Name: 호흡기 관련 및 병원-획득 세균성 폐 렴의 murine Oropharyngeal 포부 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: 배우세요 마우스 구강인두 흡인법을 이용한 폐렴 감염 모델로 항생제 내성 및 신약 효능을 평가하는 방법입니다. 이 기술은 임상 감염을 신속하고 재현 가능하게 재현하여 감염병 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

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이 작품은 알레르기의 국가 학회 및 건강의 국가 학회 [부여 번호 R01 AI117211, R01 AI130060, R21 AI127954 그리고 R42 AI106375 학사] 및 미국 식품 및 의약품 안전 청 [계약에서 전염병에 의해 지원 되었다 BML HHSF223201710199C]입니다.

동물 관련 된 모든 절차는 연구원의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인을 받아야 한다.
1입니다. 세균성 Inoculum의 준비
<ol><li>세균성 식민지를 격리 합니다.<ol>
<li>행진 (예를 들어, A. baumannii "HUMC1") 적절 한 살 균 한 천 매체 (예를 들어, Tryptic 간장 agar)에 세균성 긴장 되 주의 고립 된 식민지를 생성 하 고.</li>
		<li>적절 한 조건 (예를 들어, 37 ° C에서 하룻밤)에 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>숙박 문화를 성장.<ol>
<li>대표, 메 마른 inoculating 루프와 한 천 배지에서 고립 된 식민지를 선택 하 고 그것을 사용 하 여 적절 한 살 균 국물 매체 (예를 들어, Tryptic 간장 국물) 10 mL를 접종 하.</li>
		<li>적절 한 조건 (예를 들어, 통풍 모자, 50 mL 원뿔 유리병에 하룻밤 200 rpm에서 떨고 37 ° C)에서 고정 단계에 도달 하는 샘플을 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Subculture 성장.<ol>
<li>피 펫을 사용 하 여 신선한 메 마른 국물의 10 mL를 100 μ의 숙박 문화를 전송 합니다.</li>
		<li>지 수/로그 단계는 적절 한 조건 (예를 들어, 통풍 모자, 50 mL 원뿔 유리병에 3 h 200 rpm에서 떨고 37 ° C)에 도달 하실 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Subculture 워시.<ol>
<li>Subculture incubating 환경에서 제거 합니다.</li>
		<li>박테리아를 작은 5 분 4000 × g에서 원심.</li>
		<li>발음 하 고는 상쾌한 삭제.</li>
		<li>펠 릿을 완전히 resuspended 때까지 적극적으로 소용돌이의 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 10 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>총 3 세척 단계 1.4.2-1.4.4 두 번 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>세균 현 탁 액의 농도 조정 합니다.<ol>
<li>600에서 광학 밀도 측정 하는 분 광 광도 계를 사용 하 여 nm (OD600), 세균 현 탁 액의 광학 밀도 측정.</li>
		<li>살 균 PBS 세균 현 탁 액에는 inoculum의 광학 밀도 0.5, OD600 에 떨어질 때까지 사용 하 여 추가는 방정식 C나× Vi = Cf× Vf, "C"는 농도, "V"는 "나" 볼륨 초기, 최종 "f"입니다. * Cf 항상 0.5; 되어야 Vf 는 변수를 해결 하기 위해입니다.</li>
		<li>세균 현 탁 액 0.5 세600 떨어지면, 작은 박테리아와 0.5 세600 를 도달 하는 상쾌한의 적절 한 금액을 제거 5 분 4000 × g에서 원심.</li>
		<li>(예를 들어, 1 × 10-6을 달성 하기 위해 3 1: 100 희석) 살 균 PBS에 직렬 희석을 수행 및 식민지 형성 세균 농도 보여 상관 계수를 결정 하기 위해 살 균 한 천에 접시 (CFUs/mL) 당 단위 에는 OD600 0.5의. 참고:이 상관 계수 값 각 종족의 각 변형에 대 한 달라 집니다 및 감염에 대 한 inoculum 준비 전에 결정 되어야 합니다.</li>
		<li>상관 계수를 결정 한 후 원하는 농도 (예를 들면, 2 × 108-1 × 109 CFUs/mL);의 inoculum을 만드는 데 사용 원하는 inoculum OD600 0.5 보다 크면, 원심 작은 박테리아와 원하는 농도 도달 하는 상쾌한의 적절 한 금액을 제거 5 분 4000 × g에서 세균 현 탁 액.</li>
