Name: 매핑 대사: 조직에서 직접 젖 산 효소 활동 모니터링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: 학습하세요 조직에서 NAD(P)H 생성 효소 활동을 직접 측정하는 대사 매핑 방법을. 냉동절단과 특수 염색을 통해 효소 활성의 공간적 분포를 정확히 분석할 수 있습니다.

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HAC 리 타 알 렌 재단 (http://www.ritaallenfoundation.org)의 밀 튼 중 카셀 학자 이었다. 이 작품에서 국립 연구소의 일반 의료 과학 R01 GM081686, R01 AR070245, 국립 연구소의 종합 의료 과학 R01 GM0866465, Eli와 Edythe 넓은 재생 의학 센터 & 줄기 세포 연구 (HAC에 교부 금에 의해 투자 되었다 로즈 언덕 및 Hal Gaba 상), 아와 HAC Jonsson 종합 암 센터에서 상을 아이리스 칸토어 여자 건강 센터/UCLA CTSI NIH 그랜트 UL1TR000124, 백혈병 림프 종 사회 영향. 이 간행물에 보고 된 연구 보너스 번호 P50CA092131에서 국립 보건원의 국립 암 연구소에 의해 지원 되었다. Funders 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 결정 게시 또는 원고의 준비에 전혀 역할을 했다. HAC는 Eli & Edythe 넓은 센터의 재생 의학 및 줄기 세포 연구, UCLA 분자 생물학 연구소, UCLA 생물 정보학 각 부처간 프로그램의 회원입니다.

