의 50 µ L 발음, 독도, 포함 된 튜브에 그것을 추가 하 고 부드럽게 거품의 형성을 방지 하는 믹스 resuspend. 절차 동안 얼음에 튜브를 유지.</li>
	<li>집게의 2 개 쌍을 사용 하 여는 omentum의 가장자리를 선택 하 고 부드럽게 위 벽과 창 자 섬 이식 한 액체의 작은 볼륨을 수용할 수 있는 사이 홈을 형성 하기 위하여 그것을 인상.</li>
	<li>두 번째 사람은 절차에 200 µ L 피 펫 팁 resuspended 섬-히드로 혼합물 (튜브의 전체 내용)를 발음, 홈으로 콘텐츠를 전달 하자.</li>
	<li>혼합물 부드럽게 올리거나 낮추는 omentum의 가장자리에 의해 홈에 잘 배치 됩니다 확인 하십시오. 체온의 효과로 하이드로 겔 전에 3 분 이내 혼합물의 위치 완전 한 굳은 것 이다. 후에 하이드로 겔 세트, 커버는 이식 omentum 접어. 참고:는 히드로 굳은는 omentum 주변 위 벽에 준수 합니다.</li>
	<li>히드로 경화 완전히 후 면봉을 사용 하 여 내장을 만지지 이식의 사이트 돌 복 부 구멍으로 위치를.</li>
	<li>20 µ L cephalosporin의 추가 (5 ~ 10 mg) 감염을 방지 하기 위해 복 부 구멍으로를 사용 하 여 4-0 봉합 복 부를 닫습니다.</li>
	<li>그것의 감 금 소를 마우스를 반환 하 고 마우스 받는 사람 각각에 대 한 모든 단계를 반복 합니다. 쥐를 따뜻하게 유지 하 고 그들은 완전히 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 때까지 시각적으로 모니터링 합니다. 그들은 완전히 복구 될 때까지 쥐를 다른 동물에서 별도 유지.</li>
	<li>수술 후 예방으로 일주일 동안 매일 50 µ L cefazolin 나트륨 (0.05 mg/mL)의 주입. Bupivicaine + Buprenorphine 관리, 즉 0.25%의 1-3 방울을 적용 상처 클립의 배치 이전에 몸에 붙이기도 절 개 사이트에 Bupivicaine. 관리 Buprenorphine(0.03 mg/ml with sterile 0.9% saline, 0.05-0.10 mg/kg) 복 (IP) 루트를 통해.</li>
	<li>측정 비 단식 혈액 포도 당 수준을 혈액 포도 당 미터를 사용 하 여 꼬리 정 맥 혈액 샘플에서 이식 후 하루에 한 번. omentum, 이식 때 섬 이식 지연 기능 하 고 2-3 주 동안 완전 하 게 정상적인 혈액 포도 당 수준에 도달 하지 않을 수 있습니다.</li>
	<li>조직학, omental 이식 다음 이식 하는 실험의 끝에 마우스에서 제거 합니다. 조직학 프로토콜에 따라 조직 수정. 이식 immunostaining 또는 면역 형광 연구 분석할 수 있습니다.</li>
</ol>2. 대체는 Omentum에 이식 방법
참고: 실 온에서 사용 되는 대체 섬유 소-트 롬 빈 히드로 지하실 멤브레인 매트릭스 하이드로 겔에 대 한 대체 수 있습니다. 2 부품, 섬유 소 마감재 단백질 해결책 (50 U/mL 트 롬 빈 10 mg/mL fibrinogen) 그것에 의하여 이루어져 있다. 구성 요소가 혼합 되어, 그들은 장소에는 독도 보유 하는 응고 형성.
<ol><li>섬유 소 thombin 하이드로 겔 화합물을 사용 하 여 실내 온도에. 1.2 단계에서 각 마우스 이식 당 450-500 섬 등가물 (IEQ)를 받게 됩니다. CMRL-1066 매체의 100 µ L 살 균 1.5 mL 스냅-탑 튜브에는 독도 놓습니다. 즉시 이식, 전에 10 cm의 길이 대 한 살 균 PE50 튜브에는 독도 발음 하 고 부드럽게 원심 (30에서 200 x g s) 느슨한 펠 릿을 형성 하기 위하여.</li>
	<li>퍼져 omentum와 (단계 1.5-1.8) 위에 말한 대로 동물을 준비 합니다. 하이드로 겔 구성 요소 (10 µ L/각)을 혼합 하 고는 omentum에. (그림 3D)</li>
	<li>바로 독도 히드로에 튜브에서 추방. 히드로 독도 주위 응고를 형성 한다. (그림 3E)</li>
	<li>히드로와 주머니를 형성 하는 독도 omentum 접어. (그림 3 층) 1.13 1.18 단계를 계속 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+research+and+clinical+practice%22%5BJournal%5D)">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).</li>
<li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+Induction+Immunotherapy+Promotes+Long-Term+Insulin+Independence+After+Islet+Transplantation+in+Type+1+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Potent Induction Immunotherapy Promotes Long-Term Insulin Independence After Islet Transplantation in Type 1 Diabetes.</a> American Journal of Transplantation. 12 (6), 1576-1583 (2012).</li>
<li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+lancet%22%5BJournal%5D)">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> The lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li>
<li>Nilsson, B., Ekdahl, K. N., Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction+to+improve+islets+of+Langerhans+engraftment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Control of instant blood-mediated inflammatory reaction to improve islets of Langerhans engraftment.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 16 (6), 620-626 (2011).</li>
<li>Bellin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+islet+function+in+islet+allotransplant+and+autotransplant+recipients%2C+despite+lower+islet+mass+in+autotransplants%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Similar islet function in islet allotransplant and autotransplant recipients, despite lower islet mass in autotransplants.</a> Transplantation. 91 (3), 367-372 (2011).</li>
<li>Bruni, A., Gala-Lopez, B., Pepper, A. R., Abualhassan, N. S., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+cell+transplantation+for+the+treatment+of+type+1+diabetes%3A+recent+advances+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+metabolic+syndrome+and+obesity%3A+targets+and+therapy%22%5BJournal%5D)">Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes: recent advances and future challenges.</a> Diabetes, metabolic syndrome and obesity: targets and therapy. 7, 211(2014).</li>