		<li>이러한 값은 동일한 종의 세균 분리와 다른 유전 배경의 마우스 사이 달라 집니다 마우스의 각 변형에 세균 분리 각의 독성 확인 vivo에서 파일럿 연구를 수행 합니다. 다양 한 그람 음성 종족에 대 한 LD100 마우스에는 일반적으로 1-5 × 108 CFUs/마우스, 특정 긴장은 낮은 inocula에 치명적인.</li>
	</ol>
</li>
	<li>이전에 게시8 (옵션) 필요 시, 정확한 inocula로 나중에 사용할 동일한 aliquots를 고정 합니다.<ol>
<li>두 500 mL 원뿔 튜브, 및 4000 × g에서 원심 분리기는 5 분, 위에서 설명한 전송으로 세균성 inoculum 1 리터를 준비 합니다.</li>
		<li>각 원뿔 유리병에서 상쾌한의 450 mL를 폐기 하 고 나머지 상쾌한에 박테리아의 펠 릿 resuspend.</li>
		<li>마그네틱 볶음 bar가 포함 된 250 mL 비 커에 집중된 세균 inoculum을 전송 하 고 지속적으로 300 rpm에서 저 어 접시 위에 섞으십시오.</li>
		<li>신중 하 게 집중된 세균성 inoculum (예를 들어, 1 × 1010 CFUs/mL)의 정확 하 게 600 μ 전송 포함 하는 살 균 H2O의 정확 하 게 300 μ와 300 mL 1.6 극저온 유리병에는 피 펫을 사용 하 여 살 균 글리세롤;의 μ 믹스와-80 ° c.에 게 참고: 저장을 위해 필요한 글리세롤 실험 결과 혼동 하 고 그래서 그것을 씻어 필요가 초과 사망을 일으킬 수 있습니다.</li>
		<li>때 사용 하기 위해 준비, 실 온에서 10 분에 대 한 샘플을 녹여.</li>
		<li>1 mL 50 mL 원뿔 유리병에 전송, 작은 공의 박테리아를 5 분 동안 4000 × g에서 살 균 PBS, 그리고 원심 분리기의 9 mL를 추가 합니다. 상쾌한 발음 하 고 감염 inoculum에 대 한 원하는 농도 도달 하는 PBS의 적절 한 볼륨에서 미리 정해진된 양의 CFUs (1 mL × CFUs/mL에서 재고 농도 냉동) resuspend.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 마비 쥐
<ol><li>케 타 민/Xylazine 참고: 케 타 민/xylazine와 마 취 마우스 일어나 야 하기 전에 접종 절차를 완료 하려면이 기술에서 새로운 연구에 대 한 충분 한 시간을 제공 하 긴 기간, 있다.<ol>
<li>Pharmaceutifcal 학년 PBS, 100 mg/mL 마 취 제 재고 솔루션의 1 mL의 8.5 mL를 결합 하 여 주사 솔루션의 10 mL를 준비 (최종 농도 10 mg/mL), 그리고 20 mg/mL Xylazine 재고 솔루션의 0.5 mL (최종 농도가 10 mg/mL).</li>
		<li>(예를 들어, 25-g 마우스에 대 한 250 μ) 복 (IP) 주입에 의해 10 μ/g를 관리 합니다.</li>
		<li>그들의 눈은 마 취의 연장된 기간 동안 손상 하는 경향이 있기 때문에 케 타 민/Xylazine와 함께 취 쥐의 눈에 안과 연 고를 적용 합니다.</li>
		<li>에 마우스를 놓고 마 취에서 깨어났을 때까지 모니터 합니다. 참고: 동물 하지 맡겨야 한다 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isoflurane 참고: 마우스 빨리 일어나 isoflurane 유도 마 취에서 접종 절차에서 숙련 되 고 마 취의이 메서드를 사용 해야만 유도 약 실에서 제거 되 고 후.<ol>
<li>산소 흐르는와 적절 한 크기의 유도 실에서 순진한 마우스를 놓습니다.</li>
		<li>챔버 봉인된 종료 후 anesthetize isoflurane 4% (v/v) 적어도 5 분;에 대 한 추가 정밀 기화 기를 사용 하 여 마우스 마 취 유도 실에서 마우스를 제거 하 고 마 취에서 깨어나 하는 데 걸리는 시간을 측정 하 여 확인 (~ 60 s). 참고: 기관 지침에 따라 마 취 시간이 다를 수 있습니다 및 일부 동물 되 완전히 마 취를 5 분 이상 필요할 수 있습니다 다는 것을 유의 하십시오.</li>
		<li>2-3%; isoflurane 농도 조정 하 여 최대 10 분 동안 마 취를 유지 마 취 총 기간은 경우 > 15 분, 마 취 쥐의 눈에 안과 연 고를 적용.</li>
		<li>에 마우스를 놓고 단계 2.1에서 마 취에서 깨어났을 때까지 모니터 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 접종/감염 쥐
<ol><li>마 취 마우스를 일시 중단, 약 두 번 마우스의 몸 길이 (예를 들어, 20 cm) (예: 운영 표면 위에 높이에 고정 된 개체에 보안 강한, 얇은 문자열 (예:, 민트향)에 그것의 위쪽 앞 니에 의해 그것을 거 실험실 벤치).</li>
	<li>살 균, 무뚝뚝한 끝난 집게를 사용 하 여 그것의 입에서 마우스의 혀는 부드럽게 당겨. 마우스의 혀의 우연한 분쇄를 방지 하기 위해 살 균, gloved 손가락을 혀를 전송 합니다. oropharynx에 액세스할 수 있도록 하 고 방지 측면 inoculum의 삼 키는 입 밖으로 혀를 잡으십시오.</li>