설명 하는 모든 실험 동물 관리 위원회, 로스 앤젤레스가 주 대학에 의해 승인 되었다.
1. 냉동된 마우스 스킨의 슬라이드 생성
<ol><li>기관 정책에 따라 마우스를 안락사 참고: 보호에 대 한 제도적 정책을 따릅니다. 동물 관련 된 모든 프로토콜 기관 동물 관리 위원회에 의해 승인을 받아야 한다.</li>
	<li>동물 털 트리머 사용 마우스의 머리를 제거 합니다.</li>
	<li>가 위를 사용 하 여 피부에 절 개를 확인 합니다. 집게를 사용 하 여 마우스에서 피부를 들어올립니다. 멀리 피부 섹션을 잘라가 위를 사용 하 여.</li>
	<li>cryomold 복합 시 약 동결을 채우십시오 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>바늘 코 집게를 사용 하 여 채워진된 cryomolds에 장소 피부 섹션입니다. 동양 피부 있도록 조직 조각 표 피에서 진 피, hypodermis와 근육 (그림 2)에 피부의 횡단면을 생성 합니다. 참고: 가능 하면 실험 탑재 하 고 동일한 슬라이드에 구분 하 고 함께 처리 수 있도록 동일한 cryomold에서 함께 마우스 제어. 거품을 만드는 것이 아니라는 것을 주의.</li>
	<li>드라이 아이스는 얼음 양동이에 블록의 평평한 표면에 cryomold를 배치 하 고 고정 하자. 스킨의 방향을 관찰을 계속 합니다. 필요한 경우 조정 합니다. 참고: 드라이 아이스를 처리할 때 극저온 장갑 착용.</li>
	<li>Cryomolds 스토리지-80 ° C 냉동 고로 전송 합니다. 샘플 효소 활동의 상당한 손실 없이 약 3 달 동안 냉장고에서 유지할 수 있습니다. 냉동된 섹션을을 건조 하지 마십시오.</li>
	<li>-20 ° C, 7-10 µ m 두께 최고의 피부 형태학21에 대 한 섹션을 만들을 슬라이스 조직 한 cryostat 사용 하.</li>
</ol>2. 얼룩에 대 한 슬라이드 준비
<ol><li>시험 될 슬라이드 집합을 설정 합니다. 나드 보류 될 것입니다 어떤 컨트롤 슬라이드를 포함 하 고 다른 컨트롤에 슬라이드 기판, 젖이 나올, 보류 될 것 이다. 냉동된 조직 블록 이전 조사에서 긍정적인 제어 슬라이드를 포함 합니다.</li>
	<li>짧게 수정 피부 4% 포 르 말린 5 분에 대 한 섹션을 포함 하는 슬라이드 슬라이드, 또는 4% 포 르 말린의 pipetting 1 mL로 슬라이드 4% 포 르 말린을 포함 하는 컨테이너를 찍기 하 여 여러 슬라이드를 처리할 때. 참고: 고정 피부 않습니다 하지 껍질을 슬라이드에서 다음 절차와 보존 피부 형태학 동안 지킬 것 이다. 주의: 포 르 말린은 발암 물질과 유해; 장갑을 착용, 그것은 당신의 피부 및 화학 증기 두건에서이 단계를 수행 하지 마십시오.</li>
	<li>적어도 1 mL의 인산 염으로 세척 슬라이드 버퍼링 염 분, pH 7.4, 슬라이드 당 pipetting 또는 수영.</li>
</ol>3. 준비 솔루션 얼룩
<ol><li>젖 산 효소 활동 얼룩에 대 한 소용돌이 함께 시 약 (50 mM Tris pH 7.4, 750 µ M NADP, 80 µ M phenazine methosulfate (PMS), 600 µ M 블루 nitrotetrazolium 염화 물, 그리고 30mm 젖) 얼룩의 크기에 따라 적절 한 크기의 튜브에 필요한 솔루션입니다. 참고: 1 mL는 완전히 하나의 슬라이드를 커버 하기에 충분.</li>
	<li>있는 모든 시 약은 나드 제외 하 고 존재 하는 두 번째 솔루션을 준비 합니다. 모든 시 약은 젖 산을 제외 하 고 존재 하는 세 번째 솔루션을 준비 합니다.</li>
</ol>4. 슬라이드 솔루션 얼룩에 알을 품으십시오
<ol><li>부드럽게 피펫으로 얼룩 솔루션 또는 전체에서 섹션을 다루는 준비 슬라이드에 제어 솔루션 (1 mL입니다 한 슬라이드에 대 한 충분 한). 여러 슬라이드를 함께 처리 되는 경우 동시에 얼룩 솔루션으로 모든 슬라이드를 찍어 (컨테이너는 완전히 조직 단면도 커버에 충분 한 해결책 확인).</li>
	<li>어둠 속에서 37 ° C에서 습도 환경에서 슬라이드를 품 어. 슬라이드 위에 솔루션 얼룩 경우 증발을 방지 하기 위해 습도 환경에서 슬라이드를 놓습니다.</li>
</ol>5입니다. 모니터 슬라이드
<ol><li>모니터링 검사에 의해 파랑 클리어에서 얼룩 솔루션의 변환 합니다. 샘플 blueness의 원하는 수준에 도달, 얼룩 솔루션을 제거 하 여 반응을 중지 합니다. 참고: 피부를 위한 10 분은 충분 합니다. 에 오르간과 효소 활동에 따라 달라 집니다.</li>
	<li>Pipetting으로 인산 염 버퍼 식 염 수와 슬라이드를 린스 (1 mL는 각 슬라이드에 대 한 충분 한) 또는 찍기. 참고: 서로 게 비교 될 것입니다 모든 샘플 유지 되어야 합니다 얼룩 솔루션에서 동일한 양의 시간에 대 한.</li>
</ol>6. counterstain 및 마운트
<ol><li>피펫으로 슬라이드 슬라이드 blueness의 적절 한 수준에 도달 하는 때에 counterstain. 참고: 빨간색 또는 녹색 핵을 설정 하는 Counterstains precipitant는 formazan에 의해 만들어진 블루와 좋은 대조를 제공 합니다.</li>
	<li>수성 또는 비-수성 매체22장착 탑재. 설치 매체의 1 ~ 3 방울 (40-50 µ L)은 커버 슬립의 크기에 따라 충분 합니다.</li>
</ol>7. 이미지 슬라이드 및 계량
<ol><li>가벼운 현미경 슬라이드 이미지. 실험의 사진 및 제어 샘플 및 10 배, 20 X 40 X 확대에 부정적인 모든 컨트롤을 가져가 라.</li>
	<li>이미지 분석 소프트웨어는 서로 다른 영역에서 푸른 얼룩의 강도 결정 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없습니다 경쟁 관심사 있다.

