Name: Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: 배우세요 C57BL/6 마우스를 이용한 원심 인공 수술법으로 전환 결장염을 연구하는 방법을. 이 기법은 유전자 변형 없이 면역 반응과 미생물군 상호작용을 탐구할 수 있는 신뢰할 수 있는 동물 모델을 제공합니다.

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여기에 설명 된 모든 방법 수의 정부 기관 (Landesamt에 Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit 및 Fischerei 메클렌부르크-포어 폼 머 른, (LALLF M-V))에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 수술 전 치료와 동물의 준비
<ol><li>동물 시설에 도착, 비슷한 크기의 그룹으로 동물 (C57Bl/6)를 분할 하 고 각 그룹을 함께, 케이지 그룹 실험 내내 일정 하 게 유지. 참고: 같은 섹스의 동물을 사용 합니다. 설명 결과 남성 쥐와 함께 얻은 했다. 참고: 남성 동물 사용 되는 경우, 케이지 그룹 함께 시작 하는 때 그들은 나이의 7 주 계층 구조를 설정할 수 있도록, 따라서 위험을 최소화 공격적인 행동의 실험 중.</li>
	<li>적어도 1 주일 전에 수술, 높은 에너지로 전환 (> 14 MJ/kg) 및 고 단백 (> 20%) 모든 필수 미 량 원소와 비타민을 포함 하는 피드 (자세한 자료의 목록 참조). 참고: 수술을 수행할 때 모든 마우스 무게 이상 25 g을 확신 합니다.</li>
	<li>케 타 민 (i.p. 87 mg/kg) 및 xylazine 염 산 염 (i.p. 13 mg/kg)의 복 주사로 마 취 및 진통 유발. 마우스는 기계적 자극, 예를 들면 발가락 피치, 모터 응답 없이 허용 될 때까지 기다립니다.</li>
	<li>작업 데스크, 안정적인 작업 중 위치 및 체온의 압도적인 손실 방지를 보장에 위치 열 언더레이에 부정사 위치에 테이프와 함께 narcotized 마우스를 보안 합니다. 참고: 열 언더레이 36 ° C ~ 40 ° C;의 표면 온도가 있어야 합니다. 수술 실 온도 21 ° c.는 이어야 한다</li>
</ol>2. 원심 인공 작업
<ol><li>복 부 머리를 면도. 시작 하기 전에 수술, 세 번 사용 하 여 알코올 70% 작업 필드와는 iodophor 소독. 무 균 조건에 대 한 보장을 작업 필드에 드러 워 진.</li>
	<li>복 부 근육과는 교육에 따라 복 incising 15 m m 중간 개복 술 수행 알바, 혈액 손실이 최소화.</li>
	<li>2 기금 atraumatic 집게를 사용 하 여, 신중 하 게 맹, 터미널 회장 및 오름차순 및 가로 결 장 복 막 구멍에서. 참고: 엄격 하 게 제한 mesenteric 구조에 부상을 방지 하기 위해 내장의 기계 조작에 주의 해야 합니다.</li>
	<li>Cecal 극, 오름차순 결 장 및 작은 창 자 (그림 1a 및 1b)을 확인 합니다. 참고: 오름차순 콜론의 올바른 식별은 인공의 올바른 배치에 대 한 근본 이다. Ileocecal 지역의 해부학 모호한 경우에 Peyer의 패치의 존재 확인 소장, 그리고 형성된 된 대변의 존재는 콜론 특징.</li>
	<li>눈금자를 사용 하 여 미래의 인공의 위치를 결정. 그것은 배치 되어야 한다 20 mm 원심 원심 인공 ileocecal 밸브.</li>
	<li>상단 오른쪽 사분면에서 복 벽에 두 번째 3-m m 절 개를 확인 합니다. 루프를 왜곡 하지 않도록 주의 되는 루프를 형성 하기 위하여이 절 개를 통해 이전 확인된 콜론 세그먼트를 당기십시오.</li>
	<li>신중 하 게는 mesocolon 통해 22 게이지 유연한 i.v. 정 통과. 알아서 하지 mesenteric 혈관 구조를 손상.</li>
	<li>내장 복 막 구멍을 반환 합니다.</li>