	<li>마우스의 혀를 누른 oropharynx micropipette;를 사용 하 여 50 μ inoculum (세균성 중지) 장소 oropharynx는 구강과 인 두는 입의 뒤쪽의 교차점에 위치 해 있습니다. 참고: 그것은 매우만 micropipette에 첫 번째 정류장에 pipetting으로 액체를 제공 하는 것이 중요입니다. 마우스는 inoculum oropharynx;에 배치 되는 때 몇 초 동안 호흡을 중지 합니다. 결국, 재귀 포부 폐 렴 감염 귀착되는 폐를 입력 액체의 독특한 딱딱거리는 소음에 의해 표시 된 세균 현 탁 액을 흡입 하는 마우스를 발생할 것입니다.</li>
	<li>경우는 inoculum까지 배치 되지 않습니다 다시 충분히 정상적인 호흡, 입과는 inoculum의 후속 흡입을 통해 반사 포부를 집게는 네어스 꼬집어.</li>
	<li>접종, 후 혀, 서 스 펜 션 문자열에서 마우스를 제거, 감 금 소에 놓고 모니터링 단계 2.1에서 마 취에서 깨어났을 때까지.</li>
</ol>4. 질병의 진행을 모니터링
참고: 때문에 동물의 고통을, 다양 한 지표 사용 해야 쥐 죽어가는; 될 때를 나타내는 이전 승인된 IACUC 프로토콜;에 따라이 결정에 따라 안락사를 수행 한다 체온, 체중 감소, 모양, 걸음 걸이, 및 혈액 (예를 들어, iSTAT 통해)9,10,11,12,에서에서 얻을 수 있는 다른 생체를 포함 하는 moribundity의 다양 한 마커 13,14,,1516.
<ol><li>이전 승인된 IACUC 프로토콜 (예를들면, CO2 뒤에 자 궁 경부 전위)에 따라 마우스를 안락사</li>
	<li>기관지, 폐 동맥 및 폐에 가까운 폐 정 맥을 절단 하 여 안락사 마우스에서 폐를 제거 합니다.<ol>
<li>현미경 검사 법<ol>
<li>표본 형에서 폐 (또는 부분)를 놓습니다.</li>
			<li>최적의 절삭 온도 (O.C.T.) 화합물, 완전히 잠수 조직 표본 형을 채우십시오.</li>
			<li>-80 ° c.에 샘플을 동결</li>
			<li>섹션 및 현미경 검사 법에 대 한 슬라이드에 병리학 실험실에 샘플을 보냅니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>세균성 부담<ol>
<li>폐 조직 분석 균형에 무게.</li>
			<li>50 mL 원뿔 유리병 (조직의 크기)에 따라 살 균 PBS의 2 ~ 5 mL를 포함 하는 폐 조직 전송.</li>
			<li>조직 균질 화기와 폐 조직 균질.</li>
			<li>약 1000 CFUs/mL, 폐에 있는 예상된 세균성 짐에 따라 달성 하기 위해 살 균 PBS에는 homogenate의 직렬 희석을 수행 합니다.<ol>
<li>예를 들어 1 × 109 CFUs/mg, 예상 하는 경우 수행 3 1: 100 희석: 9.9 ml PBS의 소용돌이; homogenate의 전송 100 μ 이것은 첫 번째 1: 100 희석 이다. 첫 번째 1: 100 희석의 100 μ 9.9 mL PBS와 소용돌이;의 전송 이것은 두 번째 1: 100 희석 이다. 두 번째 1: 100 희석의 100 μ 9.9 mL PBS와 소용돌이;의 전송 이것은 제 3의 그리고 마지막 1: 100 희석 이다.</li>
				<li>폐에 있는 세균성 짐을 알 수 없는 경우 예상된 범위를 잡으려고 희석의 범위를 수행 합니다.</li>
			</ol>
</li>
			<li>접시에 살 균 한 dilution(s)입니다.<ol>
<li>Agar (TSA) 격판덮개를 가진 메 마른 Tryptic 간장 국물 (TSB) 준비: 결합 TSB의 30 g, 한 천의 15 g, 물 1 L, 자력으로 혼합 하 고 5 분 쿨을 다음 압력솥에 액체 사이클 15 분을 냉각 허용에 대 한 허용에 대 한 ~ 100 ° C에서 끓는 때까지 열 ~ 55 ° C, 전송 10 mL 갓 압력가 마로 소독 멸 균 페 트리 디쉬에 TSA 실내 온도에 냉각 하 고. 2-5 d 벤치탑에 건조 또는 biosafety 캐비닛 10 분에서 발견 하자.</li>
				<li>페 트리 접시 살 균 TSA를 포함 하는 희석의 100 μ를 전송 및 TSA 스프레더 또는 유리 비즈를 사용 하 여 분산.</li>
				<li>(즉, 물으로 가득 발견된 1 리터 비 커를 포함 하는 37 ° C 인큐베이터) 습도 인큐베이터에서 37 ° C에서 하룻밤 배양 접시를 저장</li>
			</ol>
</li>
			<li>CFUs/mL 폐 homogenate agar 도금에 따라 결정 (예를 들어, 위에서 설명한 제 3의 그리고 마지막 희석의 100 μ 가진 TSA 격판덮개에 100 CFUs 100 CFUs/100 μ × 100dil #1 × 100dil #2 × 100dil #3 것 = 1 × 109 CFUs/mL).</li>
			<li>CFUs/mg 폐 조직 기반 CFUs/mL 폐 homogenate mg 폐 조직/mL homogenate (예를 들어, 위에서 설명한 샘플 사용 폐 조직 PBS, 다음 1 × 109 CFUs/mL ÷ 100 mg/5 mL = 5 × 107 의 5 mL에 균질의 100 밀리 그램으로 나누어 계산 CFUs/mg).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