여기 설명 하는 방법은 젖 산 효소 또는 다른 세포 유형 조직 내에서 또는 시간이 지남에 따라 조직의 다른 부분에서에서 NADH 또는 NADPH를 생성 하는 다른 대사 효소의 활동을 모니터링 하는 데 사용할 수 있습니다. 젖 산 효소, 종양 줄기 세포의 생물학을 이해 하기 위한 중요 한 효소 이며 개별 셀에서 젖 산 효소 활동을 모니터 하는 능력이이 효소의 기능에 중요 한 통찰력을 제공할 것입니다.
이 프로토콜의 중요 한 장점은 다른 방법론에 비해 하나는 모니터 효소 활동, 보다는 그냥 단백질 풍부 하, 더 결정적인에 대 한 정보 뿐 아니라 어디 젖 산 효소 효소에에서 발생할 수 있습니다. 현재, 하지만 어디 그들은 실제로 기능. 여기에 설명 된 방법은 선택 된 단백질, 예를 들어, 셀 혈통 마커 수준은 젖 산 효소 활동으로 같은 조직 샘플에서 결정 되도록 immunohistochemistry와 결합할 수 있습니다. 젖 산 효소 활동을 모니터링 하기 위한 MRI-기반 접근, 비교...

있는 효소는 높은 또는 낮은 활동 조직 내의 위치를 이해 하는 것은 이해 개발 및 생리학에 대 한 필수적입니다. 사본 또는 단백질 레벨은 효소 활동에 대 한 대리 모 알선으로 자주 사용 된다. 이러한 연구는 유익 수 있습니다, 그들은 포스트 번역 상 수정, 단백질 복합물, 또는 효소의 subcellular 지 방화의 존재 하는 효소의 활동을 결정 하기 위한 중요 한 수 있는 정보를 제공 하지 않습니다. 효소 활동은 직접 측정 하는 경우 더 이상 높은 또는 낮은 활동은 조직 내에서 혼합물 또는 셀의 공간 분포 내에서 개별 셀에 대 한 정보를 포함 하는 무 균된 단백질 lysates에 자주 모니터링 합니다.
여기는 조직 샘플 내에서 효소 활동의 공간 배급을 매핑하기 위한 상세한 프로토콜을 제공 합니다. 방법론은 tetrazolium 염 dehydrogenases, reductases, 및 냉동된 조직1에서 oxidases의 활동을 지역화를 사용할 수 있습니다 설명 하는 이전 연구를 기반으로 합니다. 이러한 방법으로, 물 불용 성 formazan 형성 때 양성자 tetrazolium 소금2,3에 전송 됩니다. 포도 당-6-인산 효소는 NADPH와 양성자, 생성 하 고 tetrazolium 활동 감지 되었습니다. 포도 당-6-인산 효소는 유럽 넙치 hepatocytes4, 폐5 의 2 형 폐 포 세포와 신장5nephrons에서에서 모니터링 되었습니다. Tetrazolium 소금 또한 냉동된 조직6transketolase 활동을 모니터링 하는 데 사용 되었습니다. 비슷한 접근 방식은 최근 인접 한 슬라이드7에 동일한 조직에 여러 개의 dehydrogenases의 활동을 모니터링 하는 데 사용 되었다.
여기 tetrazolium 염을 사용 하 여 (그림 1) 젖 산 효소 활동의 공간적 분포를 모니터링 하는 방법을 설명 합니다. 젖 산 효소 분해 젖이 나올, 하 고 역 반응에 의해 생성 된 pyruvate를 변환할 수 있습니다. 젖 산 효소 활동은 결과적으로 그것의 분 비로 젖이 나올 대 tricarboxylic 산 주기로 pyruvate의 입구를 결정 하는 중요 한 이다. 젖 산 수치 종종 다양 한 질병 이나 상해는 손상 된 세포와 효소가 릴리스 되었습니다 나타낼 수 있기 때문에 암8,,910를 포함 하 여 질병을 진단 하는 데 사용 됩니다.
4 젖 산 효소 유전자를 있다: LDHA, LDHB, LDHC, 및 LDHD11. LDHA와 LDHB는 초기 LDHA 유전자12의 중복에서 발현 생각 된다. LDH는 tetramer로 활성 이며 LDHA 및 LDHB homotetramers와 함께 heterotetramers를 형성할 수 있다. LDHA LDHB는 젖 산에 대 한 높은 선호도를 보고 pyruvate13우선적으로 젖 산을 변환 하는 동안 pyruvate에 대 한 높은 선호도가지고 보고 있다. LDHA 발기인 HIF1α, cMYC 및 FOXM1 녹음 방송 요인11에 대 한 바인딩 사이트를 포함 되어 있습니다. 또한, 같은 많은 다른 glycolytic 효소14,15, LDH 포스트 번역 상 수정에 의해 수정할 수 있습니다. 섬유 아 세포 성장 인자 수용 체 1 Y10 tetramer 형성을 촉진, 또는 NADH 기질 바인딩16촉진 Y83 LDHA phosphorylate 수 있습니다. LDHA acetylated17수도 있습니다. 이러한 이유로, LDH 활동의 완전 한 이해 LDH 단백질 수준, 하지만 효소의 활동 뿐만 아니라 모니터링 해야 합니다.