	<li>간단한 스티치와 resorbable 봉합 (예를 들어, polyglactin 910 또는 polyfil 4-0 1/2 c)를 사용 하 여 피부에 유연한 튜브의 양쪽 끝을 수정 합니다.</li>
	<li>개복 술을 닫기 전에 유체 소생 0.5 mL 0.9% 염 분의 복 주사를 사용 하 여 수행 합니다.</li>
	<li>Resorbable 봉합 (예: polyglactin 910 또는 polyfil 4-0 1/2 c)를 사용 하 여 연속 봉합으로 복 막과 근육 층을 닫습니다. 예를 들어, polyglactin 910 (polyfil 4-0 1/2 c) resorbable 봉합 사를 사용 하 여 연속 봉합으로 피부를 닫습니다.</li>
	<li>좋은 위를 사용 하 여 부분합 transection 수행 하 여 exteriorized 콜론 루프를 엽니다. 피하는 mesentery에 모든 부상. 콜론을 완전히 transect 하지 마십시오.</li>
	<li>각 인공 여 복 하 3 단일 전체 두께 바늘을 사용 하 여 수정 하 고 monofil, 흡수 되기 쉬운 봉합 사를 사용 하 여 피부 (예를 들어, polydioxanone 또는 monofil 6-0 3/8s). 기능 끝-인공 인 성의 루프 및 점액 누 인 원심 루프 (그림 1c)이이 시점에서 명확 하 게 구분 됩니다. 참고: 작업 시간 해야 20 분 미만 유체 및 열 손실을 제한 합니다.</li>
	<li>후 악기 제조업체의 지시에 따라 초음파 목욕에 알데하이드 무료 살 균 솔루션을 사용 하 여 소독, 수술을 마무리.</li>
</ol>3. 가짜 작업 (Colotomy)
<ol><li>1.1 단계를 수행 합니다. 2.4 through.</li>
	<li>눈금자를 사용 하 여 미래 colotomy 위치를 결정. colotomy 실험 그룹에서 인공으로 ileocecal 밸브 로부터 같은 거리 위치 한다.</li>
	<li>콜론을 열고 적어도 2/3 잘가 위를 사용 하 여 그것의 둘레.</li>
	<li>닫기 단일 층으로 colotomy, 전체 두께 중단 monofil, 흡수 되기 쉬운 봉합 사를 사용 하 여 봉합 (예를 들어, polydioxanone, monofil 6-0 3/8s). 참고: 작업 시간 실험된 외과 의사, 유체 및 열 손실 제한에 대 일 분 미만 이어야 한다.</li>
	<li>2.10 단계를 수행 합니다. 2.11. 그리고 2.14입니다.</li>
</ol>4. 수술 후 관리
<ol><li>그들의 감 금 소에 동물을 반환 합니다. 37 ° C (예를 들어, 적외선 램프로)의 잘 단련 된 분위기를 제공 마우스는 완전히 깨어 때까지. 다음, 온도 및 습도 통제 환경 (21 ° C, 상대습도 30% ± 10%)에서 마우스를 유지. 음식과 식 수를 무료로 이용할을 수 있습니다. 유체 이해를 촉진 하기 위하여 추가 물에 젖은 사료를 제공 합니다.</li>
	<li>0.1 mg/kg 몸 무게 buprenorphine를 주입 하 여 수술 후 진통 시작 때 동물 기계적 자극에 반응을 보여 사우스 캐롤라이나. 호흡을 하지 않도록 주의 해야 합니다.</li>
	<li>수술 후 첫 주 동안 지속적인된 진통에 대 한 1 mg/mL tramadol와 식 수를 보충 한다.</li>
	<li>로 인해 감소 액체 섭취 량에 대 한 보상 이동성 감소, 수술 후 첫 주 동안 장에 단단한 음료 패드를 공급.</li>
	<li>첫 주, 첫 달의 나머지 동안 매초 마다 하루 그리고 Kleinwort 외 에 설명 된 질병 심각도 점수를 사용 하 여 두 번째 달 동안 모든 3 일 동안 매일 동물과 동물 행동 점수를 무게 6.</li>
</ol>

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</ol>

모든 저자 들은 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.