확실히, 마우스 미니어처 인간 되지 않습니다. 마우스 모델에서 얻은 결과 맥락에서 고려 하 고 이후 차이6두 종 사이의 유사성에 따라 인 간에 게 적용에 대 한 해석 해야 합니다. 그것은 또한 선택으로 적절 한 마우스 긴장 하는 것이 중요 특정 있다; 다른 사람 보다 일부 감염에 더 취약 선택16의 병원 체 변형 마찬가지 다.
엄격한 고 매우 재현 방법으로 감염을 수행 하기 위해 필수적 이다. Inocula는 하나의 값에 아직 그 값의 90%도 무해 한 쥐에 치명적 될 수 있습니다. 따라서, 그것은 절대적는 inoculum을 준비할 때에 특히 그리고 감염 하는 경우이 프로토콜에 나열 된 모든 조건 정확히 같은 방식으로 재생 된다. 또한, 각 병원 체 질병에 독특한 inoculum 일으킬 것입니다. 따라서, 그것은 각 스트레인의 병원 체와 마우스의 각 변형에 대 한 적절 한 inoculum을 결정...

더 낮은 호흡 감염 세계의 치명적인 전염 성 질병 및 개발 도상국1죽음의 가장 일반적인 원인입니다. 세계적으로, 이러한 감염 3.2 백만 이상 죽음1에 대 한 계정. 또한, 병원내 폐 렴 의료 인수 감염의 가장 일반적이 고 치명적인 형태 중 이며 가장 항생제 내성 병원 체2,3에 의해 발생 합니다. 모두 지역 사회 획득 세균성 폐 렴 및 병원내 폐 렴의 수집의 일반적인 경로 폐 포에 oropharyngeal 내용의 포부입니다. 종종 이러한 질병을 연구 하는 데 사용 하는 murine 모델 사용 intranasal 접종4, 입금 대상에서 합병증과 축 농 증 및 물리적 외상, 질병과 일치 되지 않은 같은 증상을 일으키는 폐 밖에 박테리아의 많은 모델은 인간의 진행 에뮬레이션 하도록 설계 되었습니다. 다른 모델은 흡입 챔버 및 micromisting 장치, 더 정확 하 게 바이러스, 결핵, 그리고 곰 팡이 pneumonias 모방 하지만 전형적인 세균성 pneumonias 획득의 정상적인 경로 정확 하 게 정리 하지 않습니다 사용할 수 있습니다.
Murine oropharyngeal 포부 폐 염 모델 자연 경로 및 세균성 폐 렴의 병 인을 시뮬레이션 하기 위해 활용 될 수 있습니다. 접종 50 µ L를 피 펫을 사용 하 여 마 취 쥐의 oropharynx에 세균 현 탁 액의,에 의해 반사 포부 인가요, 전염 성 폐 렴에서 결과. 이 모델을 사용 하 여, 하나는 폐 렴을 일으키는 병원 체와 높은 충실도 모델, 더 유사한 포부 폐 렴 감염 인간에서 관찰 된 이러한 질병에 대처 하기 위해 새로운 치료법의 pathogenesis를 확인할 수 있습니다. 또한, 비슷한 모델을 구강5,6감염, 달리이 모델 하면 전체 inoculum 그것 오프 사이트 염증과 감염, 위 염 등을 일으킬 수 있습니다 창 자 대신 폐에 도달 하면 그리고 장 염입니다. 마지막으로, 다른 게시 된 모델 요구는 후 두 경 하 고 기도7접종, 달리이 모델 gavage 바늘으로 기도 방해 하지 않습니다 그리고 inoculum 배달에 대 한 주입을 필요로 하지 않습니다. 대신, 접종 마우스의 자연 포부 반사에 의존합니다.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214530</td><td>TSB와 결합하여 TSA</td></tr><tr><td>비즈, 보로실리케이트 유리</td><td>Kimble</td><td>135003</td><td>매번 사용 전에 베이킹 또는 자동클레이빙으로 살균</td></tr><tr><td>비커, 250 mL</td><td>Pyrex</td><td>1003</td><td>집중 세균 접종의 정확한 분취 시 사용</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Sorvall</td><td>ST 40R 4,000</td><td>회 가능; 4&deg에 g; </td></tr><tr><td>C Chamber for Anesthesia</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>VetFlo-0720</td><td>최대 5 마리의 쥐</td></tr><tr><td>수용 Cryomold, 중간 크기</td><td>Sakura Tissue-Tek</td><td>4566</td><td>일회용 비닐 표본 금형, 15&times; 15&회; 5mm</td></tr><tr><td>치실</td><td>Oral-B</td><td>37000469537</td><td>안정적인 포스트에 묶습니다. 