우리가 여기에 제시 하는 메서드와 다른 접근 젖 산 효소 활동을 모니터링 하는 데 사용 되었습니다. 무 균 단백질 lysate spectrophotometrically 젖 산 효소 활동을 모니터링할 수 있습니다. NADH 생성 젖 산 pyruvate 변환으로 측정 될 수 있다 340 흡 광도에 따라 nm, 동안 pyruvate는 젖 산18변환으로 NADH의 실종을 모니터링할 수 있습니다. 젖 산 효소 활동은 또한 자기 공명 영상 (MRI)와 모니터링 되었습니다. 13 C-pyruvate를 관리할 수 있습니다 하 고 젖이 나올에 pyruvate의 변환의 비율으로 감시 될 수 있다 [1-13C] 젖이 나올 / [1-13C] pyruvate. 상승의 비율 [1-13C] 젖이 나올 / [1-13C] pyruvate 암 조직19에서 관찰 되었습니다. MRI-기반 접근 정상에 젖 산 효소 활동과 질병 조직에 정보를 제공할 수 있습니다, 하는 동안 방법론 특정 셀에 활동 수준을 결정 하는 데 필요한 해상도 있지 않습니다. 여기에 제공 된 방법론은 조직 영역에서 단일 셀에도 젖 산 효소 활동에 정보를 제공할 수 있습니다.
현장에서 활동 분석 실험을 사용 하 여, 우리는 젖 산 효소의 활동은 마우스 피부20의 머리카락 뿌리 줄기 세포에서 높은 발견. 우리 또한 사용 방법이 경작된 한 배아 줄기 세포에서 젖 산 효소의 활동을 모니터링 하 고 활동은 피더 계층 보다는 줄기 세포에서 발견. 마지막으로, 우리는 신선한 마우스 대동맥에서 젖 산 효소의 활동을 모니터링 하 고 부드러운 근육 세포에 얼룩이 관찰. 우리 여기 냉동된 마우스 피부에서 젖 산 효소 활동을 모니터링 하기 위한 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>안락사된 쥐의 피부를 채취하기 위한</td> <td>수술 기구</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tissue-tek cryomold 25 mm x 20 mm x 5 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9511236</td><td>쥐 피부 동결용</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. 화합물</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9638938</td><td>cryomolds 장착용</td></tr><tr><td>얼음 양동이</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-106</td><td></td></tr><tr><td>드라이 아이스</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>폴리신 접착 슬라이드</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-78</td><td></td></tr><tr><td>4% 포르말린</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-245-684</td><td>물에 희석,</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수, pH 7.4</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>와류</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>트리스 염기</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-245-684</td><td></td></tr><tr><td>NAD</td><td>시그마-알드리치</td><td>N7004</td><td></td></tr><tr><td>페나진 메토설페이트</td><td>시그마-알드리치</td><td>P9625</td><td></td></tr><tr><td>니트로테트라졸륨 블루 클로라이드</td><td>시그마-알드리치</td><td>N6876</td><td></td></tr><tr><td>리튬 L-락테이</td><td>트 시그마-알드리치</td><td>L2250</td><td>기판</td></tr><tr><td>37&deg; C 인큐베이터 (또는 조직 배양 인큐베이터)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>브라질! 카운터 스테인</td><td>Anatech</td><td>861</td><td>카운터 스테인</td></tr><tr><td>마운팅 매체</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-5000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드용 커버 슬립</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544D</td><td></td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