이 프로토콜에 안정적으로 제공 하는 DC의 murine 모델 (예를 들어, 드 노 보 개발 염증이 대 장 세그먼트, 단축, 토 굴 및 절감 submucosa 림프 낭의 인간 DC의 histopathological 기능을 재현 잔 셀 번호)입니다. 이 이점 이외에도이 모델 매우 비슷한 트리거링 요인에 의해 유발 고 가장 영향을 받는 인간의 경우 가벼운 심각도에 온건한의 임상 과정을 선물 한다.
재현할 결과 및 허용 수술 치, microsurgical 기술에서 연습이 필요 하다. 그러나, 인공 및 가짜 작업 (colotomy) 매우 낮은 수술 mortalities 수행할 수 있습니다 (< 10%). 일부 작업 단계는 매우 중요: 1) 긍정적으로 확인 결 장 그리고 맨끝 회장. 경우 어디 명확 하지 ileocecal 지역의 해부학, Peyer의 패치의 존재에 의해 형성된 된 대변의 존재와 터미널 회장으로 콜론을 확인할 수 있습니다. 2) 때 인공 루프,...

최근 몇 년 동안, 고아 한 선 동적인 장 질병 (IBDs; 다른 비 감염 성 대 장 염 엔터티의 상당수 즉., Crohn의 질병 또는 colitis ulcerosa)는 임상 및 histopathologically 특징 되었습니다 인간에서. 이러한 colitis 형태의 개발을 선도 병 태 생리 기계 장치는 완전히 이해 되지 부분적으로 적절 한 동물 모델은 부족 때문에. 양 대 장 염이 최근 설명된 엔터티 중 하나입니다. 기간 Glotzer1에 의해 1980 년에 화폐로 주조 되었다, 비록 비슷한 표현 형의 초기 설명 Morson2에 의해 1972 년에 주어졌다. 질병 개발 50%에 enterostomy, 우회 환자의 91%에 그리고 그것의 임상 강도 다릅니다3,4. 아메리카 합중국에서에서 약 120000 인공 환자의 연간 발생률을 감안할 때,이 질병 엔터티는 중요 한 건강 문제를 구성 합니다.
이 프로토콜을 개발의 전반적인 목표는 인간 DC에서 본 비슷한 colitis 트리거에 의존 하 고 하는 인간 질병의 기본 histopathological 기능을 재현 murine DC 모델을 제공 했다. 다른 murine colitis 모델 달리 우리의 모델에서 colitis 유도 유전자 변형된 동물 (예를 들어, 일리노이-7 유전자 변형 마우스, N cadherin 지배적인 부정적인 쥐, 또는 TGFβ/- 생쥐), 필요 하지 않습니다 응용 프로그램의 화학적 자극 물질 (예, dextran 황산 나트륨 (DSS)-유도 대 장 염, 또는 trinitrobenzene 술 폰 산 (TNBS)-유도 대 장 염), 또는 특정 세포 인구 (CD45RB높은 전송에서 면역 결핍 생쥐에서의 전송 colitis의 모델) (검토,5참조). 다른 모델과 달리 우리의 DC 모델의 그대로 면역 시스템은 면역 메커니즘의 평가 DC 개발에 관련 된 있습니다. 제외 된 장 세그먼트에 점 막 염증의 제한 위장, 창 자의 다른 면역 구획에 면역 항상성에의 다른 부분에 점 막 면역의 돌아옴의 평가 수 (예: , Peyer의 패치 및 mesenteriale 림프절), 및 전체 유 기체의 면역 항상성. 마지막으로, 우리의 모델 모두는 지역 미생물으로 영양 항 일반 로컬 환경 변화에서 발생 하는 로컬 염증 성 자극을 제어 하는 메커니즘을 조사에 적합 한 도구를 구성 합니다.

