Name: Chirurgische Labyrinthectomy der Ratte das vestibuläre System untersuchen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 3 s
Description: Lernen Sie die chirurgische Labyrinthektomie bei der Ratte zur Untersuchung des vestibulären Systems und der Kompensationsmechanismen. Diese Methode ermöglicht wichtige Einblicke in vestibuläre Funktionsverluste.

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Diese Forschung wurde unterstützt durch einen Zuschuss aus den Korea Health Technology R & D Project durch das Korea Gesundheit Industrie Entwicklung Institut (KHIDI), finanziert vom Ministerium für Gesundheit & Wohlbefinden, Republik Korea (gewähren Nummer: HI15C2651).

Diese Studie wurde durchgeführt, im Einklang mit den institutionellen Animal Care und Verwendung Ausschuss der Seoul National University Hospital (14-0148-C1A1), die von der Vereinigung für die Begutachtung und Akkreditierung of Laboratory Animal Care akkreditiert ist International.
Hinweis: Die Experimente wurden an Sprague-Dawley (SD) männlichen Ratten von ca. 7-8 Wochen alt (200/250 g) durchgeführt. Jedes Tier wurde bis 1 Woche vor Beginn des Experiments Laborbedingungen akklimatisiert. Die Tiere lebten in einem Raum Temperatur und Feuchtigkeit kontrolliert mit einer Konstanten 12-H:12-h hell: Dunkel-Zyklus mit freiem Zugang zu Nahrungsmitteln und Trinkwasser.
1. Labyrinthectomy
<ol><li>Decken Sie die autoklaviert chirurgische Instrumente mit einem sterilen Pad. Im OP-Bereich mit 70 % Ethanol zu desinfizieren. Verwenden Sie ein steriles Tuch und erhalten Sie sterile Bedingungen während der Operation zu.</li>
	<li>Eine Kleid zu tragen, Maske (zur Abdeckung Nase und Mund), Kappe (Kopfbedeckung), und ein paar sterile Handschuhe. Die chirurgischen Instrumente darf nur mit sterilen Oberflächen in Berührung kommen.</li>
	<li>Injizieren von tiletamin-Zolazepam Betäubung (40 mg/kg Körpergewicht) intramuskulär in den medialen Oberschenkel oder intraperitoneal, und Xylazin (10 mg/kg Körpergewicht) intramuskulär oder intraperitoneal. Hinweis: Andere Formen der Vollnarkose, einschließlich Isofluran Inhalation können auch verwendet werden.</li>
	<li>Legen Sie die Ratte auf eine Erwärmung (anfänglich bei 42 ° C). Beide Augen der Ratte, Augentrockenheit unter Narkose zu verhindern zuweisen Sie Schmiermittel Augensalbe.</li>
	<li>Legen Sie die Ratte auf der rechten Seite. Das Fell im Operationsbereich mit Haarschneidemaschinen zu rasieren. Desinfizieren Sie die Website mit 70 % Ethanol.</li>
	<li>Injizieren Sie 1 % Lidocain Hydrochlorid in der linken retroaurikulärer Bereich subkutan.</li>
	<li>Mit einem Skalpellklinge #15, machen Sie einen ~5.0 cm retroaurikulärer Schnitt. Trennen Sie den Muskel und Faszie, die äußeren Gehörgang mit Iris-Schere (Abbildung 1A) verfügbar zu machen. Öffnen Sie leicht den äußeren Gehörgang mit der Klinge #15 oder die Iris-Schere (Abbildung 1 b). Setzen Sie häufig das Trommelfell (Abbildung 2A).</li>