매핑 대사: 조직에서 직접 젖 산 효소 활동 모니터링

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

공간과 시간에 효소 활동을 매핑 하는 것이 정상 조직과 질병에서 셀 동작의 분자 기초를 이해 하기 위한 중요 합니다. 신진 대사 활동 분석 실험 현장에 는 조직 내에서 신진 대사 활동의 공간적 분포에 대 한 정보를 제공할 수 있습니다. 여기 조직 샘플에서 직접 효소 젖 산 효소의 활동을 모니터링 하기 위한 상세한 프로토콜을 제공 합니다. 젖 산 효소 포도 당 소비 호 기성 또는 혐 기성 해당 분해를 통해 에너지로 변환 하는 것입니다 여부의 중요 한 결정 이다. 젖 고 나드를 포함 하는 솔루션은 냉동된 조직 섹션에 제공 됩니다. 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 (NAD) NADH를 검출 될 수 있다 양성자의 감소에 따라 제공 하는 동시에 변환 하는 동안 높은 젖 산 효소 활동에 포함 된 셀 pyruvate에 제공 된 젖 산을 변환 됩니다. nitrotetrazolium 블루 침전으로 시각화 formazan 블루. 우리는 마우스 피부에서 젖 산 효소 활동을 모니터링 하기 위한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜을 적용, 우리는 젖 산 효소 활동은 높은 무부하 머리 여 포 줄기 세포는 피부 내에 발견. 마우스 미 발달 섬유 아 세포 보다 배양된 미 발달 줄기 세포에서 높은 얼룩 공개 교양된 마우스 배아 줄기 세포를 적용 하는 프로토콜. 갓 절연된 마우스 대동맥의 분석 계시 수직 대동맥 평활 근 세포에 얼룩. 제공 하는 방법론 공간적으로 냉동 또는 신선한 조직에 양성자를 생성 하는 효소의 활동을 매핑하는 데 사용할 수 있습니다.

우리는 이전 제자리에 활동 분석 실험 마우스 피부20에 대 한 결과 보고 있다. 그림 3에서 같이, 우리는 절차는 위에서 설명한 때 머리 여 포의 기지에서 머리카락 뿌리 줄기 세포에서 젖 산 효소 활동의 높은 수준을 다음 관찰. 이러한 결과 형광 활성화 된 세포 피부의 머리 여 포 줄기 세포에 대 한 정렬 및 정렬된 셀에 활동 분석 실험과 줄기 세포 구획에 높은 젖 산 효소 활동을 확인에 의해 뒷받침 했다.
머리 여 포 줄기 세포는 높은 젖 산 효소 활동 우리의 연구 결과 바탕으로, 우리 교양된 미 발달 줄기 세포의 연구를 확장. 마우스 미 발달 섬유 아 세포 급지대 계층으로 혼자 또는 배아 줄기 세포의 존재를 분석 했다. 배양된 세포를 분석 하려면 매...