<table><tbody><tr><td>작동 재료</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>열 밑받침, 6 와트</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 70% (메틸에틸케톤 포함)</td><td>Greifswald</td><td></td><td></td>대학병원 약국</tr><tr><td>나무 애플리케이터, 작은 면 머리 단면, 나무 막대기, 길이 150mm</td><td>Centramed GmbH, 독일</td><td>8308370</td><td>작업 필드 소독용</td></tr><tr><td>가위</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>외상성 DeBakey 집게</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v. 캐뉼라 22G</td><td>Braun Melsungen AG, 독일</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 바이올렛 브레이드; V-5 17m 1/2c; 70cm</td><td>에티콘, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 모노필; V-18 13mm 3/8C; 70cm</td><td>에티콘, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (멸균 내부가있는 바늘이 달린 주사기)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Germany</td><td>18824-01</td><td>초음파 욕조에서 수술 기구 소독</td></tr><tr><td>약물</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine)</td><td>Bayer, Germany</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Drops, 100 mg/mL (트라마돌 염산염)</td><td>Gr&uuml; nenthal GmbH, 독일</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL 식수</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, 독일</td><td>PZN: 08844252</td><td>체중 25mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>metronidazole 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Germany</td><td>PZN: 체중 05543515</td><td>12.5mg/kg 체중 i.p.</em</td></tr><tr><td>>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, 독일</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>고체 음료 Dehyprev Vit BIO, 파우치</td><td>TripleATrading, 네덜란드</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, 독일</td><td></td><td>광학 현미경</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, 미국</td><td>770-9000</td><td>50 &micro의 수의학 혈액학 분석기; l 정맥 EDTA - 혈액</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (초음파 욕조)</td> <td>Bandelin electronics, Germany</td><td>RK 100 H</td><td>수술기구 소독</td></tr> <tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>NIS Element BR4 소프트웨어</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine 원심 인공, c57bl/6 마우스에 전환 colitis의 새로운 모델

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

양 대 장 염 (DC)는 환자에서 발생 하는 diverting enterostomy의 결과로 지저분한 스트림에서 제외 장 세그먼트와 자주 임상 조건입니다. 이 질병의 병 인 병이 정의 남지만 크 론 병과 궤 양성 대 장 염 같은 클래식 선 동적인 장 질병의 차이가 나타납니다. 이 질병의 개발을 선도 pathophysiological 메커니즘을 해독 하기 위한 연구는 적절 한 murine 모델의 부족에 의해 심각 하 게 방해 되었습니다. 이 프로토콜은 면역 체계의 역할 및 DC의 개발에 미생물와의 상호 작용의 연구를 용이 하 게 하는 DC의 murine 모델을 생성 합니다. C57BL/6 동물을 사용 하 여이 모델에 콜론의 원심 부분 원심 인공 항문을 만들어, 약한 염증 제외 장 세그먼트에 보통의 개발 트리거링 및 인간의 전형적인 병 변 재현으로 지저분한 stream에서 제외 됩니다. 적당 한 조직의 염증 반응으로 Dc입니다. 쥐 모델 달리 많은 유전자 변형 murine 모델 C57BL/6 배경에 사용할 수 있습니다. 우리의 모델이 동물의 조합 수 있습니다 개별 cytokines, 발산, 또는 생리 활성 분자 (예를 들어, 인터 루 킨 (IL)-17;의 수용 체의 잠재적인 역할을 IL-10, chemokine CXCL13, CXCR5 및 CCR7, chemokine 수용 체 그리고 sphingosine 1 인산 염 수용 체 4) DC의 병 인에 평가. C57BL/6 백그라운드에 congenic 쥐 긴장의 가용성은 크게 다른 종류의 세포는 병 인에 관련 된 DC의 역할을 설정 하는 전송 실험 용이. 마지막으로, 모델 및 비 영향을 영향을 받는 장 세그먼트에서 점 막 면역에 지역 개입 (예를 들어, 로컬 미생물 또는 로컬 염증 치료의 수정)의 영향을 평가 하기 위해 기회를 제공 하 고는에 조직의 면역 항상성입니다.

수술은 모두 실험 (인공), 가짜 (colotomy) 그룹에 잘 용납입니다. 수술 및 수술 관리 올바르게 수행 하는 경우 수술 사망률 10%를 넘지 말아야 한다. 첫 수술 후 주에 상당한 체중 감소 실험와 가짜 그룹에서 볼 수 있다. 가짜 그룹의 동물 달성 4 번째 수술 후 날 향해 일반적으로 그들의 체중 최하 하지만 실험 그룹의 뒷부분에 나오는 1 일 발생. 체중 감량은 초기 체중의 21.7%에 도달 하는 실험적인 그룹에 더 발음 됩니다. 반면, 가짜 동물 그들의 초기 몸 무게 (그림 2)6의 10.8%를 잃게됩니다. 수술 후 첫 주에 체중 nadir 후 몸 무게 두 실험 그룹에서 하지만 실험적인 그룹에서 느린 경사로 지속적으로 상승. (즉, 피 묻은 방전 또는 어느 실험도 가짜 그룹6에서 발생 하는 액체 배변) 심...