<li>Shapiro, A. J., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27834384">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Cantarelli, E., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+transplantation+sites+for+pancreatic+islet+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+diabetes+reports%22%5BJournal%5D)">Alternative transplantation sites for pancreatic islet grafts.</a> Current diabetes reports. 11 (5), 364(2011).</li>
<li>Cantarelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+animal+models+for+preclinical+islet+transplantation%3A+no+model+fits+all+%28research+purposes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Murine animal models for preclinical islet transplantation: no model fits all (research purposes).</a> Islets. 5 (2), 79-86 (2013).</li>
<li>Beli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erratum+to%3A+CX3CR1+deficiency+accelerates+the+development+of+retinopathy+in+a+rodent+model+of+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Erratum to: CX3CR1 deficiency accelerates the development of retinopathy in a rodent model of type 1 diabetes.</a> J Mol Med (Berl). 95 (5), 565-566 (2017).</li>
<li>Hafner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+Patterns+of+Retinal+Oxygen+Saturation+and+Microvascular+Hemodynamic+Parameters+Preceding+Retinopathy+in+Patients+With+Type+II+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Regional Patterns of Retinal Oxygen Saturation and Microvascular Hemodynamic Parameters Preceding Retinopathy in Patients With Type II Diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (12), 5541-5547 (2017).</li>
<li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nature Biotechnology. 35 (1), 82017(2017).</li>
<li>Voigt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+Progression+Rate+of+Diabetic+Retinopathy+in+Type+2+Diabetes+Patients+in+Correlation+with+the+Duration+of+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Endocrinol+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Prevalence and Progression Rate of Diabetic Retinopathy in Type 2 Diabetes Patients in Correlation with the Duration of Diabetes.</a> Exp Clin Endocrinol Diabetes. , (2017).</li>
<li>Baidal, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+of+an+Intraabdominal+Endocrine+Pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioengineering of an Intraabdominal Endocrine Pancreas.</a> New England Journal of Medicine. 376 (19), 1887-1889 (2017).</li>
<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. , (2016).</li>
<li>Berman, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioengineering+the+endocrine+pancreas%3A+intraomental+islet+transplantation+within+a+biologic+resorbable+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Bioengineering the endocrine pancreas: intraomental islet transplantation within a biologic resorbable scaffold.</a> Diabetes. 65 (5), 1350-1361 (2016).</li>
<li>Delaune, V., Berney, T., Lacotte, S., Toso, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28109023">Intraportal islet transplantation: the impact of the liver micro-environment.</a> Transplant International. 30 (3), 227-238 (2017).</li>
<li>Espes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+restoration+of+vascularity+and+oxygenation+in+mouse+and+human+islets+transplanted+to+omentum+may+contribute+to+their+superior+function+compared+to+intraportally+transplanted+islets%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rapid restoration of vascularity and oxygenation in mouse and human islets transplanted to omentum may contribute to their superior function compared to intraportally transplanted islets.</a> American Journal of Transplantation. 16 (11), 3246-3254 (2016).</li>
<li>Hajizadeh-Saffar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+VEGF+expression+by+human+embryonic+stem+cell-derived+mesenchymal+stromal+cells+reduces+the+minimal+islet+mass+required+to+reverse+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Inducible VEGF expression by human embryonic stem cell-derived mesenchymal stromal cells reduces the minimal islet mass required to reverse diabetes.</a> Scientific Reports. 5, (2015).</li>
</ol>