약 6" 테이블 높이</td></tr><tr><td>위의 펜치 VWR</td><td></td><td>82027-440</td><td>마우스의 입에서 혀를 부드럽게 빼내는 데 사용됩니다</td></tr>. <tr>Lung Tissue <td>Omni International</td><td>TM125-115</td><td>용 Homogenizer</td>는 <td>처음 사용하기 전에 고압클레이브를 사용합니다. 샘플 사이를 헹굽니다</td></tr><tr>.<td>마취를 위한 Isoflurane,</td><td>Abbott</td><td>10015516</td><td>대체 약물을 사용할 수 있습니다. 그에 따라 절차를 수정하십시오</td></tr>. <tr><td>iSTAT 카트리지</td><td>Abbott</td><td>03P79-25</td><td>귀하의 필요에 맞게 다양한 카트리지를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 케타민, 100 mg/mL</td><td>Western Medical Supply</td><td>4165</td><td>PBS에서 1:10을 1 mg/mL로 희석하고 1 mg/mL에서 Xylazine과 결합</td></tr>하십시오. <tr><td>눈을 위한 연고</td><td>Akorn</td><td>Tears Renewed</td><td>디스펜서 끝으로 눈을 만지지 마십시오</td></tr><tr><td>최적의 절단 온도 (O.C.T.) </td><td>Compound Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>-80 &deg에서 폐 샘플을 동결하는 데 사용됩니다. C 병리학 절편 준비</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>VWR</td><td>25384-302</td><td>폴리스티렌, 일회용, 멸균, 100회; 15mm</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td>칼슘 및 마그네슘이 없는 Dulbecco의 PBS</td></tr><tr><td>피펫 팁, 200-&mu; L</td><td>VWR</td><td>10017-044</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>Pipetter, 200-&mu; L</td><td>Gilson</td><td>Pipetman P200</td><td>사용 전 자동 클레이브 및 보정</td></tr><tr><td>스프레더, 세균 세포</td><td>Bel-Art</td><td>F377360006</td><td>매번 사용 전에 베이킹 또는 자동클레이빙으로 살균</td></tr><tr><td>Stir Bar, 자석, 7.9 mm 직경 &times; 38.1 mm 길이</td><td>VWR</td><td>58948-150</td><td>분할 중에 집중된 세균 접종을 젓는 데 사용됩니다</td></tr>. <tr><td>Stir Plate, Magnetic</td><td>Corning</td><td>PC-620D</td><td>분취 중 농축된 세균 접종물을 교반하는 데 사용</td></tr><tr><td>TSB(Tryptic Soy Broth)</td> <td>BD</td><td>211822</td><td>한천과 결합하여 TSA</td></tr><tr><td>바이알, 원추형, 멸균, 50mL</td><td>Corning</td><td>431720</td><td>세균성 접종물 준비에 사용</td></tr><tr><td>바이알, 원추형, 멸균, 500mL</td><td>Corning</td><td>431123</td><td>냉동 접종물 제조를 위한 접종물을 농축하는 데 사용됨</td></tr><tr><td>바이알, 극저온, 2.0mL</td><td>코닝</td><td>430659</td><td>농축 세균 접종 자일라진의 극저온 저장에 사용되며</td></tr><tr><td>, 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>AnaSed 주입은</td><td>PBS에서 1:20을 1 mg/mL로 희석하고 1 mg/mL에서 케타민과 결합합니다</td></tr></tbody></table>.