Murine 원심 인공 인간의 전환 colitis, 지저분한 스트림에서 제외 콜론 세그먼트에서 주로 림프 colitis 위한 murine 모델을 제공 합니다.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 우회성 대장염 발병에서 면역 체계의 역할과 미생물 군집과의 상호 작용에 대한 연구를 촉진하는 것입니다. 이 방법은 대변 흐름에서 제외된 두 세그먼트 모두에서 발생하고 전환성 장루가 있는 환자의 최대 90%에 영향을 미치는 전환성 대장염에 관한 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 대장염을 유발하기 위해 유전자 변형 동물, 화학적으로 자극적인 물질의 사용 또는 면역이 결핍된 마우스로 특정 세포 집단을 이식할 필요가 없다는 것입니다.동물 시설에 도착하면 쥐를 비슷한 크기의 그룹으로 나눕니다. 각 그룹을 함께 케이지하고 실험 내내 그룹을 일정하게 유지합니다. 적어도 수술 일주일 전에는 모든 필수 미량 원소와 비타민이 함유된 고에너지 고단백 사료로 전환하십시오.텍스트 프로토콜에 따라 동물을 마취한 후 수술을 준비하려면 테이프를 사용하여 체온 손실을 방지하기 위해 가열 패드에서 누운 자세로 동물을 안정시킵니다. 그런 다음 마우스가 운동 반응 없이 발가락 꼬집기와 같은 기계적 자극을 견디는지 확인합니다.수술을 시작하기 전에 알코올 70%와 1회 4%를 사용하여 수술 부위를 3회 소독합니다. 무균 상태를 보장하기 위해 작업 필드를 드레이핑하십시오. 리네아 알바를 따라 복부 근육과 복막을 절개하여 출혈을 최소화하는 15mm 중형 개복술을 수행합니다.그런 다음 두 개의 debakey atraumatic forceps를 사용하여 복막강에서 맹장, 말단 회장, 하행 및 횡단 결장을 조심스럽게 당깁니다. 장간막 구조의 손상을 방지하고 장의 최적 풍량을 유지하기 위해 장의 기계적 조작을 제한하도록 주의하십시오. 다음으로, cecal pole, ascending colon 및 small intestine을 확인합니다.회장 영역의 해부학적 구조가 모호한 경우, Peyer's patches의 존재는 소장을 식별하고 형태 ature의 존재는 결장을 특징짓습니다. 자를 사용하여 향후 결장루의 위치를 결정합니다. 원위 결장루를 위해 회장 판막 원위 20mm에 위치해야 합니다.오른쪽 상단 사분면의 복벽을 3mm 더 절개합니다. 그런 다음 이 절개 부위를 통해 이전에 식별된 결장 분절을 당겨 고리를 형성하고 고리가 왜곡되지 않도록 주의합니다. 22게이지의 유연한 IV 캐뉼라를 중결장을 통해 조심스럽게 통과시키되 장간막 혈관 구조가 손상되지 않도록 주의하십시오.그런 다음 장을 복막강으로 되돌립니다. 간단한 바늘과 재흡수성 봉합사를 사용하여 유연한 튜브의 양쪽 끝을 피부에 고정합니다. 개복술을 닫기 전에 0.9%식염수 0.5mL의 복막 내 주사를 사용하여 수액 소생술을 수행합니다.지속적인 재흡수성 봉합사로 복막과 근육층을 닫습니다. 그런 다음 비슷한 방법으로 피부를 닫는다. 미세한 가위를 사용하여 부분합 횡단을 수행하여 외부화된 콜론 루프를 엽니다.