저자는 충돌의 관심을 보고.

문맥을 통해 간 섬 이식 가장 일반적으로 사용 되는 작은 섬 이식의 방법 인간, 하지만 여전히 포털 정 맥 혈전 증과 간 steatosis17등 효율성과 안전 문제입니다. 최근 연구는 omentum 간, 하지만 더 많은 연구 필요 임상 번역12,14,,1819전에 실시 해야 적당 한 대안이 있을 수 있습니다 보여줍니다.
마우스 섬 이식에 대 한 사이트는 omentum 테스트를 위해 적합 한 모델입니다. 마우스에는 omentum는 위 벽 아래 있으며 일반적으로 접혀 있다. 그러나, 쥐에서 omentum의 크기는 작고 접근 하기 어려운. 이식에 대 한 사용, 그것은 부드럽게 전체 크기에 그것을 밖으로 확산 다음 독...

국제 당뇨병 연맹 (IDF)에 따르면 당뇨병 mellitus 현재 382 백만 사람들, 20351592 백만 명 예상된 증가 함께 적용 됩니다. 두 수용자와 xenogeneic 섬 이식 조직 면역 치료가 필요 합니다. 면역 억제, 없이 면역 거부 이식 손실2의 주요 원인입니다. 또한 중재 인스턴트 혈액 염증 반응 (IBMIR)3,4인 이식된 섬 손실의 중요 한 문제가입니다. 그러나, syngeneic와 같은 면역 반응의 부재에도 자동 이식 모델, 작은 섬 세포는 문맥을 통해 간으로 이식 가난한 혈액 등 불리 한 환경 조건, 또는 염증 때문에 손실 됩니다 또는 공급 감소 산소 및 영양소5,6. 그 결과, 장기 신진 대사 기능을 보장 하기 위해 높은 섬 번호는 감소 engraftment7초기 세포 손실을 보상 하는 데 필요한.
섬 engraftment를 최적화 하기 위해 시도, 여러 대체 해 부 사이트 실험적으로 조사 뿐 아니라 임상, 약속, 아직 하지 확실 한 결과8. 대체 사이트 중 일부는 간단 하 고 안전한 액세스를 제공 하는 반면 (예., 피부, 신장 캡슐, 위 submucosa 및 눈의 앞쪽 챔버) 또는 더 큰 섬 대 중을 위한 더 넓은 표면 (예., 복 막 구멍), 생존 및 생리 신진 대사 이식된 독도의 제한는 성능과 우려9유지. 섬 engraftment에 대 한 더 적합 한 사이트에 대 한 검색 진행 중 이다.
omentum 많은 해 부 사이트를 작은 섬 이식의 초기 개발에 조사 하 고 독도10,,1112,13, 성공적인 환경 입증 했다 중 하나 였습니다. 14. 그러나, intraportal 섬 주입 임상 선택 인해 일부 절차의 상대적 단순 되었고 동물에 이른 성공 모델6. 또한, 부분적으로, 원판이 관련 사이트, 특히 대규모 초기 섬 손실, 덜 이해 하 고 덜 제한 필드 실험 섬 이식의 초기 시절에 했다 성숙. 최근 강력한 증거를 나타내는 혈관 내 섬 주입에서 멀리 이상적는 omentum은 세포 이식에 대 한 잠재적으로 가치 있는 사이트로 다시 신흥.
(Omental 주머니의 형태로) omentum 간15,16상대적 이점을 제공합니다. 그것은 쉽게 접근할 수 있는 잘 vascularized입니다. 이식 (필요한 경우) 생 검의 검색 수 있습니다. 독도 의해 경험 하는 허 혈 성 기간 간에 비해 감소 하 고 있는 omentum 불가능 intraportally, 어디 포털 압력에서 상승 큰 섬 대 중 합병증을 일으킬 수 있습니다 상대적으로 받아들일 수 있다.
이식의 syngeneic 마우스 모델 연구, 고용 6-8 주 몸 무게의 20-25 g. 섬 받는 250의 복용량 streptozotocin의 단일 주사와 당뇨병 렌더링 했다와 오래 된 사이 남성 마우스 C57BL/6에서에서 테스트 프로토콜에 사용 된 mg/kg ip입니다. 당뇨병의 유도 경우 마우스의 혈액 포도 당 수준 24 mmol/L 48 h 보다 큰 주입 후 최소 5 일에 대 한 해당 수준의 위 남아 성공적인 간주 될 수 있습니다.
Syngeneic 독도 일부 수정 이전 게시 된 방법에 따라 나이 일치 하는 기증자의 췌 장 으로부터 격리 했다. 간단히는 콜라 대신 담 관 담 낭에 주입 했다. 이 주입의 용이성을 촉진 하기 위하여 개선으로 이루어졌다. 콜라 주입이 했다 뒤에 부 화, 조직 파괴, 밀도 그라데이션 분리 및 순수 독도를 손으로 따기. 독도 아래 10% 열 비활성화 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 37 ° C에서 플라스 크 T175에에서 보충 하는 CMRL-1066 매체에서 하룻밤 배양 했다 이식 전에 95% 공기-5% CO2 .