호흡기 관련 및 병원-획득 세균성 폐 렴의 murine oropharyngeal 포부 모델

Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

Murine 감염 모델이 질병 병 인을 이해 하 고 원인 병원 체에 대처 하기 위해 설계 된 새로운 치료제의 효능을 테스트 합니다. 감염 성 폐 렴 환자가 병원에서 제시한 가장 흔한 감염 중 이며 따라서 적절 한 생체 내에서 모델을 보증. 일반적인 폐 렴 모델 사용 대상에서 합병증과 증상, 축 농 증, 위 염, 장 염, 물리적 외상, 또는 microparticle 모방에 어로 졸 스프레이 등을 일으키는 폐 밖에 과도 한 유기 체를 예금 intranasal 접종 바이러스 성, 결핵, 또는 곰 팡이 폐 렴의 전형적인 확산. 이러한 모델 전형적인 지역 사회 또는 의료 획득 세균성 폐 렴의 병 인을 정확 하 게 반영 하지는 않습니다. 반면, oropharyngeal 포부 폐 염의이 murine 모델 의료 획득 폐 렴의 물방울 경로 모방합니다. 박테리아의 50 µ L를 접종 마 취 쥐의 oropharynx에 정지 하면 재귀 포부를 폐 렴. 이 모델을 사용 하나는 폐 렴을 일으키는 병원 체와이 질병에 대처 하기 위해 새로운 치료법의 병 인을 확인할 수 있습니다.

프로토콜을 따르고 신중 하 게, 재현 하 고 안정적인 데이터를 쉽게 얻을 수 있습니다. 그것은 중요 한 하나의 사용자 지정된 inoculum 준비 프로토콜 하나 서로 비교 하는 실험에 대 한 엄격 하 게 준수입니다. 그것은 또한 감염 절차 동안 마우스를 제대로 처리 하는 것이 중요입니다. 없는 isoflurane 마 취 실로 쥐를 배치 해야 합니다. 마우스는 미리 채워졌다 isoflurane 챔버에 배치 됩니다 경우 당황 것입니다 그리고 아마도 실험 결과 손상 시킬 수 있는 과잉 스트레스를 발생할 수 있습니다. 컨테이너 뚜껑을 확보, 후 천천히 점진적으로 0%에서 4% (v/v), 그것의 농도 증가 하 여 isoflurane를 소개 급하게 isoflurane 관리 또한 공포에 마우스를 발생할 수 있습니다. 쥐 되 면 무 의식, 2-3% (v/v) isoflurane 농도 감소 하 고 몇 분 추가 대 한 챔버에 남아 있을 수 있도록. 이 시점에서, 쥐가 될 준비가 감염 (...

감염 성 폐 렴은 인간에서 가장 일반적인 감염 중 하나입니다. 적절 한 생체 내에서 모델은 질병 병 인을 이해 하 고 새로운 치료제의 효능을 테스트 중요 합니다. 이 murine oropharyngeal 포부 폐 염 모델 하나 pathogenesis 및 이러한 치명적인 감염에 대 한 새로운 치료를 확인할 수 있습니다.