우리 nicotinatmide 아데닌 디뉴클레오티드 인산 (NAD(P)H) + H + 조직 샘플에서 직접 생성 하는 효소 효소 활동의 공간적 분포를 매핑하기 위한 프로토콜 설명.

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

이 방법은 조직 내 다른 위치에서 효소의 활성과 같은 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 연구원이 조직 샘플에서 직접 효소 활성을 감지할 수 있다는 것입니다. 이 절차를 시작하려면 동물 털 트리머로 마우스의 털을 제거하십시오.가위를 사용하여 등 피부를 절개합니다. 그런 다음 피부를 들어 올려 잘라냅니다. 다음으로, Cryomold에 냉동 시약 화합물을 채웁니다.바늘 코 집게를 사용하여 피부 부분을 필드의 Cryomold에 넣습니다. 표피에서 진피, 하피 및 근육에 이르는 피부의 단면이 보이도록 피부 단면을 지정합니다. 가능한 경우 실험용 마우스와 대조군 마우스를 동일한 Cryomold에 함께 장착하여 동일한 슬라이드에서 절단하고 함께 처리할 수 있습니다.거품이 생기지 않도록 주의하세요. 얼음 양동이에 있는 드라이 아이스 블록의 평평한 표면에 Cryomold를 놓습니다. 보관을 위해 Cryomold를 섭씨 80도의 음의 냉동고로 옮기십시오.샘플은 효소 활성의 현저한 손실 없이 약 3개월 동안 냉동고에서 보관할 수 있습니다. 절편의 경우, 섭씨 영하 20도로 설정된 저온 유지 장치를 사용하여 조직을 절편화하여 최상의 피부 형태를 위해 7-10마이크로미터 두께의 절편을 만듭니다. 이 절차에서는 NAD가 보류될 대조군 슬라이드, 기질 젖산염이 보류될 또 다른 대조군 슬라이드, 이전에 조사된 동결 조직 블록의 양성 대조군 슬라이드를 포함하는 테스트할 슬라이드 세트를 설정합니다.피부 절편이 포함된 슬라이드를 4% 포르말린으로 5분 동안 간단히 고정합니다. 그런 다음 PBS로 슬라이드를 씻으십시오. 다음으로, NADP, PMS, 니트로테트라졸륨 블루 클로라이드 및 젖산을 포함한 시약을 함께 와류로 처리하여 적절한 크기의 튜브에서 젖산 탈수소효소 활성 염색을 수행합니다.다음으로, NAD를 제외한 모든 시약이 존재하는 두 번째 용액을 준비합니다. 그 후, 젖산을 제외한 모든 시약이 존재하는 세 번째 용액을 준비합니다. 슬라이드와 염색 용액 또는 대조 용액을 배양하려면 동시에 용액에 담그십시오.그런 다음 어둠 속에서 섭씨 37도의 가습 환경에서 배양합니다. 염색 용액이 투명에서 파란색으로 변하는 것을 모니터링합니다. 샘플이 원하는 수준의 청색에 도달하면 염색 용액을 제거하고 PBS로 헹궈 반응을 중지합니다.그 후, 슬라이드가 적절한 수준의 파란색에 도달했을 때 슬라이드에 대조 염

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 비디오는 젖산 탈수소효소를 사용하여 세포 용해물에서 젖산을 측정하기 위한 비색 분석에 대해 설명합니다. 이 효소는 젖산을 피루브산으로 변환하고, NAD를 테트라졸륨 염료와 반응하는 NADH로 변환하여 젖산을 정량화하기 위해 분광 광도계로 측정할 수 있는 착색 제품을 제공합니다.