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 inch (12-13 cm) 가위</td><td>RWD 생명 과학&nbsp;</td><td>S12030-11</td><td></td></tr><tr><td>세밀한 집게</td><td>RWD 생명 과학</td><td>F11010-13</td><td></td></tr><tr><td>작은 상처 클립</td><td>RWD 생명 과학</td><td>R33003-01</td><td></td></tr><tr><td>Acutenaculum</td><td>RWD 생명 과학</td><td>F31044-13</td><td></td></tr><tr><td>2 쌍의 조직 집게</td><td>RWD 생명 과학</td><td>&nbsp; F13023-10</td><td></td></tr><tr><td>4-0 바늘 봉합사</td><td>Chenghe, 중국</td><td>17094</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; L 피펫 및 팁</td><td>Gilson</td><td>PN11</td><td></td></tr><tr><td>One Touch ultraeasy Basic 혈당 모니터링 시스템&nbsp; &nbsp;</td><td>존슨 & Johnson</td><td>33391713</td><td></td></tr><tr><td>면도날</td><td>Philips</td><td>HC1099/15</td><td></td></tr><tr><td>Material and animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodium</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P3761</td><td>마취용&nbsp;</td></tr><tr><td>하이드로겔&nbsp;</td><td>bdbiosciences.com</td><td>356234</td><td>베이스먼트 멤브레인 매트릭스</td></tr><tr><td>피브린-트롬빈 하이드로겔&nbsp;</td><td>Baxter.com</td><td>1501250</td><td>성분은 혼합시 응고</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Yingniu medical, 안후이, 중국</td><td>23170608</td><td></td></tr><tr><td>요오도퍼</td><td>Lierkang 의료 기술, Shangdong, 중국</td><td>170521</td><td></td></tr><tr><td>생리식염수</td><td>Baxter.com</td><td>2B1324</td><td></td></tr><tr><td>Cephalosporin</td><td>Lukang medical, Shangdong, China</td><td>150303</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin</td><td>Baxter.com</td><td>2G3508</td><td></td></tr><tr><td>윤활제 안연</td><td>203964</td><td></td><td>주요 제약</td></tr><tr><td>스트렙토조토신</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>S0130</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해 효소 V 형</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>C9262</td><td></td></tr><tr><td>CMRL-1066 미디어</td><td>celltrans, 온주, 중국</td><td>X018D1</td><td></td></tr><tr><td>histopaque</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>10771</td><td>밀도 구배</td></tr><tr><td>PE50 튜빙</td><td>Braintreesci.com</td><td>PE50 100 FT</td><td>폴리에틸렌 .023" x .038</td></tr><tr><td>Calcein AM</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>C1359</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iodide</td><td>Sigmaaldrich.com</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>최적 절단 온도 화합물 (OCT)</td><td>Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL</td><td>4583</td><td>임베딩 배지</td></tr><tr><td>인슐린 항체</td><td>세포 신호 기술, Danvers, MA 01923</td><td>8138S</td><td></td></tr><tr><td>헤마톡실린 염색 매체</td><td>세포 신호 전달 기술, Danvers, MA 01923</td><td>14166S</td><td></td></tr><tr><td>에오신 염색 매체</td><td>Beyotime Biotech, China</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.&nbsp;</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6 생쥐</td><td>의학 동물 센터 광동성</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>GE 헬스케어 생명 과학</td><td>SH30084</td><td></td></tr><tr><td>T175 플라스크</td><td>팔콘</td><td>353112</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 스냅 탑 튜브</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에 omentum 작은 섬 이식 하는 방법