	<li>Unter dem Mikroskop (7,5 X oder 12,5 X) das Trommelfell und die Gehörknöchelchen mit Ausnahme der Steigbügel, mit der Pinzette zu entfernen. Lösen Sie die Muskeln auf dem Lambdoidal Grat mit der Klinge #15 oder die Iris-Schere (Abb. 2 b).</li>
	<li>Mit einem Bohrer mit niedriger Drehzahl (< 3000 u/min) mit einem Diamantschleifer (2.1 oder 1,4 mm) Bohren die Mittelohrchirurgie Bulla Knochen um den Punkt des Ausganges des Nervus facialis (Abb. 3A). Die stapedial Arterie zu identifizieren. Achten Sie darauf, nicht um die stapedial Arterie während des Bohrens zu beschädigen.</li>
	<li>Weiter Bohren das Vestibül der stapedial Arterie überlegen und das runde Fenster und die knöchernen Seitenkanal Semicircular aufdecken. Öffnen Sie den Seitenkanal Semicircular in der Nähe der Ampulle. Weiter in der Ebene der Seitenkanal Semicircular Bohren und Bohren der Ampulle des überlegenen Semicircular Kanals.</li>
	<li>Aspirieren Sie der Inhalt der Vorhalle mit einer 18-G oder 22 G Nadel. Spritzen und Aspirieren Sie 1 cm3 100 % Ethanol 3 X.</li>
	<li>Schließen Sie die Muskeln und die Haut in zwei Schichten mit einfachen unterbrochenen Nähten.</li>
	<li>Nicht unbeaufsichtigt lassen ein Tier bis es ausreichend Bewusstsein zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wiedererlangt hat. Halten Sie die Ratte warm, bis es erwacht mit einem Heizkissen oder eine Wärmelampe. Nach dem Erwachen, bewegen Sie sich die Ratte zu einem einzelnen Käfig in einem Raum mit den üblichen Umgebungsbedingungen.</li>
	<li>Verwalten von Antibiotika (z.B., Cefazoline 20 mg/kg, Trimethoprim-Sulfonamide 100 µL subkutan, oder Penicillin 300.000 IU) Bedarf an Tag 1; Analgetikum (kein Opioid; z.B., Allgemeinbefinden 2 mg/kg, Carprofen 5 mg/kg subkutan) können auch gegeben werden.</li>
</ol>(2) Sham Chirurgie
<ol><li>Für die Farce Chirurgie als ein Steuerelement, führen Sie die gleichen chirurgischen und postoperativen Verfahren (gemäß Ziff. 1), einschließlich der Exposition von den äußeren Gehörgang und das Trommelfell (Schritt 1.7), die Entfernung der das Trommelfell und die Gehörknöchelchen und die Ablösung der Muskeln auf der Lambdoidal Grat (Schritt 1,8), aber nicht öffnen Semicircular Kanal oder Ethanol zu injizieren.</li>
</ol>3. Überprüfen Sie den Verlust der vestibulären Funktion
Hinweis: Der Verlust der vestibulären Funktion kann mit entweder Verhaltens- oder vestibulären Funktionstests beurteilt werden. 13 , 17 , 18 Behavioral Tests umfassen die Bewertung der posturalen Asymmetrie und Nystagmus.
<ol><li>Identifizieren Sie Haltungsschäden Asymmetrie, die spontane oder evozierte Lauf-Rollen, fallen auf der linken Seite, oder sich bewegen und beugte sich zu der lesioned Seite18enthält. Sehen Sie Video 1.</li>
	<li>Nystagmus durch eine visuelle Inspektion der freiwillige Augenbewegungen zu identifizieren. Beim spontanen Nystagmus fehlt im Ruhezustand, Blätterteig Luft sanft über den Kopf des tierischen18. Sehen Sie Video 2.</li>
</ol>