호흡기 관련 및 병원-획득 세균성 폐 렴의 murine Oropharyngeal 포부 모델

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative ...

이 방법은 인공호흡기 관련 폐렴 치료를 통한 새로운 치료법에 대한 항생제 내성 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 빠르고 쉽게 재현할 수 있는 방식으로 임상 감염을 정확하게 복제한다는 것입니다. 생쥐에게 접종하려면 첫 번째 마취 된 동물의 윗니 옆을 강하고 얇은 끈에 매달아 놓습니다.작동 표면 위의 고정된 물체에 마우스 몸통 길이의 약 두 배 높이에 고정합니다. 무뚝뚝한 집게를 사용하여 혀를 부드럽게 빼내고, 구강 인두에 접근할 수 있도록 장갑을 낀 멸균 된 손가락으로 혀를 옮깁니다. 마이크로 피펫의 플런저를 첫 번째 스톱으로 눌러 마우스가 반사 흡인에 의해 박테리아 현탁액을 흡입할 때까지 50마이크로리터의 접종물을 구강 인두에 놓습니다.쥐는 접종물을 구강 인두에 넣으면 몇 초 동안 호흡을 멈추고 결국 반사적 흡인으로 인해 폐로 들어가는 액체의 독특한 딱딱거리는 소리로 알 수 있는 박테리아 현탁액을 흡입하게 됩니다. 그런 다음 완전히 누울 때까지 모니터링하면서 동물을 우리로 되돌립니다. 적절한 실험 종점에서 기관, 폐동맥 및 폐정맥을 절단하여 폐 조직을 제거할 수 있도록 합니다.질병 진행에 대한 조직병리학적 분석을 위해 폐를 표본 주형에 넣습니다. 그리고 조직이 완전히 잠길 때까지 최적의 절단 온도 화합물로 금형을 채웁니다. 그런 다음 절편 및 분석이 이루어질 때까지 샘플을 섭씨 영하 80도에서 동결합니다.박테리아 부담을 추정하려면 적출된 폐 조직을 50ml 원뿔형 바이알로 옮기고 분석 저울로 질량을 측정합니다. 그런 다음 5ml의 멸균 PBS를 바이알에 옮깁니다. 조직 균질화기로 폐 조직을 균질화합니다.또한 균질성 및 멸균 PBS에서 연속 희석을 수행하여 감염된 폐에서 예상되는 박테리아 부담을 기준으로 밀리미터당 약 1000개의 집락 형성 단위(CFU)를 달성합니다. 각 희석액 100마이크로리터를 개별 트립틱 콩 한천 플레이트에 플레이트합니다. 그리고 유리 구슬을 사용하여 균질액을 고르게 분포시킵니다.그런 다음 플레이트를 가습된 섭씨 37도의 인큐베이터에 밤새 보관하십시오. 희석당 집락 형성 단위의 수를 계산하기 전에. LD 100을 결정하기 위해 다양한 접종 농도로 마우스를 감염시켜야합니다.이러한 대표적인 실험 조건하에서, 마우스당 10에서 8번째 CFU의 2배가 너무 높았다. 7번째까지 10을 5배, 7번째까지 10을 두 번 곱한 것은 너무 낮았다. 그리고 10번

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Lenhard, A. 외. 바이러스 공동 감염 시 폐 렴 구균이 집착자에서 병원체로 전환되는 마우스 모델은 연령에 따른 악화된 질병을 재현합니다. J. Vis. 경험 (2022)이 영상은 인플루엔자 바이러스가 폐 렴구 균을 정착자에서 병원체로 전환시키는 쥐 공동 감염 모델을 보여줍니다. 박테리아 정착, 바이러스 감염, 질병 진행에 관련된 단계를 개괄합니다.

바이러스 공동 감염 후 폐렴구 균 의 병원성 전이를 연구하기 위한 마우스 모델

출처: Nielsen, T. B. 외, 인공호흡기 관련 및 병원 내 획득성 세균성 폐렴의 쥐 구인두 흡인 모델. J. Vis. 경험 (2018)이 영상은 마취된 쥐의 폐로 박테리아를 전달하여 폐 감염을 유도하고 면역 반응을 유도하는 과정을 시연합니다.

세균성 폐 감염을 확립하기 위한 마우스 구인두 흡인 모델 준비

이 비디오는 삽관 및 폐엽에 박테리아 현탁액 설치를 통해 면역 능력이 있는 설치류 모델에서 폐 감염이 확립되는 것을 보여줍니다. 이 모델은 면역 능력이 있는 동물에서 항균 효능 연구를 가능하게 합니다.