장간막에 대한 모든 부상을 피하고 결장을 완전히 횡단하지 마십시오. 모노필 흡수성 봉합사로, 복막과 피부에 3개의 단일 전체 두께 스티치를 사용하여 각 결장루 개구부를 고정합니다. 기능적 말단 결장루인 구심성 고리(afferent loop)와 점액 누공(mucus filvula)인 원심성 고리(efferent loop)는 이 시점에서 명확하게 분리됩니다.결장절개술을 시행하려면 원위 결장루에 대해 입증된 대로 두골극, 상행 결장 및 소장을 확인한 후 자를 사용하여 결장루와 회장 판막에서 동일한 거리에 위치해야 하는 향후 결장절개술 위치를 결정합니다. 가는 가위를 사용하여 결장 둘레의 최소 2/3를 엽니다. 모노필 흡수성 봉합사를 사용하여 수액 소생술을 수행하고 이전과 같이 복막과 피부를 봉합하기 전에 전체 두께의 단속 봉합사로 결장절개술을 닫습니다.절차에 따라 동물을 우리로 되돌리고 완전히 깨어날 때까지 섭씨 37도의 적외선 램프 아래에 두기 전에 온도와 습도가 조절되는 환경으로 되돌립니다. 동물이 기계적 자극에 반응을 보이면 체중 1kg당 0.1mg의 부프레노르핀 SC를 주사하여 수술 후 진통을 시작합니다. 호흡 억제의 징후가 있는지 주의 깊게 확인하십시오. 수술 후 첫 주 동안 지속적인 진통제를 위해 mL당 1mg의 트라마돌을 식수에 보충하십시오.거동이 불편하여 감소한 수분 섭취를 보상하기 위해, 수술 후 첫 주 동안 케이지에 고체 음료수 패드를 공급하십시오. 마지막으로, 동물의 무게를 측정하고 첫 번째 주 동안에는 매일, 첫 번째 달의 나머지 기간 동안 두 번째 날마다, 두 번째 달에는 세 번째마다 동물 행동을 평가합니다. 수술은 실험 그룹과 가짜 그룹 모두에서 잘 견딥니다.체중 감소는 실험 그룹에서 더 두드러지며 초기 체중의 21.7%에 이릅니다. 대조적으로, 가짜 동물은 초기 체중의 10.8%를 감량합니다. 수술 후 첫 60일 동안의 총 사망률은 결장루군에서 약 40%, 가짜 투여군에서 약 10%입니다.대부분의 사망은 수술 후 첫 주에 발생했으며, 사망 원인은 이 그림에 나와 있습니다. 마우스의 원위 결장루는 주로 림프구성 대장염의 발병을 초래하여 인간 DC의 특징적인 조직학적 특징을 재현합니다. 배제된 장 분절에서 30일 후에 배상 세포 보유 소낭선 길이가 감소합니다.절대 배상 세포 수는 또한 수술 후 14일 후에 제외된 장 분절의 소굴에서 현저히 감소합니다. DC의 특징적인 병변인 점막에서 림프낭 여포가 발생하면 대변 편차가 더 오래 지속되어야 합니다. 빠르면 2주부터 림프구 여포의 수가 증가할 수 있지만, 2개월이 지나면 그 차이가 현저해집니다.이 비디오를 시청한 후에는 쥐 원위 결장루를 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 20분 이내에 완료할 수 있습니다. 이 모델은 특정 세포 집단의 염증 매개체의 역할과 전환 대장염의 발병기전을 다루기 위해 다른 유전자 변형 모델 또는 선천성 마우스 균주에서 이식 실험과 결합할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