<ol><li>Curthoys, I. S., Halmagyi, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vestibular+compensation%3A+a+review+of+the+oculomotor%2C+neural%2C+and+clinical+consequences+of+unilateral+vestibular+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vestibular+Research%22%5BJournal%5D)">Vestibular compensation: a review of the oculomotor, neural, and clinical consequences of unilateral vestibular loss.</a> Journal of Vestibular Research. 5 (2), 67-107 (1995).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Diese Technik ist eine nützliche Methode für die Erstellung von plötzlichen, dauerhafte und vollständige vestibulären Funktionsverlust. Dies ließe sich vestibuläre Erkrankungen, wie z. B. vestibuläre Neuritis, eine akustische Tumor und Morbus Menière zu studieren. Viele Studien haben diese Technik verwendet, um die neuronale Plastizität des vestibulären Kerne oder der dazugehörigen zentralen Prozess5,17,18,<sup class=...

Die vestibuläre Organ ist unerlässlich für Gleichgewicht und Auge. Eine normale vestibuläre Funktion hängt symmetrisch afferenten Signale aus der vestibulären Organe in den zwei inneren Ohren. Vestibuläre Unterfunktion oder Verlust induziert Schwindel, Nystagmus und Haltungs-Ungleichgewicht. Nach einer akuten Schädigung erholt sich die vestibuläre Funktion spontan innerhalb weniger Tage ein Prozess genannt vestibulären Kompensation1,2. Die vestibuläre Kompensation der statischen Defizite ist ein Prozess der Genesung, die im Zusammenhang mit dem Ungleichgewicht der spontanen ruheaktivität zwischen der ipsilateralen und kontralaterale vestibuläre Kerne. Die vestibuläre Kompensation der dynamischen Defizite erfolgt hauptsächlich über sensorische und Verhaltensstörungen Substitutionen (mit visuellen oder somatosensorische Eingänge)3. Diese Prozesse sind attraktiv für neuronale Plastizität Studien4,5.
Eine Reihe von Methoden wurden entwickelt, um das Gleichgewichtsorgan und die Mechanismen zugrunde liegenden neuronalen Plastizität während vestibuläre Kompensation, wie chirurgische und chemische Labyrinthectomy und vestibulären Neurectomy5,6 studieren ,7,8. Vestibulären Neurectomy ist gewissermaßen vestibulären Totalverlust zu induzieren, aber es ist ein schwieriger und invasive Verfahren und kann verursachen Hirnschäden8,9. Diese Methode erfordert größere chirurgische Geschick und dauert länger als Labyrinthectomy. Chemische Labyrinthectomy einschließlich Gentamycin, Arsanilate und Tetracaine, ist einfacher und kann liefern zuverlässige Ergebnisse10,11,12. Jedoch die Cochlea beschädigt werden und vestibulären Verlust kann entwickeln im Laufe der Zeit11. Darüber hinaus sind die Auswirkungen von Chemikalien auf das Gehirn, die für die genaue Auswertung erhalten werden soll, ist unklar. Chirurgische Labyrinthectomy wurde erstmals in tierexperimentellen Studien in 184215 und wurde zuerst bei der Ratte in 193616berichtet. Diese Technik wird inzwischen in vielen Tier-Studien5,17,18,19. Chirurgische Labyrinthectomy ist eine spezifische, zuverlässige und relativ einfache Methode. 13 , 14 im übrigen, die Symptome der vestibulären Schäden gelten unmittelbar nach der Operation. Hier beschreiben wir unsere OP-Technik für Ratte Labyrinthectomy.

<table><tbody><tr><td>ASPIRATOR KB-012</td><td>KOH BONG & CO., LTD.</td><td>KB-012</td><td>Medizinischer Aspirator</td></tr><tr><td>Klinge: #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>#10015-00</td><td>Klingen für #7 Skalpellgriffe, #15</td></tr><tr><td>Kohlenstoffstahl Grate</td><td>Fine Science Tools</td><td>#19007-05</td><td>Schaftdurchmesser: 2,3 mm, Länge: 44 mm, Packung mit 10 Graten</td></tr><tr><td>Carl Zeiss Surgical GmbH</td><td>Carl Zeiss</td><td>#6627100863</td><td>Operationsmikroskop</td></tr><tr><td>Dumont #3c</td><td>Fine Science Tools</td><td>#11231-20</td><td>Standardspitze 0,17 x 0,10 mm, 11 cm</td></tr><tr><td>Dumont #5SF</td><td>Fine Science Tools</td><td>#11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7B</td><td>Fine Science Tools</td><td>#11270-20</td><td>Verzahnt 0,17 x 0,10 mm, 11 cm</td></tr><tr><td>Extra Fine Science Tools: gerade</td><td>Fine Science Tools</td><td>#14084-08</td><td>Irisschere, bestens geeignet für Mikrodissektion unter hoher Vergrößerung</td></tr><tr><td>Feine Irisschere: gerade</td><td>Fine Science Werkzeuge</td><td>#14094-11</td><td>Hergestellt aus martensitischem Edelstahl, kombiniert mit Molybdän und Vanadium</td></tr><tr><td>Fingerschlaufe Ohrlocher</td><td>Fine Science Tools</td><td>#24212-01</td><td>1 mm. Bietet Stabilität und Kontrolle für Forscher, die das Nummerierungssystem verwenden</td></tr><tr><td>Hartman</td><td>Fine Science Tools</td><td>#13002-10</td><td>Spitzenbreite: 1 cm, gezahnt, 10 cm</td></tr><tr><td>Kurzer Skalpellgriff #7 Solid</td><td>Fine Science Tools</td><td>#10003-12</td><td>#7 kurzer, 12 cm</td></tr><tr><td>kleiner Gefäß-Kauterisierer</td><td>Fine Science Tools</td><td>#18000-03</td><td>Ersatzspitze, gerades Messer, reduziert Blutungen auf ein Minimum und bietet daher ein Operationsfeld frei von Klemmen und Hämostaten</td></tr><tr><td>Stark 207S</td><td>SAESHIN</td><td>207S</td><td>Leistungsstarkes Drehmoment bei niedriger Drehzahl, erhältlich mit Drehzahl- oder Ein/Aus-Fußschalter</td></tr><tr><td>Saugrohre</td><td>JEUNGDO B& VERIFIZIERTER LIEFERANT - P CO., LTD.</td><td>H-1927-8</td><td>Frazier, 18 cm</td></tr><tr><td>VICRYL</td><td>ETHICON</td><td>W9570T</td><td>Synthetisches resorbierbares steriles chirurgisches Nahtmaterial</td></tr><tr><td>Weitlaner-Locktite</td><td>Fine Science Tools</td><td>#17012-13</td><td>Maximale Spreizung: 4,5 cm, 2 x 3 stumpfe Zähne, 11 cm</td></tr><tr><td>Zoletil</td><td>Virbac, Frankreich</td><td></td><td>Tiletamine-zolazepam</td></tr><tr><td>Rompun</td><td>Bayer</td><td></td><td>Xylazin</td></tr><tr><td>Rimadyl</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Carprofen</td></tr><tr><td>Septra</td><td>Pfizer</td><td></td><td>Trimethoprim-Sulfonamid&nbsp;</td></tr></tbody></table>