면역 역량이 있는 설치류 모델에서 폐렴 연쇄상구균의 기관지 내 주입

우리는 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)의 기관내 주입에 의한 쥐 폐 손상 모델을 개발했습니다. 이 모델은 폐렴 중 폐 손상을 모방하며 임상적으로 관련이 있습니다.

녹농균 유발 폐 손상 모델

숙주-병원체 상호 작용에 대한 체외 연구는 특정 면역 반응의 특성을 규명할 수 있지만 복잡한 반응의 영향을 관찰하려면 생체 내 모델이 필요합니다. 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 노출 후 녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 매개 폐 감염을 사용하여 인공호흡기 관련 폐렴 병원성과 관련된 미생물 상호 작용에 대한 쥐 모델을 확립했습니다.

미생물 커뮤니티를 공부<em&gt; 생체</em&gt; 사이에 호스트 매개 상호 작용의 모델<em&gt; 칸디다 알비 칸스</em&gt; 및<em&gt; 녹농균</em&gt; 항공에

여러 가지 방법 마우스에서 세균성 폐렴 모델링 문헌에 기재되어있다. 여기서, 우리는 구강 인두로 피펫 세균 접종의 흡인 (즉, 흡입)를 통해 폐렴을 유도하기위한 비 침습적, 저렴하고 빠른 방법을 설명합니다. 폐 선천성 면역 반응의 평가를위한 다운 스트림 방법도 자세히 설명되어 있습니다.

마우스의 실험 세균성 폐렴의 유도 및 표현형에 대한 비 침습적 및 기술적 비 집약적 인 방법

이 프로토콜은 인간에서 관찰되는 산성 폐렴의 발병 기전과 매우 유사한 마우스에서 급성 폐 손상을 유발합니다. 우리는 최대한의 급성 치명적이지 않은 낮은 pH 폐 손상을 생성하고 원주 압력 방출과 결합된 개방 기관절개술을 사용하여 설치류-인간 해부학적 호흡 구조의 차이를 설명합니다.

급성 폐 손상의 열기 기관 절개 위산 흡인 쥐 모델은 최대한 급성 치명적 폐 손상의 결과

면역 능력이 있는 설치류에서 폐 감염을 확립하는 방법이 설명되어 있습니다. 숙련되면 이 방법을 빠르고 쉽게 수행하여 S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae 및 A. baumannii의 많은 분리물에서 안정적인 감염을 유도할 수 있습니다.

면역 적격 설치류에서 강력한 폐렴 모델에 대해 항균 효능을 평가하기<i&gt; S. 폐렴</i&gt;<i&gt; H. 인플루엔자</i&gt;<i&gt; K. 폐렴</i&gt;<em&gt; P. 녹농균</em&gt; 또는<em&gt;를했다. baumannii가</em

여기에서, 우리는 병원체 복구 및 전사체 분석에 선행된 더 낮은 호흡기관에 주입의 비침범성 경로를 제공함으로써 이차 세균성 폐렴 연구를 향상시키는 방법을 제시한다. 이러한 절차는 재현 가능하며 캐뉼라, 가이드 와이어 또는 광섬유 케이블과 같은 특수 장비 없이도 수행할 수 있습니다.

이차 세균성 폐렴의 뮤린 모델을 위한 정확한 병원균 전달 및 회복 시스템

이 원고는 생쥐에서 폐렴의 전염성 모델을 확립하고 손상 해결의 각각의 특성과 함께 박테리아 성장 및 기관 내 점안 방법을 설명합니다. 고차원 유세포 분석을 사용하여 면역 환경을 평가하는 새로운 접근 방식도 설명합니다.

폐렴의 해결을 평가하기 위한 실험모델

이 논문은 바이러스 감염 동안 폐렴구균이 무증상 집락 상태에서 질병을 유발하는 병원체로 전환하기 위한 새로운 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 질병 진행의 여러 단계 동안 다양한 숙주에서 다미생물 및 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 데 쉽게 적용할 수 있습니다.

바이러스 동시 감염 시 콜로니자에서 병원체로 Streptococcus pneumoniae 의 전환을 위한 마우스 모델은 연령 악화 질병을 요약합니다.

배우세요 마우스 구강인두 흡인법을 이용한 폐렴 감염 모델로 항생제 내성 및 신약 효능을 평가하는 방법입니다. 이 기술은 임상 감염을 신속하고 재현 가능하게 재현하여 감염병 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

호흡기 관련 및 병원-획득 세균성 폐 렴의 murine Oropharyngeal 포부 모델

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