식수에서 실시 Dextran 황산 나트륨 (DSS)은 급성 대장염의 설립 murine 염증성 손상 모델입니다. 이 프로토콜은 DSS 치료와 조직의 준비를 위해 방법을 설명합니다.

Dextran의 황산 나트륨 (DSS)를 사용 Murine 대장염 모델링

우리는 빠르게 친 염증성 에이전트 dextran 황산 나트륨 (DSS)의 세주기에 의해 다음과 일관되게 인간의 대장염에서 본 것과 morphologic와 분자 유사성과 마우스에 결장 종양을 생성 genotoxic 에이전트 azoxymethane (AOM)의 어느 관리의 프로토콜을 보여줍니다 암을 관련.

Azoxymethane (AOM)과 Dextran의 황산 나트륨 (DSS)와 모델링 대장염 - 관련 암

이 비디오에서는 마우스 근위 결장 루프 또는 pcLoop 세그먼트를 생성하는 수술 절차를 설명한 다음 장 상피 투과성을 연구하기 위해 세그먼트에 형광 마커를 내강 내 주입하는 방법을 설명합니다.

Mouse Proximal Colon loop Model의 생성: 내강내 주사 후 혈청 내 형광 마커를 검출하여 근위 결장 루프를 생성하고 장 투과성을 측정하는 수술 절차

이 비디오는 염증성 장 질환인 대장염의 화학적 유도 쥐 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 마우스는 적절한 기간 동안 덱스트란 황산나트륨(DSS) 용액을 섭취할 수 있습니다. DSS를 섭취하면 결장의 점액과 상피층 장벽이 손상되어 장내 미생물이 기저 조직으로 들어가 상주 면역 세포가 이를 감지하여 과장된 면역 반응을 매개하여 염증을 유발합니다.

덱스트란 황산염 나트륨 유발 대장염의 쥐 모델을 생성하는 기술

Citrobacter rodentium 감염이 장의 세균 감염을 공부뿐만 아니라 마우스의 면역 반응 및 대장염를 개최 할 수있는 중요한 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 장벽 무결성, 병원체 부하와 손쥐 전염성 대장염에 대한 병원체 및 호스트 공헌의 철저한 특성을 허용하는 조직 학적 손상의 측정을 설명합니다.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; 마우스 모델 : 감염성 대장염에 대한 공부 병원체 및 호스트 기부

지난 몇 년 동안, 새로운 세대의 내시경은 쥐 대장염과 대장 종양을 평가하기위한 중요한 진단 연구 보조로 등장했습니다. 우리는 생쥐의 염증과 대장 종양의 내시경 적 평가뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 내시경 심각도를 문서화하는 진수 식별자를 사용하는 새로운 채점 시스템에 여기에 대한 자세한 프로토콜을 제시한다.

검증 된 내시경 채점 시스템을 사용하여 대장염과 대장 종양의 위험을 평가하기 위해 마우스의 유연한 대장 내시경 검사

분절성 아데노 크리 (adeno-cre) 감염 및 고해상도 대장 내시경 검사 를 통한 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델을 확립하기위한 프로토콜이 제시됩니다.

산발성 대장 암의 유 전적으로 조작 된 마우스 모델

창 자 방해는 심한 복 부 통증, 메스꺼움, 구 토, 그리고 대변의 통과 방지 하면 내장의 부분적 또는 완전 한 막힘. 쥐에서 장 부분 obsructions를 만들기 위한이 절차는 병 적인 세포 성장 및 소장에서 죽음을 기본 메커니즘을 공부에서 신뢰할 수 있는.

장 부분 방해의 마우스 모델

Anastomotic 누설 또는 수술 후 고장 수술 후 병 적 상태와 사망률의 주요 원인입니다. 저 승 문 합을 만들기 위한 우리의 수술 anastomoses의 치유 메커니즘을 공부에 대 한 안정적이 고 재현 가능한 방법입니다.

쥐에 있는 저 승 문 합의 창조

제시된 프로토콜은 염증성 장 질환 관련 대장암의 유도에 이어 마우스에서 부록(caecal patch)의 막강 외과적 제거를 기술한다. 이 뮤린 충수 절제술 모델은 인간 위장 병기의 병인에서 부록의 생물학적 역할을 조사 할 수 있습니다.

만성 대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 Caecal 패치의 정확한 국소화에 의해

우리는 장 조작을 통해 생성된 수술 후 장폐색의 쥐 모델을 설명합니다. 위장 통과 기능, 병리학적 변화 및 면역 세포 활성화는 수술 후 24시간 후에 평가되었습니다.

수술 후 장폐색 쥐 모델

배우세요 C57BL/6 마우스를 이용한 원심 인공 수술법으로 전환 결장염을 연구하는 방법을. 이 기법은 유전자 변형 없이 면역 반응과 미생물군 상호작용을 탐구할 수 있는 신뢰할 수 있는 동물 모델을 제공합니다.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

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