chirurgische labyrinthectomy der ratte das vestibuläre system untersuchen

Surgical Labyrinthectomy of the Rat to Study the Vestibular System

Das vestibuläre System oder den vestibulären vergütungsprozess studieren, haben eine Reihe von Methoden entwickelt, um vestibulären Schäden, einschließlich der chirurgischen oder chemische Labyrinthectomy und vestibulären Neurectomy verursachen. Chirurgische Labyrinthectomy ist eine relativ einfache, zuverlässige und schnelle Methode. Hier beschreiben wir die Operationstechnik für Ratte Labyrinthectomy. Ein postauricular Schnitt erfolgt unter Vollnarkose zu entlarven, den äußeren Gehörgang und das Trommelfell, wonach das Trommelfell und die Gehörknöchelchen ohne die Steigbügel entfernt sind. Die Steigbügel Arterie, die sich zwischen den Steigbügel und des ovalen Fensters befindet, ist eine gefährdete Struktur und muss bewahrt werden, um eine klare OP-Feld zu erhalten. Ein Loch, fenestrate erfolgt das Vestibül mit einem 2,1-mm-Bohrer Bohrer überlegen die Steigbügel. Dann ist 100 % Ethanol durch dieses Loch eingespritzt und mehrmals abgesaugt. Sorgfältige Dissektion unter einem Mikroskop und sorgfältiger Blutstillung sind unerlässlich, um zuverlässige Ergebnisse zu erhalten. Symptome des vestibulären Verlust, wie Nystagmus, Kopf kippen und eine Rollbewegung, sind unmittelbar nach der Operation zu sehen. Der Rotarod oder Rotation-Stuhl-Test kann verwendet werden, um Objektiv und quantitativ die vestibuläre Funktion bewerten.

Der Erfolg der Operation wurde durch behavioral Tests validiert. Alle Tiere ausgestellt, das typische Verhalten von einem einseitigen Verlust der vestibulären Funktion. Spontane Lauf-Rollen zeigte sich unmittelbar nach der Operation, hervorgerufen durch einen Luftstoß über den Kopf oder eine leichte Berührung mit dem Körper in der frühen Phase der Erholung (Video 1). 3-d nach der Operation, die Tiere auf der lesioned Seite mit gelegentlichen gelehnt bewegt fällt auf der l...

Dieses Protokoll beschreibt die chirurgische Labyrinthectomy einer Ratte, die eine nützliche Methode für das Studium des vestibulären Systems ist.

Chirurgische Labyrinthectomy der Ratte das vestibuläre System untersuchen

To study the vestibular system or the vestibular compensation process, a number of methods have been developed to cause vestibular damage, including ...

Das übergeordnete Ziel der chirurgischen Labyrinthektomie bei der Ratte ist es, das vestibuläre System und die vestibulären Kompensationsprozesse zu untersuchen. Bei dieser Methode kann es zu akuten Komplikationen hinsichtlich des vestibulären Kompensationsprozesses des vestibulären Funktionsverlustes kommen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass es sich um eine einfache und schnelle Methode handelt.Im Allgemeinen haben Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten, die Steigbügelarterie zu erhalten. Denn die Steigbügelarterie befindet sich in der Nähe der Bohrstelle. Beginnen Sie damit, autoklavierte chirurgische Instrumente mit einem sterilen Pad abzudecken und den Operationsbereich mit siebzigprozentigem Ethanol zu desinfizieren.Nachdem Sie die Ratte mit einer institutionell anerkannten Methode betäubt haben, legen Sie die Ratte auf ein auf 42 Grad Celsius eingestelltes Wärmekissen. Tragen Sie Gleitmittel auf beide Augen der Ratte auf, um Augentrockenheit während der Narkose zu verhindern. Lege die Ratte auf die rechte Seite.Rasieren Sie dann das Fell über dem Operationsbereich und desinfizieren Sie die Stelle mit siebzigprozentigem Eth

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Dieses Video zeigt eine Methode zur Isolierung vestibulärer Neuronen aus dem Innenohr eines Mäusewelpen. Er beschreibt akribisch die Schritte, die erforderlich sind, um das Innenohr zu präparieren, das Ganglion vestibulär zu entnehmen und anschließend das Ganglion in einzelne Zellen zu dissoziieren. Diese Zellen werden dann auf Glasbodenschalen kultiviert, um eine vestibuläre Neuronenkultur zu etablieren.