테스트 샘플에서 젖산의 정량화를 위한 비색 분석

이 비디오는 테스트 물질의 세포 독성 효과와 인체 정밀 절단 폐 절편에서 막 무결성에 미치는 영향을 측정하기 위한 젖산 탈수소 효소, LDH 분석을 보여줍니다. 이 분석은 샘플의 세포 사멸 또는 손상에 대한 정량적 측정을 제공합니다.

Lactate Dehydrogenase Assay를 통한 폐 절편의 세포 독성 및 막 무결성 평가

후속 샘플 용해를 통한 동적 핵 분극은 생물학적 시스템의 신진대사에 대한 실시간 연구를 가능하게 했습니다. 과분극[1-13C]피루브산은 in vitro에서 전립선 암종 세포주에서 젖산 탈수소효소 활성을 연구하는 데 사용되었습니다.

과분극 (13) C 대사 자기 공명 분광학 및 이미징

여기, 우리는 현미경으로 시각화 하 고 세포와 조직 활동, 기능 및 subcellular 지 방화에 dehydrogenases의 활동을 계량 하는 데 사용할 수 있는 프로토콜을 제시.

신진 대사 매핑: 양적 효소 Cytochemistry 및 Histochemistry Dehydrogenases 세포와 조직에서의 활동을 결정 하

여기 포유류 세포에서 대량 autophagic 격리 활동을 측정 하기 위한 간단 하 고 잘 검증 된 프로토콜을 설명 합니다. 메서드를 사용 하면 전체 셀룰러 LDH 수준에 비해 sedimentable 셀 분수에 젖 산 효소 (LDH)의 비율을 측정에 기반.

젖 산 효소 격리 분석 결과-간단 하 고 신뢰할 수 있는 결정 하는 방법을 포유류 세포에서 대량 Autophagic 격리 활동

여기, 우리는 미토 콘 드리 아 산소 소비, 영양에 너 지론, 및 양성자 누출, 미토 콘 드리 아에서 ATP 비능률적의 주요 원인의 정의 개념을 측정 하기 위한 방법 공유. 이러한 결과 미토 콘 드리 아 기능을 평가할 수 있도록 영양소 사용률에 에너지의 30%에 대 한 계정 수 있습니다.

홀스타인 젖소에서 미토 콘 드리 아 호흡 추정 간 미토 콘 드리 아 산소 소비와 양성자 누출 속도 론 측정

여기에서 우리는 분자 산소를 소비하는 능력과 독립적으로 포유류 세포의 미토콘드리아 기능을 직접 측정하기 위한 분석 모음을 제시합니다.

포유류의 미토콘드리아 기능을 측정하기 위한 산소 비의존적 분석

여기에서는 생체 외 초파리 유충 뇌 제제에서 유전적으로 인코딩된 Förster 공명 에너지 전달 기반 센서를 사용하여 신경교세포와 뉴런에서 모노카르복실레이트, 포도당 및 ATP의 수송을 시각화하는 프로토콜을 제시합니다.

유전적으로 인코딩된 센서를 사용하여 생체 외 초파리 유충 뇌에서 모노카르복실레이트 및 기타 관련 대사 산물 시각화

여기에서는 골수, 비장 및 경색된 심장에서 대식세포를 추출하고 이후에 살아있는 세포의 대사 플럭스를 평가하는 방법을 자세히 설명합니다.

비장 및 심장 대식세포와 골수 단핵구의 생체 외 대사 플럭스 분석

이 프로토콜은 맞춤형 생물반응기 시스템을 과분극 ¹³C NMR 분광법과 통합하여 살아있는 세포의 실시간 피루브산 대사를 측정함으로써 대사 연구 및 약물 스크리닝 응용 분야의 재현성과 운동 정확도를 개선합니다.

과분극 13CNMR을 사용한 살아있는 세포의 실시간 대사 검출

학습하세요 조직에서 NAD(P)H 생성 효소 활동을 직접 측정하는 대사 매핑 방법을. 냉동절단과 특수 염색을 통해 효소 활성의 공간적 분포를 정확히 분석할 수 있습니다.

매핑 대사: 조직에서 직접 젖 산 효소 활동 모니터링

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