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

타입-1 당뇨병에 대 한 잠재적인 치료를 작은 섬 이식 제안 되었습니다. 최근 강력한 증거 나타냅니다 혈관 내 섬 주입 이상 까지입니다 이며 따라서는 omentum 섬 이식에 대 한 잠재적으로 가치 있는 사이트로 다시 신흥. 이 실험에는 고품질 독도의 고립과 당뇨병 받는 사람에 게 독도의 주입 필요합니다. omentum에 이식 수술 단계를 더 시각적으로 설명 될 수 있다 필요 합니다. 여기,이 절차에 대 한 자세한 내용은 표시 됩니다. 당뇨병 쥐의 omental 주머니에 혼합물을 배치 하기 전에 히드로와 격리 된 독도 혼합의 두 가지 방법은 여기 설명 되어 있습니다. 다른 hydrogels 다른 조건을 위해 사용 됩니다. Syngeneic 독도 omentum에서 받는 사람 당뇨 마우스의 혈당은 최대 35 일 동안 감시 되었다. 일부 동물 면역 조직화 학적인 분석을 수행 하기 위해 14 일 후에 희생 되었다. 전 임상 이식 이렇게 예비 데이터 임상 이식에 번역을 사용할 수 있습니다.

췌 장 post-digestive 상태는 그림 1A에 표시 됩니다. 순화 독도 그림 1B에서 표시 됩니다. Dithizone 얼룩이 지 고는 독도의 생존 테스트는 그림 2에 표시 됩니다. omentum 작은 섬 이식의 주요 단계는 그림 3에 나와 있습니다. 혈액 포도 당 수준은 omental 이식 후 받는 사람의 그림 4에 나와 있습니다. 이식의 조직학 분석은 그림 5에 표시 됩니다.
<img alt="펠릿이 있는 세포 배양 원심분리기 튜브; 염색...

마우스에 독도의 omental 이식 하는 방법을 소개 합니다. 격리 된 독도 히드로와 혼합 하 고 혼합 당뇨 마우스의 omental 주머니에 배치 됩니다. 그리고, 혈액 포도 당 감시 면역 조직화 학적인 분석을 수행 합니다.