Isolierung von Neuronen vestibulärer Ganglien aus dem Innenohr einer Maus

Analyse der vestibulären Haarzellen Funktion wird durch ihre Lage tief innerhalb der schwierigste Teil des Schädels, der Felsenbein kompliziert. Die meisten funktionalen Haarzellen Studien haben akut isolierten Haarzellen verwendet. Hier beschreiben wir eine semi-intakten Herstellung von Maus vestibulären Epithel für elektrophysiologische und Zwei-Photonen-Mikroskopie Studien.

Eine Isolierte Semi-intakt Vorbereitung der Maus Vestibuläre Sinnesepithel für Elektrophysiologie und hochauflösende Zwei-Photonen-Mikroskopie

Mitochondriale Dysfunktion ist ein Markenzeichen von Zellalterung. Dieser Aufsatz benutzt nicht-invasive nahen Infrarot (NIR) Behandlung die Mitochondrienfunktion im alternden Maus vestibulären Sinnesepithel verbessern.

Nahes Infrarot (NIR) Licht Erhöht Ausdruck einer Markierung der Funktion der Mitochondrien im Maus Vestibular Sinnesepithel

Hier beschreiben wir Canalostomy Verfahren die lokale Medikamentenabgabe in das innere Ohr von Erwachsenen und Neugeborenen Mäusen durch den Semicircular Kanal mit minimalschaden Hör- und vestibulären Funktion ermöglicht. Diese Methode kann verwendet werden, virale Vektoren, Pharma und kleine Moleküle in das Innenohr Maus impfen.

Canalostomy als ein chirurgisches Vorgehen zu Local Drug Delivery in das innere Ohr von Erwachsenen und Neugeborenen Mäusen

Die vorgestellte Protokoll erzeugt einen anhaltenden sensorischen Konflikt für Experimente zur langfristigen lernen zu studieren. Durch das dauerhaft eine feste Vorrichtung tragen auf dem Kopf, sind Mäuse ständig eine sensorische Missverhältnis zwischen visuellen und vestibulären Eingaben während der Fahrt frei im Hause Käfige ausgesetzt.

Langfristige sensorischen Konflikt in Mäusen frei Verhalten

Protokolle werden vorgestellt, um die autonomen und verhaltensorientierten Auswirkungen passiver Bewegungen bei Nagetieren mittels vertikaler Aufzugsbewegung und Riesenraddrehung zu bewerten.

Bewertung der autonomen und Verhaltenseffekte passiver Bewegungen bei Ratten mit vertikaler Aufzugsbewegung und Riesenradrotation

Hier werden Methoden vorgestellt, die detaillierte Anweisungen zum Sezieren, Dissoziieren, Kultivieren und Patch-Clamp-Aufzeichnen von vestibulären Ganglion- und Spiralganglienneuronen des Innenohrs liefern.

Isolierung und Kultivierung von vestibulären und spiralförmigen Ganglien-Somata von neonatalen Nagetieren für Patch-Clamp-Aufnahmen

In dieser Arbeit beschreiben wir eine Technik zur Entnahme menschlicher vestibulärer Endorgane unter physiologischen Bedingungen während der Labyrinthektomie und deren Analyse mittels Immunfärbung.

Entnahme vestibulärer Endorgane unter physiologischen Bedingungen während der Labyrinthektomie

We present a new dissection method to extract the vestibular ganglion and all five vestibular organs (utricle, saccule, and three cristae: lateral/horizontal, anterior, and posterior) as one whole-mount vestibular complex. Confocal imaging allows visualization of vestibular neuron cell bodies for quantification, as well as neuronal projections to the sensory...

Whole-Mount Dissection of the Vestibular Complex and Quantification of Vestibular Ganglion Neurons in Mice

Lernen Sie die chirurgische Labyrinthektomie bei der Ratte zur Untersuchung des vestibulären Systems und der Kompensationsmechanismen. Diese Methode ermöglicht wichtige Einblicke in vestibuläre Funktionsverluste.

Chirurgische Labyrinthectomy der Ratte das vestibuläre System untersuchen

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