마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

이 방법은 섬 이식 과 같은 섬 이식 분야의 주요 질문에 대한 답변을 도와 줍니다. 이 기술의 의미는 omentum이 섬 이식을 위한 잠재적인 가치 사이트로 다시 나타나기 때문에 타입-I 당뇨병의 치료로 확장합니다. 이 기술의 주요 장점은 분리된 섬이 하이드로겔과 혼합되어 혼합물이 당뇨 마우스의 오멘텀 파우치에 배치된다는 것입니다.커튼과 일회용 과 같은 멸균 물질로 수술 부위의 무균 필드를 준비하여 시작합니다. 멸균 수술 기구를 무균 장에 놓습니다. 200 마이크로리터 파이펫 팁을 사용하여 스테레오 현미경 으로 기증자 섬을 선택합니다.각 동물에 대해 450~500개의 섬을 수집하고 CMRL 10 66 배지 100마이크로리터가 있는 멸균 1.5 밀리리터 스냅 탑 튜브로 이송한다. 이식할 준비가 될 때까지 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 섬이 수확되면 지하 막 매트릭스 하이드로겔을 얼음 위에 해동하십시오.무게와 태그 모든 당뇨병 받는 사람 마우스. 제도적으로 승인된 프로토콜에 따라 첫 번째 마우스를 마취한 후 발가락 핀치를 투여하여 마취의 깊이를 테스트합니다. 금단 반사가없는 경우 마취 수준은 수술에 적합합니다.마취 하에 건조를 방지하기 위해 수의사 연고를 눈에 투여하십시오. 70%에탄올로 복부를 면봉하십시오. 그런 다음 수술 부위에서 머리카락을 면도합니다.멸균 커튼으로 동물을 덮고 요오드 스크럽으로 이 지역을 소독하십시오. 안과 가위를 사용하여 복부의 중간선을 따라 4~5센티미터 절개를 만든 후, 창자를 왼쪽으로 이동하고 수술 시 탈수를 방지하기 위해 식염수에 젖은 거즈로 덮습니다. 그런 다음 면봉을 사용하여 위장을 완전히 노출시키고 위 아래에 있는 오멘텀을 찾습니다.이 시점에서 하이드로겔은 완전히 해동되어야 합니다. 섬이 들어 있는 튜브를 200배 g에서 30초 간 회전시다. 스핀 후 상체를 제거합니다.그런 다음 하이드로겔의 50 마이크로리터를 섬이 함유하는 튜브에 추가하고 거품의 형성을 피하여 부드럽게 섞는다. 다음으로 두 쌍의 집게를 사용하여 모멘텀의 가장자리를 집어 들고 부드럽게 올려 위 벽과 내장 사이에 홈을 형성합니다. 수술의 이 시점에서, 200 마이크로리터 파이펫 팁으로 리펜시드 섬 하이드로겔 혼합물을 흡인하고 홈으로 전달하는 두 번째 사람이 필요합니다.혼합물이 오멘텀의 가장자리를 부드럽게 올리거나 내리면서 홈에 잘 배치되었는지 확인합니다. 하이드로겔이 고화되기 3분 전에 혼합물의 위치를 완료합니다. 하이드로겔 세트 후, 접목을 커버하기 위해 오멘텀을 접습니다.수압겔이 고화됨에 따라 오멘텀은 주변 위벽을 고수합니다. 하이드로겔이 완전히 고화되면 면봉을 사용하여 복강내 의 장을 재배치하여 이식 부위를 만지지 않도록 주의하십시오. 다음으로 감염을 방지하기 위해 복강에 적절한 항생제의 200 마이크로 리터를 분배합니다.그런 다음 4 O 봉합사를 사용하여 복부를 닫습니다. 일반적으로 이 방법에 새로 인한 개인은 마우스에 있는 omentum의 사이트가 작고 평가하기 위하여 피곤하기 때문에 투쟁할 것입니다. 마우스를 완전히 외부 의정을 회복할 때까지 따뜻하게 된 복구 케이지에 넣습니다.다음 날과 그 후 매일 일주일 동안, 수술 후 예방으로 항생제를 주입. 또한, 이식 후 하루에 한 번 혈당 측정을 사용하여 꼬리 정맥 혈액 샘플에서 비 금식 혈액 포도당 수준을 측정한다. 모멘텀에 이식할 때, 섬 이식편은 지연된 기능을 가질 수 있고 2 3주 동안 완전히 정상적인 혈당 수준에 도달하지 않을 수 있다.이식된 조직은 이식 후 14일 동안 안락사된 마우스로부터 회수되었다. 여기서 접목은 DAPI 염색 후 핵의 클러스터로 볼 수 있다. 접목된 조직의 기능은 항 인슐린 항체를 가진 면역 형광 염색에 의해 드러난다.H&E 염색은 오멘텀의 대각막으로 둘러싸인 접목된 조직을 보여줍니다. 일단 마스터되면 제대로 수행되는 경우 이 기술을 1시간 만에 수행할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 마우스 omentum이 깨지기 쉽다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 다른 고등학교에서 사용되는 다른 방법, 병화에 대한 아슬렛의 확산 및 성능과 같은 특정 질문에 대답 할 모든 MB 성능. 이 발달 후에, 이 기술은 그들의 및 이식에 있는 연구원을 위한 도로를 열어 두 개 이상의 발췌에서 타입 I 당뇨병을 위한 처리를 탐구하기 위하여. 이 비디오를 시청 한 후, 당신은 마우스의 오멘텀에 섬을 이식하는 방법에 대한 좋은 이해를해야합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리 프로토콜이 정상적으로 쉽게 생쥐의 신장에 따라 캡슐 아일 레츠이나 세포를 제공하기 위해 개발되었습니다. 세포 신장 캡슐에서 세포를 이식에 사용되는 최종 튜브에 쥐똥에 집중되어있다. 이 기법의 용이성은 세포와 마우스에 스트레스를 줄여줍니다.

당뇨병 마우스의 신장 캡슐으로 췌장 아일 레츠의 이식

절연 아일 레츠의 이식은 제 1 형 당뇨병에 대한 잠재적인 치료로 제안되었습니다. 여기 마우스 pancreata에서 아일 레츠를 분리하고 신장의 subcapsular 공간을 이식하는 방법을 설명합니다.

Murine 아일릿 절연 및 Subcapsular 신장 이식을위한 방법

이 비디오는 생체 내에서 인간 췌장 이식편의 혈관 재생화를 모니터링하기 위해 인간 췌장도를 마우스 눈의 전방에 이식하는 프로토콜을 설명합니다. 또한 이식편의 캡슐화 및 혈관화를 촉진하는 데 있어 수용자 세포와 기증자 세포의 기여도를 이해하는 데 도움이 됩니다.

췌장섬 접목: 생체 내 이미징을 위해 췌장섬을 마우스 눈의 전방에 이식하는 방법

이 비디오에서는 췌장섬 세포를 간 문맥에 주입한 다음 출혈을 성공적으로 방지하기 위해 젤 폼을 적용하는 절차를 설명합니다. 수술 후 출혈은 섬 이식 중 높은 사망률의 흔한 원인입니다.

섬 이식의 쥐 모델: 췌장도를 문맥에 주입하는 수술 방법 및 수술 후 출혈 예방

이 프로토콜은 murine islet isolation과 decellularized scaffold상의 seeding을 증명합니다. Scaffold-supported 랑게질을 streptozotocin (STZ) 유도 당뇨병 생쥐의 부고환 지방 패드에 이식 하였다. 아일 레트는 이식 부위에서 생존하고 고혈당 상태를 역전시켰다.

당뇨병 쥐의 부고환 지방 세포에 이식 된 지지체 지지대 지지대

췌 장 섬 이식 타입-1 당뇨병에 normoglycemia를 달성 하는 방법입니다. 이 문서는 당뇨병 쥐의 정상적인 포도 당 수준을 유지 하는 intraportal 경로 통해 이식 기술에 초점을 맞추고.

Intraportal 이식 마우스 모델에서 췌 장 독도의

여기, 우리는 히드로 기반 세포 치료, 섬 이식의 예에 의해 그림의 vivo에서 유효성 검사에 대 한 프로토콜을 제시. h Omental 매트릭스 섬 작성 (귀환) 이식 혈관, 적절 한 변화 환경에서 engraftment를 극대화 하기 위해 가까이 omental 레이어 사이 셀 하이드로 겔 혼합물의 주입 수 있습니다.

내부 Omental 작은 섬이 식을 사용 하 여 h Omental 매트릭스 섬 작성 (유도)

이 프로토콜에서, 뮤린 아일렛 분리 및 인추니얼 피하 백색 지방 조직내로이식하는 방법이 기재되어 있다. 분리된 합성 뮤린 섬은 지하 막 하이드로겔을 사용하여 뮤린 수용자로 이식된다. 수령인의 혈당 수준을 모니터링하고, 아일렛 이식의 학력 분석이 수행됩니다.

뮤린 아일렛의 인과 피하 백색 지방 조직 (ISWAT) 이식 모형

이 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 복강 내 이식 된 섬의 검출에 적합합니다. 특히, 생체 결합제의 사용 또는 봉합이 필요하지 않습니다.

부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식

여기서 우리는 마우스에서 임상적으로 관련이 있지만 기술적으로 도전적인 수술 절차 인 포털 내 섬 이식을 성공적으로 수행하는 세련된 수술 절차를 제시합니다.

마우스에서 간내 섬 이식 중 주입 후 포털 정맥 출혈 최소화

이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

배우세요 당뇨병 마우스에서 대막에 섬유소 수소겔과 함께 섬 이식하는 방법을. 이 기술은 1형 당뇨병 치료 연구에 활용되며 섬 생존율을 향상시킵니다.

마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

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